deteccion y cuantificacion de proteina

PRACTICA No. 1. DETECCIN Y CUANTIFICACIN DE PROTEINASNombre del alumno: Fecha: 28 de abril del 2014RESUMEN:Las protenas desempean un papel importante dentro de la clula, tanto estructural como funcional (enzimas, glicoprotenas, lipoprotenas, hormonas, neurotransmisores). Para extraerse la ovoalbmina de huevo y la casena de la leche se tuvieron que desnaturalizar agitndola y agregando cido actico hasta llegar a su punto isoelctrico (posteriormente se lav con etanol para eliminar los residuos de lpidos) respectivamente suministrando a ambas calor; para su cuantificacin se utiliz el mtodo de Biuret y el espectrofotmetro de haz simple a una longitud de onda de 540 nanmetros para medir las absorbancias de las muestras patrn (peptona de casena y albumina srica o BSA) y de las muestras problema (casena y ovoalbmina extradas). Realizndose una curva de calibracin para encontrar las concentraciones de las protenas extradas.INTRODUCCIN: El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia. Determina la cantidad de concentracin en una solucin de algn compuesto utilizando frmulas (Ley de LambertBeer)1. La ovoalbmina es la principal protena de la clara del huevo, pertenece a la superfamilia protenica de las serpinas posee cerca de 385 aminocidos. La casena es una fosfoprotena (un tipo de heteroprotena) presente en la leche y en algunos de sus derivados (yogur o queso).OBJETIVO: Extraccin y cuantificacin de protenas por espectrofotometra.PROCEDIMIENTO: Primero se realiz la extraccin de las protenas del huevo y la leche (ovoalbmina y casena) luego se desnaturalizaron, se prepararon diluciones de las muestras patrn (peptona de casena y BSA) y muestras problema (casena y ovoalbmina) y se les agreg 2 ml del reactivo de Biuret2, luego se midieron sus absorbancias a una longitud de onda de 540 nm. Se realizaron curvas de calibracin para cada protena extrada. RESULTADOS Y DISCUSIN: Como se puede observar en las grficas se obtuvo una concentracin intermedia entre las muestras patrn de 0.042 mg/ml en el caso de la ovoalbmina y en la casena de 0.371 mg/ml.

CONCLUSIONES: De acuerdo a los resultados las concentraciones de las protenas extradas son relativamente altas demostrando que tanto el mtodo de extraccin como el de cuantificacin son viables a utilizar.BIBLIOGRAFIA:1.Harris, Daniel. Anlisis Qumico Cuantitativo. Segunda Edicin. Revert S.A. Espaa (1999); 2. Camacho Garrido, Salvador. Prcticas de biotecnologa, P.2-4,