6. manual bacterii
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1
MANUAL DE PRACTICAS DEL
LABORATORIO DE BACTERIOLOGIacuteA II
AUTORES
M en C REYNA DEL CONSUELO ALMIRAY PINZOacuteN
MEC ANA BERTHA ESCOBEDO LOPEZ
M en C GLORIA LEOacuteN TELLO
M en C MARIacuteA SUSANA PEREacuteZ FERNAacuteNDEZ
M en C PATRICIA GUADALUPE SUAacuteREZ ALBORES
2013
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2
IacuteNDICE
Praacutectica No 1 Infecciones gastrointestinales (Coprocultivo)
3
Praacutectica No 2 Infecciones de las vias urinarias (Urocultivo)
9
Praacutectica No 3 Sensibilidad a los antimicrobianos meacutetodo de Kirby-Bauer
(antibiograma)
16
Praacutectica No 4 Infecciones de viacuteas respiratorias altas (Exudado fariacutengeo y
nasofariacutengeo)
21
Praacutectica No 5 Infecciones de viacuteas respiratorias bajas (Cultivo de esputo)
26
Praacutectica No 6 Buacutesqueda e identificacioacuten de Mycobacterium tuberculosis
32
Praacutectica No 7 Infecciones oculares
39
Praacutectica No 8 Infecciones oacuteticas
42
Praacutectica No 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado
uretral)
45
Praacutectica No 10 Cultivo de heridas
551
Praacutectica No 11 Diagnoacutestico de enfermedades meniacutengeas (Cultivo de LCR)
55
Praacutectica No 12 Hemocultivo
60
3
PRAacuteCTICA No 1
INFECCIONES GASTROINTESTINALES
COPROCULTIVO
Introduccioacuten
El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza
fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades
diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes
Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de
microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a
miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son
abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y
especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como
Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la
flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis
principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de
importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias
El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al
diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis
Objetivo
El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las
diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
4
Material
Placas de Petri con Agar Mac
Conkey
Placas de Petri con Agar SS
Placas de Petri con Agar XLD
Placas de Petri con Agar Sulfito de
Bismuto
Placas de Petri con Agar Enteacuterico de
Hecktoen
Placas de Petri con Agar EMB
Placas de Petri con Agar Campy-
BAP
Placas de Petri con Agar TCBS
Placas de Petri con Agar Gelosa
sangre de Carnero
Caldo selenito o tetrationato en tubos
de 13x100 con 2 mL
Agua peptonada Alcalina (APA) a
pH 9
Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de
13x100 con 2mL
Tubos con medio TSI LIA MIO
urea de Christensen citrato de
Simmons para pruebas bioquiacutemicas
Solucioacuten de Iodo
Juego de colorantes de Gram
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante de Azul de Metileno
Gradillas
Aceite de inmersioacuten
Frasco con benzal
Algodoacuten
Taxos de oxidasa
Tubos con caldo soya tripticasa
Bantildeo mariacutea
Marcador de vidrio
Buffer de PBS
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato
2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies
3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra
Procesamiento de la muestra
1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas
pastosas o de diferente color
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
2
IacuteNDICE
Praacutectica No 1 Infecciones gastrointestinales (Coprocultivo)
3
Praacutectica No 2 Infecciones de las vias urinarias (Urocultivo)
9
Praacutectica No 3 Sensibilidad a los antimicrobianos meacutetodo de Kirby-Bauer
(antibiograma)
16
Praacutectica No 4 Infecciones de viacuteas respiratorias altas (Exudado fariacutengeo y
nasofariacutengeo)
21
Praacutectica No 5 Infecciones de viacuteas respiratorias bajas (Cultivo de esputo)
26
Praacutectica No 6 Buacutesqueda e identificacioacuten de Mycobacterium tuberculosis
32
Praacutectica No 7 Infecciones oculares
39
Praacutectica No 8 Infecciones oacuteticas
42
Praacutectica No 9 Infecciones del aparato genital (Exudado cervico vaginal y exudado
uretral)
45
Praacutectica No 10 Cultivo de heridas
551
Praacutectica No 11 Diagnoacutestico de enfermedades meniacutengeas (Cultivo de LCR)
55
Praacutectica No 12 Hemocultivo
60
3
PRAacuteCTICA No 1
INFECCIONES GASTROINTESTINALES
COPROCULTIVO
Introduccioacuten
El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza
fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades
diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes
Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de
microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a
miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son
abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y
especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como
Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la
flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis
principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de
importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias
El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al
diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis
Objetivo
El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las
diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
4
Material
Placas de Petri con Agar Mac
Conkey
Placas de Petri con Agar SS
Placas de Petri con Agar XLD
Placas de Petri con Agar Sulfito de
Bismuto
Placas de Petri con Agar Enteacuterico de
Hecktoen
Placas de Petri con Agar EMB
Placas de Petri con Agar Campy-
BAP
Placas de Petri con Agar TCBS
Placas de Petri con Agar Gelosa
sangre de Carnero
Caldo selenito o tetrationato en tubos
de 13x100 con 2 mL
Agua peptonada Alcalina (APA) a
pH 9
Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de
13x100 con 2mL
Tubos con medio TSI LIA MIO
urea de Christensen citrato de
Simmons para pruebas bioquiacutemicas
Solucioacuten de Iodo
Juego de colorantes de Gram
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante de Azul de Metileno
Gradillas
Aceite de inmersioacuten
Frasco con benzal
Algodoacuten
Taxos de oxidasa
Tubos con caldo soya tripticasa
Bantildeo mariacutea
Marcador de vidrio
Buffer de PBS
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato
2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies
3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra
Procesamiento de la muestra
1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas
pastosas o de diferente color
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Cambridge University
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
3
PRAacuteCTICA No 1
INFECCIONES GASTROINTESTINALES
COPROCULTIVO
Introduccioacuten
El estudio de las bacterias responsables de cuadros cliacutenicos gastrointestinales se realiza
fundamentalmente mediante el cultivo de la materia fecal (coprocultivo) Las enfermedades
diarreicas agudas representan una de las principales causa de defuncioacuten en nuestro paiacutes
Las viacuteas gastrointestinales son el haacutebitat natural de una extensa variedad de
microorganismos la mayoriacutea de las bacterias de la flora enteacuterica residente corresponden a
miembros de la familia Enterobacteriaceae (Ecoli Proteus etc) aunque tambieacuten son
abundantes Enterococcus faecalis diversas especies de Staphylococcus Mycobacterium y
especies anaerobias Siendo de mayor relevancia diagnoacutestica las enterobacterias patoacutegenas como
Shigella Salmonella Yersinia Escherichia coli esta uacuteltima aunque se considera parte de la
flora algunos serotipos denominados enteropatoacutegenos son capaces de producir gastroenteritis
principalmente en lactantes en forma de brotes epideacutemicos Ademaacutes de otros geacuteneros de
importancia meacutedica como Vibrio Campylobacter y Helicobacter que pertenecen a otras familias
El objetivo principal de realizar el coprocultivo es que eacuteste sirva como apoyo al
diagnoacutestico cliacutenico en caso de gastroenteritis
Objetivo
El alumno aprenderaacute la teacutecnica para la realizacioacuten del coprocultivo asiacute como conoceraacute las
diferentes pruebas bioquiacutemicas que se utilizan para la identificacioacuten de los patoacutegenos intestinales
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
4
Material
Placas de Petri con Agar Mac
Conkey
Placas de Petri con Agar SS
Placas de Petri con Agar XLD
Placas de Petri con Agar Sulfito de
Bismuto
Placas de Petri con Agar Enteacuterico de
Hecktoen
Placas de Petri con Agar EMB
Placas de Petri con Agar Campy-
BAP
Placas de Petri con Agar TCBS
Placas de Petri con Agar Gelosa
sangre de Carnero
Caldo selenito o tetrationato en tubos
de 13x100 con 2 mL
Agua peptonada Alcalina (APA) a
pH 9
Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de
13x100 con 2mL
Tubos con medio TSI LIA MIO
urea de Christensen citrato de
Simmons para pruebas bioquiacutemicas
Solucioacuten de Iodo
Juego de colorantes de Gram
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante de Azul de Metileno
Gradillas
Aceite de inmersioacuten
Frasco con benzal
Algodoacuten
Taxos de oxidasa
Tubos con caldo soya tripticasa
Bantildeo mariacutea
Marcador de vidrio
Buffer de PBS
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato
2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies
3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra
Procesamiento de la muestra
1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas
pastosas o de diferente color
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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Tesis UAP
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
4
Material
Placas de Petri con Agar Mac
Conkey
Placas de Petri con Agar SS
Placas de Petri con Agar XLD
Placas de Petri con Agar Sulfito de
Bismuto
Placas de Petri con Agar Enteacuterico de
Hecktoen
Placas de Petri con Agar EMB
Placas de Petri con Agar Campy-
BAP
Placas de Petri con Agar TCBS
Placas de Petri con Agar Gelosa
sangre de Carnero
Caldo selenito o tetrationato en tubos
de 13x100 con 2 mL
Agua peptonada Alcalina (APA) a
pH 9
Solucioacuten salina isotoacutenica en tubos de
13x100 con 2mL
Tubos con medio TSI LIA MIO
urea de Christensen citrato de
Simmons para pruebas bioquiacutemicas
Solucioacuten de Iodo
Juego de colorantes de Gram
Portaobjetos
Cubreobjetos
Colorante de Azul de Metileno
Gradillas
Aceite de inmersioacuten
Frasco con benzal
Algodoacuten
Taxos de oxidasa
Tubos con caldo soya tripticasa
Bantildeo mariacutea
Marcador de vidrio
Buffer de PBS
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato
2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies
3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra
Procesamiento de la muestra
1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas
pastosas o de diferente color
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
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PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Desarrollo
Toma y transporte de muestra para coprocultivo
Las muestras se deberaacuten obtener al inicio del cuadro cliacutenico antes de iniciar el tratamiento
antimicrobiano
1 La muestra de heces se puede tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y
con tapa hermeacutetica de preferencia debe usarse esteacuteril y desechable cuando se trata de
lactantes la muestra se toma directamente del recto usando sonda K31 conectada a una
jeringa esteacuteril e introducieacutendole solucioacuten salina isotoacutenica Si la muestra se toma en el
mismo laboratorio donde se va a procesar el aislamiento no es necesario usar medio de
transporte hay que sembrar de inmediato
2 En estudios de campo o cuando el laboratorio no estaacute cercano la muestra se toma con
un hisopo que debe quedar bien impregnado de materia fecal El hisopo se coloca en un
medio de transporte como el de Cary-Blair o el de Stuart-Amies
3 Soacutelo en ocasiones extremas se puede refrigerar la muestra
Procesamiento de la muestra
1 Hacer la observacioacuten directa de las heces si presenta moco sangre o si son liacutequidas
pastosas o de diferente color
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
2 La tincioacuten de Gram en frotes de materia fecal es importante para corroborar la presencia
de Campylobacter en sus formas vibrioacutenicas y helicoidales la presencia de ceacutelulas
indicativas de inflamacioacuten eritrocitos etc
3 La materia fecal se siembra directamente con un asa y la cantidad de muestra depende del
tipo de medio de cultivo utilizado El meacutetodo usado es por la teacutecnica de estriacutea cruzada
esterilizaacutendola en cada seccioacuten de la placa y separando la estriacutea
4 Las placas se incuban a 37deg C durante 18 a 24 h
5 Al mismo tiempo de sembrar las placas sembrar un tubo de enriquecimiento con muestra
fecal usando una cantidad pesada de inoacuteculo como caldo tetrationato o caldo selenito Si
se sospecha de Vibrio sembrar un tubo con agua peptonada alcalina (APA) incubar a
37degC de 12 a 18 h y posteriormente sembrar en un medio selectivo
6 7- Del tubo de enriquecimiento despueacutes de incubado se siembran medios selectivos y
diferenciales y se identifican las colonias de intereacutes
DIAGRAMA DE TRABAJO
Heces
Agar Mac Conkey
Agar EMB
Azul de metileno
Agar ENDO
Agar XLD
Agar tergitol 7
SSI al 05
Enriquecimiento
Caldo tetrationato o
Caldo selenito
Agar SS
Agar verde Brillante
Agar sulfito de bismuto
Agar XLD
Identificacioacuten bioquiacutemica
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
IDENTIFICACIOacuteN DE Vibrio cholerae
Reporte del coprocultivo
Realizar un informe del estudio para el meacutedico incluyendo los siguientes datos
1 Nombre completo del Paciente
2 Edad y sexo del mismo
3 Tipo de cultivo
4 Si la muestra conteniacutea microorganismos de la flora normal o las bacterias patoacutegenas a nivel
intestinal
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
5 Las caracteriacutesticas principales de la muestra
6 Sus observaciones con las diferentes tinciones
7 Si existe alguacuten comentario se le realiza al meacutedico con sus respectivas sugerencias
8 Firma del responsable
Cuestionario
1 Menciona la flora que podemos encontrar normalmente en una muestra de heces
2 Cuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos encontrar en este tipo de muestra
3 En una muestra soacutelida iquestqueacute bacteria buscamos principalmente
4 iquestQueacute factores intervienen para que un microorganismo pueda causar una infeccioacuten
gastrointestinal
5 iquestQueacute bacterias producen enterotoxinas
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No2
INFECCIONES DE VIacuteAS URINARIAS
UROCULTIVO
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas urinarias son muy frecuentes y presentan una marcada resistencia al
tratamiento y muchas de ellas con tendencia a redicivar especialmente en las personas del sexo
femenino consideraacutendose riesgosas porque pueden evolucionar a enfermedades renales graves
como pielonefritis presentaacutendose en algunos casos de manera asintomaacutetica o como enfermedad
aguda o croacutenica
Las infecciones agudas son causadas generalmente por un solo microorganismo mientras
que las croacutenicas por varios microorganismos Las bacterias que con mayor frecuencia se aislan de
la orina de pacientes son E coli Staphylococcus Proteus Enterococcus faecalis Salmonella
Pseudomonas Mycobacterium ocasionalmente Neisseria gonorroheae o Candida albicans
Objetivo
El alumno aprenderaacute las diferentes tomas de muestra de la orina asiacute como la teacutecnica para su
cultivo
Material
Placas de Petri con Agar Mac Conkey
Placas de Petri con Agar Sal y Manitol
Placas de Petri con Agar sangre de carnero
Placas de Petri con Agar Thayer Martin
Placas de Petri con Agar de DNAsa
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Tubos con medio de Biggy
Tubos con medios TSI LIA MIO Urea y Citrato para pruebas bioquiacutemicas
Asa calibrada
Juego de colorantes de Gram
Taxos de catalasa oxidasa PN ESD Bacitracina 004 U
Portaobjetos y cubreobjetos
Placas esteacuteriles
Pipetas esteacuteriles
Tubos esteacuteriles
Solucioacuten Salina Isotoacutenica
Matraz con Agar Nutritivo esteacuteril
Cuenta colonias
Desarrollo
Toma de muestra
La muestra idoacutenea es la primera miccioacuten de la mantildeana ya que permite la multiplicacioacuten de
bacterias durante la noche
Teacutecnicas para mujeres
1 La paciente debe quitarse la ropa interior
2 Se lavaraacute las manos cuidadosamente con agua y jaboacuten las enjuagaraacute con agua y las secaraacute
con una toalla limpia
3 Se separaraacuten los labios mayores y menores y los mantendraacute separados en todo momento
hasta que se haya recogido la orina
4 Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasaacutendola de delante hacia atraacutes se
repetiraacute el proceso un total de 4 veces
5 Enjuagar cuidadosamente con agua hervida para eliminar los restos de jaboacuten
6 Se indicaraacute a la paciente que orine desechando los 20-25 primeros mililitros tras lo cual y
sin interrumpir la miccioacuten se recogeraacute el resto de la orina en el recipiente
7 El frasco de boca ancha y esteacuteril debe sujetarse para que no tenga contacto con pierna
vulva o ropa de la paciente Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie
interior
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Teacutecnica para hombres
1 Lavado de las manos con agua y jaboacuten
2 Retraer completamente el prepucio que se mantendraacute asiacute en todo momento hasta que se
haya recogido la orina
3 Limpiar el glande con jaboacuten neutro
4 Eliminar los restos de jaboacuten enjuagaacutendolo con agua hervida
5 Se pediraacute al paciente que orine desechando los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir
la miccioacuten recoger el resto de la orina en el recipiente esteacuteril
Teacutecnica para nintildeos
1 En nintildeos y nintildeas mayores la orina se recoge de forma similar a los adultos
2 En nintildeos y nintildeas maacutes pequentildeos la orina se recogeraacute en colectores o bolsas esteacuteriles
especialmente disentildeadas para ellos de la siguiente forma
a) Lavado cuidadoso de los genitales y aacuterea perineal igual que en los adultos
b) Colocar la bolsa de plaacutestico o el colector
c) Vigilar la bolsa cada 30 minutos y tan pronto como el nintildeo haya orinado deben
retirarse y enviarse al laboratorio para su procesamiento
d) Si la miccioacuten no se ha realizado en una hora se repite la operacioacuten colocando una
nueva bolsa
Otros pacientes
1 En pacientes ingresados con imposibilidad de recoger la muestra por siacute mismos se
realizaraacute sondaje vesical por personal sanitario experto con las medidas aseacutepticas
oportunas
2 Orina de pacientes con cateacuteter permanente
a) Se limpiaraacute el cateacuteter con una gasa humedecida en alcohol o solucioacuten yodada
Dejar secar unos minutos
b) Pinchar directamente con la aguja el cateacuteter por la zona desinfectada aspirando
entre 3-5 mL
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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y Plesiomonas Tesis UAP
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Tesis UAP
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UAP
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
c) Para su transporte puede enviarse en la jeringa o pasar la orina a un recipiente
esteacuteril Si no puede llevarse al laboratorio se debe refrigerar a 4ordmC
d) Como regla general se considera que la muestra de sonda vesical no es una
muestra adecuada y que estaacute justificado rechazar su procesamiento
Aspiracioacuten suprapuacutebica
1 Este tipo de procedimiento solo puede ser realizado por personal meacutedico Se usa para obtener
el diagnoacutestico exacto en los recieacuten nacidos y en los nintildeos pequentildeos es una forma de
demostrar el origen de la infeccioacuten de la vejiga y la bacteriuria con microorganismos que se
originan maacutes allaacute de la vejiga asiacute como la buacutesqueda de bacterias anaerobias
2 Hacer una puncioacuten directa en la vejiga a traveacutes de la pared abdominal con aguja y jeringa
3 Este tipo de meacutetodos se considera muy agresivo
Transporte de la muestra
La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora Cuando esto no sea posible debe
refrigerarse a 4ordmC durante un tiempo maacuteximo de 24 horas El laboratorio debe controlar el
transporte garantizaacutendose que las muestras han sido refrigeradas desde el momento de su toma
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
siendo admisible si no puede garantizarse el transporte correcto la utilizacioacuten de alguacuten
conservante (aacutecido boacuterico al 2 o el sistema comercial con boacuterico-formiato)
Volumen miacutenimo de la muestra
Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL ver tabla
Recomendaciones sobre el volumen de orina
Meacutetodo del asa calibrada 10-3
1 Se basa en el uso del asa calibrada para inocular un volumen conocido de orina en la placa
2 Agitar la orina y tomar una asada de orina con el asa calibrada procurando que solo entre la
rueda y se descarga en liacutenea rectas en el centro de la placa y se estriacutea
3 Se incuban las placas a 37ordmC por 24 h
4 Contar el nuacutemero de colonias que se desarrollan en las placas y se calcula las unidades
formadoras de colonias por mL (UFCmL)
5 Se identifica el microorganismo seguacuten sus caracteriacutesticas
Meacutetodo de dilucioacuten con pipeta
1 Se coloca 01 mL de orina en 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 102) se
homogeneiza el tubo perfectamente
2 Con una pipeta esteacuteril se toman 01 mL de esta dilucioacuten y se transfiere a un segundo tubo
conteniendo 99 mL de solucioacuten salina isotoacutenica (dilucioacuten 104)
3 Se toman 01 mL de cada uno de los tubos y se depositan en placas de medios de cultivo
seleccionados
DETERMINACION VOLUMEN
(mL) COMENTARIOS
Bacteria 05-1 Primera orina de la mantildeana
Hongos gt20 Primera orina de la mantildeana
Mycobacterias gt20 Primera orina de la mantildeana tres diacuteas consecutivos
Anaerobios 1 Aspirado suprapuacutebico enviar en un sistema de transporte
para anaerobios
Virus 10-15 Primera orina de la mantildeana enviar con hielo y
transportar al laboratorio inmediatamente
Paraacutesitos Orina de 24 horas
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
4 La suspensioacuten bacteriana se extiende rotando las placas suavemente se incuba a 37ordmC de 18-
24 h
5 Se cuenta el nuacutemero de colonias de acuerdo al factor de dilucioacuten correspondiente
Meacutetodo de vaciado en placa
1 Se coloca 1 mL de cada una de las diluciones arriba mencionadas dentro de cajas de Petri
esteacuteriles
2 Se agrega el medio de cultivo fundido y enfriado a 45ordmC se rota suavemente la placa para
que se homogeneice perfectamente y se deja solidificar el medio
3 Se incuban las placas a 37ordmC de 18-24 h
4 Se cuenta el nuacutemero de colonias
5 De acuerdo al factor de dilucioacuten se calcula las UFCmL
DIAGRAMA DE TRABAJO
Reporte
Una parte importante del urocultivo es la interpretacioacuten del resultado El criterio de 100000 o
maacutes microorganismos por mL de orina para el diagnoacutestico de la bacteriuria significativa es
primariamente de iacutendole operacional cuando se emplea el meacutetodo del vaciado aseacuteptico para
Agar Mac Conkey
Agar sangre de carnero asa calibrada 10-3
Cent 2000g10 min Sedimento
Cuantificacioacuten No de colonias X 1000
No de UFCmL
Thayer Martin (N gonorrhoeae)
Agar Biggy (Candida albicans)
Identificacioacuten bioquiacutemica
Primera miccioacuten matutina
Chorro medio
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
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PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
recoger las muestras Actualmente se utiliza el criterio de Kass para detectar una bacteriuria
verdadera
La bacteriuria verdadera se caracteriza usualmente por cuentas que exceden sobradamente el
1rsquo000000 de colonias por mL menos de 10000 UFC mL se considera negativo Sin embargo es
muy importante el criterio del meacutedico de acuerdo al estado cliacutenico de su paciente
El reporte deberaacute contener los siguientes datos
Nombre del Paciente
Edad
Sexo
Fecha
Hora de la toma de muestra
Nombre del meacutedico
Tipo de estudio
Resultado
Pe Se aiacuteslo E coli 650000 UFCmL
Negativo a las 48 h de incubacioacuten
Firma del Responsable
Cuestionario
1 Menciona a partir de queacute aacuterea del aparato urinario es esteacuteril
2 Escribe los microorganismos que podemos encontrar como microflora residente en la
uretra
3 iquestQueacute es la bacteriuria
4 iquestPor queacute es importante realizar cultivos cuantitativos en una muestra de orina
5 iquestPor queacute la orina debe procesarse lo maacutes pronto posible
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRACTICA No 3
SENSIBILIDAD A LOS ANTIMICROBIANOS METODO DE KIRBY-BAUER
ANTIBIOGRAMA
Introduccioacuten
En los uacuteltimos antildeos las bacterias resistentes a los antimicrobianos han causado varios brotes de
infecciones que produjeron muchas muertes Por ello es necesario establecer programas
nacionales e internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibioacuteticos
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables La
informacioacuten microbioloacutegica y epidemioloacutegica disponible ayudaraacute a los cliacutenicos a seleccionar el
agente microbiano maacutes apropiado para tratar cada infeccioacuten
Plantear la necesidad de saber cuaacutel es el antimicrobiano que se debe utilizar para eliminar
el microorganismo que estaacute provocando la infeccioacuten es de suma importancia en pacientes cuyas
terapias antimicrobianas han tenido poco eacutexito principalmente en pacientes hospitalizados
Para esto es necesario conocer
1 La susceptibilidad del microorganismo ldquoin vitrordquo
2 La relacioacuten de susceptibilidad entre el microorganismo y las bacterias de la misma especie
3 Las propiedades farmacoloacutegicas de los antimicrobianos incluyendo su toxicidad
distribucioacuten absorcioacuten y excrecioacuten
4 Experiencia cliacutenica en el tratamiento
5 Historia natural del proceso patoloacutegico
6 El estado inmune del hueacutesped
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El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
El papel que juega el laboratorio es de suma importancia ya que al determinar la
susceptibilidad de los microorganismos ldquoin vitrordquo daraacute una pauta a seguir sobre cuaacutel debe ser el
antimicrobiano que se debe usar sin dejar de considerar las diferencias en su actividad in vitro
Para este tipo de estudios existen varios meacutetodos como son
1 Dilucioacuten seriada en tubo
2 Dilucioacuten seriada en placa
3 Difusioacuten en discos de papel filtro
4 Sistemas automatizados
La seleccioacuten del meacutetodo va a depender de
1 Nuacutemero de pruebas que se procesen diariamente
2 Tipo de microorganismo que se trata del sitio que se aisleacute tipo de patogenicidad etc
3 Equipo automatizado que se cuente
Objetivo
Que el alumno realice la teacutecnica de difusioacuten en disco de Kirby-Bauer para determinar la
susceptibilidad del patoacutegeno ldquoin vitrordquo ante determinados antimicrobianos
DIFUSIOacuteN EN DISCOS DE PAPEL FILTRO (Modificado de la FDA y la NCCLS del
meacutetodo original de Bauer Kirby Sherris y Turck 1966)
Utilizando discos de papel filtro con diferentes concentraciones del antimicrobiano seacute obtiene
diaacutemetros en la zona de inhibicioacuten proporcionales a la concentracioacuten Para seguir este meacutetodo es
indispensable
1 Efectuar el antibiograma a microorganismos de crecimiento raacutepido por lo que no se
deberaacute emplear en organismos de crecimiento lento anaerobios obligados
2 Siempre se realizaraacute con cultivos puros y con cepas control
3 El medio empleado es el de Mueller-Hinton cuyo pH final deberaacute ser 72 a 74
4 Los microorganismos control utilizados para realizar esta teacutecnica son Staphylococcus
aureus (ATCC 25923) y Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
5 Verificar la calidad de los discos asiacute como su fecha de caducidad
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
6 Para probar la susceptibilidad de Haemophylus y Streptococcus se utiliza el medio
suplementado con sangre de carnero
Material
1 Placas con medio de Mueller Hinton de 15 cm de diaacutemetro
2 Placas con medio de Mueller Hinton con sangre de carnero
3 Tubos con 4 ml de caldo Mueller Hinton
4 Hisopos esteacuteriles
5 Pinzas
6 Sensidiscos para Grampositivos y Gramnegativos
7 Cepas control
8 Regla transparente
9 Alcohol
10Tubo del Nefeloacutemetro de McFarland al 05
11Solucioacuten salina isotoacutenica esteacuteril
Desarrollo
1 Con un asa en punta se tocan 4 oacute 5 colonias morfoloacutegicamente iguales y se inoculan en un
tubo con caldo Mueller Hinton
2 Incubar a 35ordmC hasta que aparezca una leve turbidez (2 a 5 h)
3 Se ajusta la turbidez tomando como referencia el tubo 05 del Nefeloacutemetro de McFarland
4 Se introduce el hisopo en el caldo de tal forma que se humedezca con la suspensioacuten
bacteriana se le quita el exceso de caldo en las paredes del tubo
5 Sembrar el microorganismo en la placa de Mueller Hinton en tres direcciones para sembrar
uniformemente Al final se pasa el hisopo en el borde de la placa
6 Colocar los sensidiscos distribuidos en forma uniforme o en su defecto usando un dispensador
automaacutetico con una presioacuten ligera
7 Incubar la placa de Petri en forma invertida durante 18 h a 35ordmC
8 Se mide los halos de inhibicioacuten con la regla
9 La interpretacioacuten de los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten de las cepas se hace en base a las
tablas entregadas por el fabricante
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
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4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Diagrama de procedimientos
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Reporte
1 Se informa la actividad de los antibioacuteticos contra los microorganismos empleados
2 Si la cepa es de microorganismos resistentes a la penicilina se debe probar su comportamiento
a otros antibioacuteticos
3 Siacute el paciente es sensible a la penicilina se debe usar eritromicina y la tetraciclinas como otra
alternativa
4 Se reporta el nombre de la bacteria con su geacutenero y especie asiacute como su comportamiento al
antibiograma
Cuestionario
1 Describe las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la realizacioacuten de los antibiogramas
2 iquestA queacute microorganismo le realizas el antibiograma
3 iquestCuaacutel es la teacutecnica que utilizaste en la praacutectica y queacute nombre recibe
4 iquestQueacute medio de cultivo utilizaste para esta teacutecnica
5 iquestPor queacute se calibra la muestra a una turbidez de 05 y a cuaacutentas bacterias equivale
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 4
TRACTO RESPIRATORIO SUPERIOR
EXUDADO FARIacuteNGEO Y NASOFARIacuteNGEO
Introduccioacuten
El estudio del exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo es importante para el diagnoacutestico de ciertas
infecciones consideradas dentro de las principales causas de morbilidad y mortalidad en todo el
mundo Dentro de las principales bacterias patoacutegenas causantes de infeccioacuten estaacuten los
estreptococos
Tambieacuten es muy importante conocer la flora normal en las viacuteas respiratorias altas y bajas
para un buen reporte ya que la orofaringe es un sitio expuesto y se debe distinguir a los
patoacutegenos de los comensales con ayuda del cultivo
El exudado fariacutengeo y nasofariacutengeo son las muestras maacutes empleadas para el estudio
bacterioloacutegico de una infeccioacuten de viacuteas respiratorias superiores y es requisito importante que sean
tomadas en forma adecuada para garantizar resultados confiables y correctos
Objetivo
Que el alumno aprenda a tomar la muestra para el aislamiento de bacterias de importancia meacutedica
de viacuteas respiratorias altas
Toma y transporte de la muestra
Es muy importante la toma de la muestra al inicio del cuadro cliacutenico antes de empezar cualquier
tratamiento
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
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13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
1 Es importante indicarle al paciente que debe venir al laboratorio sin aseo bucal
2 Sin haber ingerido ninguacuten tipo de alimento
3 No debe haber ingerido ninguacuten antimicrobiano
4 Se inclina la cabeza del paciente hacia atraacutes y se revisa con una laacutempara la zona afectada
5 Se empuja la lenguas hacia abajo con un abatelenguas esteacuteril que permita mejor visioacuten
6 Se introduce un hisopo hacia las amiacutegdalas se frota suavemente la zona afectada
7 Hay que evitar tocar la lengua los dientes o la mucosa
EXUDADO NASOFARINGEO
En la muestra indicada para la investigacioacuten de Bordetella pertussis se puede tomar por
exudado o aspirado
1 Utilizar solamente hisopos de Dacroacuten o rayoacuten con base de plaacutestico o alambre
flexible NO utilizar hisopos de alginato de calcio o con palillo de madera
2 Introducir el hisopo por una de las narinas aproximadamente 10 cm cuidando tocar solo
el extremo posterior del mango del hisopo y evitar tocar solo los cornetes
3 Una vez tocado el fondo de la nasofaringe se frota suavemente y con movimiento raacutepido
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Aspirado
1- Desinfectar el lugar de la puncioacuten con povidona
2- Introducir una aguja en el antrum maxilar por debajo del cornete inferior o en el seno frontal
por debajo del marco supraorbital del ojo
3- Aspirar el liacutequido del seno Cuando no se obtenga liacutequido aplicar 1 mL de suero salino esteacuteril
y aspirarlo nuevamente
4-Inyectar una parte de la muestra en un medio de transporte para anaerobios y enviar el resto en
un contenedor esteacuteril o en la propia jeringa
Transporte de la muestra
1 En caso que la muestra no se vaya a procesar de inmediato se deberaacute depositar en medio de
transporte
2 Es importante que el meacutedico nos indique en base al cuadro cliacutenico de que proceso infecciosos
se sospecha para conocer los requerimientos de cada una de las bacterias y sembrar las
muestras inmediatamente
Material
1 Placas de Petri con Gelosa sangre de carnero al 5
2 Placas de Petri con medio de Sal y Manitol
3 Placas de Petri con Mac Conkey
4 Placas de Petri con medio de Thayer-Martin
5 Placas de Petri con medio de Agar hemina bacitracina extracto de levadura (GHBL)
6 Placas de Petri con medio de Biggy
7 Tubos con medios TSI LIA MIOCS y Urea para pruebas bioquiacutemicas
8 Tubos con caldo Soya Tripticasa
9 Matraz con 15 ml de agar de Soya tripticasa
10Hisopos esteacuteriles
11Abatelenguas esteacuteriles
12Colorantes de Gram
13Frasco con cloro
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
14Sensidiscos de Bacitracina de 004 U
15Sensidiscos de Optoquina
16Sensidiscos de Novobiocina
17Tubos con agar bilis esculina
18Tubos de Caldo soya tripticasa con 65 NaCl
Desarrollo
Es importante seguir el diagrama de trabajo que se indica en esta praacutectica Aunque el uso
de agar sangre de carnero es obligado para la buacutesqueda de Streptococcus hemoliacutetico
1 Se toma la muestra como ya se indicoacute anteriormente se siembra en los medios agar sangre de
carnero Thayer Martin Sal y Manitol etc
2 Se incuban 24 h a 37ordmC
3 Hacer frotes y tentildeir por teacutecnica de Gram Ziehl Neelsen Giemsa para investigar asociacioacuten
con fusoespirilar
4 Siacute en las tinciones se sospecha de Corynebacterium diphteriae se debe seguir un diagrama de
trabajo especiacutefico para su identificacioacuten asiacute como el aviso inmediato a las autoridades de la
SSA
5 Se debe leer todas las placas y se identifica a los microorganismos patoacutegenos
Es importante en nintildeos menores de cinco antildeos la investigacioacuten de Haemophilus influenzae
Es de gran trascendencia epidemioloacutegica determinar la presencia de portadores de Neisseria
meningitidis
Otro problema importante son los casos de Bordetella pertussis es importante sembrar las
muestras en medio de Bordet-Gengou y seguir un diagrama especiacutefico para su identificacioacuten
asiacute como la notificacioacuten de los casos a la SSA
Reporte
El reporte al meacutedico es de acuerdo a nuestros resultados es importante tomar en cuenta la edad y
sexo del paciente
1 Se aisloacute Flora Normal
2 Se identificoacute el siguiente microorganismo se pone geacutenero y especie
3 Es posible encontrar maacutes de un microorganismo patoacutegeno en un cultivo
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
4 De preferencia a estas muestras se les realiza antibiograma si tiene maacutes de una bacteria
patoacutegena a cada una se les realiza su antibiograma
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- iquestCuaacutel es la importancia de realizar un cultivo fariacutengeo
2- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para una correcta toma de muestra
3- Menciona la flora normal de faringe
4- Menciona a los principales patoacutegenos que podemos encontrar como posibles productores de
una faringitis
5- iquestCuaacutel es la importancia de buscar a Streptococcus pyogenes
Caldo estreptosel
Agar Biggy
Agar sangre de carnero
(CGP BGN)
GHBEL (H influenzae)
Candida albicans
Agar sangre de carnero
Medio de transporte Stuart
Pruebas de identificacioacuten
Colonias β-hemoliacuteticas
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 5
INFECCIONES DE VIacuteAS RESPIRATORIAS BAJAS
(CULTIVO DE EXPECTORACIOacuteN)
Introduccioacuten
Las infecciones de las viacuteas respiratorias inferiores son causa importante de enfermedad y muerte
a nivel nacional Siendo la tuberculosis en sus diferentes cuadros agudos una de las maacutes
frecuentes se presentan tanto en gente joven y anciana asiacute como en pacientes inmunodeficientes
y a consecuencia principalmente del uso del tabaco
De los principales agentes bacterianos asociados a neumoniacuteas sobresalen en primer
teacutermino Streptococcus pneumoniae Klebsiella pneumoniae Haemophilus influenzae bacterias
del tipo anaerobio tienen un papel importante en algunas muestras por lo que se recomienda la
buacutesqueda de Chlamydia pneumoniae y Mycoplasma pneumoniae que se asocia con neumoniacuteas
atiacutepicas Francisella tularensis Ecoli Ps aeruginosa levaduras del tipo de Candida albicans
En las condiciones habituales de la cliacutenica diaria la expectoracioacuten no es una muestra
representativa de la situacioacuten existente en el tracto respiratorio inferior por su mezcla con
secreciones procedentes de todo el aacuterbol traqueo-bronquial y con la flora saproacutefita de la
orofaringe No obstante es un meacutetodo faacutecil y raacutepido cuya utilidad o relacioacuten entre resultado
obtenido y verdadera etiologiacutea depende en gran medida de su correcta obtencioacuten control de
calidad antes de iniciar su procesamiento tipo de agente que se pretenda detectar y valoracioacuten
adecuada del resultado
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo e identificacioacuten de los agentes etioloacutegicos
de las viacuteas respiratorias bajas a partir de esputo y otros productos
Toma de muestra
1- Enjuagar la boca con agua destilada esteacuteril o solucioacuten salina
2- Obtener el esputo tras una expectoracioacuten profunda preferentemente matinal
3- De no producirse expectoracioacuten espontaacutenea puede inducirse el esputo con nebulizaciones de
suero fisioloacutegico esteacuteril (15 mL durante 10 minutos) siendo uacutetil ademaacutes realizar un drenaje
postural o fisioterapia respiratoria
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL
1 Este tipo de muestras solo son tomadas por un meacutedico en condiciones aseacutepticas
2 Evitar la contaminacioacuten con la flora de la cavidad oral
3 Se recomienda solo en pacientes hospitalizados con SIDA Caacutencer o enfermedad obstructiva
croacutenica (EPOC)
4 La muestra se debe procesar de inmediato una vez llegada al laboratorio
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Volumen miacutenimo
De 2 a 10 mL si es posible
Transporte y conservacioacuten
Enviacuteo inmediato al laboratorio (no superior a 2 horas) Si no es posible conservar en
refrigeracioacuten 4ordmC
Observaciones
1- Es preferible realizar la toma antes de instaurar el tratamiento antibioacutetico
2- No es uacutetil para anaerobios
3- No son inoculables las secreciones de sospechosa procedencia
4 - La expectoracioacuten debe rechazarse hasta obtener un esputo de calidad suficiente (mas de 25
leucocitos polimorfonucleares por campo 100x y de 10 ceacutelulas epiteliales por campo 100x)
Material
1 Placas de Agar sangre de carnero
2 Placas de Agar de Mac Conkey
3 Placas de Agar Cetrimida
4 Placas de Agar de Sal y Manitol
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
5 Placas de Agar de Thayer Martin
6 Placas de Agar Levinthal
7 Placas de gelosa sangre en base Columbia con aacutecido nalidiacutexico y colistina
8 Tubos con medio de Biggy
9 Tubos con medios TSI UREA CS LIA y MIO para pruebas bioquiacutemicas
10 Portaobjetos
11 Cubreobjetos
12 Microscopio
13 Juego de colorantes de Gram
14 Tinta China
15 Aceite de inmersioacuten
16 Taxos de optoquina y bacitracina de 004 U y 10 U
17 Tubos esteacuteriles de plaacutestico desechable
18 Pipetas Pasteur esteacuteriles
19 Centriacutefuga
Desarrollo
Todas las muestras de cepillado bronquial o de esputo se deben trabajar con las siguientes
medidas de seguridad Uso de campana de seguridad guantes desechables cubrebocas y lentes
protectores o en su defecto mascarillas
Seleccioacuten de la muestra
1 La muestra se examina microscoacutepicamente para identificar la presencia de sangre y material
purulento asiacute como el color de la misma
2 Se toma de la porcioacuten maacutes purulenta o con restos de sangre y a partir de esta porcioacuten se hace
una tincioacuten de Ziehl-Neelsen tincioacuten de Gram y el examen en fresco el cual una vez puesto el
cubreobjetos se presiona de tal forma que la muestra se distribuya
3 Observar todo el porta-objetos para determinar la distribucioacuten de las ceacutelulas tipo
4 Se examina por la oacuteptica de Normarsky Hay que seleccionar 10 campos representativos y en
ellos se cuentan el nuacutemero y proporcioacuten de leucocitos y de ceacutelulas epiteliales de descamacioacuten
Seguacuten los resultados se clasifican de acuerdo a Welch y Kelly
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
CLASIFICACIOacuteN DEL ESPUTO SEGUacuteN WELCH Y KELLY
Clase de Grupo Ceacutelulas Leucocitos
Welch-Kelly Normansky Epiteliales
I 0 lt25 lt25
1 gt25 lt10
2 gt25 10-25
II 3 gt25 gt25
III 4 10-25 gt25
5 lt10 gt25
6 lt25 gt25
Tomado de Welch DFkellMTJClinMicrobiol 1979 9520-524
5 Las muestras que sean de clase III seraacuten cultivadas
6 Las muestras que sean de clase I y II se rechazan no se deben cultivar
Nota Es muy importante indicar el porqueacute del rechazo de la muestra al meacutedico y solicitar una
nueva muestra y se enviacutea con la siguiente leyenda ldquoLa muestra no fue aceptada para el cultivo
debido a la presencia de maacutes de 25 ceacutelulas epiteliales por campo microscoacutepico (100x)
7 Inocular la porcioacuten sobrante del material purulento en los medios de cultivo adecuados por
estriacutea cruzada no olvidar hacer picadura en las placas de gelosa sangre de carnero para
certificar la hemoacutelisis
8 Incubar las placas con sangre a 35-37 ordmC en atmoacutesfera parcial de CO2
9 Se identifican las bacterias de acuerdo a su geacutenero y especie
Reporte
1 Proporcionar un informe preliminar despueacutes de la observacioacuten de los cultivos
2 La flora normal presente en el cultivo no debe ser identificada ni reportada
3 Si no se observan microorganismos al teacutermino de la incubacioacuten y la identificacioacuten de los
microorganismos patoacutegenos ya se realizoacute se debe enviar el informe final con fecha y firma del
responsable Se debe informar el cultivo pe Negativo a buacutesqueda de S pyogenes
4 Si no hay crecimiento despueacutes de dos diacuteas el informe final es el siguiente No hubo
crecimiento bacteriano a las 48 h de incubacioacuten
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
En el laboratorio se debe contar con pruebas raacutepidas para la identificacioacuten de antiacutegenos que
ayudan al meacutedico para establecer una terapia antimicrobiana adecuada y en el menor tiempo
posible
En paciente con fibrosis quiacutestica o en hueacutespedes comprometidos es semejante sin embargo es
importante reportar todos los microorganismos independientemente la cantidad en que se
encuentra y es muy importante realizarles el antibiograma aunque el meacutedico no lo solicite
DIAGRAMA DE TRABAJO
37 degC CO2 24 ndash 48 h
Cuestionario
1- iquestQueacute caracteriacutesticas debe tener una muestra de expectoracioacuten para poderla procesar
2- iquestQueacute microorganismos pueden afectar las viacuteas respiratorias bajas
3- iquestCuaacutel es el principal microorganismo que buscamos en una expectoracioacuten
4- iquestMencione otras teacutecnicas que se pueden utilizar para identificar a Streptococcus pneumoniae
5- iquestCuaacutel es el fundamento de la tincioacuten de Ziehl-Neelsen
Muestra (Esputo)
Pruebas de identificacioacuten
Agar Gelosa Sangre Agar Gelosa Chocolate Agar Mac Conkey Agar Sal y Manitol Agar Biggy
Examen en fresco Tincioacuten de Gram
BAAR
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
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de beta lactamasa Tesis UAP
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Tesis UAP
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 6
BUacuteSQUEDA E IDENTIFICACIOacuteN DE
Mycobacterium tuberculosis
Introduccioacuten
La tuberculosis en nuestro paiacutes es actualmente uno de los problemas maacutes importantes de salud en
los uacuteltimos 5 antildeos y su resurgimiento se da a partir de la epidemia de VIH que ataca a todo el
mundo
El diagnoacutestico de las micobacterias se puede realizar en diferentes productos bioloacutegicos
como son esputo orina lavado gaacutestrico raspado lariacutengeo lavado o cepillado bronquial materia
fecal sangre menstrual heridas
Objetivo
Que el alumno conozca el manejo de las diferentes muestras para el aislamiento de
Mycobacterium tuberculosis
Toma de muestra
Una parte muy importante para un buen resultado es la toma de muestra la cual deben cubrir
algunos requisitos indispensables como son
1 Calidad de la muestra
2 Cantidad
3 Envase esteacuteril y desechable
EXPECTORACIOacuteN
1 La muestra debe ser de preferencia la primera de la mantildeana
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
2 La muestra que son enviadas al laboratorio de preferencia se le agrega carbonato de sodio que
tiene la finalidad de disminuir el crecimiento de la flora asociada y disminuir el mal olor
3 En caso de nintildeos se puede usar el hisopo lariacutengeo o nasofariacutengeo
4 No olvidar usar frasco esteacuteril biodegradable de boca ancha
ORINA
1 Se debe obtener en un frasco esteacuteril y de boca ancha despueacutes de lavado estricto de genitales
2 Se puede usar orina de 24 h o la primera de la mantildeana
3 En este tipo de muestras es posible que el meacutedico lo solicite en forma seriada
LAVADO GASTRICO
1 Este tipo de muestras solo las efectuacutea un meacutedico
2 Se utiliza una sonda gaacutestrica esteacuteril y desechable
3 El contenido del lavado gaacutestrico se pone en un frasco esteacuteril
4 Se trabaja el sedimento
5 Este tipo de muestras se deben trabajar el mismo diacutea que se toman
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
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14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
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16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
LAVADO O CEPILLADO BRONQUIAL y PLEURAL
1 Este tipo de muestras es tomado por el meacutedico en sala de operaciones bajo condiciones de
asepsia
2 Este tipo de muestras se reciben en un frasco esteacuteril con un volumen de acuerdo al aseo que le
realizaron al paciente
3 Se deben procesar el mismo diacutea que se reciben
4 Se trabaja con el sedimento de la misma
Material que se utiliza para el lavado o cepillado bronquial
HECES
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril y desechable
2 Se prepara una suspensioacuten gruesa de materia fecal y solucioacuten salina
3 Se agrega un volumen igual de eacuteter Se agita y se centrifuga a 3000 rpm5 min
4 Se elimina el sobrenadante
5 Se utiliza la capa gelatinosa
6 Se realiza la tincioacuten de BAAR
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
7 El resto de la materia fecal se trata con NaOH al 4 se siguen los pasos igual que el esputo
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
1 Este tipo de muestras las obtiene el meacutedico en forma aseacuteptica
2 Se reciben en tubos esteacuteriles
3 Se centrifuga la muestra
4 Del sedimento se realizan las tinciones y se siembra
5 La muestra se debe trabajar en forma inmediata el diacutea que se recibe
TEJIDOS
1 Se recibe en un frasco esteacuteril de boca ancha
2 Se toman fragmentos de tejidos y se trituran en un mortero esteacuteril
3 Se hacen frotes delgados
4 Las demaacutes muestra se siembra en forma directa
Material
1 Tubos esteacuteriles de tapoacuten de rosca de plaacutestico biodegradable con capacidad de 40 ml guantes
desechables
2 Cubrebocas o en su defecto mascarilla
3 Frascos esteacuteriles
4 Agitador vortex
5 Equipo de Ziehl-Neelsen
6 Equipo de Auramina Rodamina
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
7 NaOH al 4
8 Pipetas Pasteur esteacuteriles
9 Frasco con fenol al 10
10Pinzas
11Tubos con medio de Lowenstein - Jensen
12Microscopio
13Aceite de inmersioacuten
14Portaobjetos
Desarrollo
BACILOSCOPIA DIRECTA DEL ESPUTO
1 Hacer un frote de la porcioacuten purulenta se puede usar un aplicador de madera
2 Extender la muestra en forma uniforme
3 El aplicador se desecha dentro del frasco de la muestra
4 Se deja secar el frote al aire
5 Se fija al calor
6 Se tintildee por la teacutecnica que se tenga para la buacutesqueda de BAAR
INTERPRETACION
El nuacutemero de bacilos es de suma importancia ya que se relacionan con el grado de infectividad
del paciente La lectura se realiza como lo muestra el esquema de tal forma que se observa toda la
preparacioacuten
Informe de las baciloscopias para BAAR
Tomado de International 4 Union Againts Tuberculosis 1977
No de bacilos Reporte de Resultados
Negativo No se observan BAAR en 100 campos
De 1 a 9 BAAR Informar el nuacutemero de bacilos en 100 campos
Positivo + Menos de un bacilo x campo observados en 100 campos
Positivo ++ De 1 a 10 bacilos por campo en promedio en 50 campos observados
Positivo +++ Maacutes de 10 bacilos por campo en 20 campos observados
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Cambridge University
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
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Tesis UAP
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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
CONCENTRACION Y CULTIVO DEL ESPUTO
Dado las caracteriacutesticas de las muestras es importante seguir estas indicaciones para prepararlas y
poder asiacute sembrarlas en el medio selectivo
Meacutetodo de Petroff modificado
1 Se toman 2 mL del esputo y se transfieren a un tubo de tapoacuten de rosca de plaacutestico desechable y
se mezclan con un volumen igual de NaOH al 4 con rojo de fenol
2 El tubo se agita en un vortex durante 20 seg Se incuba a 37ordm C por 15 min
3 Se centrifuga a 3000 rpm durante 15 min (Por ninguacuten motivo se debe abrir la centrifuga si
no se ha detenido completamente)
4 Se decanta cuidadosamente el sobrenadante
5 El sedimento se neutraliza con HCl 1N o con H2SO4 al 8 El procedimiento de
neutralizacioacuten debe ser muy cuidadoso de tal forma que el pH final no sea inferior a 65 ni
superior a 72
6 Se siembra 7 o 8 gotas del sedimento con pipeta Pasteur esteacuteril en dos tubos con medio de
Lowenstein-Jensen
7 El sedimento se toma con pipeta Pasteur y se hacen dos frotes que se tintildeen con los meacutetodos
existentes en el laboratorio para la buacutesqueda de BAAR puede ser la tincioacuten de Ziehl - Neelsen
o de auramina rodamina
8 Los tubos se deben incubar a 37ordmC dejaacutendolos en posicioacuten horizontal con la tapa floja durante
24 a 48 hasta que se evapore el inoacuteculo Posteriormente se ajusta la tapa con fuerza para evitar
que la muestra se evapore se incuba durante 60 diacuteas
9 Semanalmente se revisan los tubos hasta la octava semana Siacute no hay desarrollo se informa
como negativo Un cultivo se da como negativo despueacutes de 60 diacuteas de incubacioacuten
10Si hay crecimiento se identifica a M tuberculosis las caracteriacutesticas del crecimiento son
masas pequentildeas de superficie mate y consistencia ceacuterea Tintildee diferentes tonos desde amarillo
muy paacutelido hasta anaranjado rojizo
11Los resultados se informan ya que se haya identificado con las pruebas especiales para el
geacutenero y la especie
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
TRATAMIENTO DE LA ORINA
1 Se recibe la muestra en un frasco esteacuteril de boca ancha de preferencia la primera orina de la
mantildeana
2 Se centrifuga la muestra a 3000 rpm por 30 min
3 Decantar el sobrenadante y depositarlo en el frasco original cuidar de limpiar la boca del tubo
con fenol al 10 Se hace el frote del sedimento
4 El resto del sedimento se trata con NaOH al 4 Agregando una cantidad semejante al
sedimento
5 Se deja 15 min a 37ordmC
6 Se siguen los mismos pasos que para la teacutecnica del esputo para sembrar el sedimento con
pipeta Pasteur esteacuteril
7 Se realiza del sedimento la baciloscopia
Reporte
En caso de tener BAAR se reportan como se indicoacute en la tabla es importante correlacionarlo
con el cultivo
Cuestionario
1 iquestImportancia meacutedica de Mycobacterium tuberculosis
2 En la buacutesqueda de Mycobacterium tuberculosis para su cultivo iquestqueacute tratamiento debes
darle a la muestra
3 iquestEn queacute condiciones debes trabajar a Mycobacterium tuberculosis y por queacute
4 Menciona alguacuten medio selectivo para Mycobacterium tuberculosis cuaacutento tiempo
necesita incubarse y queacute pruebas necesitas hacer para su identificacioacuten
5 Menciona un meacutetodo diferente al cultivo convencional para diagnosticar tuberculosis
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
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18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 7
INFECCIONES OCULARES
Introduccioacuten
Las infecciones oculares se manifiestan comuacutenmente por el constante lagrimeo Los
microorganismos aislados con mayor frecuencia dependen de la edad del paciente y su localidad
Consideraacutendose dentro de los pacientes de mayor riesgo a los recieacuten nacidos por las posibles
secuelas irreversibles que pueden originarse en ellos
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que atacan principalmente este sitio
Toma de muestra cultivo ocular
1- Indicar al paciente que debe abstenerse de aplicar soluciones antiseacutepticas en ambos ojos
2- Con un hisopo mojado en suero fisioloacutegico frotar sobre la conjuntiva
3- Identificar de que ojo procede la muestra
4- El transporte deberaacute ser inmediato Cuando no sea posible se colocaraacuten los hisopos en medio
de transporte tipo Stuart-Amies que se mantendraacute a temperatura ambiente Para Chlamydia se
utilizaraacute un medio de transporte especiacutefico (2-SP)
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Material
1 Hisopos esteacuteriles de alginato de calcio o de dacron
2 Guantes esteacuteriles y desechables
3 Placas de Gelosa sangre de carnero
4 Placas de sal y manitol
5 Placas de agar Mac Conkey
6 Placas de Thayer -Martin
7 Placas con medio de Levinthal oacute Agar chocolate
8 Placas con Agar DNAsa
9 Tubos con Biggy
10Tubos con mediosTSI LIA MIO Citrato y Urea para pruebas bioquiacutemicas
11 Reactivo de oxidasa
12Taxos de optoquina y bacitracina
13Equipo para buacutesqueda de Chlamydia
Desarrollo
1 La muestra se toma del sito de dantildeo y se siembra en los medios de cultivo indicados
2 Es importante incubar las placas en las condiciones que requieran
3 Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram
4 Se identifica el crecimiento seguacuten el diagrama
5 Para buacutesqueda de Chlamydia se realiza por medio de tinciones o en su defecto por meacutetodos de
inmunofluorescencia
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Reporte
Debido al tipo de muestra es importante reportar cualquier bacteria identificada para su
tratamiento inmediato
1 Se reporta el resultado teniendo cuidado de indicar de que ojo procede la identificacioacuten
2 Es importante realizar el antibiograma en este tipo de muestra
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1 Esquematiza la anatomiacutea del ojo
2 Menciona las diferentes teacutecnicas que se utilizan para la toma de muestra seguacuten el
problema que se presenta en el ojo
3 iquestQueacute flora podemos encontrar en el ojo
4 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que podemos aislar
5 iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa Sabouraud
Tincioacuten de Gram Medio de
transporte Stuart
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
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PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Praacutectica No 8
INFECCIONES OacuteTICAS
Introduccioacuten
Dentro de las infecciones que pueden generar complicaciones maacutes frecuentes estaacuten la de los
oiacutedos ya sean por su forma croacutenica o aguda El cuadro inicial puede asociarse a infecciones
respiratorias mal cuidadas en nintildeos por la introduccioacuten de objetos extrantildeos pe botones frijoles
etc
Objetivo
Que el alumno conozca la metodologiacutea para el manejo de este tipo de muestra e identifique las
bacterias que pueden causar dantildeo en oiacutedo
Toma de muestra
1 Se le indica al paciente que se abstenga de aplicarse gotas de antimicrobianos
2 Se introduce el hisopo teniendo cuidado de no lastimar indicando el paciente hasta donde
soporta el hisopo
3 Se diferencia los tubos del oiacutedo derecho e izquierdo
4 En las infecciones croacutenicas se limpia el oiacutedo con solucioacuten de cloruro de benzalconio 11000
para eliminar la flora contaminante
5 Cuando se trata de perforaciones del tiacutempano debe ser tomada por el otorrinolaringoacutelogo
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
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PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
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nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Material
1 Guantes esteacuteriles desechables
2 Hisopos delgados de alginato de calcio o de dacron
3 Gasas esteacuteriles
4 Placas de gelosa sangre de carnero
5 Placas de Sal y Manitol
6 Placas de Mac Conkey
7 Placas de agar de Levinthal
8 Placas con agar DNAsa
9 Tubos con medios TSI LIA MIO CS y Urea
10Taxos de optoquina
11Taxos con bacitracina
12Tubos con Biggy
13Colorantes de Gram
14Tubos con OF con glucosa al 1
15Reactivo para catalasa
16Reactivo para oxidasa
Desarrollo
Despueacutes de la toma de muestra es importante sembrarla en los medios de cultivos indicados y en
forma inmediata Cualquier crecimiento se le debe efectuar la tincioacuten de Gram y reportarla La
identificacioacuten se realiza en base al diagrama
Reporte
En el reporte al meacutedico se debe indicar
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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de beta lactamasa Tesis UAP
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Tesis UAP
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UAP
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
1 El resultado por separado de cada oiacutedo
2 Como se encontraba este cuando se le tomo la muestra
3 Si se encontroacute alguacuten objeto extrantildeo
4 Es importante realizarle el antibiograma en caso de que el cultivo se encuentre positivo
5 Siacute no se aiacutesla ninguacuten microorganismo se reporta como negativo a las 72 h de incubacioacuten
DIAGRAMA DE TRABAJO
Cuestionario
1- Esquematiza la anatomiacutea del oiacutedo
2- De las diferentes partes del oiacutedo menciona que flora podemos encontrar en cada una de ellas
3- iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el oiacutedo
4- Menciona las diferentes teacutecnicas que utilizas para la toma de muestra
5- iquestQueacute indicaciones le das al paciente para la toma de muestra de oiacutedo
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Inocular Agar sangre Agar chocolate Agar sal y manitol Agar Mac Conkey Agar Dextrosa SabouraudBiggy
Medio de transporte Stuart
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No9
INFECCIONES DEL APARATO GENITAL
(EXUDADO CERVICO VAGINAL VULVAR Y URETRAL)
Introduccioacuten
Las enfermedades de transmisioacuten sexual (ETS) son un problema importante en Salud Puacuteblica
Los principales agentes asociados a las ETS incluyen virus bacterias hongos protozoarios y
ectoparaacutesitos los cuales estaacuten involucrados en varios siacutendromes por lo que la participacioacuten del
laboratorio en el diagnoacutestico es relevante Sin embargo los microrganismos tambieacuten pueden
introducirse en el aparato genital ya sea instrumentacioacuten es decir presencia de aparatos extrantildeos
al cuerpo los cuales pueden causar inflamacioacuten o irritacioacuten y favorecer la infeccioacuten Ademaacutes la
madre puede contagiar al nintildeo durante el embarazo o durante el parto
En general la identificacioacuten de las bacterias productoras de ETS no siempre es a traveacutes de
cultivos en algunos casos se requiere de teacutecnicas inmunoloacutegicas Como el caso de Treponema
pallidum ya que no existe ninguacuten medio sinteacutetico para su aislamiento o Chlamydia trachomatis
que por ser una bacteria intracelular obligada requiere de ceacutelulas vivas para su multiplicacioacuten de
tinciones especiales o bien teacutecnicas de hibridacioacuten para su identificacioacuten
Las infecciones agudas pueden extenderse por continuidad en el aparato genital y originar
secuelas graves en tanto que la infeccioacuten puede tener caracteriacutesticas metastaacutesicas y transmitirse
por viacutea sanguiacutenea a otros oacuterganos y tejidos
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
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sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Aprenderaacute a tomar una muestra de aparato genital y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Este tipo de muestras requiere de condiciones especiales en cada caso y se deben tomar en
cuenta las siguientes recomendaciones
1- Es importante tomarlas cuando la sintomatologiacutea existe y obligatoriamente en los contactos
de la pareja sexual
2- El paciente no debe estar en tratamiento antimicrobiano
3- Es importante que se cuente con el material adecuado como son hisopos de alginato de calcio
de dacroacuten o tratados con soluciones amortiguadoras
4- Este tipo de muestras se deben sembrar en los medios de cultivo adecuados y en forma
inmediata
5- En caso de no tener los medios se debe utilizar medios de transporte y crecimiento
6- Existen casos de mujeres y en hombres donde es necesario muestrear otros sitios anatoacutemicos
sobre todo en los pacientes que refieren contacto oro-genital ano-genital y oro-anal
Exudado vaginal
1- Con la paciente en posicioacuten ginecoloacutegica se introduciraacute un espeacuteculo sin lubricante (si es
necesario para lubricar utilizar agua templada)
2- Recoger la muestra bajo visioacuten directa con un hisopo de la zona con mayor exudado o en su
defecto del fondo del saco vaginal posterior e introducirlo a un medio de transporte Stuart-Amies
(figura xx)
3- Repetir la operacioacuten con un segundo hisopo hacer un extendido sobre un portaobjetos y
colocar el hisopo en un tubo con SSI para la posterior observacioacuten en fresco
4- Retirar el espejo y de la secrecioacuten que quedoacute en el espeacuteculo medir pH y hacer la reaccioacuten de
aminas con KOH al 10 se reporta positiva si desprende un olor caracteriacutestico a ldquopescadordquo el
cual se debe a aminas volaacutetiles
5- Cuando se sospeche la infeccioacuten por Neisseria gonorrhoeae Chlamydia trachomatis
Mycoplasma hominis o Ureaplasma urealtycum deberaacute enviarse muestra endocervical
6- Mantener la muestra a temperatura ambiente o preferentemente en estufa 35-37ordmC hasta su
procesamiento que deberaacute ser antes de 3-6 horas
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
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Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
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11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
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y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
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23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Figura Toma de muestra vaginal
Observacioacuten en fresco
Las observaciones en fresco son de gran utilidad sobre todo en mujeres en las cuales existe
secrecioacuten vaginal y en el caso de tricomoniasis vaginosis bacteriana y candidiasis asiacute como en
la tricomoniasis en pacientes masculinos
1 La muestra es recolectada en un tubo con solucioacuten salina isotoacutenica
2 Se toma una gota de esta muestra y se coloca en un portaobjetos y se cubre con un
cubreobjetos
3 Se observa al microscopio en objetivo de 40x y con poca iluminacioacuten
4 Se reporta si se observan Trichomonas vaginalis levaduras ceacutelulas clave leucocitos y
lactobacilos
Desarrollo
Exudado uretral
1 Limpiar cuidadosamente la mucosa circundante con gasas esteacuteriles
2 Introducir un hisopo uretral fino suavemente con un movimiento de rotacioacuten hasta
penetrar unos 2 cm dentro de la uretra (3-5 cm para la investigacioacuten de Chlamydia
trachomatis) (figura) 3- Repetir operacioacuten con un segundo hisopo
3 Un hisopo seraacute destinado al examen microscoacutepico y el otro para al cultivo
4 La muestra deberaacute procesarse como maacuteximo en un plazo de 6-12 h
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
5 Cuando no haya suficiente exudado puede estimularse mediante un masaje suave
prostaacutetico-vesicular
Aislamiento
Las muestras se deben sembrar directamente en el medio de cultivo en forma adecuada En el
caso de Thayer - Martin se debe sembrar en forma de Z con el hisopo proveniente de la toma de
muestra de ceacutervix y posteriormente se estriacutea con el asa en el laboratorio
Las placas de agar sangre carnero de Thayer Martin y de agar chocolate se incuban en atmoacutesfera
parcial de CO2 a 37ordmC Despueacutes del tiempo de incubacioacuten se deben revisar las placas y es
importante realizarles la tincioacuten de Gram a los crecimientos De acuerdo al crecimiento se
efectuacutean las pruebas de identificacioacuten como se muestra en el diagrama
Figura Toma de muestra uretral
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
DIAGRAMA DE TRABAJO
V
Agar Mac Conkey
Biggy
Gardnerella vaginalis
Candida albicans
Identificacioacuten bioquiacutemica
Medio de transporte
Stuart
Agar Sangre de Carnero
Agar Sangre Humana
Streptococcus Staphylococcus
Thayer-Martin
Neisseria gonorrhoeae
Enterobacterias
Tincioacuten de Gram
Agar Chocolate
Solucioacuten salina
isotoacutenica
Observacioacuten en fresco
Trichomonas vaginalis
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
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15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Reporte
En el reporte se deberaacute informarle al meacutedico lo siguiente
1- Edad del paciente
2- Sexo
3- Tipo de muestra
4- Fecha en el que se realizoacute el estudio
5- Caracteriacutesticas del endocervix si hay uacutelceras cantidad de flujo olor etc
6- pH Vaginal
7- Tincioacuten de Gram
8- Examen en fresco
9- Resultado del cultivo
10- Antibiograma (en caso de haberlo realizado)
Buacutesqueda de Chlamydia trachomatis
Buacutesqueda de Treponema pallidum
Firma del responsable
Cuestionario
1 iquestQueacute indicaciones debes darle al paciente para la toma de muestra ceacutervico vaginal
2 iquestPara queacute utilizas el tubo con solucioacuten salina y otro con medio Stuart
3 iquestCuaacutel es la importancia de determinar el pH vaginal
4 iquestEn queacute consiste la prueba del KOH y para queacute es uacutetil
5 Menciona cuaacuteles son los microorganismos que podemos encontrar como flora normal en
vagina
BENEacuteMERITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
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CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
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7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
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20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
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Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
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DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
PRAacuteCTICA No 10
CULTIVO DE HERIDAS
Introduccioacuten
Uno de los fenoacutemenos que se observan con maacutes frecuencia en las enfermedades infecciosas es la
formacioacuten de un exudado purulento a raiacutez de la invasioacuten bacteriana de una cavidad tejido u
oacutergano del cuerpo Cliacutenicamente puede ir desde un sencillo o inocuo ldquogranordquo hasta uno o varios
abscesos con muacuteltiples bolsas de pus El exudado estaacute constituido por microorganismos
invasores leucocitos principalmente polimorfonucleares y una mezcla de humores orgaacutenicos y
fibrina En algunos casos el exudado puede recubrir la superficie del oacutergano en otros el exudado
puede estar tabicado por capas de fibrina y una red de ceacutelulas tisulares (aacutentrax) Incluso hay casos
en que el exudado proviene de una herida abierta que por ello suelta liacutequido espeso o pus
Uno de los principales problemas de pacientes fracturados quemados u operados que se
encuentran en unidades hospitalarias son las infecciones que pueden adquirir en estos
nosocomios En este tipo de infecciones pueden estar involucrados muchas bacterias hongos y
virus diferentes ademaacutes estas infecciones pueden estar involucrados uno o maacutes agentes causales
Dada la diversidad de agentes etioloacutegicos y la complejidad de estas infecciones el meacutedico a
menudo describe al microbioacutelogo el aspecto de la lesioacuten para ayudar en el diagnoacutestico
Objetivo
Aprenderaacute a tomar una muestra de herida y a procesarla en el laboratorio
Desarrollo
Toma de muestra de lesiones en la piel
1 Lavar cuidadosamente la superficie de la herida
2 Recoger el pus mediante jeringa y aguja aspirando preferentemente de zonas profundas
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
3 Cuando la muestra sea insuficiente instilar suero o solucioacuten de Ringer lactato y aspirarlo
nuevamente en la jeringa Para muestras liacutequidas se recomienda intentar obtener de 1-10
cmsup3
4 Cuando los procedimientos anteriores no sean factibles podraacute efectuarse un frotis de las
partes profundas de la herida con un hisopo
5 La muestra se puede enviar en la misma jeringa de la extraccioacuten debidamente
identificada si puede procesarse antes de 2 horas y si no usar medio de transporte
Toma de muestra de exantemas
1 Aspirar directamente con jeringa y aguja el contenido de las lesiones Cuando no sea
suficiente colocar una pequentildea cantidad de suero salino esteacuteril y aspirarlo
Toma de muestra de abscesos cerrados
1 Desinfectar la piel Limpiar la zona con alcohol de forma conceacutentrica comenzando por el
centro Abarcar una zona de unos 10 cm
2 Repetir la operacioacuten con povidona En pacientes con hipersensibilidad al iodo en lugar de
povidona se utilizaraacute alcohol dos veces consecutivas
3 Dejar secar al menos 1 minuto para que la povidona ejerza su accioacuten antiseacuteptica
4 Realizar una puncioacuten-aspiracioacuten del absceso con jeringa y aguja
5 Introducir una pequentildea parte de la muestra en el medio de transporte para anaerobios
6 Desinfectar la superficie de goma del tapoacuten con povidona e inyectar con la misma jeringa
parte de la muestra No deberaacuten utilizarse nunca los medios que hayan adquirido una
coloracioacuten azul
7 Dejar el resto de la muestra en la jeringa y remitirla asiacute o bien traspasarla a un
contenedor esteacuteril
Toma de muestra de fistulas
1 Limpiar cuidadosamente la superficie cutaacutenea con alcohol y luego con povidona Aspirar
el exudado de la parte profunda de la fiacutestula con jeringa y aguja aproximadamente de 1 a
5 mL
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Procesamiento de la muestra
1 Realizar tinciones de Gram y Ziehl -Neelsen
2 A partir de la muestra sembrar diferentes medios de cultivo de acuerdo al diagrama
3 En el medio de tioglicolato se eliminaraacute el oxiacutegeno hirviendo durante 10 min
4 Todo el material se incuba a 37ordmC durante 24 a 48 h
5 Las placas se deben revisar y a cualquier crecimiento se efectuacutea la tincioacuten de Gram se
procede a identificar de acuerdo al geacutenero y especie
6 Es importante que en este tipo de muestras se realice el antibiograma
REPORTE
En este tipo de muestras se debe reportar la tincioacuten de Gram directa lo maacutes pronto posible para
iniciar tratamiento
Se reporta el crecimiento como positivo en caso de cualquier crecimiento y negativo cuando no
existe crecimiento
DIAGRAMA DE TRABAJO
Muestra
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey Agar Sangre de Carnero
Agar Chocolate Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Tincioacuten de Gram
Hisopo Jeringa
Tioglicolato
Anaerobios
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
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LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Cuestionario
1 iquestDe queacute microorganismos se encuentra constituida la flora normal de piel
2 Menciona las diversas maneras en que podemos causarnos una herida y queacute probables
microorganismos podriacuteamos aislar
3 Escribe los pasos a seguir para la toma de una muestra de una herida infectada
4 iquestEn queacute casos es recomendable el cultivo de un tejido y cuaacutel es el meacutetodo utilizado
5 En la buacutesqueda de anaerobios iquestqueacute microorganismos buscariacuteas y que medios utilizariacuteas
para su cultivo
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 11
DIAGNOacuteSTICO DE ENFERMEDADES MENIacuteNGEAS
CULTIVO DE LIacuteQUIDO CEFALORRAQUIacuteDEO (LCR)
Introduccioacuten
Aunque desde hace mucho tiempo se daba por hecho que la funcioacuten primordial del liacutequido
cefalorraquiacutedeo (LCR) era la de proteccioacuten del sistema nervioso central (SNC) y la regulacioacuten de
su volumen en 1926 Cushing propuso la idea de que el LCR representaba la ldquotercera
circulacioacutenrdquo Desde entonces se ha confirmado y ampliado su proposicioacuten
Cushing plantea que el LCR constituye por siacute mismo el medio interno del SNC ya que lo
provee de la matriz acuosa de los componentes exactamente necesarios para su adecuado
funcionamiento por otro lado actuacutea como linfa cerebral ya que su continua circulacioacuten permite
la remocioacuten permanente de materiales nocivos y de desecho
Auacuten maacutes recientemente se ha comprobado el papel que juega el LCR en el transporte a
traveacutes del enceacutefalo mediante diversas moleacuteculas activas como hormonas y aminas de accioacuten
neutral
Dentro de las patologiacuteas que maacutes comuacutenmente se presentan a este nivel estaacute la meningitis
que es la inflamacioacuten de las membranas que recubren el SNC es decir las delgadas membranas
que cubren totalmente al cerebro y la meacutedula espinal y una de sus causas puede ser por infeccioacuten
baacutesicamente debido a que los microorganismos responsables de esta forma cliacutenica pueden
alcanzar al SNC a traveacutes de la viacutea hematoacutegena (bacteriemia o septicemia) o invadir directamente
el cerebro (otitis fracturas de craacuteneo etc)
El diagnoacutestico del SNC se apoya en el examen integral del LCR en esta tarea tanto el
meacutedico como el quiacutemico son responsables de la utilidad del examen El meacutedico desde la toma de
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FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
la muestra la medicioacuten de la presioacuten intracerebral entre otras y el quiacutemico como realizador
directo de los anaacutelisis citoquiacutemicos y microbioloacutegicos del LCR
Objetivo
El alumno conoceraacute la metodologiacutea a seguir para la realizacioacuten del cultivo del LCR
Material
1 Placas con gelosa sangre de carnero
2 Placas con agar de Mac Conkey
3 Placas con Agar de Sal y Manitol
4 Placas con Medio de Thayer- Martin (sin inhibidor)
5 Tubos con medio de Lowenstein-Jensen
6 Tubos con TSI LIA MIO Citrato Urea para pruebas bioquiacutemicas
7 Tubos con base de CTA conteniendo glucosa sacarosa maltosa fructuosa al 1
8 Portaobjetos
9 Cubreobjetos
10Aceite de Inmersioacuten
11Tinta china (Marca Pelikan)
12Equipo de tincioacuten de Gram
13Taxos de bacitracina y optoquina
14Reactivo de Kovacs
15Pipetas Pasteur esteacuteril
16Centriacutefuga
Metodologiacutea
Toma de muestra
El LCR se obtendraacute antes de instaurar cualquier terapeacuteutica antibioacutetica
LCR obtenido por puncioacuten lumbar
1 Se localiza la zona elegida para la puncioacuten lumbar mediante palpacioacuten de los espacios
intervertebrales una vez colocado el paciente en la posicioacuten adecuada
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
2 Se desinfecta con alcohol al 70 una zona de 10 cm de diaacutemetro en el aacuterea elegida la
aplicacioacuten del desinfectante se hace de forma conceacutentrica del centro a la periferia Se
repite la operacioacuten con povidona yodada que se deja secar durante un minuto
3 Realizar la puncioacuten entre los espacios intervertebrales L3-L4 LA-L5 o L5-S1 siguiendo
las normas de la maacutes estricta asepsia (ver fig9)
4 Al llegar al espacio subaracnoideo retirar el estilete y dejar salir libremente el liacutequido
cefalorraquiacutedeo que se recogeraacute en tres tubos sin conservantes con tapoacuten de rosca
Generalmente el primer tubo para el estudio bioquiacutemico el segundo para el estudio
microbioloacutegico y el tercero para investigacioacuten de ceacutelulas (este suele ser el maacutes transparente
aunque la puncioacuten haya sido traumaacutetica) No obstante el tubo maacutes turbio se enviaraacute a
Microbiologiacutea
Fig 9 Toma de muestra de LCR
Volumen miacutenimo
1 Para el estudio bacterioloacutegico rutinario es suficiente 1 mL aunque es preferible disponer
de voluacutemenes superiores
2 Para hongos o micobacterias se necesitan al menos 2 mL adicionales maacutes por cada uno de
los estudios siendo deseable llegar a los 10 mL
3 Para estudio de virus se necesita al menos 1 o 2 mL maacutes
Transporte
El producto debe enviarse inmediatamente al laboratorio pues alguno de los agentes etioloacutegicos
como S pneumoniae pueden lisarse raacutepidamente a partir de una hora tras su recogida Si no es
posible se mantendraacute en estufa a 35-37ordmC y una parte se incubaraacute en un frasco de hemocultivo
que se mantendraacute en ideacutenticas condiciones hasta su procesamiento en el laboratorio Si no se
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
dispone de estufas se mantendraacute a temperatura ambiente Nunca deberaacute refrigerarse pues se
puede afectar la viabilidad de N meningitidis y H influenzae
En el LCR no se estudian rutinariamente anaerobios En caso de solicitar una
investigacioacuten se enviaraacute en un medio de transporte de liacutequidos para estudio de anaerobios o en
hemocultivo de anaerobios
Las muestras para el estudio de virus se enviaraacuten en hielo si el enviacuteo se retrasa maacutes de 24
horas se deberaacute de conservar a -70ordmC
Observaciones
Como la meningitis suele surgir por un proceso bactereacutemico se solicitaraacuten simultaacuteneamente
hemocultivos pudiendo ser asiacute mismo estudiadas las posibles lesiones metastaacutesicas cutaacuteneas
Es necesario que el meacutedico sentildeale claramente las investigaciones solicitadas (bacterias
habituales micobacterias anaerobios hongos o virus)
Diagrama de trabajo
LCR
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Gelosa Sangre
Agar Gelosa Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowenstein-Jensen
Centrifugar 10-20 min
1000-1500 rpm
Sedimento Tinciones
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Cuestionario
1 Describe las caracteriacutesticas fiacutesicas y quiacutemicas de un LCR normal
2 iquestCuaacuteles son los valores del LCR en caso de existir alguna alteracioacuten dependiendo del
microorganismo presente
3 Indica las tinciones que se le pueden realizar al LCR para su pronto diagnoacutestico
4 iquestQueacute teacutecnicas se utilizan para el cultivo del LCR
5 iquestCuaacuteles son los principales patoacutegenos que puedes encontrar en el LCR
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
PRAacuteCTICA No 12
HEMOCULTIVO
Introduccioacuten
El cultivo de sangre o hemocultivo es uno de los estudios maacutes solicitados en el laboratorio cliacutenico
ya que de alguna manera apoya el diagnoacutestico de las infecciones sisteacutemicas que presentan en su
evolucioacuten una etapa de bacteriemia o septicemia
La presencia de microorganismos en la sangre refleja una infeccioacuten activa y diseminada
en los tejidos Esta situacioacuten puede originarse por
a) BACTERIEMIA Es un teacutermino que denota la presencia de bacterias en sangre este
puede ser transitorio como un resultado de un fenoacutemeno comuacuten como por ejemplo el
cepillarse los dientes en la evolucioacuten de algunas enfermedades en infecciones de viacuteas
urinarias o en infecciones de heridas La bacteriemia persistente o recurrente es la
presencia continua de una bacteria en la sangre e implica un fenoacutemeno que en algunas
enfermedades da manifestaciones cliacutenicas
b) SEPTICEMIA Se caracteriza por la presencia de bacterias en sangre y tejidos
acompantildeado por ataque al estado general las bacterias se estaacuten multiplicando en forma
activa y liberando toxinas originando manifestaciones cliacutenicas de diversa magnitud (local
o sisteacutemica)
c) PIEMIA Formacioacuten de diversos abscesos de tipo purulento de origen bacteriano
En pacientes inmunocomprometidos como son recieacuten nacidos personas de la tercera edad
asiacute como inmunosuprimidos se pueden presentar focos seacutepticos y poner en peligro su vida
BENEMEacuteRITA UNIVERSIDAD AUTOacuteNOMA DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIacuteMICAS
LICENCIATURA QUIacuteMICO FARMACOBIOacuteLOGO
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIacuteA
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Una de las caracteriacutesticas de este tipo de infecciones es la aparicioacuten de un cuadro febril en
el hueacutesped acompantildeado como consecuencia de la liberacioacuten del piroacutegeno endoacutegeno por los
fagocitos posterior a la ingestioacuten de material toacutexico endotoxinas productos de degradacioacuten
tisular piroacutegeno exoacutegeno
Objetivos
1 El alumno aprenderaacute los pasos a seguir para realizar la toma de muestra de la sangre
2 El alumno conoceraacute los diferentes medios de cultivo utilizados para realizar un
hemocultivo
3 El alumno desarrollaraacute el procedimiento para llevar a cabo un hemocultivo asiacute como el
aislamiento e identificacioacuten del patoacutegeno
Material
1 Medio bifaacutesico Ruiz Castantildeeda (frasco para hemocultivo)
2 Jeringas esteacuteriles y desechables de 5 o 10 mL
3 Agujas esteacuteriles calibre 21
4 Torniquete y torundas con alcohol
5 Frasco con tintura de Iodo
6 Equipo de tincioacuten de Gram
7 Placas de gelosa sangre de carnero
8 Placas de agar de Mac Conkey
9 Placas de Sal y Manitol
10Placas de Thayer- Martin
11Pruebas bioquiacutemicas TSI MIO LIA citrato y urea
12Microscopio
13Sensidiscos de Bacitracina y Optoquina
14Taxos de oxidasa
Metodologiacutea
Toma de muestra y transporte
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Este tipo de muestra estaacute indicado en casos de fiebre hipotermia sensacioacuten de enfriamiento
escalosfriacuteos postracioacuten hipotensioacuten fiebre prolongada e intermitente con soplo cardiaco
perceptible Es importante la toma de muestra cuando el paciente se encuentra al inicio del
periodo febril antes de llegar al pico El nuacutemero e intervalos de los cultivos dependen del cuadro
cliacutenico del paciente asiacute como de su gravedad
Es importante saber el tipo de frasco para Hemocultivo que se puede actualmente usar ya
que muchas de ellas contienen sustancia que anulan la accioacuten de los antimicrobianos asiacute como el
complemento y la fagocitosis
Puede usarse meacutedula oacutesea lo que aumentariacutea las posibilidades de obtener un buen diagnoacutestico
1 Se selecciona el sitio de toma de muestra debe evitarse tomar muestras de cateacuteter
intraarteriales o intravenosos permanentes a menos que la sangre no pueda obtenerse por
venopuncioacuten
2 El sitio de venopuncioacuten debe limpiarse vigorosamente con torundas impregnadas de etanol al
70 o con tintura de iodo en alcohol
3 Hay que esperar que seque sin soplar
4 Por ninguacuten motivo se debe tocar el sitio despueacutes de que fue desinfectado
5 Los frascos para hemocultivo o tubos de cultivo se deben limpiar del tapoacuten con alcohol-iodo
6 Se inserta la aguja en la vena y se extrae la sangre el volumen depende de la edad y marca de
la botella usada El volumen recomendado es Nintildeos de 1 a 3 mL adultos de 5 ml en adelante
7 Una vez tomada la sangre se inyecta a la botella con una aguja nueva Se debe mezclar bien
en forma homogeacutenea para evitar que se coagule
8 La botella inoculada se mantiene horizontalmente con la parte soacutelida hacia abajo durante 20
minutos
9 Se incuba la botella a 37ordmC durante 6 semanas En forma vertical
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Fig Toma de muestra sanguiacutenea
Actualmente existen diversas opciones para cultivar la sangre estas pueden ser
Hemocultivo liacutequido
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente se le antildeade suficiente volumen de tal
manera que alcance una proporcioacuten de 110 de sangre a medio
2 Se incuba a 37ordmC en condiciones aerobias
3 Se hace una inspeccioacuten de las botellas cuando menos una vez al diacutea durante 3 diacuteas y luego 2 a
3 veces por semana hasta completar 21 diacuteas
Botella de Cultivo Bifaacutesico
Se emplea la botella de Ruiacutez Castantildeeda modificada o medios bifaacutesicos comerciales (Ver Fig 10)
1 Se toma la muestra de sangre como se indicoacute anteriormente
2 Se inocula la sangre en la botella e incubar a 37ordmC durante 7 diacuteas o dejar hasta 45 diacuteas en caso
que se sospeche de Brucella
3 Incubar en atmoacutesfera de CO2 al 5 - 10
4 Se inspeccionan los frascos a diario y se buscan colonias en la superficie del medio como
sentildeal de un cultivo positivo
5 En caso de cultivo positivo hay que realizar la tincioacuten de Gram
6 Se realizan las resiembras en los medios indicados
7 En ausencia de crecimiento visible se efectuacutean resiembras a las 48 h y luego cada semana
hasta completar los 21 diacuteas aunque puede continuar por 45 diacuteas y soacutelo despueacutes de este tiempo
se puede descartar y considerar negativo
Botellas Bactec
Botellas BacTAlert
Fig 10
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
Meacutetodo de Lisis
1 Se toman los tubos que contienen sustancias hemolizantes
2 Se concentran los microorganismos por centrifugacioacuten a 3000 rpm durante 30 min
3 Se inocula el sedimento en las diferentes placas de cultivo
Meacutetodo de Fluorescencia
1 Se toma la muestra como se indicoacute anteriormente
2 Se inoculan las botellas de acuerdo al tipo de paciente este tipo de botellas tiene medios de
cultivo para bacterias aerobias anaerobias y hongos estaacuten adicionados de resina cuyo
objetivo principal es capturar eacutel o los antimicrobianos que pueden estar presentes en la
muestra
3 Se incuban en un aparato especial (Bactec 9050) que se mantiene a 37ordmC y rotando
suavemente
4 En cuanto se presenta desarrollo bacteriano el equipo cuenta con un sensor de fluorescencia
la que se va aumentando por el incremento de CO2 producido por el propio metabolismo
bacteriano esto lo realiza cada 10 min Una alarma avisa al quiacutemico la posicioacuten de la botella
con produccioacuten de CO2
5 Se realizan las resiembras en los medios ya descritos
Reporte
Es poco frecuente encontrarse dos o maacutes especies bacterianas diferentes en un cultivo de sangre
en la mayoriacutea de los casos se trata de alguna contaminacioacuten y esto sucede principalmente por una
mala toma de muestra
Siacute no hay crecimiento a los 45 diacuteas hay que dar como negativo el cultivo y se desecha la botella
En el caso de haber crecimiento se identifica al agente etioloacutegico con las pruebas requeridas por
el mismo
Es importante mantener informado al meacutedico coacutemo va el Hemocultivo de sus pacientes
principalmente si se encuentran en salas de terapia intensiva
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
DIAGRAMA DE TRABAJO
Incubar 37degC 15-20 diacuteas o maacutes
Cuestionario
1 Menciona otra teacutecnica para la toma de muestra de sangre para su cultivo
2 iquestPor queacute es importante tomar la muestra de sangre en el pico febril
3 iquestSeriacutea normal encontrar dos o maacutes bacterias en un hemocultivo
4 iquestPor queacute se recomienda cultivar la sangre en un medio bifaacutesico y en queacute consiste eacuteste
5 El aislamiento de Staphylococcus epidermidis en un hemocultivo iquestseriacutea cliacutenicamente
importante
Sangre
Pruebas de identificacioacuten
Agar Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Chocolate
Agar Sal y Manitol
Agar Biggy
Agar Lowestein-Jensen
Botella para hemocultivo
Tincioacuten de
Gram
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
BIBLIOGRAFIacuteA
1 Allen BW and Baker FJ 1976 Micobacterias Aislamiento identificacioacuten y pruebas de
sensibilidad Ed Manual Moderno SA Meacutexico DF P 29 54 55 68 71
2 Bailey and Scott 2003 Diagnoacutestico Microbioloacutegico 12a edicioacuten Ed Meacutedica Panamericana
3 Cowan S 1974 Manual for Identification of Medical Bacteria 2nd
Cambridge University
4 HernaacutendezndashMeacutendez JT y colbs 2003 Bacteriologiacutea Meacutedica Diagnoacutestica Instituto
Politeacutecnico Nacional 2ordf edicioacuten Ed Cueacutellar
5 Jawetz Melnick y Adelberg 2001 Microbiologiacutea Meacutedica 25ordf edicioacuten Ed Mc Graw Hill
6 Manual de Bioxoacuten No 1
7 Manual de Difco
8 Koneman EW Allen SD Janda W 2005 Diagnoacutestico Microbiologico Ed Panamericana
9 Calvin M K 1993 Infecciones de las Viacuteas Urinarias Ed Panamericana
10INDRE1994 Manual de Enfermedades Tropicales SSA Meacutexico
11INDRE 1992 Manual para el procedimiento e Identificacioacuten de Haemophilus SSA Meacutexico
12INDRE 1995 Manual de Teacutecnicas del Laboratorio SSA Meacutexico
13IPN 1994 Manual de Bacteriologiacutea Meacutedica Meacutexico DF
14Morales del Razo D 1982 Investigacioacuten de Bacterias Aerobias causantes de bacteriemias en
nintildeos hospitalizados del HUP Tesis UAP
15Peacuterez MA 1976 Apuntes de Bacteriologiacutea Meacutedica y Veterinaria IPN
16Peacuterez OT 1984 Aislamiento e Identificacioacuten y Mecanismos de Patogenicidad de Aeromonas
y Plesiomonas Tesis UAP
17Peacuterez SF y Rivera Y P 1985 Buacutesqueda de Cepas de Neisseria gonorrohoeae productora
de beta lactamasa Tesis UAP
18Navarro AR 1985 Investigacioacuten de Yersinia enterocolitica en Lactantes y Preescolares
Tesis UAP
19Teacutellez CO 1984 Campylobacter jejuni Aislamiento y Mecanismos de Patogenicidad Tesis
UAP
20Zinsser Microbiologiacutea 17ordf ed Ed Meacutedica Panamericana
21Edwards PR Ewing WH 1986 Identification of Enterobacteriaceae 4th
ed Burgess
Publishing Co
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
22Organizacioacuten Mundial de la Salud 1991 Manual de investigaciones de laboratorio de
infecciones enteacutericas agudas Ginebra
23Giono CS 1993 Diagnoacutestico de enfermedades bacterianas del aparato gastrointestinal En
Bacteriologiacutea Meacutedica de Garciacutea E y S Giono Meacutexico DF
24Blancarte LM Anzaldo G Balandrano S Manual de teacutecnicas y procedimientos de
laboratorio de tuberculosis Publicacioacuten teacutecnica del INDRE SSA 41992
25De Leoacuten I Hernaacutendez J 1992 El diagnoacutestico de Chlamydia Trachomatis 2ordfed Meacutexico
26 Ruiz-Castantildeeda M 1954 Brucelosis Prensa Med Meacutexico
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