Βασικές Αρχές Κυτταρομετρίας Ροής

ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΙΑΣ ΡΟΗΣΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΙΑΣ ΡΟΗΣ

Αλεξάνδρα Φλέβα Ph.D ΒιολόγοςΤμήμα Ανοσολογίας -

Ιστοσυμβατότητας ΓΠΝ «Παπαγεωργίου»

ΕΙΣΑΓΩΓΗΕΙΣΑΓΩΓΗ

Ο όρος κυτταρομετρία ροής Ο όρος κυτταρομετρία ροής χρησιμοποιήθηκε αρχικά για να χρησιμοποιήθηκε αρχικά για να περιγράψει μια τεχνική μέτρησης περιγράψει μια τεχνική μέτρησης κυττάρων σε δείγμα που «ρέει». κυττάρων σε δείγμα που «ρέει».

ΕΙΣΑΓΩΓΗΕΙΣΑΓΩΓΗ

Η κυτταρομετρία ροής αποτελεί μια Η κυτταρομετρία ροής αποτελεί μια αυτοματοποιημένη μέθοδο ανάλυσης αυτοματοποιημένη μέθοδο ανάλυσης

των φυσικοχημικών χαρακτηριστικών των φυσικοχημικών χαρακτηριστικών κυττάρων και σωματιδίων κυττάρων και σωματιδίων

της ποσοτικής έκφρασης της ποσοτικής έκφρασης κυτταρικών συστατικών κυτταρικών συστατικών

των κυτταρικών λειτουργιών των κυτταρικών λειτουργιών των κυτταρικών αλληλεπιδράσεων των κυτταρικών αλληλεπιδράσεων με βάση τη σκέδαση και το φθορισμόμε βάση τη σκέδαση και το φθορισμό

ΕΙΣΑΓΩΓΗΕΙΣΑΓΩΓΗ

Αναγκαία συνθήκη για τα παραπάνω Αναγκαία συνθήκη για τα παραπάνω αποτελεί η προϋπόθεση ότι το υπό αποτελεί η προϋπόθεση ότι το υπό έλεγχο δείγμα θα βρίσκεται σε έλεγχο δείγμα θα βρίσκεται σε μορφή εναιωρήματος. μορφή εναιωρήματος.

ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΡΟΗΣΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΡΟΗΣ

Αποτελεί έναν επιτυχή συνδυασμόΑποτελεί έναν επιτυχή συνδυασμό αιματολογικού αναλυτή και αιματολογικού αναλυτή και

φθορίζοντοςφθορίζοντος μικροσκοπίουμικροσκοπίου

WALLACE COULTER 1956WALLACE COULTER 1956

©J.Paul Robinson

WALLACE COULTER 1956WALLACE COULTER 1956

Πρώτος Πρώτος αυτοματοποιημένος αυτοματοποιημένος αναλυτής έμμορφων αναλυτής έμμορφων στοιχείων του στοιχείων του αίματοςαίματος

©J.Paul Robinson©J.Paul Robinson

1970- ΚΥΤΤΑΡΟΔΙΑΧΩΡΙΣΤΗΣ 1970- ΚΥΤΤΑΡΟΔΙΑΧΩΡΙΣΤΗΣ ΖΩΝΤΩΝ ΚΑΙ ΝΕΚΡΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝΖΩΝΤΩΝ ΚΑΙ ΝΕΚΡΩΝ ΚΥΤΤΑΡΩΝ

1974- 1974- ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΜΕ ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΜΕ ΛΑΜΠΑ ΑΛΟΓΟΝΟΥΛΑΜΠΑ ΑΛΟΓΟΝΟΥ

1975 – ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΔΥΟ 1975 – ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΔΥΟ ΠΑΡΑΜΕΤΡΩΝ ( ΠΑΡΑΜΕΤΡΩΝ ( LASER FS/SS)LASER FS/SS)

Photo ©2000 – J.P. Robinson

ΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑΠΛΕΟΝΕΚΤΗΜΑΤΑ

Ανάλυση μεγάλου αριθμού Ανάλυση μεγάλου αριθμού κυττάρωνκυττάρων

Απαιτείται μικρός χρόνος Απαιτείται μικρός χρόνος ανάλυσηςανάλυσης

Ταυτόχρονη ανίχνευση Ταυτόχρονη ανίχνευση μέχρι και μέχρι και 2121 παραμέτρων παραμέτρων

Επιτρέπεται η ανάλυση Επιτρέπεται η ανάλυση κυτταρικών υποπληθυσμώνκυτταρικών υποπληθυσμών

Ανίχνευση ελάχιστου Ανίχνευση ελάχιστου αριθμού κυττάρωναριθμού κυττάρων

ΠΕΡΙΓΡΑΦΗΠΕΡΙΓΡΑΦΗ

Ο κυτταρομετρητής ροής Ο κυτταρομετρητής ροής αποτελείται από τρία βασικά αποτελείται από τρία βασικά συστήματα συστήματα

υδροδυναμικό σύστημα ροής υδροδυναμικό σύστημα ροής οπτικό σύστημα οπτικό σύστημα ηλεκτρονικό σύστημα ανάλυσης ηλεκτρονικό σύστημα ανάλυσης

δεδομένωνδεδομένων

ΓΡΑΦΙΚΗ ΑΝΑΠΑΡΑΣΤΑΣΗ ΓΡΑΦΙΚΗ ΑΝΑΠΑΡΑΣΤΑΣΗ ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗ ΡΟΗΣΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗ ΡΟΗΣ

ΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΡΟΗΣΚΥΤΤΑΡΟΜΕΤΡΗΤΗΣ ΡΟΗΣ

LaserLight488nm

FL2 PE

SSC

FSC

Fluidics

Electronics

Computer

FL3 PerCP, Cy5

FL1 FITC

Light detectors

ΥΔΡΟΔΥΝΑΜΙΚΟΥΔΡΟΔΥΝΑΜΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑΣΥΣΤΗΜΑ

Αποτελείται από την κυψελίδα ροής (flow cell), η οποία δρα ως κανάλι μέσω της οποίας περνάει το κυτταρικό εναιώρημα περιβαλλόμενο από το αδρανές ρυθμιστικό διάλυμα (sheath fluid). Χαρακτηριστικό του συστήματος είναι η εφαρμογή της υδροδυναμικής εστίασης που επιτυγχάνει τη ροή των κυττάρων σε μονήρη διάταξη.

ΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ

ΑΚΤΙΝΑ ΑΚΤΙΝΑ LAZERLAZER ΦΙΛΤΡΑ ΦΙΛΤΡΑ

((διαχωρίζουν το φάσμα της ακτίναςδιαχωρίζουν το φάσμα της ακτίνας)) ΦΩΤΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΤΕΣ (ΦΩΤΟΠΟΛΛΑΠΛΑΣΙΑΣΤΕΣ (PMTs)PMTs)

((συλλέγουν τα φωτεινά σήματασυλλέγουν τα φωτεινά σήματα)) ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣ

ΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ

Optical Path XL

ΑΚΤΙΝΕΣ ΑΚΤΙΝΕΣ LASERLASER

ΜΙΑ ΠΗΓΗ ( 488ΜΙΑ ΠΗΓΗ ( 488 nm) nm) ΔΥΟ ΠΗΓΕΣ ( 488 ΔΥΟ ΠΗΓΕΣ ( 488 nm + 635 nm)nm + 635 nm) ΤΡΕΙΣ ΠΗΓΕΣ ΤΡΕΙΣ ΠΗΓΕΣ

Αργού (Αργού (Ar)Ar)ΚρυπτούΚρυπτού ( (ΚΚr)r)ΗλίουΗλίου -- Νέου (Νέου (He-Ne)He-Ne)

Ηλίου Ηλίου -- Καδμίου ( Καδμίου (He-CdHe-Cd))

ΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ Ακτίνα Ακτίνα laser laser προσπίπτει στη μονήρη προσπίπτει στη μονήρη

κυτταρική διάταξη προκαλείται σκεδασμός κυτταρική διάταξη προκαλείται σκεδασμός του φωτός ανάλογα με το μέγεθος των του φωτός ανάλογα με το μέγεθος των κυττάρων (πρόσθιος σκεδασμός – κυττάρων (πρόσθιος σκεδασμός – forward forward scatter) scatter) και με την ενδοκυττάρια και με την ενδοκυττάρια πολυπλοκότητα πλάγιος σκεδασμός – πολυπλοκότητα πλάγιος σκεδασμός – side side scatter). Μscatter). Με αυτόν τον τρόπο επιτυγχάνεται ο ε αυτόν τον τρόπο επιτυγχάνεται ο αρχικός διαχωρισμός του εναιωρήματος αρχικός διαχωρισμός του εναιωρήματος στους κυτταρικούς πληθυσμούς που στους κυτταρικούς πληθυσμούς που εμπεριέχει.εμπεριέχει.

ΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ ΚΑΙ ΟΠΤΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑ ΚΑΙ ΚΥΤΤΑΡΟΚΥΤΤΑΡΟ

Πρόσθιος σκεδασμός FSC)

< 10° σκέδαση

μέγεθος

Πλάγιος σκεδασμός (SSC)90° σκέδαση~ κοκκίωση

Laser

Y Ενταση φθορισμούΠυκνότητα αντιγόνου

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣ

Ο αριθμός και το είδος των Ο αριθμός και το είδος των φθοριζουσών ουσιών επιλέγεται ανάλογα φθοριζουσών ουσιών επιλέγεται ανάλογα με με

το είδος του κυτταρικού πλυθυσμού το είδος του κυτταρικού πλυθυσμού το υπό διερεύνηση νόσημα το υπό διερεύνηση νόσημα τη ποσότητα του επιφανειακού ή τη ποσότητα του επιφανειακού ή

ενδοκυττάριου αντιγόνου που ενδοκυττάριου αντιγόνου που διερευνάταιδιερευνάται

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣ

<390 λ 400-450 λ 450-500 λ

500-570 λ 570-590 590-620

620-750 >750

ultra- violet blue green yellow orange red infra- violet red

FITC520

PE575

ECD615

PC5665

LASER 488

PI620

Πόσες φθορίζουσες ουσίες Πόσες φθορίζουσες ουσίες πρέπει να χρησιμοποιούνται;πρέπει να χρησιμοποιούνται;

Θεωρητικά, δεν υπάρχει περιορισμόςΘεωρητικά, δεν υπάρχει περιορισμός Σε πρακτικό και κλινικό επίπεδο η Σε πρακτικό και κλινικό επίπεδο η

χρήση χρωμάτων περιορίζεται από χρήση χρωμάτων περιορίζεται από κανένα χρώμα (κανένα χρώμα (FS/SS) FS/SS) έως 6 ίσως 8 έως 6 ίσως 8 φθορίζουσες ουσίες φθορίζουσες ουσίες

Στον ερευνητικό τομέα έχει Στον ερευνητικό τομέα έχει αναφερθεί η χρήση έως και 21 αναφερθεί η χρήση έως και 21 φθοριζουσών ουσιώνφθοριζουσών ουσιών

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣ

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣTANDEMTANDEM

Οι σύγχρονες ανάγκες της Οι σύγχρονες ανάγκες της πολυπαραμετρικής και πολυπαραμετρικής και πολυχρωματικής κυτταρικής πολυχρωματικής κυτταρικής ανάλυσης οδήγησε στη χρήση των ανάλυσης οδήγησε στη χρήση των σύνθετων φθοριζουσών ουσιών σύνθετων φθοριζουσών ουσιών γνωστών ως δίδυμες γνωστών ως δίδυμες tandemtandem χρωστικές. χρωστικές.

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣTANDEMTANDEM

Οι φθορίζουσες ουσίες Οι φθορίζουσες ουσίες tandemtandem είναι σύνθετες είναι σύνθετες φθορίζουσες ουσίες αποτέλεσμα ένωσης δύο φθορίζουσες ουσίες αποτέλεσμα ένωσης δύο χρωστικών. Η διέγερση της πρώτης ουσίας χρωστικών. Η διέγερση της πρώτης ουσίας προκαλεί εκπομπή ενέργειας που διεγείρει τη προκαλεί εκπομπή ενέργειας που διεγείρει τη δεύτερη. Το τελικό αποτέλεσμα είναι η εκπομπή δεύτερη. Το τελικό αποτέλεσμα είναι η εκπομπή ενέργειας και φθορισμού σε μήκος κύματος ενέργειας και φθορισμού σε μήκος κύματος μεγαλύτερο από ότι θα μπορούσε να επιτύχει η μεγαλύτερο από ότι θα μπορούσε να επιτύχει η πηγή πηγή laser laser των των 488nm488nm με μια φθορίζουσα ουσία με μια φθορίζουσα ουσία

ΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣΦΘΟΡΙΖΟΥΣΕΣ ΟΥΣΙΕΣTANDEMTANDEM

COMPENSATIONCOMPENSATION

Όσο περισσότερες φθορίζουσες ουσίες Όσο περισσότερες φθορίζουσες ουσίες χρησιμοποιούνται για την κυτταρική χρησιμοποιούνται για την κυτταρική ανάλυση, τόσο πιο πολύπλοκη γίνεται ανάλυση, τόσο πιο πολύπλοκη γίνεται και διαδικασία διαχωρισμού και και διαδικασία διαχωρισμού και πιθανής επικάλυψης της εκπομπής πιθανής επικάλυψης της εκπομπής φθορισμού των χρωστικών. Η ρύθμιση φθορισμού των χρωστικών. Η ρύθμιση αυτή είναι γνωστή ως αυτή είναι γνωστή ως compensationcompensation και έχει σκοπό την αφαίρεση των και έχει σκοπό την αφαίρεση των κοινών τόπων μήκους κύματος κοινών τόπων μήκους κύματος εκπομπής μεταξύ των φθοριζουσών εκπομπής μεταξύ των φθοριζουσών ουσιώνουσιών

COMPENSATIONCOMPENSATION

Επιλογή Καλύτερης Επιλογή Καλύτερης Φθορίζουσας ΟυσίαςΦθορίζουσας Ουσίας

Y

Y

Ποσότητα Αντιγόνου ανά

κύτταρο

Χαμηλή Χαμηλή PE, PE, PC5PC5

Π.χ. CD13, CD19, CD56ΥψηλήΥψηλή FITCFITC

Π.χ. CD45, HLA Class I, CD33

ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ

Η μετατροπή των φωτεινών Η μετατροπή των φωτεινών σημάτων σε δεδομένα και η σημάτων σε δεδομένα και η ανάλυσή τους γίνεται από τον ανάλυσή τους γίνεται από τον ηλεκτρονικό υπολογιστή του ηλεκτρονικό υπολογιστή του κυτταρομετρητή. κυτταρομετρητή.

ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΗΛΕΚΤΡΟΝΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ

Βιολογικά δείγματαΒιολογικά δείγματα

Μεταφορά δείγματος στο κατάλληλο Μεταφορά δείγματος στο κατάλληλο αιματολογικό φιαλίδιοαιματολογικό φιαλίδιο

Συντήρηση δείγματος στον ανάλογο Συντήρηση δείγματος στον ανάλογο χρόνοχρόνο

Επεξεργασία δείγματος σε μορφή Επεξεργασία δείγματος σε μορφή εναιωρήματοςεναιωρήματος

Ανάλυση δείγματος στον ανάλογο χρόνοΑνάλυση δείγματος στον ανάλογο χρόνο Ανάλυση και επεξεργασία συγκεκριμένου Ανάλυση και επεξεργασία συγκεκριμένου

αριθμού κυττάρων αριθμού κυττάρων

ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΠΕΙΡΑΜΑΤΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΕΝΟΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣΕΝΟΣ ΔΕΙΓΜΑΤΟΣ

Επώαση με τα κατάλληλα Επώαση με τα κατάλληλα μονοκλωνικάμονοκλωνικά

Επεξεργασία μεμβράνης για τα Επεξεργασία μεμβράνης για τα ενδοκυττάρια αντιγόναενδοκυττάρια αντιγόνα

ΑιμόλυσηΑιμόλυση Ανάλυση στον κυτταρομετρητήΑνάλυση στον κυτταρομετρητή

ΟΡΙΟΘΕΤΗΣΗ (ΟΡΙΟΘΕΤΗΣΗ (GATINGGATING))

ΙΣΟΤΥΠΙΚΟ ΙΣΟΤΥΠΙΚΟ CONTROLCONTROL

Μονοκλωνικά αντισώματα κυρίως Μονοκλωνικά αντισώματα κυρίως IgG IgG τάξης (τάξης (IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b)IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b)

Ορισμός αρνητικού φθορισμού στον Ορισμός αρνητικού φθορισμού στον υπό μελέτη πληθυσμό (υπό μελέτη πληθυσμό (cut off)cut off)

Αναγκαία συνθήκη (αυτοφθορισμός Αναγκαία συνθήκη (αυτοφθορισμός κυττάρων, μη ειδική σύνδεση, κυττάρων, μη ειδική σύνδεση, ύπαρξη νεκρών κυττάρων)ύπαρξη νεκρών κυττάρων)

ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΝΑΛΥΣΗ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ

Έλεγχος ποιότηταςΈλεγχος ποιότητας

Κυτταρομετρητής ροήςΚυτταρομετρητής ροής Εργαστήριο κυτταρομετρίας ροής Εργαστήριο κυτταρομετρίας ροής

(αποτελέσματα)(αποτελέσματα)

Έλεγχος ποιότητας Έλεγχος ποιότητας κυτταρομετρητή ροήςκυτταρομετρητή ροής

Σφαιρίδια οπτικής ευθυγράμμισης Σφαιρίδια οπτικής ευθυγράμμισης :: ευθυγράμμιση των οπτικών συστημάτωνευθυγράμμιση των οπτικών συστημάτων

Σφαιρίδια αναφοράς καθορισμένου Σφαιρίδια αναφοράς καθορισμένου φθορισμούφθορισμού: : ρύθμιση φίλτρων και ρύθμιση φίλτρων και φωτοπολλαπλασιαστών φωτοπολλαπλασιαστών

Σφαιρίδια βαθμονόμησης Σφαιρίδια βαθμονόμησης : : ρύθμιση της ρύθμιση της ποσοτικοποίησης των σημάτων ποσοτικοποίησης των σημάτων φθορισμούφθορισμού

Έλεγχος ποιότητας Έλεγχος ποιότητας αποτελεσμάτων εργαστηρίου αποτελεσμάτων εργαστηρίου

κυτταρομετρίας ροήςκυτταρομετρίας ροής

Εσωτερικός (μονιμοποιημένο Εσωτερικός (μονιμοποιημένο περιφερικό αίμα γνωστών περιφερικό αίμα γνωστών συγκεντρώσεων)συγκεντρώσεων)

Εθνικός (δεν υπάρχει επίσημος Εθνικός (δεν υπάρχει επίσημος φορέας)φορέας)

Εξωτερικός (ευρωπαϊκά Εξωτερικός (ευρωπαϊκά προγράμματα ποιοτικού ελέγχου)προγράμματα ποιοτικού ελέγχου)

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ΙΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ Ι

Η κυτταρομετρία ροής αποτελεί μια ιδιαίτερα Η κυτταρομετρία ροής αποτελεί μια ιδιαίτερα ευαίσθητη και αυτοματοποιημένη μεθοδολογία ευαίσθητη και αυτοματοποιημένη μεθοδολογία ανάλυσης πολλαπλών παραμέτρων. Παρόλα ανάλυσης πολλαπλών παραμέτρων. Παρόλα αυτά, η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων αυτά, η αξιολόγηση των αποτελεσμάτων απαιτεί την άρτια και εμπεριστατωμένη απαιτεί την άρτια και εμπεριστατωμένη γνώση του αντικειμένου καθώς η ανάλυση γνώση του αντικειμένου καθώς η ανάλυση των ζητούμενων στοιχείων βασίζεται σε των ζητούμενων στοιχείων βασίζεται σε μεγάλο βαθμό στις επιστημονικές και τεχνικές μεγάλο βαθμό στις επιστημονικές και τεχνικές γνώσεις του χειριστή και αναλυτή ενός γνώσεις του χειριστή και αναλυτή ενός κυτταρόμετρου. Η κυτταρομετρία ροής, αν κυτταρόμετρου. Η κυτταρομετρία ροής, αν και αυτοματοποιημένη, επιδέχεται μεγάλο και αυτοματοποιημένη, επιδέχεται μεγάλο βαθμό υποκειμενικότηταςβαθμό υποκειμενικότητας . .

ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ΙΙΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑ ΙΙ

Οι εφαρμογές της κυτταρομετρίας είναι Οι εφαρμογές της κυτταρομετρίας είναι πολλές, αυξάνονται συνεχώς όσο πολλές, αυξάνονται συνεχώς όσο εξελίσσονται οι τομείς της μοριακής εξελίσσονται οι τομείς της μοριακής βιολογίας, της βιοχημείας, της φυσικής βιολογίας, της βιοχημείας, της φυσικής και της ηλεκτρονικής τεχνολογίας, η και της ηλεκτρονικής τεχνολογίας, η παρουσία όμως ενός κατερτισμένου παρουσία όμως ενός κατερτισμένου επιστήμονα θα παραμένει αναπόσπαστο επιστήμονα θα παραμένει αναπόσπαστο κομμάτι ενός έγκυρου αποτελέσματος από κομμάτι ενός έγκυρου αποτελέσματος από έναν κυτταρομετρητή ροής.έναν κυτταρομετρητή ροής.