פרק 6 עמוד 1 פרק 6. סדר העניינים... פרק 6 עמוד 2 חלק ראשון :...

1עמוד 6פרק

66פרק פרק

סדר העניינים...סדר העניינים...

2עמוד 6פרק

חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגי חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגי

כרומטוגרפיה ...כרומטוגרפיה ...

חלק שני: תאור כמותי, גימלון חלק שני: תאור כמותי, גימלון

חלק ראשון: מבואחלק ראשון: מבואמטרותמטרות

3עמוד 6פרק

תאור תהליך כרומטוגרפיה בעמוד

תופעת העיכוב

תאור כללי של סוגי כרומטוגרפיה

וחומרי מילוי

ניתוח כרומטוגרמות

תהליך כרומטוגרפיה בעמוד תהליך כרומטוגרפיה בעמודColumn ChromatographyColumn Chromatography

4עמוד 6פרק

פאזה נייחת

Stationary Phase

מריץ

)אלואנט(

עיכובעיכוב

5עמוד 6פרק

מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים?מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים?

6עמוד 6פרק

הבדלי גודל

הידרופוביותאינטראקציות

ביולוגיות - ספציפיות עם הפאזה

כימיות - לא ספציפיותהנייחת

אלקטרוסטטיות

ואן-דר-ואלס

שוני בתכונות הפיזיקליות, הכימיות ו/או

הביולוגיות בין מרכיבי תערובת החומרים במרק

תכונות הפאזה הנייחת

המפתח לתכנון כרומטוגרפיה המפתח לתכנון כרומטוגרפיה יעילהיעילה

ניתוח כרומטוגרמותניתוח כרומטוגרמות

7עמוד 6פרק

Time (Volume)

Sig

na

l

Time (Volume)

Sig

na

l

2

2max

max 2

1ttexpss

2

2max

max 2

1VVexpss(6.1)

s - קריאת הגלאי

t - זמן הרצה

V - נפח שנאסף

smax, tmax, Vmax - נפח, זמן, קריאתגלאי בנקודת המקסימום

tmax - סטיית תקן

תאור בעזרת פילוג תאור בעזרת פילוג גאוסיאניגאוסיאני

השבה של מומסהשבה של מומס

8עמוד 6פרק

:tכמות מומס שיצאה עד זמן

x

0

u

max2maxmax

t

0

t

0

2

2max

max

due2

xerf

21tterf1Qst2

dt2

1ttexpQsQydt

2

סה”כ מומס בעמוד: 2maxmax

0 0

2

2max

max Qst2

1dt

2

1ttexpQsQydt

(6.2) 21tterf1R max21

e Reהשבה

(6.3)

כושר הפרדה ודרגת טיהורכושר הפרדה ודרגת טיהור

9עמוד 6פרק

RRssכושר הפרדה - רזולוציה כושר הפרדה - רזולוציה

Rs>1.6שיאים מופרדים

11max,22max,

1max,2max,s *t*t2

ttR

דרגת טיהור דרגת טיהור PPuu

jj,ejmax,

i,eimax,i,u Rs

RsP(6.4)

Time (Volume)

Sig

nal

maxt4 רוחב השיא

סוגי תהליכי כרומטוגרפיהסוגי תהליכי כרומטוגרפיה

10עמוד 6פרק

Gel Filtrationג’ל פילטרציה Gel Permeation Chromatography, GPCSize Exclusion Chromatography, SEC

שינויים בעיכוב שינויים בעיכוב נובעים נובעים

מהבדלי...מהבדלי...

סוג סוג כרומטוגרפיהכרומטוגרפיה

גודל המולקולה

ישומיםישומים

חלבונים, סילוק יונים

פאזה הפוכה

Reveres Phase Chromatography, RPC

אינטראקציות

הידרופוביות

ויטמינים,פפטידים חלבונים,

אנטיביוטיקה

כרומטוגרפיה הידרופובית

Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC

אינטראקציות

הידרופוביות

ויטמינים, חלבונים,

אנטיביוטיקה

)המשך()המשך(סוגי תהליכי כרומטוגרפיה סוגי תהליכי כרומטוגרפיה

11עמוד 6פרק

ספיחהAdsorption Chromatography

שינויים בעיכוב שינויים בעיכוב נובעים נובעים

מהבדלי...מהבדלי...

סוג סוג כרומטוגרפיהכרומטוגרפיה

אינטראקציות

לא-ספציפיות

ישומיםישומים

,DNAחלבונים, RNA

Perfusion Chromatography אינטראקציותשונות

חלבונים

חילוף יונים

Ion Exchange Chromatography, IEC

אינטראקציות חשמליות

חלבונים, חומצות

אורגניות

כרומטוגרפית זיקה

Affinity Chromatographyאינטראקציות

ספציפיות )ביולוגיות(

פפטידים, חלבונים

חומרי מילויחומרי מילויPacking MaterialsPacking Materials

12עמוד 6פרק

(GPCג’ל ) חלקיק נקבובי Perfusion Chromatography

ג’ל - פילטרציהג’ל - פילטרציה

13עמוד 6פרק

Gel FiltrationGel Filtrationג’ל פילטרציה ג’ל פילטרציה Gel Permeation Chromatography, GPCGel Permeation Chromatography, GPC

Size Exclusion Chromatography, SECSize Exclusion Chromatography, SEC

נפוץ לקביעת משקל מולקולרי•

שימוש בדוגמאות כיול•

מתאם שכיח:• bMWln*aV

V

0

עיכוב: הבדלי גודל

Bio-Gel (Polyacrylamid)Sephadex (Dextran)Agarose

Styragel (Polystyren)

כרומטוגרפיה הידרופוביתכרומטוגרפיה הידרופוביתפאזה הפוכה פאזה הפוכה

14עמוד 6פרק

עיכוב: אינטראקציות הידרופוביות

ביו-פולימרים וביוכימיקלים הידרופוביים

אינטראקציות חלשות•

קשורות למצע phenylאו butyl קבוצות •נייח

אלואנט מימי, ריכוז מלח גבוה•

כרומטוגרפיה הידרופובית

Hydrophobic Interaction Hydrophobic Interaction

Chromatography, HICChromatography, HIC

כרומטוגרפית פאזה הפוכה

Reveres Phase Reveres Phase

Chromatography, RPCChromatography, RPC

אינטראקציות חזקות•

• alkanes ( 8-18קשורים למצע נייח פחמנים(

אלואנט אורגני•

חילוף יוניםחילוף יוניםIon-Exchange ChromatographyIon-Exchange Chromatography

15עמוד 6פרק

עיכוב: אינטראקציות חשמליות

חלבונים, חומצות אמינו, חומצות אורגניות

sReABsReBA

-

-

-

-

-

- -

+

+

+

+

+

+

יונים קשורים

Fixed ions

יונים נגדיים

Counter ions

חילוף )הפיך( של יונים נגדיים ביונים בעלי סימן זהה

מהפאזה הניידת

מחליף קטיוני

ם

צעד נוסף לשיפור ההפרדה... צעד נוסף לשיפור ההפרדה...

16עמוד 5פרק

( שינויי בהרכב הממס ( שינויי בהרכב הממס Gradient methodsGradient methods))

- הגדלה הדרגתית של ריכוז מלחמחלף יונים

- שינוי ריכוזי הממיסים כרומטוגרפיות הידרופוביות באלואנט

( הזרקת תוספים ) הזרקת תוספים Displacement Displacement chromatographychromatography))

dextran sulfate

carboxymethyl strach

imminodiacetic acid (IDA)

כרומטוגרפית זרימה רדיאליתכרומטוגרפית זרימה רדיאלית Radial flow chromatographyRadial flow chromatography

17עמוד 5פרק

מריץ

)אלואנט(

זרימה רדיאליתזרימה רדיאלית

18עמוד 5פרק

יתרונות

הקטנת מפל לחץ •

זרימה אחידה •בעמוד

רגישות נמוכה•

לזיהומים מוצקים

הגדלת הספיקה בנפח עמוד נתון )יעילות כלכלית גבוהה יותר(

גימלון כרומטוגרפית זרימה רדיאליתגימלון כרומטוגרפית זרימה רדיאלית

19עמוד 5פרק

אין שינוי בקוטר העמוד

) “הדרך” שעובר הנוזל הזורם במצע הנקבובי(

גימלון לינארי!הגדלת אורך העמוד

הגדלת נפח העמוד, נפח הדוגמא, הספיקה ונפח האלואנט באותו פקטור - בלי שינוי

בזמן ההפרדה

כרומטוגרפיה רציפהכרומטוגרפיה רציפה

20עמוד 5פרק

Annular Chromatography

זמן שהייה

מיקום איסוף התוצר

אין מגבלה על סוג המילוי

עמודי כרומטוגרפיה תעשייתייםעמודי כרומטוגרפיה תעשייתיים

21עמוד 5פרק

זרימה רדיאלית

סיכום חלק ראשוןסיכום חלק ראשון

6פרק 22עמוד

תאור תהליכי כרומטוגרפיה בעמוד

עקרון הפעולה

עיכוב

חומרי מילוי שונים

תאור כמותי של כרומטוגרמות: פילוג גאוסיאני

כלים לחישוב כושר הפרדה, השבה ודרגת טיהור