p4-penetapan kadar protein secara biuret

PRAKTIKUM FARMASI BIOKIMIA

P 2PENETAPAN KADAR PROTEIN

SECARA BIURET

TUJUAN

Mahasiswa dapat menetapkan kadar protein dengan metode biuret

DASAR TEORI

Penentuan kadar protein secara Biuret berdasarkan atas pengukuran serapan cahaya oleh ikatan kompleks yang berwarna ungu. Ini terjadi apabila protein bereaksi dengan tembaga dalam lingkungan alkali.

Pelajari . . .

Protein…?Memahami mekanisme reaksi….?Metode analisis kolorimetri…?Spektrofotometri visibel…?

mekanismenya?Manfaat menetapkan kadar protein

dalam dunia medis……?

ALAT & BAHANAlat :o Tabung Reaksio PipetTteteso Spuit Injeksi

1ml&5mlo Rak Tabung Reaksio Gelas Ukur

Bahan:o Lar. Standar

Proteino Pereaksi Biureto Albumin(Putih

Telur)o NaOH 3 %o Aquadest

CARA KERJA• Reagen Biuret

Larutan 1,5 gr CuSO4 5H2O dalam 500ml air

Larutan 1,5 gr CuSO4 5H2O dalam 500ml air

+ 300ml NaOH 10% , kocok+ 300ml NaOH 10% , kocok

Ad air sampai TandaAd air sampai Tanda

Lar. Standar Protein

Timbang albumin murni 1 gramTimbang albumin murni 1 gram

Larutkan dengan air ad 100mlLarutkan dengan air ad 100ml

+ beberapa tetes NaOH 3% untuk mempermudah melarutkan+ beberapa tetes NaOH 3% untuk mempermudah melarutkan

Uji Kadar

Ambil Lar.Standar 0,1;0,3;0,4;0,5;0,7 ml + Aquadest ad 1ml

Ambil Lar.Standar 0,1;0,3;0,4;0,5;0,7 ml + Aquadest ad 1ml

+ Reagen Biuret 4ml , vortex+ Reagen Biuret 4ml , vortex

Biarkan 30 menit dan ukur serapannya pada Panjang Gelombang 540nmBiarkan 30 menit dan ukur serapannya pada Panjang Gelombang 540nm

• Sampel

• Blanko

1 ml sampel + 4ml Reagen Biuret , Vortex

Diamkan 30 menit, Baca serapan pada panjang gelombang 540nm

1ml Aquadest + 4ml Reagen Biuret , vortex dan diamkan 30 menit

Ukur serapan pada panjang gelombang 540 nm

PERHITUNGAN

y = bx+ay = absorbansi x = Kadar

• Perhitungan kadarx = y – a x f.pengenceran

b