mr civel – abm1 / microbiologie le laboratoire de microbiologie
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Mr Civel – ABM1 / Microbiologie
Le laboratoire de
Microbiologie
Les établissements d’enseignement entrent dans le champ d’application du Code du travail.
Évaluation des risques par le classement des agents biologiques en 4 groupes en fonction du risque infectieux .
Etablissement de mesures adaptées pour la protection collective et individuelle : les mesures vont conditionner le degré de confinement, c’est-à-
dire la conception du laboratoire de bactériologie, et vont influencer l’organisation du poste de travail.
Etablissement de procédures adaptées : elles constituent les consignes de sécurité.
Aspects réglementaires
Les agents biologiques et leur classement
Classe de
risque
Risque pour le
manipulateur
Risque pour la population
Pouvoir pathogène reconnu
Traitement et/ou moyen efficace de prévention
Exemples d’agents
1 Faible Aucun 0 Inutile
- Saccharomyces cerevisiae (levure de boulangerie)- Bactéries lactiques (Yaourt)- Penicillium roqueforti- Escherichia coli K12
2 Modéré Faible + +
- Escherichia coli UPEC- Staphylococcus aureus- Listeria monocytogenes- Cytomégalovirus
3 Élevé Faible ++/+++ +- Mycobacterium tuberculosis- VIH, VHB, Prions- Yersinia pestis
4 Élevé Élevé +++ 0
- Agents des fièvres hémorragiques : virus Ebola, virus de Lassa
- Virus de la variole
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT
NIVEAUX DE CONFINEMENT
2 3 4
A Conception du laboratoire
1. Signalisation du laboratoire (pictogramme " danger biologique ").
Oui Oui Oui
2. Laboratoire séparé des autres locaux au moins par une porte. Oui Oui Oui
3. Accès au laboratoire via un sas. * (oui si pression négative)
Non Optionnel * Oui
4. Accès réglementé et verrouillable. - Accès possible pour les seuls travailleurs autorisés.
Oui Oui Oui par sas
5. Possibilité de fermer hermétiquement le lieu de travail pour permettre la désinfection.
Optionnel Oui Oui
6. Filtration de l’air extrait du lieu de travail (filtre HEPA) avec évacuation de l'air à l'extérieur.
Non Oui Oui
7. Filtration de l'air entrant dans le lieu de travail. Non Optionnel Oui
8. Présence d'une fenêtre d'observation ou d'un système équivalent permettant de voir les occupants.
Optionnel Oui Oui
9. Moyen de communication avec l'extérieur. Non Optionnel Oui
10. Maintien d'une pression négative dans le laboratoire par rapport aux zones voisines.
Non Oui (1) Oui
11. Système d'alarme pour détecter tout changement inacceptable de la pression de l'air.
Non Oui Oui
12 Approvisionnement en énergie électrique de secours. Non Optionnel Oui
13. Système de ventilation de secours. Non Non OuiB Aménagements internes
Conception et équipement du laboratoire de microbiologie(Mesures de confinement)
* Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas
Mesures de confinement des laboratoires
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT
NIVEAUX DE CONFINEMENT
2 3 4
A Conception du laboratoire
B Aménagements internes1. Poste de sécurité microbiologique. Oui (2) Oui (2) Oui, type
III
2. Vêtements de protection. Oui Oui adaptés Oui adaptés
3. Aménagements pour le rangement des vêtements de protection dans le laboratoire ou l'unité.
Oui Oui Oui
4. Douche pour la décontamination des travailleurs. Non Optionnel Oui
5. Lavage des mains : lavabos dont les robinets peuvent être manœuvrés sans utiliser les mains.
Oui (3) Oui Oui
6. Résistance des surfaces à l'eau, nettoyage aisé sans endroits inaccessibles au nettoyage.
Oui (sols) Oui Oui
7. Surfaces des paillasses imperméables à l'eau, résistantes aux acides, alcalis, solvants et désinfectants.
Oui Oui Oui
8. Lutte efficace contre les vecteurs, par exemple rongeurs et insectes.
Oui Oui Oui
9. Présence d'un autoclave. * facilement accessible
Oui* Oui* Oui dans le labo
10. Présence dans le laboratoire d'un équipement de base spécifique (matériel marqué)
Non Oui Oui
C Pratiques opératoires
Conception et équipement du laboratoire de microbiologie(Mesures de confinement)
* Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas
Mesures de confinement des laboratoires
MESURES DE CONFINEMENT A METTRE EN ŒUVRE DANS LES LABORATOIRES DE RECHERCHE, DE DÉVELOPPEMENT ET D'ENSEIGNEMENT
NIVEAUX DE CONFINEMENT
2 3 4
A Conception du laboratoire
B Aménagements internes
C Pratiques opératoires
1. Stockage des agents biologiques en lieu sûr. Oui Oui Oui lieu protégé
2. Manipulation des matières infectées et de tout animal contaminé dans un système approprié de confinement (5)
Optionnel Oui Oui
3. Utilisation de conteneurs spécifiques pour aiguilles contaminées, objets piquants ou tranchants souillés.
Oui Oui Oui
4. Minimisation de la formation d'aérosols. Oui Oui Oui
5. Contrôle de la dissémination des aérosols formés. Minimiser Empêcher Empêcher
6. Gants Optionnel Oui Oui
7. Inactivation du matériel contaminé et des déchets. Oui Oui Oui
8. Sortie du laboratoire après décontamination des équipements susceptibles d'être contaminés (centrifugeuses. PSM...).
Oui Oui Oui
9. Inactivation des effluents des éviers et des douches. Non Oui Oui
* Oui : exigence. Non : pas d’exigence. Optionnel : doit être décidé, au cas par cas
Conception et équipement du laboratoire de microbiologie(Mesures de confinement)
Mesures de confinement des laboratoires
PictogrammesDe
Sécurité
Risques biologiques
PictogrammesDe
Sécurité
Exemple de phrases de risque :
R1 Explosif à l'état sec.R2 Risque d'explosion par le choc, la friction, le feu ou d'autres sources d'ignition.R5 Danger d'explosion sous l'action de la chaleur.R10 Inflammable. R12 Extrêmement inflammable.R68 Possibilité d'effets irréversibles
R39/26/27/28 Très toxique : danger d'effets irréversibles très graves par inhalation, par contact avec la peau et par ingestion. …
Exemple de phrases de sécurité :
S1 Conserver sous clé. S2 Conserver hors de la portée des enfantsS3 Conserver dans un endroit fraisS4 Conserver à l'écart de tout local d'habitationS8 Conserver le récipient à l'abri de l'humidité. S9 Conserver le récipient dans un endroit bien ventiléS64 En cas d'ingestion, rincer la bouche avec de l'eau ( seulement si la personne est consciente ).
S36/39 Porter un vêtement de protection approprié et un appareil de protection des yeux / du visage. …
Les risques au laboratoire de Microbiologie
Matériel utilisé Nature du risque Geste sécurité - Prévention
Le bec électrique BRULURESPort d'une blouse non inflammable. Cheveux courts ou attachés. Vigilance. Ne pas approcher un produit inflammable
Verres (lame, pipette) COUPURES Port de gants. Vigilance.
Pipettes Pasteur :- stériles
- contaminées
PIQURES
Les poser sur leur support.Ne pas laisser de fragments sur la paillasse.
Les jeter immédiatement après usage dans le bac de Javel.
Matériel électrique ELECTROCUTIONSols et paillasses secs.Ne pas toucher une prise ou une fiche d'appareil avec les mains mouillées. Signaler au professeur tout appareil abîmé (fil dénudé).
Produits chimiques
INHALATIONMaintenir les flacons fermés.Ne pas respirer au-dessus d'un flacon ouvert.
INGESTIONNe jamais prélever à la bouche.Utiliser une poire aspirante ou une pipette automatique.
PROJECTIONS Utiliser une blouse, des gants, des lunettes et travailler sous hotte.
COMBUSTIONNe pas manipuler les produits inflammables à proximité d'une flamme ou d'une source d'étincelles ou de chaleur.
Micro-organismes
INHALATIONPort de masque. Manipulation de souches dangereuses sous la hotte.
INGESTIONUtilisation de poires aspirantes, de système d'aspiration Ne pas porter les mains à la bouche.
PROJECTIONSEviter les courants d'air.Flamber l'oese progressivement (boucle en dernier !!!)Ne pas porter de lentilles.
Les règles fondamentales de la manipulation microbiologique
Ne pas contaminer les réactifs et milieux de cultureSinon risque d'erreur
technique
Ne pas contaminer l’environnement ou les personnes
Sinon risque biologique
- Le matériel de laboratoire
- L’organisation du poste microbiologique
- La manipulation aseptique (entrée du laboratoire, en cours de manipulation,
sortie du laboratoire)
1. Pipette Pasteur
5. Verre à pied
2. Anse ou oese
3. Fil droit
4. Pince
Le matériel de laboratoire
Le matériel de laboratoire
7. Bac à pipettes*
9. Portoirs
8. Bec Hoffmann (électrique)
Le matériel de laboratoire
Le matériel de laboratoire
12. Colorants Violet de Gentiane, Lugol, Fuschine et décolorant (alcool)
13. Porte lame (et bac à coloration, ici remplacé par l’évier)
11. Lamelle
et lame
10. Pissette d’eau (ou autre)
4.
Le matériel de laboratoire
Le matériel de laboratoire
8. revolver
9. Vis Macrométrique
10. Vis Micrométrique
1. Objectifs
2. Objectifs
7. potence
3. Porte Lame
4. Platine
11. Source lumineuse
12. Pied
Le microscope optique
5. Condenseur6. Diaphragme
Le matériel de laboratoire
Le microscope optique
Housse
Papier doux sous l’objectif X100
Microscope débranché
Utilisation du microscope optique, aux laboratoires du lycée Paul Eluard de Saint-Denis
L’organisation du poste de travail
A droite : Pot à instruments
propres :
.……..................................
……..…………............
..……………………
……………..………………..
A gauche : Milieux et tubes de culture ………………..… de la source de chaleur !
Bac à colorantsPosition du technicien manipulant dans la zone stérile qui doit être ……………. et disposée au milieu de la paillasse
Microscope, stylos et documents ………. de la zone de manipulationFils électriques au ……….
……. de la paillasse
A droite : Bac à Javel pour pipettes contaminées dépo-sées ……………..……….…..
Bec Hoffmann
Manchon électrique
L’organisation du poste de travail
Procédures au laboratoire de microbiologie
En entrant : Tenue appropriés et organiser son poste
- Pendant la manipulation :Attitude réfléchie et comportement adapté + utilisation de
matériel stérile
-En fin de manipulation :Rangement et nettoyage + désinfection
La manipulation aseptique
Procédure de nettoyage de la paillasse
Gestion des déchets
Procédure de nettoyage des mains
Conduite à tenir en cas d’accident
Mise en place de Procédures
Procédures au laboratoire de microbiologie
Nettoyage de la paillasse
1. Nettoyage-désinfection avec de l’anios, en fin de manipulation (adaptation de la procédure)
2. En cas de désinfection après une contamination :Délimitation
Temps d’action Essuyage
Gestion des déchets
Procédures au laboratoire de microbiologie
Déchets non piquants-coupants :
Tubes àHémolyse en
verre
Boites de pétriAmpoules APIPapiers contaminésEcouvillonsPlaques en carton de sérogroupageParafilmGants latexSpatules d’étirementTubes eppendorfUnopettes recapuchonnéesTubes plastiquesTubes de sang
Déchets piquants-coupants :
Pipettes pasteurPipettes plastiques
Cure-dents Agitateur
Tubes hématocriteCrochets de verre
Débris de verreCônes des
micropipettes
Bac à pipette Bac à lames
Poubelles de salle destinées à l’autoclavage
D’après la procédure M002, JN. Joffin
Grands tubes de culture
LamesLamelles
Procédures au laboratoire de microbiologie
Lavage des Mains
2 - Recueillir une dose de savon liquide 3 - Se savonner 30 secondes
environ en insistant sur les espaces interdigitaux, le dos des mains et les poignets
1 - Après avoir retroussé les manches, mouiller les mains
6 - Fermer le robinet avec l'essuie-mains qui est éliminé dans une poubelle ouverte ou à commande à pédale
5 - Essuyer les mains avec un essuie-mains jetable
4 - Rincer abondamment
Le laboratoire de Microbiologie
Promotion 2009
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