metabolismo microbiano
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Prof. GLORIA MARÍA SAEZ FLORES
El estudio de la exigencia nutricional o no de las bacterias es útil para su identificación
Las moléculas de gran tamaño deben ser previamente digeridas por exoenzimas para que sean moléculas más pequeñas y puedan ser absorbidas. Ejem. Almidón - amilasas, Proteínas - proteasas, ADN - Desoxirribonucleasas, Gelatina - gelatinasas, Lípidos - lipasas y fosfolipasas.
No todas las especies bacterianas son capaces de producir todas las exoenzimas
El estudio de la producción de algunas de ellas es útil en la identificación de los géneros y especies.
La membrana citoplasmática es la encargada de la adsorción selectiva de nutrientes
Se da procesos pasivos (glicerol, agua, CO2, O2)
Procesos activos (permasas, bombas de Na o Ca, sideróforos)
Nutrientes
MICRO Cromo Cobalto Cobre Manganeso Molibdeno Niquel Selenio Tungsteno Vanadio y Zinc.
MACRO
• Carbono.
• Nitrogeno.
•Fosforo.
•Azufre
•Potasio
•Magnesio
•Sodio
•Calcio
•Hierro
FUENTE DE CARBONO: CO2 -- FOTOAUTÓTROFAS ( luz y CO2 ) y O
LITOAUTÓTROFAS(comp. inorgá. y CO2 ) COMP. ORGANICOS – QUIMIOHETEROTROFAS
FUENTE DE NITROGENO: NH4
+, NO3-, NO2
-, AMINOACIDOS, PURINAS, PIRIMIDINAS
FACTORES DE CRECIMIENTO: VITAMINAS B, NAD (V), HEMINA (X)
Fuente de Carbono
OrgánicoOrgánicoquimioheterótrofos quimioheterótrofos
COCO22
quimioautótrofosquimioautótrofosOrgánicoOrgánico
FotoheterótrofosFotoheterótrofosVerdes no sulfurosasVerdes no sulfurosas
Púrpuras no sulfurosas Púrpuras no sulfurosas
COCO22
fotoautótrofafotoautótrofass
Aceptor final de electrones
O2
Animales, protozoarios, hongos,
bacterias
No ONo O22
OrgánicoStreptococcus
InorgánicoClostridium
H2O No HNo H22OO
Fotosíntesis Fotosíntesis OxigenativaOxigenativa
Fotosíntesis Anoxigenica
verdes y púrpuras sulfurosas
Otros gases N2 componente principal de la atmósfera (78%). Gas
inerte: CO tóxico puede ser oxidado a CO2 por algunos
microorganismos CH4 liberado a la atmósfera por microorganismos
metanogénicos, gas con efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotróficas
CO2 fuente de carbono para los autótrofos, aerobios y anaerobios, fotosintéticos o quimiosintéticos.
H2 poco usado, tóxico para la mayoría de los microorganismos, brinda energía a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP
Bacterias aerobios estrictas: necesitan una concentración de alrededor del 21% de oxígeno para poder desarrollar. (Pseudomonas, Mycobacterium, Corynebacterium)
Bacterias microaerófilas: sólo necesitan alrededor de un 5% de oxígeno para desarrollar. Mayores concentraciones inhiben su desarrollo. (Campylobacter, Helicobacter)
Bacterias anaerobios obligadas o estrictas: son incapaces de sobrevivir en presencia de oxígeno, es decir requieren un 0% de oxígeno (Fusobacterium, Clostridium)
Bacterias anaerobias aerotolerantes: pueden crecer en presencia o ausencia de oxigeno, pero la energía la obtienen por fermentación. Ej. Bacterias acidolacticas. (Actinomyces, Propionibacterium)
Bacterias anaerobias facultativas: son bacterias que proliferan mediante procesos oxidativos, utilizando oxigeno como aceptor terminal de electrones, o en anaerobiosis, empleando reacciones de fermentación para obtener energía.. (Streptococcus, Staphylococcus, Enterobacteriaceae)
Bacterias capnófilas: son bacterias aerobias que necesitan además para crecer un 5-10% de CO2. (Neisseria, Haemophilus)
BB CC DDAA
Aerobio Anaerobio Microaerófilo Anaerobio estricto estricto facultativo
Bacterias Psicrófilas: soportan bajas temperaturas, entre 0 - 20ºC (Pseudomonas, Listeria)
Bacterias Mesófilas: desarrollan mejor a temperaturas intermedias, entre 15 - 45ºC (Staphylococcus,
Streptococcus) Bacterias Termófilas: son capaces de soportar altas
temperaturas, de 40-70ºC o más (Bacterias no patógenas) Bacterias Estenotérmicas, son mesófilas pero sólo
desarrollan y sobreviven en rangos estrechos de temperatura, entre 35 - 36ºC (Neisseria) Bacterias Euritérmicas: son capaces de sobrevivir
en amplios rangos de temperatura, entre 0 - 44ºC. (Enterococcus)
Neutrófilas: entre 5,5 - 8,0 (Staphylococcus, enterobacterias)
Acidófilas: entre 0,0 - 5,5 (Lactobacillus)
Alcalófilas: entre 8,0 - 11,5 (Vibrio)
PRESION OSMÓTICA: Transporte activo de potasio. Excreción de sust. osmóticamente
activas.
POTENCIAL REDOX. Aerobios. Eh= 0,2 - 0,4 V Anaerobios. Eh< -0,12 V
Tiempo de generacion: es el tiempo que se requiere para que la poblacion se duplique.
Los tiempos de generacion varian ampliamente entre las diferentes bacterias.
Ej. 1 a 3 horas, 10 min, o varios dias.
Fase lag - las células se adaptan al nuevo ambiente, aún no se dividen
Fase exponencial (log) - velocidad máxima de crecimiento bajo condiciones particulares, tiempo de generación mínimo
Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 ó estadísticamente = 0 cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad acumulación de desechos, inhibición del crecimiento
Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de división celular
El crecimiento microbiano requiere de macromoléculas como proteínas, ácidos nucleicos, polisacáridos y lípidos
Estos estructura se forman a partir de elementos preformados en el medio
Para esto requiere Fuente de Energía para llevar acabo este proceso y esto se denomina:
METABOLISMO
Definición:Conjunto de reacciones químicas que tienen lugar en la célula
Funciones:- Obtener energía química del entorno,
almacenarla, para utilizarla luego en funciones celulares
- Convertir los nutrientes exógenos en unidades precursoras de los componentes macromoleculares de la célula bacteriana
- Formar y degradar moléculas necesarias para funciones celulares específicas, ejem movilidad y captación de nutrientes
El éxito evolutivo de las bacterias se debe en parte a su versatilidad metabólica.
Las bacterias tienden a ser versátil, a intercalar fácilmente los nutrientes y productos metabólicos terminales
Esto les permite desarrollar procesosmetabólicos con gran rapidez
Energía para el movimiento, transporte de nutrientes,etc
Catabolismo
Productos de desecho
Componentes celulares
Nutrientes
Anabolismo
Energía para el desarrollo
Fuente de energía
ANABOLISMO : Formación o síntesis de compuestos químicos (Biosíntesis)
CATABOLISMO : Degradación o descomposición de compuestos
METABOLISMO MICROBIANO
Conjunto de procesos mediante los cuales un microorganismo obtiene la energía y los nutrientes que necesita para crecer y realizar otras funciones.
GLUCOSA -6-FOSFATO FOSFOENOLPIRUVATO OXALACETATO Y ALFA-CETOGLUTARATO
ORIGINAN COMPUESTOS
INTERMEDIARIOS
Fosfatos de azúcaresPiruvatoAcetil-CoAAspartatoGlutamato, etc.
ORIGINAN PRODUCTOS TERMINALES
+
AminoácidosBasesPirimidinicasPolisacáridoslípidos
Moléculas complejas
Degradación Energía
Metabolitos intermedios
Síntesis Energía
Moléculas complejas
Toda ruta
metabólica
requiere
ATPATP Dona el grupo fosfato a diversos intermediarios
Se convierte:
Forma activa y
Enlaces ricos de energía
Utilizados en diversas vías - GTP (Guanina-trifosfato) - UTP (Uridina trifosfato)
- CTP (Citidina trifosfato)- Acetil CoA (Acetil coenzima A)- Ácido 1,3-difosfoglicérido- PEP (Ácido fosfoenolpirúvico )
METABOLITO PRECURSOR RUTA CATABÓLICA
Glucosa-6P ………………… Glicólisis Fructosa-6P……………….. Glicólisis Triosa-P ……………………. Glicólisis 3-P-Glicerato ……………… Glicólisis P-Enolpiruvato …………… Glicólisis Piruvato ……………….. Glicólisis
Acetil-CoA……………… Ciclo Krebs α-cetoglutarato ………… Ciclo Krebs Succinil-CoA ………….. Ciclo Krebs Oxalacetato …………… Ciclo Krebs
Ribosa-5-P ……………. Pentosas-P Eritrosa-4-P …………… Pentosas-P
OXIDACIÓN BIOLÓGICA Fermentación Respiración
FOTOSÍNTESIS
Compuestos orgánicos
La principal contribución es la producción de ATP que lo realiza por: Fosfolarilación a nivel del sustrato
Actúan como donador (oxidación) y aceptor (reducción) de electrones
Los microorganismos
que obtienen la energía por procesos FERMENTATIVOS son:
1.- ANAEROBICOS estrictos
2.- Facultativos .- Cambian su metabolismo para producir E cuando están en presencia de oxigeno
3.- Anaerobios aerotolerantes.- no modifica su metabolismo
Las fermentaciones
más comunes de la glucosa
fermentación alcohólica
Fermentación homoláctica.
Hongos y levaduras
Bacterias del ácido láctico
En las bacterias se encuentran las tres vías centrales del metabolismo intermediario de los hidratos de carbono:
Glucolítica o de Embden Meyerhof Parnas,
Pentosa fosfato o shunt de las pentosas y
Entner-Doudoroff.
La degrada la glucosa en tres etapas:
La primera es preparativa, con reacciones que no son de oxidación
reducción, sin liberación de energía y con formación de dos intermediarios de tres. En la segunda etapa, ocurren
reacciones de oxidación reducción con liberación de energía, formación de ATP por fosforilación a nivel del
substrato y producción de dos moléculas de piruvato. En la tercer
etapa, nuevamente ocurren reacciones de oxidación reducción y
se generan los productos finales de la fermentación, que varían según la
bacteria en cuestión.
BAJO RENDIMIENTO ENERGETICO (~28%)
La glucólisis, ruta metabólica común a todos los organismos
Fermentaciones microbianas:
F. HomolácticaF. HeterolácticaF. Acido mixtaF. Acido mixtaF. ButanodiólicaF. Butanodiólica
Embden-Meyerhof Parnas
Vía de las Pentosas
Puede funcionar al mismo tiempo que la Glicólisis o que la vía de Entner-Doudoroff
es una ruta multifuncional para la degradación de
hexosas, pentosas y otros hidratos de carbono para los fermentadores heterolácticos
es la principal fuente productora de energía,
aunque la mayoría de las bacterias usan esta vía como
fuente de dinucleótido de nicotinamida adenina fosfato
reducido (NADPH) y de pentosas para la síntesis de
nucleótidos.
solo se produce una molécula de ATP por molécula de glucosa
degradada
Vía de Entner-Doudoroff.
Desde GAL-3P hasta Piruvato es catalizado por enzimas comunes a la vía Glicolítica.
Pseudomonas Neisseria RhizobiumAgrobacterium
Muy pocos Gram(+)
es la ruta principal para la degradación de la glucosa en las bacterias aerobias
estrictas
solo se produce una molécula de ATP por molécula de glucosa
degradada.
Compuestos orgánicos (Organis.HETERÓTROFICOS)El rendimiento total de ATP por mol de sustrato respirado es de 38 ATP
Compuestos inorgánicos Dador de e-
(organis. LITÓTROFICO) REDUCEN e-
Aceptor final es el O molecular
Dador de eDador de e--
Aceptor final es el sulfatos, nitratos y carbonatos
Ocurre en presencia de oxígeno (Oxidación) Glucosa + O2 CO2 + H2 O + 38 ATP
PasosGlucólisisDecarboxilación oxidativaCiclo de KrebsTransporte de electrones
Productos tóxicos: O2- y H2 O2
Bacterias aerobias y anaerobias facultativas en aerobiosis
MAYOR RENDIMIENTO ENERGETICO (~45%)
38 ATP
Las enzimas como catalasa y la peroxidasa, degrada al peróxido de hidrogeno en oxígeno molecular y agua.
Estas enzimas están ausentes en las
bacterias anaerobias estrictas, siendo susceptible al oxígeno.
Respiración anaeróbica• Ocurre en ausencia de oxígeno• Aceptores finales de electrones: iones
inorgánicos
• Glucosa + S CO2 + SH2 + 34 ATPPasos
GlucólisisDecarboxilación oxidativaTransporte de electrones
No se liberan productos tóxicos
Bacterias anaerobias obligadas y anaerobias facultativas en anaerobiosis
M.O. AERÓBICOS
Último aceptor
OXIGÉNO
M.O. ANAERÓBICOS SULFATOS, NITRATOS Y
CARBONATOS
Catabolismo de C6, C5 y C4:
Ac. cítrico, malato, fumarato, succinato son catabolizados mediante enzimas del Krebs, con formación de ATP vía oxidativa.
Catabolismo de ácidos orgánicos:Catabolismo de ácidos orgánicos:
Voges proskauerAcetil-metil-carbinol +KOH –Alfa naftol
Glicerina
Ácido graso
Ácido graso
Ácido graso
Lípido
Glicerina
3 Ácidos grasos
Las proteínas son demasiado grandes para atravesar las membranas
Los microorganismos excretan proteasas que hidrolizan las proteínas exógenas a péptidos. Proteasas Peptidasas
Proteínas----- Péptidos-------Aminoácidos
Los esqueletos carbonados de los aminoácidos entran en el ciclo ATC para sufrir una mayor oxidación vía acetil CoA, ácido cetoglutárico, ácido succínico, ácido fumárico o ácido oxaloacético
Lípidos Polisacáridos Proteínas
Ac. grasos + glicerol Glucosa y otros azúcares Aminoácidos
Acetil-CoA
CoA
Krebs
CO2
Fosforilación oxidativa
ATP ADP
O2e-
Intermediarios de bajo peso
molecular
Unidades estructurales
Macromoléculas(Alto peso molecular)
Asociaciones supra -
moleculares
Organelas
Acetato,Malonato
Ácidos grasos,Glicerina
Lípidos
Fosfopiruvato, Malato
Azúcares sencillos
Poli - sacáridos
Cetoácidos
Aminoácidos
Proteínas
Ribosa carbamil fosfato
Mono -nucleóticos
Ácidos Nucléicos
Complejos enzimáticos, Ribosomas,
Sistemas contráctiles
Núcleo, mitocondria, cloroplasto, etc.
BIOCIDA Agente químico con
amplio espectro Inactiva m.o Son: Antisépticos Desinfectantes Preservativos
La acción depende:- Medio ambiente
externo- La naturaleza,
estructura, composición y condición
- Habilidad del M.o de degradar o inactivar
EL GERMICIDA: es un agente químico que mata los microorganismos pero no necesariamente elimina las esporas (ejemplo el bactericida, mata bacterias, el fungicida, mata hongos y el viricida mata los virus )
ESTERILIZACIÓN: procedimientos que conducen a la destrucción de todos los m.o presentes en un lugar o material (incluye esporas).
DESINFECCIÓN: procedimientos que consiguen una reducción del número microorganismos presentes, pero no necesariamente la destrucción total.
DESINFECTANTES: Agentes químicos, generalmente líquidos, usados para la desinfección, se usa en superficies inertes.
BACTERIOSTÁTICO: Propiedad por la cual un biocida puede inhibir la multiplicación bacteriana, que se reanuda una vez se remueve el agente.
SÉPTICO: presencia de M.o patógeno en el tejido vivo.
ANTISÉPTICO: biocida o producto que destruye o inhibe el crecimiento de M.o dentro, o en tejido vivo.
CONSERVACIÓN: prevención de la multiplicación de M.o en productos formulados, incluyendo farmacéuticos y alimentos.
QUIMIOTERÁPICOS: son compuestos químicos con actividad microbicida o microbiostática, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir su administración a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.
ANTIBIÓTICO: Compuesto orgánicos naturales o sintéticos que inhiben o destruyen selectivamente bacterias, por lo general a concentraciones bajas.
Físico: Fuentes de radiación de alta energía (Calor,Luz UV) que oxidan la pared proteica y prácticamente queman el microorganismo.
Biológicos: Sustancias creadas por organismos superiores para autodefensa, generalmente son de tipo proteíco y se denominan enzimas. Ejem: lisozima.
Químicos: Pueden ser a su vez, inorgánicos o de síntesis orgánicaEjemplo: Dióxido de cloro (ClO2), Isotiazolinas, cloraminas, bromuros de alquilo, cloruros de alquilo o arilo, etc.
Los agentes físicos más empleados para destruir oeliminar microorganismos no deseables son el
calor, laradiación y agentes mecánicos como filtraciónCALOR:
SecoHúmedo
RADIACIONES:Luz UltravioletaRadiaciones Ionizantes
AGENTES MECÁNICOS: Filtración
Ultrasonidos
La temperatura mínima. se puede explicar en función de un descenso de la fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos de transporte de
nutrientes y el gradiente de protones. Por encima de la temperatura mínima la tasa de crecimiento va aumentando proporcionalmente hasta alcanzar la
temperatura óptima, debido a que las reacciones metabólicas catalizadas por enzimas se van aproximando a su óptimo. En dicha temperatura óptima las
enzimas y reacciones se dan a su máxima tasa posible A partir de la temperatura óptima, si seguimos subiendo la temperatura se produce un descenso
acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar la temperatura máxima, refleja desnaturalización e inactivación de proteínas enzimáticas esenciales,
colapsamiento de la membrana citoplásmica y a veces lisis térmica de la bacteria
FLAMEADO
AIRE CALIENTE (Hornos): Esterilizante 160ºC/ 2 horas
INCINERACIÓN
Pasteurización: 63ºC/30 min Ebullición. VAPOR DE AGUA:
Vapor Fluente. Vapor a presión superior a la Atmosférica:
AUTOCLAVE
121ºC, 15 lb y 10-15 121ºC, 15 lb y 10-15 min.min.
LA ACCIÓN LETAL DEL CALOR ES UNA RELACIÓN DE TIEMPO Y TEMPERATURA
La mayoría de bacterias, levaduras y hongos
80oC , 5-10 min
Mycobacterium tuberculosis 58oC , 30 min
Mycobacterium tuberculosis 59oC , 20 min
Mycobacterium tuberculosis 65oC , 2 min
Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis
60oC , 60 min
La mayoría de esporas patógenas 100oC , pocos min
RADIACIONES
Radiaciones ionizantes:
•Son los rayos X y Gamma, y los radiosótopos Co60 y Cs137
•Efectos son letales y mutagénicos.•Muy penetrantes
Radiaciones no ionizantes. •Son los rayos UV•Cambios en el ARN o en proteínas•Poco penetrantes
Control de microorganismos con radiacionesUna lámpara ultravioleta se utiliza para descontaminar la superficie del interior de una cabina de seguridad biológica.
RADIACIONESRADIACIONES
ULTRASONIDOS
- Vibraciones de alta frecuencia (poca penetración).
- Desnaturalizar las proteínas y componentes bacterianos.
- Se emplean en un baño de agua para limpieza de material
FILTRACION
- Para materiales termolábiles y sensibles a radiaciones.
- Tamaño del poro: 0.005-1 µ.
- Los virus no son retenidos
Filtros de membrana
Filtros HEPA
MÉTODOS MECÁNICOS
Esterilización por filtración
Objetos críticos: Contacto con sistema vascular o tejidos
estériles. (instrumentos quirúrgicos, agujas, catéteres, prótesis,...). ESTERILIZACION
Objetos semicríticos: Contacto con mucosas o con piel no
intacta. (sondas urinarias, endoscopios, ...). DESINFECCIÓN DE ALTO
NIVEL O ESTERILIZACIÓN
Objetos no críticos: Contacto con piel intacta (termómetros,
manómetros, fonendoscopios, suelos, paredes, ...). LIMPIEZA O
DESINFECCIÓN DE NIVEL INTERMEDIO O BAJO.
Clasificación de los objetos según el riesgo de infección que comporta su
utilización
PRIONES (EJC)
ESPORAS BACTERIANAS (Bacillus spp., Clostridium spp.)
MICOBACTERIAS (Mycobacterium tuberculosis)
VIRUS PEQUEÑOS SIN ENVOLTURA (Poliovirus)
BACTERIAS GRAMNEGATIVAS (Pseudomonas spp.)
HONGOS (Aspergillus spp., Candida spp.)
VIRUS MEDIANOS SIN ENVOLTURA (Adenovirus)
BACTERIAS GRAMPOSITIVAS (Staphylococcus spp.)
VIRUS CON ENVOLTURA (HIV, VHB)
Relación decreciente de resistencia
Mecanismo de acción de los desinfectantes
Desnaturalización y coagulación de proteínas (Ej. Alcoholes)
Oxidación de distintos componentes (Ej. Cl, óxido de etileno)
Alteración de permeabilidad de la membrana (Ej. Agentes surfactantes, alcoholes)
Combinación radicales de proteínas y ácidos nucleicos, dando reacciones de sustitución (Ej. aldehidos, óxido de etileno)
Naturaleza de los microorganismos presentes: Potencia de los desinfectantes
1. Alto nivel: Inactivan todas las bacterias vegetativas, incluyendo a micobacterias, hongos, virus, pero no necesariamente esporas bacterianas (Ej. Aldehídos, derivados del Cl)
2. Nivel intermedio: No eliminan esporas bacterianas, sí bacterias vegetativas, hongos y virus, pero con dificultad virus desnudos de pequeño tamaño ( Ej. Alcoholes, fenoles)
3. Bajo nivel: no destruyen a todos los hongos, ni a los virus desnudos de pequeño tamaño (Ej. Derivados del amonio cuaternario)
Condiciones físico-químicas para una buena eficacia de la sustancia
1. Tiempo de exposición
2. Temperatura
3. Concentración
4. pH
DESINFECTANTES MÁS USADOS:
1. Alcoholes
2. Agentes oxidantes (Cloro, Yodo, Ac. Paracético,
H2O2)
3. Agentes surfactantes
4. Derivados fenólicos
5. Aldehídos
6. Oxido de etileno
Factores a considerar en la selección
del método de desinfección
•Microorganismos:- Grado de muerte microbiana requerido
- Naturaleza microbiana (virus, bacterias...)
•Instrumental- Uso al que se destine
- Naturaleza del objeto a tratar
•Costo del procedimiento
•Facilidad/accesibilidad de la técnica
•Impacto medioambiental
Espectro de acción de los desinfectantes:
Condiciones de un buen biocida
Debe tener un amplio espectro de actividad Efectivo a baja concentración Efectivo en un amplio rango de pH. Solubles en agua. Compatible con otros productos químicas en el medio. Alta persistencia: Debe ser efectivo a través del tiempo. Fácil de neutralizar: Debe poseer mecanismos
desactivadores para su posterior neutralización. Baja toxicidad humana. El coeficiente fenólico, es un valor experimental que se
realiza a las sustancias que tienen propiedades biocida, tomando como referencia la capacidad biocida del fenol.
Jawers 1994 Microbiología Médica.
V.Ausena Ruiz 1996 Introducción a las enfermedades infecciosas.
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