a komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai (Áok 2012)
Post on 18-Mar-2016
60 Views
Preview:
DESCRIPTION
TRANSCRIPT
1
A komplement rendszer gyakorlati vonatkozásai
(ÁOK 2012)
Buzás Edit
Fülöp A. K. (Szerk.): Immunológiai szemináriumok, 4. fejezet.
2
Rövid tartalom
• Bevezetés• Az aktivációs utak mérése
– Aktivitás– Komponensek
• A komplement aktivitás mint eszköz (mérés komplement aktiválás segítségével)
• A komplement aktiváció szabályozásának betegségei– Egy példa
3
A komplement rendszer
A veleszületett immunitás szolubilis molekuláris rendszere.
A komplement rendszer fehérjéi limitált proteolízissel kaszkádszerűen aktiválják egymást
A komplement rendszer fő effektor funkciói:• a pathogének lízise• opszonizáció
• a pathogén eliminációja• immunkomplexek, apoptotikus testek és nekrotikus
sejttörmelék eltávolítása• gyulladáskeltő hatás
4
C4bC2b
C2bC2a
Klasszikus útvonal Lektin útvonal Alternatív
útvonal
Membrane attack complex (MAC)
5
A szövettenyésztésben alkalmazott magzati borjúsavót miért célszerű 56oC-on 30 ‘-ig inkubálni?
A szérum komplement tartalmának inaktivációja a cél (mely révén pl. komplement mediálta sejtlízis és/vagy opszonizáció következhetne be in vitro)
6
Mire utalhat az alábbi kísérlet eredménye?
birka vvt + anti birka vvt antitest
birka vvt + anti birka vvt antitest + humán szérum
birka vvt + anti birka vvt antitest + 56oC 30’-ig előinkubált humán szérum
A szérum komplement tartalmának hatására az antitestek által kötött vörösvértestek lízise következik be (Hgb szabadul ki). Hő hatására a
komplement inaktiválódik.
7
• Értéke annak a szérumhígításnak a reciproka, mely az antitesttel fedett birka vvt-k 50% -át lizálja.• A CH50 mérés a klasszikus komplement aktiváció mérésére alkalmas. Azt tükrözi, mely mértékben képes a szérum komplement tartalma birka vvt-ket lizálni.
• Értéke csökken, ha az egyes komplement fehérjék • hiányoznak (komplement deficiencia) vagy • felhasználódnak (pl. bizonyos vasculitisekben).
Össz-komplement aktivitás mérés (CH50 teszt)
8
+ savó(amiben mérjük akomplement aktivitást)
Hemoglobin meghatározás
+ savó(amiben mérjük akomplement aktivitást)
+ savó(amiben mérjük akomplement aktivitást)
sC5b-9 meghatározás
G6PDH meghatározás
C aktiváció
hemolízis
lipolízis
+ savó(amiben mérjük akomplement aktivitást)
vvs ellenes antitest(hemolizin)
vvs
+ savó
komplement aktivitást)komplement aktivitást)(amiben mérjük a
komplement aktivitást)
Liposzóma membránellenes antitest
liposzóma
G6PDH
+
+
aggregált Ig
A
B
C
CH50 meghatározás
- reagens kontroll(RK
- lízis kontroll( LK): deszt. víz
- mintából(M) higítási sor
100%
CH50 meghatározás
- reagens kontroll( ): szérum nélkül
- lízis kontroll( ): deszt. víz
- mintából( ) higítási sor
E – E /E = y y * 100 = lízis %
ml szérum
Hemolízis
50%
CH50 = 1 ml / x ml
1
0,1 xml szérum
1
y/1 y
0,1
M RK LK
Össz-komplementtitrálási módszerek alapelvei
Hemolitikusteszt
CH50 ekvivalensELISA
Liposzóma-immunassay
11.3. ábra A CH50/ml érték kiszámítása
9
Normál komplement értékek
Szérum CH50: 142-279 CH50 egységTestnedvekben: az előző 1/3-a, ¼-e-----------------------------------------------------------------------
C1 szint: 16-33 mg/dLC3 szint: férfi: 88-252 mg/dL
nő: 88-206 mg/dLC4 szint:
férfi: 12-72 mg/dLnő: 13- 75 mg/dL
10
Az emelkedett vagy csökkent CH50 érték lehet a gyakoribb?
A leggyakrabban emelkedett érték mérhető, hiszen a legtöbb komplement fehérje akutfázis fehérje is egyben.
A komplement fehérjék hiánya vagy szignifikánsan csökkent szintje rekurrens sinopulmonaris bakteriális fertőzésekre, Neisseria által okozott meningitisre vagy sepsisre hajlamosít.
11
Mire utalhat a csökkent CH50 érték?
Primér hiány: genetikai
Szekunder hiány: elégtelen termelődés vagy fokozott felhasználás (A CH50 értéke gyakran csökken immunkomplex megbetegedésekben, pl. SLE.)
12
Mit mondhatunk ki teljes biztonsággal, ha az összkomplement (CH50) érték normál
tartományba esik?
A normál CH50 érték arra utal, hogy valamennyi komplement komponens (C1 -C9,) jelen van. Ugyanakkor egyes komplement faktorok szintje akár 50 - 80% -kal is csökkenhet a nélkül, hogy a CH50 aktivitás változna. Minthogy gyulladásos betegségekben a szintézis fokozódik, ezért a normál értékek nem jelentik, hogy nincs komplement által közvetített szövetkárosodás.
13
Melyik komplement fehérje van jelen a legnagyobb koncentrációban?
C3
C4bC2b
C2bC2a
14
Mire utal a C3 és C4 együttes csökkenése?
Klasszikus komplement aktivációra utal.
C4bC2b
C2bC2a
15
Mire utal, ha a C3 szint csökken a C4 érték viszont normál tartományba esik?
Az alternatív út aktiválódását jelzi
C4bC2b
C2bC2a
16
A betegek szérumszintje normál tartományba esik vagy emelkedett.
Miért?
Csökkent CH50 titer és komplement fehérje szint jellemzi pl. a rheumatoid arthritises vagy gonococcus arthritises
synoviális folyadékmintákat.Milyen lehet a betegek szérumszintje?
17
A komplement rendszert vizsgáló további módszerek I.
Alternatív komplement aktiváció vizsgálható, ha a elvonjuk a klasszikus és MBL úthoz szükséges Ca2+ ionokat a Ca-kelátor EGTA-val, és feleslegben biztosítjuk az alternatív aktivációhoz szükséges Mg2+ ionokat
18
A komplement rendszert vizsgáló további módszerek II.
Az MBL útvonal vizsgálható, ha a C1q-t blokkoljuk antitesttel (Mab 2204), és kizárjuk az alternatív út lehetőségét (mely >1% savó mellett működik), s így 0,1%-1% savókoncentráció között az MBL út mérhető
19
További vizsgálómódszerek a komplement komponensek mérésére
• ELISA: Pl. C3 mennyisége• Komplementaktivációs ELISA• Komplement fehérjék expressziója: RT-
PCR • Komplement receptor expresszió
kimutatása: RT-PCR, FACS
20
Komplement kötésen/ felhasználódásán alapuló
vizsgálati módszerek
21
antigén
+ komplement
+ indikátor sejt
indikátor sejtlízis
C
C
C
C
C
C
C
C
CC
C
CC
C CC C
C C
IK
komplementkonzumpció
nincskomplementkonzumpció
nincslízis
Immunkomplexek kimutatása/mérése komplement-fixációs (-konzumpciós) teszttel
IC
22
IKK
jelzett anti Ig
jelzett anti Ig
IKK
anti C3
anti C1q
Immunkomplex ( IC) kimutatása ELISA-val
IC
IC
23
A megfelelő HLA-specifitású ellenanyag hozzákötődik a sejtekhez, aktiválja a komplementet: lízis. A tipizáló savók többször terhes nőkből vagy többszörös vérátömlesztésen átesett személyektől származhatnak
HLA-tipizálás komplement függő mikrolimfocitotoxicitási teszttel
Terasaki plate
24
A komplement rendszer aktiválódási útvonalai és szabályozásuk
25
A komplementrendszer betegségeia kaszkád molekulák primer (genetikai eredetű) deficienciái
Nem feltétlenül a sejtek lízise a leglényegesebb fukciója a
komplement rendszernek!?
26
A komplementrendszer betegségei – szabályozó molekulák,receptorok
27
Örökletes angioneurotikus ödéma (HANO)(örökletes C1INH hiány)
Ugyanaz a személy krizis alatt és után
28
• 17 éves lány súlyos hasi fájdalmakkal (gyakori, éles görcsök, hányás)• appendectomia – appendix normális volt• a családban már korábban is előfordult a betegség• Dg: HANO ?• a C1INH szintje a normál érték 16%-a (ELISA)• Naponta szedhető steroid hatására a tünetek gyakorisága és súlyossága csökkent• Tisztított C1INH – időnként i.v.
Fő tünetek:• bőr, belek, légutak duzzanata• súlyos akut hasi fájdalom, hányás• ödéma különféle helyeken (gégeduzzanat – fulladást okozhat)
29
C4bC2b
C2bC2a
A komplement rendszer aktivációja gyakran hisztamin és kemokinek felszabadulását eredményezi ( fájdalmat, hőemelkedést és viszketést okozva).
A HANO-s betegek ödémája miért nem tartalmaz celluláris komponenseket és miért nem okoz viszketést?
• HANO-ban az aktív C1 miatt a C4b és a C2b szabadon termelődik a plazmában.
• A C4b gyorsan inaktiválódik, ha nem tud azonnal sejtfelszínhez kötődni. A C4b és C2b így folyamatosan elhasználódik, de nem keletkezik C3/C5 konvertáz, ezért a C3 és C5 hasítása elmarad, nem jön létre C3a és C5a sem.
• A komplement aktiválást követő hisztamin felszabadulást (hízósejt degranuláció) a C3a okozza, a fő kemotaktikus hatású komplement komponens pedig a C5a.
Stop
30
A C1-INH gátolja a kinin kaszkádot is!
Mivel C5a és C3a nem termelődik, nem azok gyulladáskeltő hatása felelős az ödémáért.
31
Mely komplement komponensek szintjének csökkenése várható? Miért?
• C2 és C4, mert ezeket az állandóan aktív C1 hasítja (diagnosztikai marker)
C4bC2b
C2bC2a
32
Mi történik az alternatív úttal?
Ez az út nem érintett, mert itt a C1 nem játszik szerepet. C4bC2b
C2bC2a
33
Milyen a terminális komponensek szintje?
A terminális komponensek szintje normális.
C4bC2b
C2bC2a
34
Miért nem fogékonyabbak a fertőzésekkel szemben?
Az alternatív útvonal érintetlen, így ez kompenzál. C4bC2b
C2bC2a
35
• Ha anafilaxia okozza (hisztamin felszabadulás), akkor azonnal reagálni fog adrenalinra/epinefrinre, és csalánkiütés is megfigyelhető.
• HANO-ban az adrenalin nem hat, intravénás C1INH kell.
Hogyan lehet eldönteni, hogy anafilaxiás reakció vagy örökletes angioödéma okozza-e a
felső légutak elzáródását (gégeödémát)?
36
1) A természetes immunválasz melyik komponensével (komponenseivel) találkozik először az extracelluláris kórokozó legnagyobb valószínűséggel?
2) A komplement rendszer milyen effektor mechanizmussal járul hozzá a pathogén eliminációjához?3) Hogy nevezik a célsejt lízisét okozó makromolekuláris komplexet?4) Mi az opszonizáció? 5) Mi szükséges az fagocitózishoz még az opszoninen kívül?
Ellenőrző kérdések
6) Milyen receptorok vehetnek részt a patogén fagocitózisában?7) Mi a szerepe a kis komplement komponenseknek?
top related