kurveoppløsning av fluoressensdata ved bruk av treveisanalyse

Kurveoppløsning av fluoressensdata ved bruk av

treveisanalyse

Åsmund Rinnanaar@kvl.dk

KjemometrigruppenLevnedsmiddelteknologi

Kongelig Veterin₣r- og Landbohøjskole

Hvorfor fluoressens?• Krever dobbeltbindinger,

eller nukleofile molekyler• Høy sensitivitet• Økt dimensjonalitet

-> Bedre separasjon

• Bruksområder• Genforskning ("tagging")• Analyse av mat (vitaminer

og proteiner)

Målemetoder• I løsning• Front-face (faste stoffer)

"Støy" i fluoressensRayleigh• 0-ordens:

Emisjon=Eksitasjon• 1-ordens:

Emisjon=2*Eksitasjon• Ingen kjemisk informasjon

under 0-ordens• Rayleigh er høyest i

intensitet

Raman• Spesifikk for

løsningsmiddelet• Konstans energidifferanse

fra 0-ordens Rayleigh• Ligger i et område med

kjemisk informasjon

Raman og Rayleigh er tilnærmet systematisk

Treveisanalyse• PARAFAC• Trilineær struktur• Ødelagt av støy• Måter å behandle dette på

a. Late som ingentingb. Trekke fra et spekter av

løsningsmiddeletc. Sette inn tomme verdierd. Vektinge. Modellering av støy

(ikke vist)

Minus vannstandard• Landskap av

løsningsmiddelet• Vanlig subtraksjon• Fjerner Raman• Minsker Rayleigh• Beregningstiden den

samme

Tomme verdier• Området over 1-ordens

inneholder samme informasjon som i mellom 0 og 1

• En rutine som automatisk setter inn tomme verdier

• Mister informasjon• PARAFAC håndterer

tomme verdier• Økt beregningstid

Vekting - MILES• Vekting av områder• Mere manuelt - vanskelig• Snitt av vannstandarder

som basis for "formen" til støyen

• Ekstra nedvekting av område under 0 og over 1

• PARAFAC kan godt regne med vekter

Vekting - Standard avvik• Alle prøvene er kjørt i

replikater (5)• Det er snittene som blir

brukt i analysen• Standardavvikene av

replikatene brukes som vekter

• Helautomatisk

Datasettet• Seks analytter

Emisjon

• 15 prøver

Eksitasjon

Sammenlikning• Problemer med Catehol og

Resorcinol• MILES best• - vann og std en hver

Resorcinol og Catechol• Catechol • Resorcinol

Er "støyen" borte?Tomme verdier og MILES fjerner Rayleigh

KonlusjonDenne analysen ble også kjørt på fire andre

datasett. Totalt sett ga det følgende ranking liste:

1. MILES2. Minus vann

3. Tomme verdier4. Std

5. Ingenting

Takk til: Rasmus Bro og Jordi Riu

Referanser: Rasmus Bro's avhandling www.models.kvl.dk/source Bro, R: PARAFAC. Tutorial and applications, Chemometrics and

Intelligent Laboratory systems, 1997 (38), 149-171 Bro, R, Sidiropoulos ND, og Smilde, AK: Maximum Likelihood Fitting

Using Simple Least Squares Algorithms, Journal of Chemometrics, Submitted

Wentzell, PD, Andrews, DT, Hamilton, DC, Faber, K, og Kowalski, BR: Maximum Likelihood Principal Component Analysis, Journal of Chemometrics, 1997 (Vol. 2), 339-366