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NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーアッセンブリー

Gibson Assembly のアップグレード製品

DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！

NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーは DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすことができるシステムです。末端に 15 塩基の相同配列がある DNA 断片とマスターミックスを混合し、15 - 60 分間インキュベーションするだけの 1 ステップ反応で複数の DNA 断片をアッセンブルすることができます。従来品の Gibson Assembly と比較してアッセンブル効率と正確性が向上しているので、長鎖 DNA、微量 DNA、複数 DNA 断片をより正確かつ高効率でアッセンブルすることができます。

特長 Gibsonをアップグレード

• わずか 15 - 60 分間のインキュベーションで終了

• 5' / 3' 末端のミスマッチ配列を除去してアッセンブル

• PCR クローニングに最適（3'-A / 平滑末端産物に対応）

• 6 本以上の複数 DNA 断片の一括アッセンブル

• 一本鎖オリゴ DNA と二本鎖 DNA をアッセンブル

• 数百 kb の長鎖 DNA 合成

• Gibson Assembly のアップグレード製品

• より正確かつ高効率で DNA をアッセンブル

• より微量の DNA（fmol）をアッセンブル

• 5' 末端だけでなく 3' 末端のミスマッチ配列を除去してアッセンブル

NEW

500

450

400

350

300

250

200

150

100

50

02-Fragment Assembly 6-Fragment Assembly

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix

Gibson Assembly Master Mix

Num

ber o

f Col

onie

s

7000

6000

5000

4000

3000

2000

1000

0

Num

ber o

f Col

onie

s

Length in overlap (bp)Amount used (fmol)

1540

1540

2013

2013

2513

2513

3013

3013

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix

Gibson Assembly Master Mix

NEBuilder アッセンブリーを使用すれば、Gibson より正確かつ高効率で 2 - 6 本の DNA 断片を一括アッセンブルすることができる。

共通配列を長く設定することにより、4 本の微量 DNA 断片（mol）を Gibson アッセンブリーより正確かつ高効率で一括アッセンブルすることができる。

6 本の DNA 断片を一括アッセンブル

微量 DNA をアッセンブル

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix• 2X マスターミックス、コントロール用 DNA が含まれています。

NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit• 2X マスターミックス、NEB 5-alpha コンピテントセル、SOC 培地、コントロール用 DNA が含まれています。

製品名 製品番号 容量 希望小売価格

NEBuilder HiFi DNA Assembly Cloning Kit E5520S 10 reactions ¥ 21,600

製品名 製品番号 容量 希望小売価格

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix

E2621S 10 reactions ¥ 18,000

E2621L 50 reactions ¥ 72,000

E2621X 250 reactions ¥ 288,000

A 実験手順

1. 15 - 20 bp の相同配列を含む DNA 断片とマスターミックスを混合

2. 50 ℃ で 15 - 60 分間インキュベートしてアッセンブル

3. 必要に応じて産物を大腸菌に形質転換

B 原理

1. エキソヌクレアーゼが 3' オーバーハングを産生

2. 1本鎖の相同配列同士がアニーリング （3' 末端のミスマッチ配列はエキソヌクレアーゼが除去）

3. ポリメラーゼが 3' 方向に DNA を伸長してギャップを埋める

4. DNA リガーゼがニックをシール

NEBuilder HiFi DNA アッセンブリーNEW

実験手順

Gibson Assembly より正確かつ高効率

DNA 断片を 1 ステップ反応で簡単に繋ぎ合わすシステムです！

NEBuilder HiFi Workfl ow

A

Add fragments to NEBuilder HiFiDNA Assembly

Master Mix.

dsDNA fragments with overlapping ends.

5´3´

5´ Exonuclease chews back 5´ ends

3´5´

3´ 5´5´ 3´

Annealing

DNA polymerase extends 3´ ends

DNA ligase seals nicks

3´5´

5´3´

3´5´

5´3´

B

Fully Assembled DNA

A + B

Incubate at 50°C for 15–60 minutes.

NEBuilder HiFi DNA Assembly

A

B

プライマーの設計にはオンラインツールが便利です！

ご質問は弊社テクニカルサポート（Tel：0120-963-650、E-mail：tech.jp@neb.com）までお問い合わせください。

ニュー・イングランド・バイオラボ・ジャパン株式会社

〒１３０-００２２東京都墨田区江東橋２-２-３倉持ビル第２カスタマーサービス電話：03-5669-6193　　FAX：03-5669-6194テクニカルサポート電話：0120-963-650　　FAX：03-5669-6194Email: tech.jp@neb.com　　Web-site: www.nebj.jp