adn proviral de vih es el blanco genÉtico...

pferrer@hcuch.cl

ADN PROVIRAL DE VIH ES EL BLANCO GENÉTICO ADECUADO PARA EL ESTUDIO DE

RESISTENCIA GENOTÍPICA A ANTIRRETROVIRALES EN PACIENTES CON

VIREMIAS DE BAJO NIVEL

FERRER P1, SOBARZO2 M y AFANI A1

1 Hospital Clínico Universidad de Chile. 2 Hospital Barros Luco, Santiago, Chile

INTRODUCCION

Existe un creciente interés por evaluar a pacientes VIH quedespués de un tiempo en terapia antirretroviral (TAR) no llegan aser indetectables manteniéndose con viremas de bajo nivel.

Lamentablemente actualmente no existen en el mercado ensayosgenotípicos que puedan realizarse con carga virales<1.000copias/mL que permitan evaluar la posible aparición de resistenciaen estos pacientes.

En estos casos se recomienda considerar al ADN proviral de VIHpara estudios de resistencia genotípica.

Evaluar la utilidad del ADN proviral de VIH como blanco para análisis de resistencia a antirretrovirales en pacientes en TAR con viremias de bajo nivel.

OBJETIVO

Materiales y Método

PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol. 2012 Jun;50(6):1936-42.

8

Materiales y Métodos

Descontinuado a nivel mundial en diciembre de 2014

Secuenciación automática usando ReCallTM

10 muestras ® con CV entre 1.000 y 10.00010 muestras ® con CV entre 10.000 y 99.00010 muestras ® con carga viral >100.000

VALIDACIÓN

1 sola discrepancia 97% concordancia

Control Acrometrix® es diseñado para laboratorios que realizan test deresistencia genotípica a inhibidores de transcriptasa reversa y proteasade VIH.

100% de Detección

Secuenciación redundante

Llamado de basesConfiable

Este método automático es:

Rápido: Una semana

Bajo costo:

Eficiente: solamente 5% deresultados no reportables

Reproducibilidad: 100%

Validación con respecto aTrugene del 97%

Usado en centros de referencia deVIH

Automatic HIV Drug Resistance Genotyping With RECall:

TR/PRO.

PR. Harrigan, et-al. J Clin Microbiol. 2012 Jun;50(6):1936-42.

Se estudiaron un total de 75 pacientes adultos de los cuáles un75% fueron hombres quienes estaban confirmados deinfección por el virus VIH y bajo tratamiento antirretroviral almomento del test de resistencia.

En primer lugar se analizaron 10 muestras de pacientes quetuvieron una carga viral promedio de 20.000 copias/mL. Estospacientes fueron analizados simultáneamente en paralelo porADN proviral y ARN viral.

Posteriormente se estudiaron exclusivamente por ADN proviral65 pacientes en quienes el médico tratante sospechó de fallavirológica. Estos sujetos presentaron una carga viralpromedio de 258 (rango de 20-1083) copias/mL.

El Estudio

Resultados

De las 10 muestras analizadas en paralelo por ARN y ADN proviral encontramos que 9 (90%)coincidieron en número y tipo de mutaciones. De estas 9 muestras coincidentes 2 fueronsusceptible y 7 fueron resistentes.

Con respecto a la muestra discrepante por ARN encontraron más mutaciones de resistenciaque por ADN proviral. Las mutaciones K65R, L100I, Y115F, K219R, and F227L fueronsolamente detectadas en ARN.

Mientras que las mutaciones V108I and K70G fueron detectadas solo en ADN proviral.

En esta muestra las mutaciones coincidentes detectadas en ambos compartimentos fueron:K103N, M184V, H221Y.

En esta muestra la discrepancia en tipo y número de mutaciones provocó diferencias en elnivel de resistencia predicho para los siguientes antiretrovirales: ABC, D4T, TDF, ETR y RPV.Siendo mayor en número y nivel por ARN.

En la serie de muestras analizada por ambos compartimentos no se encontraron mutacionesasociadas a inhibidores de proteasa.

Con respecto a las 65 muestras analizadas exclusivamente por ADN proviralse encontró que 14 fueron resistentes (22%), 43 fueron susceptible (66%) and8 fueron no reportables (12%).

En las muestras resistentes las siguientes mutaciones fueron detectadas:M184V (13.8%), K103N (7.7%), M41L (4.6%), K70R (3.1%), V108I A62V, V90I,Y181C, M230I, T215Y, T215D, H221Y (1.5%).

En esta serie de muestras estudiadas por ADN proviral se pudierondetectar las mutaciones de resistencia a inhibidores de proteasa: I93L,N88T que dio baja resistencia a ATV/r.

Resultados

Seguimiento de un caso

La terapia se cambió a; Zidovudine (AZT) + Tenofovir (TDF) +Atazanavir/ritonavir (ATV/r). 4 meses después se evaluó la carga viral yresultó indetectable.

0

2

4

6

8

10

12

14

16

K103

NK6

5RM

184V

T215

FT2

15I

P225

HL7

4IK2

19E

L100

IK1

01P

V90I

V108

IK7

0TE1

38A

H22

1YK7

0RK1

01E

D67

NL7

4VA6

2VV1

06M

V179

DM

184I

V75M

T69D

T215

DK2

19Q

K70G

G19

0AA1

06I

G19

0EK1

03N

/…K7

0EY1

15F

K219

RT2

15Y

K101

P/…

D67

GT6

9CR

…Y1

81C

M41

LM

230I

RNA

DNA

Serie de mutaciones comparando ARN y ADN proviral

Nuestros resultados demostraron que el ADN proviral es un blanco adecuado para laprueba de resistencia a fármacos antirretrovirales.

Sin embargo, debido a la discrepancia encontrada entre amboscompartimentos, el ADN proviral parece ser adecuado sólo en casos deviremias <1,000 copias / mL.

Por lo tanto, no es aconsejable reemplazar el ARN por el proviral. Se recomienda eluso de ADN proviral sólo en los casos en que el análisis de ARN no es posible.

En las 65 muestras analizadas con virema <1.000 copias / mL, las mutacionesencontradas dieron resistencia a los fármacos 3TC, FTC, ABC, EFV, NVP, DDI quecoincidieron con el tratamiento de los pacientes.

Nuestros resultados sugieren que las viremias de bajo nivel pueden serestudiadas mediante ADN proviral ya que estas podrían estar asociadas a fallavirológica que puede ser detectada precozmente y de este modo realizar unaintervención terapéutica más precoz que asegure el éxito del tratamientoantirretroviral.

Conclusiones