iii encontro nacional de tuberculose identificação e tipagem molecular de cepas de mcr isoladas de...
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III Encontro Nacional de Tuberculose
Identificação e tipagem molecular de cepas de
MCR isoladas de infecções em procedimentos
invasivos no Pará e em outros estados do Brasil
Cristina Viana-Niero
Grupo M. chelonae-abscessus
Micobactérias de crescimento rápido,
Amplamente distribuídas na natureza,
Patógenos oportunistas.
M. abscessus (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986)
M. chelonae (Kusunoki, S., and T. Ezaki. 1992; Lévy-Frébault et al., 1986)
M. immunogenum (Wilson et al.,2001; Sampaio et al., 2006)
M. massiliense (Adékambi et al., 2006; Simmon et al., 2007)
M. bolletii (Adékambi et al., 2006)
Procedimentos no. de isolados
Cirurgias laparoscópicas 58
(2 mamoplastias e 1 liposucção)
Injeção intra muscular
Mesoterapia
1
8
Surto envolvendo 311 pacientes submetidos a diferentes
procedimentos invasivos em 16 hospitais e clínicas em Belém, PA
(2004 e 2005)
0
5
10
15
20
25
No.
de iso
lados
Amostras isoladas no Instituto Evandro Chagas, Belém, PA
250
200
75
50
PRA-hsp65
m B H
BstEII [bp] (235, 210)
HaeIII [bp] (200, 70, 60, 50)
M. abscessus 2, M. massiliense e M. bolletii
(Devallois et al., 1997; Adékambi et al., 2004 e 2006)
Características fenotípicas:
tempo de crescimento
(< 7 dias e ausência de pigmentação)
Identificação molecular inicial:
PRA-hsp65 (PCR-Restriction Enzyme Analysis)
Isolados Diferenças de nucleotídeos na seqüência do gene
hsp65
posição 187 229 340
M. massiliense CIP 108297
C G T
M. abscessus 2 ATCC 14472
T C C
M. bolletii CIP 108541 T C C
Análise por seqüenciamento do gene hsp65
Seqüenciamento do gene hsp65
11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas e 1 após injeção
Número de acesso
GenBank
Cepas No. de nucleotídeos
idênticos/total
Índice de similaridade (%)
AY596465 M. massiliense CIP108297 401/401 100
AY859675 M. bolletii CIP108541 398/401 99,25
DQ869273 M. abscessus 2 ATCC14472 398/401 99,25
AY458075 M. abscessus 1 CIP104536 396/401 98,75
AY458082 M. chelonae ATCC19237 372/401 92,5
DQ288262 M. immunogenum 2 F1112 370/401 92,26
AY458081 M. immunogenum 1 CIP106684 367/401 91,52
< 97% de similaridade espécies diferentes
McNabb et al., 2004
Número de acesso GenBank
Cepas No. de nucleotídeos
idênticos/total
Índice de similaridade
(%)
AY593981 M. massiliense CIP 108297 706/711 99,29
AY859692 M. bolletii CIP 108541 700/711 98,45
DQ288264 M. immunogenum 2 F1112 633/651 97,23
AY262739 M. immunogenum 1 CIP106684 691/711 97,18
AY147164 M. abscessus 1 CIP 104536 686/711 96,48
AY262740 M. chelonae ATCC 19237 679/711 95,49
ND M. abscessus 2
< 1,7% de divergência mesma espécie
> 3% de divergência espécies diferentes
Adékambi et al., 2003
ND não disponível
Seqüenciamento do gene rpoB
11 isolados obtidos após cirurgias laparoscópicas
Injetável: 4 nucleotídeos de diferença em relação as amostras de cirurgia (99,37%)
Seqüenciamento do gene rpoB
8 isolados obtidos após mesoterapia
Número de acesso GenBank
Cepas No. de nucleotídeos
idênticos/total
Índice de similaridade
(%)
AY859692 M. bolletii CIP108541 711/711 100 (2 cepas)
710/711 99,85 (3 cepas)
709/711 99,56 (3 cepas)
Espécie diferente procedimento diferente surto distinto
EPIDEMIOLOGIA MOLECULAR
isolados de uma mesma espécie são
“iguais” ou “diferentes”?
Isolados clínicos previamente identificados
Tipagem molecular por PFGE
(Pulsed Field Gel Electrophoresis)
Captura de imagem e análise de dados
Eletroforese em campos alternados
Suspensão bacteriana
Mix: bactéria e agarose = plug
Lise bacteriana (liberação de DNA)
PFGE
Pulsed Field Gel Electrophoresis
Critério de interpretação (Tenover et al., 1997)
Digestão enzimática
Resultado de PFGE No. de bandas
diferentes
Correlação epidemiológica
relacionada 0 Isolado é parte do surto
Fortemente relacionada 2-3 Isolado é provavelmente parte
do surto
Possivelmente relacionada
4-6 Isolado é possivelmente parte do surto
Não relacionada > 7 Isolado não pertence ao surto
Critérios de interpretação
15.0
0
20.0
0
25.0
0
40.0
0
50.0
0
80.0
0
100.
00
120.
00
140.
00
200.
00
250.
00
300.
00
400.
00
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. massiliense
M. bolletii
M. bolletii
M. abscessus
M. chelonae
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Belém, PA
Rio de Janeiro, RJ
Goiania, GO
Vitória, ES
Curitiba, PR
Rio de Janeiro, RJ
Belém, PA
Santo Angelo, RS
Curitiba, PR
Vitória, ES *
Vitória, ES *
Vitória, ES *
Belém, PA *
CCUG 48898
CCUG 50184
ATCC 14472
ATCC 19977
ATCC 35752
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PFGE Pulsed Field Gel Electrophoresis
Conclusões
Os casos de infecção após mesoterapia, ocorridos em Belém, foram
causados por M. bolletii e divididos em três grupos por rpoB e PFGE.
O isolado obtido após uso de injetável foi identificado como M. massiliense
mas apresentou seqüência do gene rpoB e perfil de PFGE diferente dos
isolados provenientes de cirurgias.
Os casos de infecção após cirurgias em diferentes estados brasileiros foram
causados por uma única cepa de M. massiliense, sugerindo uma única fonte
de infecção.
A identificação de espécies estreitamente relacionadas exige a realização
de vários testes fenotípicos e moleculares.
Cristina Viana-NieroMichelle Christiane da Silva Rabello
Sylvia Cardoso Leão
Departamento de Microbiologia, Imunologia e Parasitologia, UNIFESPUniversidade Federal de São Paulo, SP
Rafael da Silva DuarteUniversidade Federal do Rio de Janeiro, RJ
Moisés PalaciUniversidade Federal do Espírito Santo, ES
Maria Cristina LourençoFundação Osvaldo Cruz, Rio de Janeiro, RJ
André KipnisUniversidade Federal de Goiás, GO
Marta Osório RibeiroIPB Lacen Rio Grande do Sul, RS
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