curva de calibracion
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“Año de la Diversificación Productiva y del Fortalecimiento de la Educación”.
UNIVERSIDAD “ALAS PERUANAS” FILIAL HUANCAYO
TEMA:CURVA DE
CALIBRACION DE LA GLUCOSA
ALUMNO: GALLEGOS PALERMO, CHRISTIAN.
CARRERA: TECNOLOGIA MEDICA.
CICLO: III CICLO.
CURSO: BIOQUÍMICA CLÍNICA I.
DOCENTE: Lic. T M. César Manuel Sánchez Alpaca.
PERÚ - 2015
CURVA DE CALIBRACION DE LA GLUCOSA
Introducción:
Es un método de química analítica empleado para medir la concentración de una
sustancia en una muestra por comparación con una serie de elementos de concentración
conocida. Se basa en la existencia de una relación en principio lineal entre un carácter
medible (por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y la
variable a determinar (concentración). Para ello, se efectúan diluciones de unas
muestras de contenido conocido y se produce su lectura y el consiguiente
establecimiento de una función matemática que relacione ambas; después, se lee el
mismo carácter en la muestra problema y, mediante la sustitución de la variable
independiente de esa función, se obtiene la concentración de esta. Se dice pues que la
respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva de calibración, se
puede interpolar el dato de la muestra problema hasta encontrar la concentración del
analito. Las curvas de calibración suelen poseer al menos una fase de respuesta lineal
sobre la que se realiza un test estadístico de regresión para evaluar su fiabilidad.
La medida de la concentración mediante un método instrumental se basa en la
existencia de una relación proporcional entre dicha concentración y la señal analítica o
respuesta que genera un instrumento.
Generalmente esta relación es lineal, de modo que puede expresarse como:
y =a+b·CA
Donde CA es la concentración del analito, y la señal medida, a la ordenada en el origen y
b la pendiente de la recta.
La ecuación de la recta se obtiene mediante calibración con disoluciones de
concentración perfectamente conocida (disoluciones patrón) a partir de la medida de la
señal analítica proporcionada por éstas. Los pares de valores concentración-señal se
ajustan a una recta, a partir de la cual pueden obtenerse la concentración del analito en
muestras desconocidas.
Preparación de los patrones
Se preparan patrones del analito que cubran un intervalo adecuado de concentraciones,
y se mide la señal analítica proporcionada por los mismos.
Disoluciones del analito de concentración conocida y creciente.
Obtención de la relación señal y concentración
Se traza un gráfico con las señales frente a la concentración de analito y se calcula la
recta que "mejor" se ajusta a los datos mediante un ajuste por mínimos cuadrados. De
esta forma se obtiene la pendiente (b) y la ordenada (a) en el origen que definen la recta.
Gráfico señal-concentración y recta ajustada por mínimos cuadrados
Uso de la curva de calibrado
Se mide la señal analítica para las muestras desconocidas y se interpola en la recta de
calibrado para obtener valores de concentración de analito.
Obtención de la concentración de analito en las muestras a partir de la gráfica y la recta.
Finalmente, para obtener la concentración de analito en la muestra hay que tener en
cuenta en los cálculos las posibles diluciones a las que se ha sometido la muestra para
obtener las disoluciones M1, M2 y M3 de medida.
TUBOS ESTÁNDAR REACTIVO ABSORBANCIA1 20 mg/dl 1 ml 0.1002 40 mg/dl 1 ml 0.1503 60 mg/dl 1 ml 0.2004 80 mg/dl 1 ml 0.2505 100 mg/dl 1 ml 0.3006 120 mg/dl 1 ml 0.350
Llevar a baño maria por 37°C X 5 min.
Leer a espectrofotómetro a 505 nm.
TUBOS CONCENTRACION ABSORBANCIA PACIENTE1 40 0.100 0.3222 60 0.150 0.2253 80 0.200 0.2654 100 0.2505 120 0.3006 140 0.350
CC
0.100 0.150 0.200 0.250 0.300 0.350
0.225 0.265 0.322
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