16.08.20141 presentazione per divulgazione versione per presentazione presentazione antibiogrammi:...
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Presentazione per divulgazione
Versione per presentazione
PRESENTAZIONE
Antibiogrammi: principio ed esecuzione
Presentazione per divulgazione in microbiologia nell’ottica di collaborazioni a scopo didattico per le Scuole Medie Superiori.© TIBIO Sagl 2009
© TIBIO Sagl 2009
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L’antibiogramma:
- Principio: prova di sensibilità (standardizzata) in vitro o in vivo di una specie o di una comunità batterica, ad uno o più prodotti antibiotici.
Specie isolate; Comunità isolate; Materiale biologico;
Viene osservata e testata la RESISTENZA o la SENSIBILITÀ all’antibiotico.
- Antibiotico: sostanza di varia natura chimica prodotta da microorganismi, quali muffe o batteri, o per sintesi, con potere battericida o batteriostatico. Prodotto anche da piante o animali (p.es. olii essenziali dei vegetali).
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RESISTENZA all’antibiotico:
La capacità di proliferazione ed il potere patogeno dei batteri non è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è inutile a fini terapeutici.
SENSIBILITÀ all’antibiotico:
La capacità di proliferazione e/o il potere patogeno dei batteri è influenzato dall’antibiotico (alle concentrazioni testate): l’antibiotico è utile a fini terapeutici.
L’effetto può essere (in funzione di molecola e concentrazione):
Battericida: l’antibiotico uccide le cellule batteriche.
Batteriostatico: l’antibiotico inibisce la crescita batterica.
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L’antibiogramma:
METODI:
Metodo per diluizioni successive: valutare la sensibilità batterica ad un antibiotico a concentrazioni decrescenti (per MIC o MBC).
10 mg/ml 1 mg/ml 0.1 mg/ml 0.01 mg/ml
0.001 mg/ml
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
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L’antibiogramma:
METODI:
Etest: test epsilometrico: prova di sensibilità su terreno solido mediante inserzione di strisce di carta bibula contenenti concentrazioni scalari di antibiotico.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
10 mg/ml
0.001 mg/ml
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L’antibiogramma:
METODI:
Metodo per diffusione: prova di sensibilità su terreno solido inoculato (Müller-Hinton agar). Per tutti i batteri di interesse medico (salvo specie esigenti). Per testare uno o più antibiotici.
10 mg/ml
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
1 mg/ml
0.1 mg/ml
BIANCO
AA
BB
CC
DD
11.04.23 7Figure da: www.servier.chServier Medical Art
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Preparazione delle capsule:
Terreno solido (agar) di Müller-Hinton Agar II: 15 ml / capsula (omogeneo!)
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
EBOLLIZIONEEBOLLIZIONE
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (1):
Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (1)
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
104 ¢ / ml
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (2):
Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (2):
Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
11.04.23 12Figure da: www.servier.chServier Medical Art
METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (2):
Inoculo in ogni capsula di 100µl di LB con 104 cellule / ml (2)
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (3):
Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
15 µl di olio essenzialeØ 6 mm
15 µl di H2OØ 6 mmCONTROLLO
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV Olivone 2009)
Antibiogramma:
Introdurre i dischi di carta imbevuti di olio essenziale e il controllo.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
15 µl di olio essenziale15 µl di olio essenziale
15 µl di H15 µl di H22OO
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (4):
Incubazione a 37°C per 24 ore.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
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METODO PER DIFFUSIONE
Protocollo da applicare (previsto per l’attività didattica del LiLu2 con la FASV, Olivone 2009)
Antibiogramma (5):
Misurazione dell’anello di inibizione.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
15 µl di olio essenziale
15 µl di H2O
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METODO PER DIFFUSIONE
Confronto degli aloni di inibizione, considerare:
Peso molecolare della molecola di antibiotico:più leggera più diffusione.
Idrofobicità della molecola di antibiotico: l’agar è a base di acqua.
Confronto possibile solo tra molecole simili!
Confronto e risultati (protocollo standard):
Alone di ø 1 – 9 mm: specie resistente.specie resistente. Alone di ø10 – 18 mm: specie con resistenza intermedia.specie con resistenza intermedia. Alone di ø > 19 mm: specie sensibile. specie sensibile.
Figure da: www.servier.chServier Medical Art
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FINE PRESENTAZIONE
Grazie per l’attenzione
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