hplc 法检测片剂中葡萄糖酸亚铁的含量摘要...

HPLC 法检测片剂中葡萄糖酸亚铁的含量

秦瑜丽 ( 山西振东制药股份有限公司，山西长治 047100)

摘要 ［目的］建立测定保健食品片剂中葡萄糖酸亚铁含量的高效液相色谱法。［方法］色谱条件为: Agilent ZORBAX SB-C18柱( 4． 6 ×150 mm，5 μm) ;以乙腈 －离子对溶液( 500 ml纯化水中加四丁基氢氧化铵 10 ml，用磷酸调 pH至 7． 6) 30∶ 70( V/V) 作为流动相;流速为 1ml /min;进样量20 μl，检测器在波长210 nm处进行检测。［结果］试验表明，该方法标准曲线良好，线性范围为62． 5 ～625． 0 μg /ml，回归方程为 Y =0． 009 2X －0． 116 6，R2 = 0． 999( n =6)。出峰时间为 1． 547 min，平均回收率为 96． 68%，RSD为 1． 5% ( n =6)。［结论］该方法操作简单，样品前处理简便，结果稳定、精确，可用于保健食品片剂中葡萄糖酸亚铁含量的测定。关键词 高效液相色谱法;葡萄糖酸亚铁;片剂;含量测定中图分类号 S609． 9 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 08 －03635 －02

Determination of Ferrous Gluconate in Tablets by HPLCQIN Yu-li ( Shanxi Zhendong Pharmaceutical Co． Ltd，Changzhi，Shanxi 047100)Abstract ［Objective］To establish a method for the determination of ferrous gluconate in health food tablets by HPLC． ［Method］The sampleswere separated on Agilent ZORBAX SB-C18 column( 4． 6 ×150 mm，5 μm)，eluted with mixture of acetonitrile and the ion-pairing reagent ( 500ml of purified water added tetra butyl ammonium hydroxide 10 ml，adjusted pH to 7． 6 with phosphoric acid) ( 30∶ 70，V/V) at 1ml /min． The in-jection volume used was 20 μl and the detector wavelength was set at 210 nm． ［Result］Ferrous gluconate was good linear over the range 62． 5－625． 0 μg /ml ( Y =0． 009 2X －0． 116 6，R2 = 0． 999，n =6) ． The peak time was 1． 547 min． The average recovery rate for ferrous gluconatewas 96． 68%，and RSD was 1． 5% ( n =6) ． ［Conclusion］This method was simple，stable，precise and accurate． So this study can be used indetermination of ferrous gluconate content in health food tables．Key words HPLC; Ferrous gluconate; Tablets; Content determination

作者简介 秦瑜丽( 1987 － ) ，女，山西长治人，高级检验工，从事保健食品的研发，E-mail: 514016041@ qq． com。

收稿日期 2013-03-08

葡萄糖酸亚铁是常用的补铁制剂之一，它含铁量较低，

副作用较轻，易于吸收，对肠胃的刺激小。在保健食品中，虽

然所有价位的铁都是有效成分，但是 Fe2 + 质量更优。《中国

药典》采用滴定法测定葡萄糖酸亚铁含量［1］，但是此方法样

品前处理繁琐，操作复杂，人为误差较大，并且只能测得总

Fe2 + 的量，而不能测定葡萄糖酸亚铁的含量。笔者在参考相

关文献［2 －4］的基础上结合产品的特点，确定离子对试剂的种

类和添加量以及 pH 的范围，确保无特征吸收峰的葡萄糖酸

亚铁在固定相上的保留时间和峰形大大改善。结果证明，该

方法稳定性和重复性好，灵敏度高，可用于葡萄糖酸亚铁类

保健食品的质量控制。1 材料与方法

1． 1 材料 主要试剂: 葡萄糖酸亚铁对照品，郑州瑞普生物

工程有限公司; 保健食品片剂，山西振东制药股份有限公司

研发部; 四丁基氢氧化铵( 10% ) ，天津市光复精细化工研究

所，分析纯; 磷酸，北京化工厂，分析纯; 乙腈，美国天地试剂

公司，色谱纯; 邻二氮菲，天津市科密欧化学试剂有限公司，

分析纯; 硫酸，洛阳市化学试剂厂，分析纯; 锌粉，天津市光复

精细化工研究所; 试验用水均为纯化水。主要仪器: UitlMate3000 高效液相色谱仪、紫外检测器、标准自动进样器、柱温

箱、pH 计( UB-7) 、T-214 型微量分析天平，北京赛多利斯仪器

系统有限公司。1． 2 方法

1． 2． 1 HPLC 法。1． 2． 1． 1 流动相的配制。1 000 ml 纯化水中加四丁基氢氧

化铵( 10% ) 20 ml，用磷酸调 pH 至 7． 6，与乙腈按 70∶ 30 混合

均匀，过 0． 45 μm 的膜，超声 30 min，备用。1． 2． 1． 2 标准溶液的制备。精密称取葡萄糖酸亚铁对照品

0． 012 5 g，置 50 ml 棕色容量瓶中，加流动相溶解定容，超声

20 min，过 0． 45 μm 滤头，再超声 10 min，得 250 μg /ml 对照

品溶液。同 法 再 分 别 配 制 浓 度 为 0、62． 5、125． 0、187． 5、250． 0、375． 0、625． 0 μg / ml 的葡萄糖酸亚铁系列标准溶液

液，待用。1． 2． 1． 3 阴性对照溶液的制备。按保健食品处方称取除葡

萄糖酸亚铁以外的其他原辅料 0． 014 0 g，置 50 ml 棕色容量

瓶中，加流动相溶解定容，超声 20 min，过 0． 45 μm 滤头，再

超声 10 min，得阴性对照溶液，待用。1． 2． 1． 4 供试品溶液的制备。取保健食品片剂 50 片，精密

称重，除去包衣，研细，精密称取 0． 028 8 g 置 50 ml 棕色容量

瓶中，加流动相溶解定容，超声 20 min，过 0． 45 μm 滤头，再

超声 10 min，待用。1． 2． 1． 5 系统适应性试验。精密量取“1． 2． 1． 2”项下对照

品溶液和“1． 2． 1． 3”项下阴性对照溶液各 20 μl，进样后记录

色谱图。1． 2． 1． 6 线性关系考察。将“1． 2． 1． 2”项下系列标准溶液

按液相条件测定，以葡萄糖酸亚铁浓度为横坐标，以峰面积

为纵坐标，绘制标准曲线。1． 2． 2 滴定法。取样品 50 片，精密称定，研细，过 40 目筛，

混合均匀。称取均匀样品 4． 186 0 g，置于具塞锥形瓶中，加

入水 75 ml 与 1 mol /L 硫酸溶液 15 ml，溶解后，加锌粉 0． 75g，密塞，放置约20 min，直至溶液脱色。用铺有锌粉的4 号垂

熔漏斗滤过，滤器用新沸放冷的水 20 ml 洗涤，合并洗液与滤

器，加邻二氮菲指示液 0． 2 ml，用硫酸铈滴定液( 0． 1 mol /L)

滴定至溶液由橘黄色转变为绿色，并将滴定的结果用空白试

安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41( 8) : 3635 － 3636 责任编辑 李菲菲 责任校对 卢瑶

验校正。2 结果与分析

2． 1 方法专属性分析 由图 1、2 可知，葡萄糖酸根的保留

时间约为 1． 6 min，其他原辅料均无干扰。

图 1 葡萄糖酸亚铁对照品色谱

图 2 阴性对照色谱

2． 2 标准曲线的绘制 由图 3 可知，该方法标准曲线良好，

线性范围为 62． 5 ～625． 0 μg /ml，回归方程是 Y = 0． 009 2X －0． 116 6，R2 = 0． 999( n =6) 。

图 3 葡萄糖酸亚铁标准曲线

2． 3 精密度试验 精密吸取“1． 2． 1． 2”项下对照品溶液 20μl，重复进样 6 次，测定葡萄糖酸亚铁的峰面积，结果依次为

2． 908 8、2． 940 7、2． 871 0、2． 888 7、2． 881 4、2． 889 9 mAU，平均值

2． 896 8 mAU，RSD 为 0． 86%。由此可知，该法精密度良好。

2． 4 回收率试验 精密称取已测知葡萄糖酸亚铁含量的样

品约 0． 011 2、0． 014 0、0． 016 8 g ( 含量为 315． 9 mg /g) 各 2份，各加入“1． 2． 1． 2”项下葡萄糖酸亚铁对照品溶液约 16、20、24 ml，按“1． 2． 1． 3”项下方法处理后，测定峰面积。结果

详见表 1。

表 1 回收率试验结果

样品称样量g

样品中葡萄糖酸亚铁含量∥g

对照品称样量

g

葡萄糖酸亚铁测定量∥g

回收率%

平均回收率%

RSD%

0． 011 7 0． 003 7 0． 004 0 0． 007 3 94． 81 96． 68 1． 50． 011 3 0． 003 6 0． 004 0 0． 007 4 97． 370． 014 5 0． 004 6 0． 005 0 0． 009 3 96． 880． 014 7 0． 004 6 0． 005 0 0． 009 5 98． 960． 016 8 0． 005 3 0． 006 0 0． 010 8 95． 580． 017 1 0． 005 4 0． 006 0 0． 011 0 96． 49

2． 5 稳定性试验 精密吸取“1． 2． 1． 4”项下供试品溶液 20μl，分别于 0、2、4、6、8 h 重复进样 1 次，测定葡萄糖酸亚铁的

峰面积，结果葡萄糖酸亚铁平均峰面积为 2． 549 0 mAU，RSD为 1． 97%。2． 6 样品测定 取 3 批保健食品片剂样品，按“1． 2． 1． 4”项

方法制备供试品溶液，各取 20 μl，测定峰面积，计算葡萄糖

酸亚铁含量。结果得出 3 批样品的葡萄糖酸亚铁含量分别

为 98． 01%、97． 80%、96． 60%，平 均 含 量 97． 47%，RSD 为

0． 79%。2． 7 滴定法结果 按照“1． 2． 2”项下方法，得出 3 批样品中

葡萄糖酸亚铁含量依次为 96． 51%、95． 90%、95． 67%，平均

值 96． 03%，RSD 为 0． 46%。测定结果显示，滴定法比 HPLC法测定结果稍偏高。3 结论

试验建立了 HPLC 法测定保健食品片剂中葡萄糖酸亚

铁的含量，结果表明，该方法比起药典规定的滴定法操作简

便，样品前处理简单，精确度高，稳定性好，无干扰，为同类产

品的质量控制提供了一种有效实用的方法。因该方法是根

据测定葡萄糖酸根的紫外吸收而发展出来的方法，所以适用

于样品中只有葡萄糖酸亚铁一种葡萄糖酸铁盐时，样品中铁

含量的测定。参考文献［1］国家药典委员会． 中华人民共和国药典( 二部) ［S］． 北京: 中国医药科

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6363 安徽农业科学 2013 年