molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a gmo ... · genetika gmo szimpózium 2008,...
Post on 02-May-2019
230 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Molekuláris biológiai eljárások alkalmazása a GMO
Dr. Dallmann Klára
analitikában és az élelmiszerbiztonság területén
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
A molekuláris biológia célja
az élőlények és sejtek működésének
molekuláris szintű tanulmányozása.
Ezt segíti a
genetika
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
genetika
biokémia
sejtbiológia
módszerei és eredményei.
• a fehérjék kimutatására és mérésére szolgáló
ELISA
Számos módszert fejlesztettek ki, ezek közé
tartozik:
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
ELISA technika
• sejt örökítő anyagának, a DNS-nek a vizsgálatára
alkalmas PCR technika
ELISA teszt
Molekuláris biológiai eljárás a fehérjék kimutatására
DNS
Kimutatás alapja: a sejtekben lévő DNS által kódolt genetikai információ alapján képződött fehérje és specifikus antitest reakciója (ELISA teszt)
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
sejt
fehérje
másodlagos antitest+enzim
+ szubsztrát
Enzim-immun analitikai eljárásELISA ( Enzyme- Linked ImmunoSorbent Assay ) teszt
+ szubsztrát
szinreakció(látható, vagy
műszeresen mérhető)minta
Izolált fehérje
Antitest
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Előny: gyors egyszerű, nem igényel komoly laboratóriumi hátteret
DE
ELISA teszt
Hátrány!A fehérje hőérzékeny, ez befolyásoljakimutatás érzékenységét és megbízhatóságát
(Reveal)
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
DE
PCR reakció
Molekuláris biológiai eljárás specifikus DNS szekvenciák kimutatására
DNS
fehérje
Lehetővé teszi a DNS különböző
szakaszainak felsokszorozását
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
sejt
PCR reakció
ciklikusan ismételt enzimreakció, specifikus primerek jelenlétében
Molekuláris biológiai eljárás a DNS kimutatására
Fluoreszcens próba
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Real-Time PCR
PCR reakció termékének kimutatása
Agaróz gélen Fluoreszcens jel megjelenése alapján
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Real Time PCR
• rendkívül érzékeny
•DNS stabil, a fehérjénél kevésbé hőérzékeny
•alkalmas mennyiségi meghatározásra is
PCR reakció előnye
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Mikor szükséges molekuláris módszerek alkalmazása a GMO analitikában és az élelmiszerbiztonság területén?
• Törvényi szabályozás - jelölési kötelezettség
A fogyasztó alapvető joga, hogy tudja a megvásárolt termék miből készült, illetve milyen tulajdonságokkal rendelkezik.
Választás lehetősége.
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
• Törvényi szabályozás - jelölési kötelezettség
• Más ( vizuális, fizikai, kémiai, biológiai) vizsgálati
módszerek nem alkalmasak
EU és hazai törvényhozás szabályozta a GMO- k kereskedelmi forgalomba kerülését és jelölését
Magyarország
§ GMO – törvényi szabályozás
EU rendelet
1829/2003
1830/2003
Magyarország
XXVII.1998. Géntechnológiai tevékenységet szabályozó törvény
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Genetikailag módosított szervezet (GMO): olyan szervezet, amelyben a génállományt molekuláris genetikai eszközökkel változtatták meg
pl. idegen DNS-t építettek be a növény
Növényi DNS
pl. idegen DNS-t építettek be a növény eredeti DNS-ébe
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
GM növény felépítésének vázlata
Beépített DNS
Növényi DNS
növényi DNSpromóter terminátor
Növényvédőszer /rovarrezisztencia
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Laboratóriumi minta
GMO tartalom laboratóriumi vizsgálatának általános menete
DNS izolálás Fehérje izolálás
ELISA testKvalitativ PCR ELISA testKvalitativ PCR
Real-time PCR
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
negatív pozitív
GM növény azonosítása
GMO vizsgálat menete
•Minta homogenizálása
•Kvalitatív GMO teszt
nem engedélyezett engedélyezett
mennyiségi meghatározás
>0.9% <0.9%GMO szimpózium 2008, Gödöllő
A fogyasztót segíti a jelölés, amely tájékoztat az élelmiszer
Élelmiszerek jelölése - Törvényi szabályozás§
fajtájáról,azonosságáról,
Törvények az élelmiszerlánc szabályozásában
azonosságáról,jellemzőiről,
összetételéről,mennyiségéről,
eltarthatóságáról,származásáról vagy eredetéről
előállítási vagy termelési módjáról
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Amennyiben nem azok az összetevők szerepelnek atermékben, melyeket a vásárló a feltüntetett adatok
alapján elvár, ekkor beszélhetünk élelmiszerhamisításról.
Élelmiszerhamisítás
?Élelmiszerhamisítás kimutatása ?Élelmiszerhamisítás kimutatása
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Élelmiszerek összetételének kimutatása
PCR módszerrel különböző állat és növényfajok azonosítása
lehetséges specifikus DNS szekvencia alapján, feldolgozott
élelmiszerekből is.
Pl.szarvasmarha, sertés, strucc, birkaPl. kukorica, szója, burgonya, cukorrépa,
sárgabarack
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Jövő molekuláris biológiai eljárása: chip technológia
•chip technológia- technikai miniatürizálás eredménye,
Előny:egyszerre több DNS szekvencia azonosítása lehetséges egyetlen mintából
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Összefoglalás
A molekuláris biológiai eljárások felhasználhatók:
•Beszállítók ellenőrzésében
•Keresztszennyeződések kimutatására•Keresztszennyeződések kimutatására
•Etikus piaci magatartás betartására
GMO szimpózium 2008, Gödöllő
Köszönöm a megtisztelő Köszönöm a megtisztelő figyelmet
top related