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04/02/2020
AMH NEL LABORATORIO DI EMBRIOLOGIA CLINICA
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Il Laboratorio di Embriologia è il luogo in cui avviene la la fecondazione in vitro in senso stretto
Nel Laboratorio lavorano
Biologi
Biotecnologi
che si occupano di Medicina della Riproduzione, ovvero gli
Embriologi
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Centro di Fisiopatologia della Riproduzione Umana – Ospedale del Delta, AUSL di Ferrara
IVF Lab
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Centro di Fisiopatologia della Riproduzione Umana – Ospedale del Delta, AUSL di Ferrara
IVF Lab
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Analisi del liquido seminale
Prelievo e selezione degli ovociti
ICSI
Coltura embrionale
Selezione degli embrioni
Transfer
Criogenia
IVF Lab
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Analisi del liquido seminale
Prelievo e selezione degli ovociti
ICSI
Coltura embrionale
Selezione degli embrioni
Transfer
Criogenia
IVF Lab
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Centro di Fisiopatologia della Riproduzione Umana – Ospedale del Delta, AUSL di Ferrara
IVF Lab
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1978
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum Invenzione del Walkman
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum Invenzione del Walkman
Primo episodio di Dallas
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum Invenzione del Walkman
Primo episodio di Dallas
Rapimento di Aldo Moro
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum Invenzione del Walkman
Primo episodio di Dallas
Rapimento di Aldo MoroNascita dal SSN italiano
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1978Nobel per la scoperta del Big
Bang Primo online exchange forum Invenzione del Walkman
Primo episodio di Dallas
Rapimento di Aldo MoroNascita dal SSN italiano
Louise Brown “the first test tube baby”
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1981 Stimolazione ovarica
(Alan Trounson)
1983 Gravidanza da
embrioni congelati (Alan Trounson)
1986 Parto da
ovociti congelati (Christopher Chen)
1987 Vitrificazione
(Michael Taylor)
1992 ICSI
(Giampiero Palermo)
2004 Primo nato da
tessuto ovarico congelato (Kutluk Oktay)
2010 Nobel per la Medicina
(Robert Edwards)
2013 Validazione della
vitrificazione degli ovociti (ASRM)
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“ Il tasso di crescita cellulare in relazione ai giorni di coltura e le caratteristiche morfologiche
dell’embrione sono fattori determinanti nella scelta dell’embrione da trasferire”
(Robert Edwrads, 1984)
Nonostante il rapido progresso, la Medicina della Riproduzione porta con sè una sfida nata con la fecondazione in vitro:
la scelta degli embrioni con maggiore possibilità di impianto
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Ovocita competente: in grado di essere fecondato in vitro e di originare un embrione
Embrione competente: in grado di evolvere in vitro e di originare una gravidanza
Il principale obiettivo per l’Embriologo del 2020 è individuare gli ovociti e gli embrioni competenti
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1
32
3
2
3 3
11
2
Quale scelgo?
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Quale scelgo?
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Quale scelgo?
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Età femminile Euploidia embrionaria
< 35 anni 65-70%
> 42 anni < 10%
Quale scelgo?
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La maggior parte degli embrioni selezionati per il trasferimento in utero sono aneuploidi
Il fatto di non potere selezionare accuratamente gli ovociti e gli embrioni competenti rende la PMA poco
efficace
Registro Nazionale PMA, 2018
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L’efficacia della PMA può aumentare trasferendo più embrioni
Ciò però comporta anche l’aumento del rischio di gravidanza multipla
“The ultimate goal of IVF is to achieve healthy single live birth following each single embryo transfer in
a shortest time”
Kupka et al., 2014; Sigalos et al., 2016
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AMH può essere utilizzato come marker di competenza ovocitaria ed embrionaria?
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La prima informazione che AMH può dare ad un Embriologo è legata al numero di ovociti che la paziente produrrà
Esistono numerosi studi che dimostrano una correlazione lineare tra le concentrazioni sieriche di AMH e il numero di ovociti recuperati
AMH può essere anche un marker di qualità (competenza), oltre che di quantità?
Nelson, 2007; La Marca, 2010; Choi, 2011
Dato che la quantità degli ovociti indica talvolta anche la loro qualità, è possibile che AMH possa essere in marker indiretto di qualità
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Studio morfologico dell’ovocita
Studio morfologico dello zigote
Studio morfologico dell’embrione
Studio morfocinetico dell’embrione
Studio genetico dell’embrione
Studio biochimico del fluido follicolare???
AMH???
Markers di competenza
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Permette di valutare:
� Maturità nucleare
� Maturità citoplasmatica
� Anomalie extracitoplasmatiche
In un ovocita competente, la maturazione nucleare e quella citoplasmatoica dovrebbero essere
coordinate
La asincronia di questi due eventi può generare anomalie morfologico e perdita di competenza
ovocitaria
Studio morfologico dell’ovocita
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profase I
Veek, 1992; Dean, 2016
L’analisi della maturità nucleare è oggi standardizzata
metafase I
metafase II
Studio morfologico dell’ovocita
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Alpha ESHRE, 2011; Rienzi, in Atlas of human embryology: from oocytes to preimplantation embryos, 2012; Braga, 2013
Gli unici indicatori morfologici di competenza ovocitaria sembrano essere:
SERSpazio perivitellino anomalo Vacuoli > 14 micron
Studio morfologico dell’ovocita
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GLUBULI POLARI
PRONUCLEI
NUCLEOLI
Lo zigote è il primo risultato della fusione dei gameti
Si origina 17 ± 1 ore dalla inseminazione
Le configurazioni di queste tre componenti sarebbero indicatori di competenza
Gianaroli, 2003; Gianaroli, 2007; Berger, 2014; Lin, 2017
Studio morfologico dello zigote
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�Numero di cellule
� Frammentazione
� Simmetria
� Nucleazione
�Espansione blastocelica
� Trofectoderma
� Inner Cell Mass (ICM)
Embrione “cleavage stage”
(II-III giornata)
Blastocisti
(IV-VI giornata)
Studio morfologico dell’embrione
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AMH e morfologia
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Assessment of the relationship of basal serum anti-mullerian hormone levels with oocyte quality and pregnancy outcomes in patients undergoing ICSI
Aydin et al., 2015
Except for the wide perivitelline space abnormality, oocyte morphology was not different between the groups with high or low AMH levels
AMH is not a valuable tool to evaluate oocyte quality, the development of high-quality embryos, or pregnancy conception
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The impact of anti-Müllerian hormone (AMH) on multi ple pronuclei (PN) presence and oocyte maturity in ICSI treatments
Sayme et al., 2019
AMH significantly correlates with the presence of multiple pronuclei in the zygote
The number of zygotes with the presence of pronuclei increased when AMH levels were higher
AMH levels could be used as a predictive marker
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Anti-Müllerian hormone levels to predict oocyte maturity and embryo quality during controlled ovarian hyperstimulation
Melado Vidales et al., 2016
Although the present study adds valuable new data on the predictive capacity of AMH in IVF/ICSI cycles, randomized controlled trials are needed to confirm these findings
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Unisce l’analisi morfologica allo studio della cinetica dello sviluppo embrionario mediante un
sistema di videocamere all’interno degli incubatori
Studio morfocinetico dell’embrione
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Moovie
s2 tempo di divisione da 3 a 4
cellule (< 0.76 h)
t5 tempo di divisione a 5 cellule
(48.8-56.6 h)
cc2 tempo di divisione da 2 a 3
cellule (≤ 11.9 h)
Studio morfocinetico dell’embrione
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There is insufficient evidence of differences in live birth, miscarriage, stillbirth or clinical pregnancy to
choose between TLS, with or without embryo selection software, and conventional incubation. The studies
were at high risk of bias for randomisation and allocation concealment, the result should be interpreted
with extreme caution
Cochrane Database Syst Rev. 2019
Studio morfocinetico dell’embrione
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AMH e morfocinetica
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Anti-Mullerian hormone (AMH) and embryo quality assessed by time-lapse imaging (TLI): a cross-sectional observational study
Bhide et al., 2017
No significant association between serum AMH and embryo quality assessed by time-lapse imaging
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Tabibnejad et al., 2019
Serum Anti-Mullerian hormone and embryo morphokinetics detecting by time-lapse imaging: A comparison between the polycystic ovarian syndrome and tubal factor infertility
AMH was negatively correlated with t5, t8, and cc3 among PCOS women
AMH had no correlation with embryo kinetics in infertile women with TF infertility
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Analisi di una biopsia dell’embrione per valutarne lo stato di euploidia
Pre-Implantation Genetic Test (PGT)
Magli, 2015; Capalbo, 2017
Studio genetico dell’embrione
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In base alle mutazioni che studia, la PGT è classificata in:
� PGT-M (ricerca delle mutazioni monogeniche)
� PGT-SR (ricerca dei riarrangiamenti strutturali)
� PGT-A (ricerca delle aneuploidie)
La PGT:
� Non aumenta i tassi di gravidanza
� Riduce gli aborti spontanei
� Riduce il Time-To-Pregnancy
� Riduce il rischio di trasmissione di malattie genetiche
Cimadomo, 2019
Studio genetico dell’embrione
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AMH ed euploidia
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Gat et al., 2017
Significant correlation between anti-müllerian hormone and embryo euploidy in a subpopulation of infertile patients
Using multivariate regression controlling for age, AFC, BMI and parity, there was a statistical association between serum AMH and proportion of euploid embryos
Herein we demonstrate a positive correlation between serum AMH and euploidy rate among blastocysts of infertile patients younger than 37 years of age
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Anti-Müllerian hormone in association with euploid embryo transfer outcomes
Wang et al., 2019
AMH concentration was not associated with positive bHCG or ongoing pregnancy for euploid embryo transfers after adjustment for potential confounders
L’impianto degli embrioni euploidi non dipende dai valori di AMH
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Ricerca di indicatori della competenza ovocitaria/embrionaria nel fluido follicolare
Revelli, 2009; Wallace 2012; O’gorman, 2013; Chimonte, 2015
Non esiste un singolo marker
I dati fino ad oggi ottenuti devono essere validati
Studio biochimico del fluido follicolare
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AMH follicolare e sviluppo embrionale
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Melado Vidales et al., 2016
No correlations were found between COH outcome parameters and AMH-FF
Anti-Müllerian hormone levels to predict oocyte maturity and embryo quality during controlled ovarian hyperstimulation
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O’Brien et al., 2019
Anti-Müllerian hormone and progesterone levels in human follicular fluid are predictors of embryonic development
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O’Brien et al., 2019
FF AMH levels were significantly increased (P = 0.007) in the ‘BLAST’ group (33.13 ± 28.83 pmol/L) compared to the ‘FERT’ group (13.6 ± 12.3 pmol/L)
Combining follicular fluid analysis with routine morphological assessment, could allow for a more accurate and sensitive method of determining embryonic developmental
competence
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Ciepela et al., 2019
Oocyte matched follicular fluid anti-Mullerian horm one is an excellent predictor of live birth after fresh single embryo transfer
AMH concentration in FF on the day of oocyte retrieval is closely related to the oocyte’s quality
It predict TQ embryo development with high implantation potential and thus predict a high probability
of live birth
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Dewailly and Laven, 2019
Conclusioni
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L’impiego di AMH in Medicina della Riproduzione si presta ad ulteriori studi
Oggi ci ripromettiamo un “dialogo continuo dalla diagnosi alla terapia”
Per cui come Centro di Fisiopatologia della Riproduzione Umana ci proponiamo come partner per
eventuali collaborazioni di ricerca sull’AMH
Conclusioni
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Grazie per l’attenzione