plagiat merupakan tindakan tidak terpuji fileiv halaman persembahan “karena masa depan sunguh ada,...
Post on 31-Jul-2019
219 Views
Preview:
TRANSCRIPT
i
UJI ANGKA KAPANG/KHAMIR (AKK), ANGKA LEMPENG TOTAL
(ALT), DAN IDENTIFIKASI Escherichia coli DALAM JAMU CEKOK
DARI PENJUAL JAMU RACIK “X” DI YOGYAKARTA
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm)
Program Studi Farmasi
Diajukan oleh :
Ribka Alvianita Susetyo
NIM : 108114105
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
HALAMAN PERSEMBAHAN
“Karena masa depan sunguh ada, dan harapanmu tidak akan hilang”
Amsal 23:18
“Segala Tulisan yang diilhamkan Allah memang bermanfaat untuk mengajar,
untuk menyatakan kesalahan, untuk memperbaiki kelakuan dan untuk mendidik
orang dalamkebenaran”
2 Timotius 3:16
Dengan penuh ucapan syukur,
Tabita Ribka Alvianita Susetyo
Saya persembahkan karya ini untuk :
Tuhan Yesus Kristus atas kasih karuniaNya dan segalanya dalam hidup saya
Papa, Mama, Mas Fian dan seluruh keluarga atas cinta , kasih sayang serta
semangat
Sahabat-sahabat yang luar biasa
Dan semua orang yang Tuhan hadirkan dalam hidup saya
Terimakasih
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
PRAKATA
Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Tuhan Yang Maha Pengasih atas
berkat dan penyertaan-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan
judul “Uji Angka Kapang/Khamir (AKK), Angka Lempeng Total (ALT), dan
Identifikasi Escherichia coli dalam Jamu Cekok dari Penjual Jamu Racik “X” di
Yogyakarta” ini dengan baik. Skripsi ini disusun untuk memenuhi salah satu
syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi Fakultas Farmasi Universitas
Sanata Dharma Yogyakarta.
Penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari bantuan berbagai pihak,
baik secara langsung maupun secara tidak langsung. Oleh karena itu penulis
hendak mengucapkan terima kasih kepada :
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc.,Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Pembimbing skripsi ini
atas segala kesabaran untuk selalu membimbing, memberi motivasi, dan
memberi masukan kepada penulis dalam menyusun skripsi ini.
3. Bapak Prof. Dr. C.J. Soegihardjo, Apt. dan Ibu Damiana Sapta Candrasari,
M.Sc. selaku Dosen Penguji skripsi. Terimakasih atas bantuan dan
masukkan kepada penulis demi kemajuan skripsi ini.
4. Dr. Sri Hartati Yuliani, M.Si, Apt. selaku Kepala Penanggung Jawab
Laboratorium Fakultas Farmasi yang telah memberi izin dalam
penggunaan fasilitas laboratorium Mikrobiologi demi terselesaikannya
skripsi ini.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
5. Bapak Jumakir, Pak Sutiyono, dan Bu Septi selaku pembimbing selama
melakukan penelitian di Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta,
terimakasih atas bimbingan, ilmu, kesabaran, dan semangat yang selalu
dibagikan dalam proses pembuatan skripsi ini.
6. Rekan – rekan penelitian seperjuangan Arellia Oktaviori, Anastasia Ika,
Maria Dyah Kartika dan Theresia Nurida, untuk semangat kerjasama yang
selalu dibagikan dalam proses penyusunan skripsi.
7. Teman – teman FKK B 2010 Maria Malida Vernandes Sasadara, Brigitta
Lynda, Yudhytha Anggarhani, Angelia Rosari, Agriva Devaly, Evan
Gunawan, Stefanus Indra, Anggun Indah, Lukas Surya, Cornelia Melinda,
Juana Merianti, Desi Irwanta, Sherly Damima, Antonio Leonardo, terima
kasih untuk kebersamaan kita.
8. Teman-teman “Wisma Sri Widodo” Mbak Febrin, Mbak Tania, Ejho,
Dephik dan tak lupa Mas Teti atas bantuan, dukungan, semangat,
perhatian, tawa dan bersedia menjadi tempat curahan hati.
9. Bryan Wisnu Hernadi, terimakasih untuk dukungan semangat, doa,
moodbooster, yang selalu ada selama proses pembuatan skripsi ini.
10. Pihak-Pihak lain yang turut membantu penulis namun tidak dapat
disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa setiap manusia tidak ada yang sempurna. Oleh
karena itu, penulis mengharapkan adanya kritik, saran dan masukan demi
kemajuan di masa yang akan datang. Semoga tulisan ini dapat memiliki manfaat
sekecil apapun bagi perkembangan ilmu pengetahuan khususnya di bidang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
kefarmasian, serta semua pihak, baik mahasiswa, lingkungan akademis, maupun
masyarakat.
Yogyakarta,
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL...................................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................................ ii
HALAMAN PENGESAHAN........................................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN .................................................................................... iv
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH ..................................................................................................................... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................................... vi
PRAKATA ..................................................................................................................... vii
DAFTAR ISI .................................................................................................................. x
DAFTAR TABEL........................................................................................................... xiv
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... xv
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................. xvi
INTISARI ..................................................................................................................... xvii
ABSTRACT ..................................................................................................................... xviii
BAB I. PENDAHULUAN............................................................................................. 1
A. Latar Belakang ................................................................................................. 1
B. Rumusan Masalah............................................................................................ 5
C. Keaslian Penelitian........................................................................................... 6
D. Manfaat Penelitian ........................................................................................... 6
E. Tujuan Penelitian ............................................................................................. 7
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA............................................................................ 8
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
A. Obat Tradisional, Jamu dan Cairan Obat Dalam................................................ 8
B. Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB).................................... 10
C. Jamu Cekok ....................................................................................................... 11
D. Angka Kapang Khamir (AKK) .......................................................................... 14
E. Angka Lempeng Total (ALT)............................................................................. 16
F. Escherichia coli.................................................................................................. 18
G. Identifikasi Escherichia coli .............................................................................. 23
1. Uji fermentasi gula-gula................................................................................. 23
2. Uji Sulfur Indol Motility................................................................................. 24
3. Uji IMVIC...................................................................................................... 25
H. Keterangan Empiris............................................................................................ 27
BAB III. METODE PENELITIAN................................................................................ 28
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ......................................................................... 28
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional .................................................... 28
1. Variabel utama.............................................................................................. 28
2. Variabel pengacau ........................................................................................ 28
3. Definisi operasional..................................................................................... 29
C. Bahan Penelitian................................................................................................. 30
1. Bahan utama................................................................................................. 30
2. Bahan kimia ................................................................................................. 30
D. Alat Penelitian.................................................................................................... 30
E. Tata Cara Penelitian ........................................................................................... 31
1. Pemilihan sampel ......................................................................................... 31
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
2. Penanganan wadah/kemasan penyiapan sampel .......................................... 31
3. Tahap pra-pengkayaan ................................................................................. 31
4. Pengujian Angka Kapang Khamir ............................................................... 32
5. Uji Angka Lempeng Total ............................................................................ 34
6. Uji identifikasi Escherichia coli .................................................................. 40
7. Pengecatan Gram ......................................................................................... 42
8. Interpretasi hasil ........................................................................................... 43
F. Analisis Hasil ..................................................................................................... 43
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................................... 44
A. Pengambilan sampel........................................................................................... 44
B. Uji Angka Kapang Khamir (AKK) .................................................................... 45
C. Uji Angka Lempeng Total (ALT)....................................................................... 50
D. Uji Identifikasi Escherichia coli ........................................................................ 53
1. Uji pengkayaan dalam media Escherichia coli Broth................................ 53
2. Isolasi E.coli pada sampel jamu cekok dalam media Trypon Bile
X-Glucoronide............................................................................................ 55
3. Identifikasi dan konfirmasi keberadaan E.coli pada sampel
jamu cekok ................................................................................................. 56
a. Uji biokimia ........................................................................................... 57
b. Uji SIM .................................................................................................. 60
c. Uji IMVIC.............................................................................................. 62
1. Uji indol ........................................................................................... 63
2. Uji metil merah ................................................................................ 64
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
3. Uji Voges Proskaeur ......................................................................... 65
4. Uji sitrat............................................................................................ 67
d. Pengecatan Gram .................................................................................. 68
E. Uji MPN ............................................................................................................ 72
1. Uji pendugaan bakteri Coliform................................................................... 72
2. Uji penegasan bakteri Coliform ................................................................... 74
3. Uji konfirmasi Coliform fekal...................................................................... 75
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................................ 77
A. Kesimpulan ................................................................................................. 77
B. Saran .......................................................................................................... 77
Daftar Pustaka ................................................................................................................ 78
Lampiran ........................................................................................................................ 81
Biografi Penulis.............................................................................................................. 94
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR TABEL
Tabel I. Petunjuk penghitungan TPC (Total Plate Count)........................................ 38
Tabel II. Hasil uji IMVIC .......................................................................................... 43
Tabel III. Angka Kapang Khamir (AKK) Jamu cekok waktu 5 hari
inkubasi ....................................................................................................... 48
Tabel IV. Angka Kapang Khamir (AKK) dari ke-3 sampel jamu cekok .................... 49
Tabel V. Angka Lempeng Total (ALT) jamu cekok waktu inkubai 48 jam............... 52
Tabel VI. Angka Lempeng Total (ALT) dari ke-3 sampel jamu cekok ...................... 52
Tabel VII. Hasil Uji Identifikasi E.coli......................................................................... 71
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Uji dalam media Escherichia coli Broth................................................... 54
Gambar 2. Hasil Isolasi E.coli pada sampel jamu cekok dalam media
Trypton Bile X-Glucoronide (TBX) .......................................................... 56
Gambar 3. Hasil uji fermentasi gula-gula sampel jamu cekok ................................... 59
Gambar 4. Hasil uji sulfur sampel jamu cekok .......................................................... 61
Gambar 5. Hasil uji motilitas sampel jamu cekok pada media SIM .......................... 62
Gambar 6. Hasil uji indol sampel jamu cekok pada media SIM ................................ 64
Gambar 7. Hasil uji metil merah sampel jamu cekok ................................................ 65
Gambar 8. Hasil uji Voges Proskaeur sampel jamu cekok ........................................ 66
Gambar 9. Hasil uji sitrat sampel jamu cekok ............................................................ 68
Gambar 10. Hasil Pengecatan Gram biakan bakteri sampel jamu cekok ................... 70
Gambar 11. Hasil uji air pada media LTB yang digunakan untuk pembuatan
jamu cekok ............................................................................................... 73
Gambar 12. Hasil uji air pada media BGLB yang digunakan untuk
pembuatan jamu cekok ............................................................................. 74
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Surat Ijin Laboratorium ..................................................................... 82
Lampiran 2. Hasil uji MPN coliformdan coliform fekal ........................................ 83
Lampiran 3. Tabel MPN menurut formula Thomas ............................................... 84
Lampiran 4. Foto Penanganan Sampel................................................................... 87
Lampiran 5. Nilai ALT sampel jamu cekok inkubasi 24 jam................................. 87
Lampiran 6. Perhitungan dan nilai ALT jamu cekok inkubasi 48 jam................... 88
Lampiran 7. Perhitungan dan nilai AKK inkubasi 5 hari ....................................... 90
Lampiran 9. Foto ALT inkubasi 48 jam ................................................................. 92
Lamiran 10. Foto AKK inkubasi 5 hari.................................................................. 93
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
INTISARI
Jamu Cekok merupakan obat tradisional Indonesia yang banyakdikonsumsi oleh masyarakat. Jamu cekok memiliki khasiat menambah nafsumakan, dan kebanyakan dikonsumsi oleh anak-anak. Pembuatan jamu yangkurang memperhatikan sanitasi dan higienitas perlu diwaspadai adanya cemaranmikroba. Adanya cemaran mikroba ini memungkinkan timbulnya penyakitsehingga mengurangi keamanannya bila dikonsumsi oleh anak-anak..
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui Angka Kapang Khamir(AKK), Angka Lempeng Total (ALT), dan keberadaan bakteri patogenEscherichia coli pada sediaan jamu cekok yang dijual oleh salah satu penjualjamu racik jamu racik “X” di Kota Yogyakarta.
Penelitian ini merupakan penelitian non eksperimental dengan rancangandeskriptif komparatif. Dilakukan replikasi sebanyak tiga kali dan dilakukan ujiAKK, ALT, dan identifikasi Escherichia coli.
Hasil penelitian menunjukkan jumlah AKK dalam sampel jamu cekokadalah 2,5 x 104 – 10,0 x 104, Angka Lempeng Total 1,6 x 107 – 2,7 x 107sertapositif mengandung bakteri E.coli.
Kata kunci: Jamu Cekok, AKK, ALT, Escherichia coli
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xviii
ABSTRACT
Jamu cekok is an Indonesian traditional medicine and has beenconsuming by Indonesian public especially to increase appetite and it is mostlyconsumed by children. The manufacture processing that is less attention ofhygiene and sanitation may increases possibility of microorganism contaminating.Microorganism contaminating may increases diseases and reduce the safety whenit is consumed by children.
The research’s purpose was to provide information about total platecount, the number of mold/yeast, and the presence of Escherichia coli in jamucekok from “X” seller in Yogyakarta.
This research is non-experimental research with descriptive explorativedesign. Sample replication was counted three times and determination of totalplate count, the number of mold/yeast, and identification of E.coli were done.
The research’s result of jamu cekok were show that ranged of total platecount was between 1,6 x 107 – 2,7 x 107, the number of mold/yeast was beetwen2,5 x 104 – 10,0 x 104 and E.coli contamination was positive.
Keywords : Jamu cekok, Number of Mold/Yeast, Total Plate Count, Escherichiacoli
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang Penelitian
Perkembangan obat tradisional di jaman modern kini meningkat karena
banyaknya masyarakat yang lebih memilih menggunakan obat tradisional
daripada obat sintetik. Kecenderungan masyarakat dalam mencari alternatif
pengobatan yang berdasar pada “back to nature” (kembali ke alam) dikarenakan
efek samping pengobatan yang memanfaatkan bahan-bahan alam relatif lebih
kecil, lebih aman, praktis, serta murah (Suharmiati dan Handayani, 2005).
Dalam Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 007
tahun 2012 tentang Registrasi Obat Tradisional pasal 1 ayat 1 disebutkan obat
tradisional adalah bahan atau ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan
hewan, bahan mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran dari bahan tersebut
yang secara turun menurun telah digunakan untuk dan dapat diterapkan sesuai
norma yang berlaku(DepKes RI, 2012).
Di Indonesia, jamu sebagai bagian dari obat herbal/ramuan, telah
diterima dan digunakan secara luas oleh masyarakat dalam rangka pemeliharaan
kesehatan, hal ini didukung dengan adanya data Riset kesehatan dasar (Riskesdas)
tahun 2010, sekitar 59,12% penduduk Indonesia pernah mengkonsumsi jamu dan
95,6% diantaranya merasakan jamu berkhasiat dalam meningkatkan kesehatan
(DepKes RI, 2011). Kebiasaan minum jamu sudah menjadi budaya, terutama bagi
masyarakat di Pulau Jawa. Selain untuk menjaga kesehatan, kebiasaan ini juga
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
merupakan alternatif pengobatan untuk mengobati penyakit ringan seperti pegal
linu, nyeri saat menstruasi, untuk melancarkan asi, flu, batuk, masuk angin, dan
untuk menambah nafsu makan pada anak (Soedarsono dan Harini, 2002).
Dalam Keputusan Kepala Badan Pengawas Obat dan makanan Nomor :
Hk.00.05.4.2411 tahun 2004 tentang pengelompokan dan Penandaan Obat Bahan
Alam Indonesia antara lain dalam pasal 2 disebutkan bahwa jamu harus
memenuhi kriteria : aman sesuai persyaratan yang ditetapkan; klaim khasiat
dibuktikan berdasarkan data empiris, dan memenuhi persyaratan mutu yang
berlaku. Obat tradisional berdasarkan sumber pembuatnya dapat dikelompokkan
sebagai obat tradisional buatan sendiri dan obat tradisional buatan pabrik. Obat
tradisional buatan penjual jamu atau lebih dikenal dengan sebutan jamu gendong
termasuk dalam kategori jamu buatan sendiri ini banyak digemari oleh masyarakat
Indonesia khususnya di Pulau Jawa (Supardi, Herman, Yuniar, 2011).
Sesuai dengan Kepmenkes no.661/MENKES/SK/VII/1994 tentang
persyaratan obat tradisional disebutkan bahwa cairan obat dalam yaitu salah satu
contohnya jamu harus memenuhi persyaratan antara lain :(1) keseragaman
volume, (2) Angka Kapang Khamir tidak lebih dari 103,(3) Angka Lempeng Total
tidak lebih dari 104, tidakmengandung mikroba patogen, aflatoksin tidak lebih dari
30bpj. Mikroba patogen yang dimaksud adalah semua mikroba yang dapat
menyebabkan orang menjadi sakit bila kemasukan mikroba tersebut. Obat
tradisional untuk penggunaan secara oral perlu diwaspadai adanya mikroba seperti
:Salmonella, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, dan Pseudomonas
aeruginosa. (BPOM RI, 1994).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
Dalam budaya masyarakat Jawa dikenal adanya jamu cekok. Jamu cekok
adalah jamu khusus yang ditujukan bagi anak-anak yang mengalami penurunan
nafsu makan. Penamaan jamu cekok mengacu pada cara pemberian yang
diminumkan secara paksa dengan cara memeras jamu ke dalam mulut anak. Jamu
cekok ini dipercaya memiliki khasiat sebagai perangsang munculnya nafsu makan
pada anak. Jamu cekok adalah ramuan bahan tradisional yang terdiri dari
Curcuma xanthorriza Roxb. (temulawak), Zingiber zerumbet L. (lempuyang
gajah), Tinospora crispa L. (brotowali), Curcuma aeruginosa Roxb. (temu ireng)
serta Carica papaya L. (pepaya).
Di Yogyakarta terdapat salah satu tempat usaha jamu cekok terkenal yang
dijual oleh penjual jamu racik “X” (Limananti& Triratnawati, 2003). Dari hasil
observasi yang peneliti lakukan pada proses pembuatan jamu cekok oleh penjual
jamu racik “X” pada bulan September 2013 ini sangat memungkinkan terjadinya
kontaminasi bakteri. Kontaminasi ini mungkin terjadi karena dalam proses
pembuatan jamu cekok alat-alat yang digunakan kurang higienis dan kurang
terjaga kebersihannya serta tempat pembuatannya pun diruangan yang sanitasinya
tidak cukup baik sehingga memungkinkan adanya kontaminasi bakteri. Penjual
jamu racik “X” berjualan dari pukul 06.00 sampai 19.30. Produksi jamu dilakukan
pada jam 09.00 setiap harinya, jamu yang dibuat pada hari ini akan dijual untuk
keesokan harinya. Jeda waktu yang lama ini memungkinkan adanya pertumbuhan
bakteri dan jamur. Peneliti memilih melakukan observasi pada penjual jamu “X”
saja karena sudah berjualan cukup lama, yaitu sejak tahun 1985 dan selalu
mempunyai banyak konsumen. Konsumen yang datang tidak hanya berasal dari
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
kota Yogyakarta, namun ada juga yang berasal dari luar kota Yogyakarta. Penjual
jamu racik “X” menjual sekitar 20 macam jenis jamu, namun yang paling banyak
peminatnya adalah jamu cekok.Sampel jamu cekok yang diambil dari penjual
jamu racik “X” dianggap dapat mempresentasikan cara pembuatan jamu pada
penjual jamu yang lain. Jamu cekok sebagai obat tradisional ini harus memenuhi
persyaratan yang berlaku yang ditetapkan oleh Badan Pengawas Obat dan
Makanan Republik Indonesia (Limananti& Triratnawati, 2003; Soedarsono dan
Harini, 2002).
Dalam Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 007
tahun 2012 tentang Registrasi Obat Tradisional pasal 4 ayat 1 disebutkan bahwa
obat tradisional yang dibuat oleh usaha jamu racikan dan usaha jamu gendong
tidak memerlukan izin edar. Jamu cekok sebagai produk usaha jamu racikan
memang tidak memerlukan izin edar namun, kualitasnya harus dapat dijamin
terutama dalam hal kebersihan dan proses pembuatannya sehingga tetap aman
dikonsumsi (Depkes RI, 2012).
Hasil pengujian mikrobiologis yang dilakukan Balai Besar Pengawas
Obat dan Makanan (BPOM) pada tahun 2001 di Jawa Tengah terhadap produk
industri obat tradisional yang beredar dipasaran sekitar 30% menunjukkan sampel
bakteri total melebihi batas yang ditentukan. Bakteri patogen yang paling banyak
ditemukan sebagai kontaminan adalah kelompok Coliform. Salah satu jenis
bakteri Coliform yang paling banyak ditemukan adalah bakteri Eschericia coli
(Zulaikhah, 2005).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
Escherichia coli adalah bakteri patogen yang bila ada di saluran
pencernaan dalam jumlah banyak dapat menimbulkan infeksi dan menyebabkan
berbagai penyakit, seperti diare, meningitis, gangguan pada ginjal, kejang perut,
demam dan infeksi lainnya (Suriawiria, 1986). Bakteri E.coli digunakan sebagai
indikator adanya kontaminasi feces dan kondisi sanitasi yang tidak baik terhadap
air, makanan dan minuman (Fardiaz, 1993). Jamu cekok yang umumnya
dikonsumsi oleh anak-anak bila tercemar bakteri E.coli dapat mengakibatkan
penyakit infeksi dan diare. Anak-anak memiliki sistem pertahanan tubuh yang
lebih rentan dibandingkan dengan orang dewasa. Apabila E.coli masuk ke dalam
tubuh maka akan memproduksi toksin berbahaya. Toksin inilah yang dapat
menyebabkan diare, ganguan pencernaan, dan komplikasi kesehatan lainnya
(Tempo, 2013).
Penelitian ini bertujuan untuk meneliti cemaran mikrobia yang meliputi
Angka Kapang Khamir (AKK), Angka Lempeng Total (ALT) dan identifikasi
keberadaan bakteri patogen khususnya Escherichia coli pada jamu cekok yang
dijual oleh penjual jamu racik “X”sehingga dapat diketahui apakah jamu cekok
yang dijual oleh penjual jamu racik “X” sudah memenuhi persyaratan secara
mikrobiologis.
B. Rumusan Masalah
1. Berapakah angka lempeng total dan angka kapang khamir yang terdapat pada
sediaan jamu cekok yang dijual oleh penjual jamu racik“X” Yogyakarta?
2. Adakah cemaran bakteri E.coli dalam jamu cekok yang dijual oleh penjual
jamu racik“X” di Yogyakarta?
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
C. Keaslian Penelitian
Penelitian jamu cekok pernah dilakukan oleh Angelia melaporkan bahwa
jamu cekok dapat meningkatkan berat badan pada mencit yang dengan dosis
0,052 mg/20gBB/hari (Angelia, 2007). Penelitian lain yang dilakukan Jauhari
(2007) melaporkan bahwa jamu cekok dapat dibuat diformulasikan dalam bentuk
sediaan tablet hisap dengan komposisi : jamu cekok 58,7%, manitol 11,3%, dan
dekstrosa 30%.Limananti dan Trianawati (2003) melakukan penelitian tentang
manfaat jamu cekok dengan melakukan wawancara kepada konsumen terkait
khasiat jamu cekok dan budaya masyarakat yang masih melestarikan budaya
minum jamu. Sedangkan publikasi penelitian mengenai Uji Angka Kapang
Khamir (AKK), Angka Lempeng Total (ALT), dan identifikasi Escherichia coli
pada sediaan jamu cekok penjual jamu racik “X” di kota Yogakarta belum pernah
dilakukan.
D. Manfaat Penelitian
1. Manfaat teoritis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi mengenai
Angka Lempeng Total, Angka Kapang Khamir dan ada tidaknya bakteri
Escherichia coli dalam jamu cekok yang dijual olehpenjual jamu racik “X”
di kota Yogyakarta.
2. Manfaat praktis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada
masyarakat mengenai kualitas keamanan sediaan jamu cekok yang dijual oleh
penjual jamu racik”X” di Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
E. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kualitas mikrobiologis
jamu cekok yang dijual oleh penjual jamu racik “X” di Yogyakarta dalam
aspek Angka Kapang Khamir, Angka Lempeng Total dan keberadaan E.coli
2. Tujuan khusus
(1) Mampu memberikan data dan informasi mengenai angka lempeng total
dan angka kapang khamir pada jamu cekok penjual jamu racik “X”
Yogyakarta.
(2) Mampu memberikan data dan informasi terkait kemungkinan cemaran
bakteri E.coli pada jamu cekok penjual jamu racik “X” Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. Obat Tradisional, Jamu dan Cairan Obat Dalam
Dalam Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 007
tahun 2012 pada pasal 1 ayat 1 dinyatakan : Obat Tradisional adalah bahan atau
ramuan bahan yang berupa bahan tumbuhan, bahan hewan, bahan mineral,
sediaan sarian (galenik), atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun
temurun telah digunakan untuk pengobatan, dan dapat diterapkan sesuai dengan
norma yang berlaku di masyarakat (DepKes RI, 2012).
Berdasarkan data WHO pada tahun 2005 sekitar 80% penduduk dunia
pernah menggunakan obat herbal. Di Indonesia obat tradisional masih sangat
sering digunakan. Data ini didukung dengan hasil riset dari Susenas (Survey
Sosial Ekonomi Nasional) pada tahun 2007 bahwa tercatat 65,01% penduduk
Indonesia yang mengeluh sakit dalam waktu kurang dari sebulan akan memilih
melakukan pengobatan sendiri dengan menggunakan obat tradisional. Menurut
data Riskesdas tahun 2010, 50% penduduk Indonesia mengkonsumsi jamu untuk
terapi alternatif dan sebagai upaya untuk memelihara kesehatan (Supardi, Herman,
Yuniar, 2010)
Obat tradisional berdasarkan sumber pembuatnya dapat dikelompokkan
sebagai obat tradisional buatansendiri, obat tradisional buatan penjual jamu dan
obat tradisional buatan pabrik. Obat tradisional buatan sendiri banyak
digunakan masyarakat dalam upaya pengobatan sendiri menggunakan bahan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
baku dari lingkungan sekitar. Obat tradisional buatan penjual jamu salah satunya
adalah jamu gendong, yaitu suatu bentuk minuman yang sangat digemari
masyarakat di Jawa, dan di berbagai pulau lain di Indonesia.Konsumsi jamu
sebagai upaya pengobatan telah dikenal luas dan dimanfaakan masyarakat untuk
tujuan mengobati penyakit ringan, mencegah datangnya penyakit, menjaga
ketahanan dan kesehatan tubuh, serta untuk tujuan kecantikan (Supardi, Herman,
Yuniar, 2010).
Jamu merupakan cairan obat dalam. Jamu adalah obat tradisional yang
tidak memerlukan pembuktian ilmiah sampai uji klinis, tetapi cukup dengan bukti
empiris (Handayani dan Suharmiati, 2002). Sebagaimana diatur dalam Keputusan
Menteri Kesehatan RI No : 661/Menkes/SK/VII/1994, persyaratan obat
tradisional yang meliputi keseragaman volume, angka kapang khamir, angka
lempeng total, mikroba patogen, aflatoksin, bahan tambahan cairan obat dalam
seperti pengawet dan pewarna, wadah dan peyimpanan. Angka kapang khamir
tidak boleh lebih dari 103 dan lempeng total yang diperbolehkan adalah tidak lebih
dari 104. Mikroba patogen harus mempunyai nilai negatif. Mikroba patogen yang
dimaksud adalah semua mikroba yang dapat menyebabkan orang menjadi sakit
bila kemasukan mikroba tersebut. Obat tradisional untuk penggunaan obat dalam
termasuk di dalamnya cairan obat dalam perlu diwapadai adanya mikroba seperti
:Salmonella, Escherichiacoli, Staphylococcus aureus, dan Pseudomonas
aeruginosa. Cairan obat dalam tidak boleh mengandung bakteri patogen karena
mikroba patogen sangat berbahaya. Mikroba patogen dapat menyebabkan infeksi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
penyakit. Persyaratan obat tradisional yang baik bertujuan untuk melindungi
konsumen dan menjaga mutu dari obat tradisional itu sendiri (BPOM, 1994).
B. Cara Pembuatan Obat Tradisional Yang Baik (CPOTB)
Pembuatan obat tradisional termasuk jamu harus memenuhi kriteria dan
persyaratan yang ditentukan. Badan Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) pada
tahun 2005 menyatakan bahwa obat tradisional merupakan produk yang dibuat
dari bahan alam yang jenis dan sifat kandungannya sangat beragam sehingga
untuk menjamin mutu obat tradisional diperlukan cara pembuatan yang baik
dengan lebih memperhatikan proses produksi dan penanganan bahan baku
(BPOM, 2005).
Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB) meliputi seluruh
aspek yang menyangkut pembuatan obat tradisional, yang bertujuan untuk
menjamin agar produk yang dihasilkan senantiasa memenuhi persyaratan mutu
yang telah ditentukan sesuai dengan tujuan penggunaannya. Tujuan dari CPOTB
ini adalah untuk melindungi masyarakat terhadap hal-hal merugikan dari
penggunaan obat tradisional yang tidak memenuhi persyaratan mutu (BPOM,
2005).
CPOTB wajib diterapkan oleh industri obat tradisional yang memiliki ijin
edar. Sesuai dengan Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 007
tahun 2012 tentang Registrasi Obat Tradisional pasal 4 ayat 1 disebutkan bahwa
obat tradisional yang dibuat oleh usaha jamu racikan dan usaha jamu gendong
tidak memerlukan izin edar. Usaha jamu gendong dan jamu racikan memang tidak
diwajibkan untuk menerapkan CPOTB namun, CPOTB dapat menjadi acuan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
dalam proses pembuatan produk jamu, sehingga kualitas mutu tetap terjamin dan
aman untuk dikonsumsi. Usaha jamu gendong dan jamu racik tidak memerlukan
ijin edar karena lingkup distribusinya yang kecil sehingga pengawasannya
dianggap mudah (DepKes RI, 2012).
C. Jamu Cekok
Jamu cekok merupakan ramuan bahan tradisional yang secara empiris
berdasarkan pengalaman turun-temurun dipercaya memiliki khasiat sebagai
perangsang munculnya nafsu makan pada anak. Istilah cekok mengacu pada cara
atau metode pemberian jamu yaitu dengan cara meminumkan jamu secara paksa
langsung ke dalam mulut anak. Pertama-tama ramuan jamu yang masih berupa
campuran tumbuh-tumbuhan, rempah-rempah yang telah dihaluskan dan diberi
sedikit air, ditempatkan padaselembar kain kecil serupa sapu tangan, kemudian
ujung-ujungnya disatukan (seperti membungkus). Anak yang akan dicekok
biasanya menunjukkan sikap menolak dan berontak, dipangku orang tuanya
dengan posisi agak berbaring. Selanjutnya hidung anak dipencet sehingga
mulutnya akan terbuka dengan sendirinya. Pada saat inilah jamu yang telah
disiapkan diperas di mulut anak sehingga cairannya masuk ke dalam mulut.
(Limananti dan Triratnawati, 2003)
Kandungan dari jamu cekok adalah Curcuma xanthorrhiza Roxb.
(temulawak), Zingiber zerumbet (lempuyang gajah), Tinospora crispa L.
(brotowali), Curcuma aeruginaosa Roxb. (temu ireng) serta Carica papaya L.
(pepaya). Masing-masing komponen dari jamu cekok mempunyai khasiat untuk
meningkatkan nafsu makan (Soedarsono dan Harini, 2002). Cara pembuatan jamu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
cekok ini cukup mudah dan sederhana hanya dengan menghaluskan semua bahan,
dikukus, lalu didiamkan dan ketika ada pembeli datang baru diperas dan
dicekokkan, atau dibawa pulang. Pembuatan jamu ini biasanya dilakukan pukul
09.00 dan jamu yang dibuat akan dijual keesokan harinya.
Komponen jamu cekok yang digunakan meliputi :
a. Temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb.)
Temulawak merupakan tanaman asli Indonesia dan termasuk salah satu
jenis temu-temuan yang paling banyak digunakan senagai bahan baku obat
tradisional. Selain itu, temulawak merupakan sumber bahan pangan, pewarna,
bahan baku industri seperti kosmetika, maupun dibuat makanan atau
minuman segar. Sebagai ramuan obat tradisional, temulawak dapat
digunakan sebagai bahan obat utama (remedium cardinale), bahan obat
penunjang (remedium adjuvans), pemberi warna (corrigenta odoris). Secara
empiris, temulawak digunakan sebagai obat dalam bentuk tunggal maupun
campuran. Rimpang temulawak berbau tajam, rasanya pahit agak pedas.
Temulawak mempunyai khasiat laktagoga, kolagoga dan digunakan dalam
pengobatan perut kembung, sembelit, diare, haid tidak lancar, serta
menambah nafsu makan (Dalimartha, 2006).
b. Lempuyang gajah (Zingiber zerumbet)
Lempuyang gajah mempunyai efek farmakologis sebagai anti radang
(anti inflamasi) dan digunakan pula sebagai penambah nafsu makan
(stomachica). Bagian yang biasanya digunakan adalah bagian rimpang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
(Hariana, 2006). Tanaman Lempuyang gajah berwarna hijau agak kehitaman,
bagian rimpang muda maupun rimpang tua berwarna kuning muda dengan
daging berwarna kuning. Rimpang berasa pahit getir dan berbau wangi
(Rukmana, 2004).
c. Brotowali (Tinospora crispa L.)
Secara turun temurun, brotowali sudah banyak dimanfaatkan oleh
masyarakat Indonesia sebagai obat demam, sakit perut, mengobati gatal-gatal,
luka yang sulit disembuhkan seta digunakan sebagai penambah nafsu makan.
Brotowali dapat memberikan efek farmakologis seperti analgesik, anti-
inflamasi, antikoagulan, tonikum, antiperiodikum, dan diuretik (Kresnady,
2003).
d. Temu ireng (Cucurma aeruginosa Roxb.)
Temu ireng berasal dari famili Zingiberaceae. Rimpangnya mempunyai
rasa pahit, tajam dan sifatnya dingin. Berkhasiat sebagai peluruh flatus
(karminatif), peluruh dahak, meningkatkan nafsu makan (stomakik),
anthelmintik, pembersih darah setelah melahirkan atau setelah haaid
(Hariana, 2006).
e. Daun Pepaya (Carica papaya L.)
Pepaya dikenal mempunyai banyak manfaat termasuk bagian daunnya.
Daun pepaya dipercaya memiliki khasiat sebagai stomakik atau penambah
nafsu makan karena berkhasiat memacu enzim pencernaan. Daun pepaya
memiliki kandungan enzym papain, alkaloid karpaina, pseudo-karpaina,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
glikosid, karposid dan saponin, sakarosa, dekstrosa, dan levulosa (Santoso,
2006).
D. Angka Kapang Khamir (AKK)
Angka kapang/khamir adalah jumlah koloni kapang dan khamir yang
ditumbuhkan dalam media yang sesuai selama 5 hari pada suhu 20-25OC dan
dinyatakan dalam satuan koloni /mL (Soekarto, 2008).
Kapang merupakan mikroorganisme bersel banyak yang membentuk
miselia yang tampak sebagai benang-benang halus. Mikroba ini membentuk spora
sebagai salah satu alat perkembangbiakannya. Kapang juga dapat membentuk
mikotoksin yang telah dikenal sebagai penyebab keracunan akut maupun kronis
(Depkes RI, 1998).
Khamir adalah mikroorganisme bersel satu dengan bentuk oval dan
berukuran lebih besar daripada bakteri. Khamir dapat tumbuh pada makanan,
peralatan pengolahan pangan, atau permukaan bangunan yang mengandung
sedikit air dan zat gizi yang mungkin berasal dari sisa makanan yang tidak
dibersihkan secara sempurna (DepKes RI, 1998).
Kapang dan khamir apabila dikonsumsi dalam jumlah banyak dan dalam
jangka waktu yang panjang dapat menimbulkan penyakit. Penyakit yang
disebabkan oleh khamir dan jamur disebut mikosis. Reaksi yang biasa disebabkan
karena toksin khamir adalah adalah reaksi alergi atau radang yang kadang-kadang
mempunyai tanda spesifik seperti adanya granuloma dan eosinofil. Khamir dapat
menimbulkan reaksi alergi terutama pada manusia yang kekebalan tubuhnya tidak
terlalu baik seperti pada lansia, orang yang sedang menjalani pengobatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
antibiotik, anak-anak, dan orang yang terinfeksi HIV. Mikotoksin merupakan
toksin yang diproduksi oleh jamur. Mikotoksin yang sering ditemukan adalah
aflatoksin yang diproduksi oleh Aspergilus flavus dan Aspergillus parasiticus.
Fungi ini secara alami terdapat dalam tanah, kacang tanah, jagung, beras,
singkong, kacang-kacangan, cabai dan rempah-rempah (Pratiwi, 2008). Bahan
makanan dan minuman yang disimpan pada suhu hangat dan basah dapat diinfeksi
oleh jamur sehingga mengkotaminasi makanan dengan aflatoksin. Pada manusia
aflatoksin dapat menyebabkan toksigenik (menimbulkan keracunan), mutagenik
(menimbulkan mutasi), dan dapat meningkatkan risiko karsinoma hepatoseluler
(Underwood, 1999). Salah satu contoh khamir yang paling sering ditemukan
menimbulkan infeksi pada manusia adalah golongan Candida. Candida adalah
anggota flora normal yang terdapat pada saluran pencernaan, selaput mukosa
saluran pernapasan, vagina, uretra, kulit dan dibawah jari-jari kuku tangan dan
kaki. Penyakit yang disebabkan oleh ragi spesies Candida disebut kandidiasis,
kandidiasis dapat bersifat akut atau subakut dan dapat menyebabkan infeksi pada
mulut, vagina, kulit, kuku, bronki, atau paru-paru. Terkadang infeksi Candida
dapat menyebabkan septikemia, endokarditis, atau meningitis. Infeksi Candida
umumnya terjadi apabila kondisi tubuh inang sedang mengalami penurunan daya
tahan tubuh (Kuswadji, 1999).
Kapang khamir dapat tumbuh selama proses penyimpanan bahan baku
jamu, penyimpanan makanan dan minuman, serta dalam kondisi tanah lembab.
Khamir dapat menyebabkan pembusukan dan dekomposisi bahan pangan karena
sifatnya, yaitu mikroba fermentatif yang dapat menguraikan unsur organik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
menjadi alkohol dan CO2. Contoh khamir yang yang dapat menyebabkan
pembusukan bahan pangan adalah Saccaromyces cerevisiae (SNI, 2009).
Jumlah kapang (jamur) dan khamir yang besar, menunjukkan
kemunduran dari mutu obat tradisional. Kapang dan khamir akan berkembang
biak bila tempat tumbuhnya cocok (DepKes RI, 1994).
Untuk mengetahui jumlah AKK dapat dilakukan dengan metode MA
PPOM nomor 96/mik/00. Uji AKK memiliki prinsip pertumbuhan kapang khamir
setelah cuplikan diinokulasikan pada media yang sesuai dan diinkubasikan pada
suhu 20-25°C. (Fardiaz, 1993). Perhitungan AKK berdasarkan prosedur Metode
analisis Pusat Pengujian Obat dan Makanan (MA PPOMN, 2006).
E. Angka Lempeng Total (ALT)
Keputusan Menteri Kesehatan RI No: 661/Menkes/SK/VII/1994
menyatakan bahwa perlu dicegah peredaran obat tradisional yang tidak memenuhi
persyaratan keamanan, kemanfaatan dan juga mutu. Salah satu parameter yang
dipersyaratkan adalah Angka Lempeng Total (ALT) (DepKes RI, 1994).
Angka Lempeng Total (ALT) adalah pertumbuhan bakteri mesofil aerob
setelah sampel diinkubasi dalam perbenihan yang cocok selama 24-48 jam pada
suhu 37°C. Dalam pengujian ALT digunakan metode pour plate dengan cara
menginokulasikan bakteri pada media agar tuang pada suhu 45°C dalam cawan
petri. Ketika agar memadat, sel-sel bakteri tidak dapat bergerak dalam agar dan
akan tumbuh menjadi koloni (SNI, 1992).
Metode kuantitatif digunakan untuk mengetahui jumlah mikroba yang
ada pada suatu sampel, umumnya dikenal dengan Angka Lempeng Total (ALT).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
Uji Angka Lempeng Total dan lebih tepatnya ALT aerob mesofil atau anaerob
mesofil menggunakan media padat dengan hasil akhir berupa koloni yang dapat
diamati secara visual berupa angka dalam koloni (cfu) per ml/g atau
koloni/100ml. Prinsip pengujian Angka Lempeng Total menurut metode Analisis
Mikrobiologi (MA PPOMN nomor 96/mik/00) yaitu pertumbuhan koloni bakteri
aerob mesofil setelah cuplikan diinokulasikan pada media lempeng agar dengan
metode pour plate dan diinkubasi pada suhu yang sesuai. Pada pengujian Angka
Lempeng Total menggunakan media PCA (Plate Count Agar) sebagai media
padatnya. Digunakan juga pereaksi khusus Triphenyl Tetrazolium Chloride 0,5 %
(TTC) (BPOM, 2008).
Angka Lempeng Total harus ditekan sekecil mungkin. Meskipun mikroba
tersebut tidak membahayakan bagi kesehatan, tetapi kadang-kadang karena
pengaruh sesuatu yang dapat menjdi mikroba membahayakan. Yang jelas angka
lempeng total tersebut dapat digunakan sebagai petunjuk tingkat berapa industri
tersebut melaksanakan Cara Pembuatan Obat Tradisional yang Baik (CPOTB).
Makin kecil angka lempeng total bagi setiap produk makin tinggi nilai
pengetrapan CPOTB di industri tersebut (DepKes RI, 1994).
Perhitungan jumlah bakteri yang hidup (viable count) menggambarkan
jumlah sel yang hidup, sehingga lebih tepat apabila dibandingkan dengan cara
total cell count. Pada metode ini setiap sel mikroba yang hidup dalam suspensi
akan tumbuh menjadi 1 koloni setelah diinkubasikan dalam media biakan dengan
lingkungan yang sesuai. Koloni bakteri adalah kumpulan dari bakteri-bakteri yang
sejenis yang mengelompok dan membentuk suatu koloni. Setelah diinkubasi maka
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
akan diamati dan dan dihitung jumlah koloni yang tumbuh dan merupakan
perkiraan atau dugaan dari jumlah mikroba dalam suspensi tertentu (Hadioetomo,
1993).
Koloni yang tumbuh tidak selalu berasal dari 1 sel mikroba, karena ada
beberapa mikroba tertentu yang cenderung berkelompok atau berantai. Bila
ditumbuhkan pada media dan lingkungan yang sesuai, kelompok bakteri ini akan
menghasilkan 1 koloni. Oleh karena itu, seringkali digunakan istilah Colony
Forming Unit (CFU) untuk menghitung jumlah mikroba hidup. Sebaiknya hanya
lempeng agar yang mengandung 25-250 koloni saja yang digunakan dalam
perhitungan (SNI, 1992).
Lempeng agar dengan koloni>250 koloni akan sulit dihitung sehingga
kemungkinan adanya kesalahan dalam penghitungan sangat besar. Digunakan
pengenceran sampel untuk membantu memperoleh perhitungan dalam jumlah
yang benar (Lay, 1994).
F. Escherichia coli
Escherichia coli adalah bakteri oportunistik yang banyak ditemukan di
dalam usus besar manusia sebagai flora normal. Bakteri ini berbentuk kokobasil
(berbatang pendek), bersifat gram negatif, tidak berspora, anaerob fakultatif, dan
motil. Bakteri Escherichia coli merupakan flora normal yang terdapat dalam usus,
dapat menjadi patogen ketika mencapai jaringan luar intenstinal normal atau
tempat flora normal yang kurang umum. Penyakit yang ditimbulkan antara lain
infeksi saluran kencing, septis, meningitis, dan diare (Jawetz, 1996).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
Mikroba yang paling umum digunakan sebagai indikator adanya
pencemaran feses dalam air, bahan makanan maupun minuman termasuk jamu
adalah Escherichia coli. E.coli merupakan spesies dengan habitat dalam saluran
pencernaan dan saluran non pencernaan seperti tanah dan air. Mikroba dari jenis
tersebut selalau terdapat dalam kotoran manusia. E.coli merupakan mikroba dari
kelompok Coliform. Mikroba dari kelompok Coliform secara keseluruhan tidak
umum hidup atau terdapat di air, makanan ataupun minuman, sehingga
keberadaannya dapat dianggap sebagai petunjuk terjadinya pencemaran kotoran
dalam arti luas, baik dari kotoran hewan ataupun manusia(Purnawijayanti, 2001).
Infeksi Escherichia coli seringkali berupa diare yang disertai darah,
kejang perut, demam, dan terkadang dapat menyebabkan gangguan pada ginjal.
Infeksi Escherichia coli pada beberapa penderita, anak-anak dibawah 5 tahun, dan
orang tua dapat menimbulkan komplikasi yang disebut sindrom uremik hemolitik.
Sekitar 2 – 7% infeksi E.coli dapat menimbulkan komplikasi. Berdasarkan sifat
virulensinya, E.coli yang dapat dikelompokan menjadi E.coli yang dapat
menyebabkan infeksi intestin, antara lain :
1. Escherichia coli enteropatogenik (EPEC)
Jenis ini merupakan penyebab utama diare pada bayi. EPEC memiliki
fimbria, toksin yang tahan terhadap panas (ST), dan toksin yang tidak tahan panas
(LT), serta menggunakan adhesin, yang dikenal sebagai intimin untuk melekat
pada sel mukosa usus. Infeksi EPEC dapat mengakibatkan diare berair yang
biasanya dapat sembuh sendiri, tetapi ada juga yang menjadi kronis. Lama diare
yang disebakan oleh EPEC dapat diperpendek dengan pemberian antibiotik.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
2. Escherichia coli enterotoksigenik (ETEC)
ETEC merupakan diare penyebab diare pada anak dan wisatawan yang
bepergian ke daerah yang bersanitasi buruk. Oleh karena itu, diare yang
disebabkan bakteri ini sering disebut juga sebagai diare wisatawan. Faktor
kolonisasi ETEC yang spesifik untuk manusia adalah fimbria adhesin. Faktor ini
dapat menyebabkan ETEC melekat pada epitel usus halus sehingga biasanya
menyebabkan diare tanpa demam. Beberapa galur bakteri ini menghasilkan
eksotoksin yang tidak tahan panas (LT), ETEC juga memproduksi toksin yang
tahan panas (ST). Toksin yang tahan panas (ST) tahan dalam air mendidih selama
30 menit. Enterotoksin yang stabil dalam pemanasan ini merupakan peptida yang
memiliki bobot molekul sekitar 4000 dalton. Karena ukurannya yang kecil inilah,
toksin ST diperkirakan sulit diinaktifkan oleh pemanasan. Toksin ini dapat
menyebabkan konsentrasi guanosin monosulfat siklik dalam sitoplasma
meningkat sehingga meningkatkan konsentrasi adenosin monofosfat setempat
(cAMP). Hal ini menimbulkan hipersekresi air dan klorida secara terus-menerus
dan lama yang disertai penghambatan resorpsi natrium. Lumen usus teregang
oleh cairan dan mengakibatkan hipermotilitas dan diare.
3. Escherichia coli enteroinvasif (EIEC)
Mekanisme patogenik EIEC mirip dengan patogenesis Shigella. EIEC
masuk dan berkembang dalam epitel sel-sel kolon sehingga menyebabkan
kerusakan pada sel kolon. Gejala yang ditimbulkan oleh infeksi EIEC mirip
dengan gejala yang disebabkan oleh Shigella. Gejala diare yang timbul biasanya
disertai dengan demam.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
4. Escherichia coli enterohemoragik (EHEC)
Jenis bakteri ini menghasilkan suatu toksin yang bernama verotoksin.
Nama verotoksin sesuai dengan efek sitotoksik toksin ini pada sel vero, yaitu sel
ginjal yang diperoleh dari sel ginjal monyet Afrika (African green monkey). EHEC
dapat menyebabkan kolitis berdarah (diare berat yang disertai pendarahan dan
sindrom uremik hemolitik (gagal ginjal akut yang disertai anemia hemolitik
mikroagiopatik dan trombositopenia).
5. Escherichia coli enteroagregatif (EAEC)
EAEC merupakan penyebab utama diare pada masyarakat berkembang.
Bakteri ini dapat menimbulkan diare akut dan kronis. EAEC melekat pada sel
manusia dengan pola yang khas dan menyebabkan diare yang tidak berdarah,
tidak menginvasi, dan tidak menyebabkan inflasi pada mukosa intenstin. EAEC
diperkirakan memproduksi entero aggregative ST toxin (EAST), yang merupakan
suatu enterotoksin yang tidak tahan panas. EAEC juga memproduksi hemolisin
yang diproduksi galur E.coli yang dapat menyebabkan infeksi saluran kemih.
Peranan toksin dan hemolisin dalam virulensi EAEC belum diketahui dengan
pasti (Radji, 2009).
Escherichia coli adalah bagian normal dari flora saluran usus.
Escherichia coli seringkali diduga sebagai penyebab timbulnya diare. Mekanisme
E.coli menimbulkan diare yaitu :
a. Escherichia coli enterotoksinogen memproduksi enterotoksin.
Enterotoksin yang dihasilkan ini ada 2 macam, yaitu toksin yang tahan panas (ST)
dan oxin yang tidak tahan panas (LT). Toksin LT menyebabkan peningkatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
aktifitas enzim adenil siklase dalam sel mukosa usus halus dan merangsang
sekresi cairan yang mempunyai kekuatan 100 kali lebih rendah dibandingkan
toksin kolera dalam menimbulkan diare. Sedangkan toksin ST bekerja dengan
cara mengaktivasi enzim guaiakolat siklase menghasilkan siklik guanosin
monofosfat yang dapat menyebabkan gangguan absorpsi klorida dan natrium serta
menurunkan motilitas usus halus
b. Escherichia coli menimbulkan diare dengan cara menginvasi langsung
lapisan epitelium dinding usus. Ketika invasi lapisan usus terjadi, diare timbul
karena pengaruh racun lipopolisakarida dinding sel (endotoksin) (Jawetz, 1996).
Untuk mengetahui adanya keberadaan E.coli biasanya dilakukan uji
identifikasi dengan metode IMVIC (uji Indol, Metil Merah, Voges Proskaeur, dan
sitrat). Apabila positif mengandung E.coli maka akan memberikan hasil positif
untuk uji Indol dan uji metil merah, dan memberikan hasil negatif untuk uji voges
proskaeur dan uji sitrat. Identifikasi E.coli merupakan serangkaian uji untuk
mengetahui keberadaan E.coli berdasarkan karakteristik khusus E.coli. Pengujian
identifikasi ini untuk melihat morfologi dan sifat biokimia dari E.coli. Escherichia
coli adalah bakteri garam-negatif, anaerob fakultatif dan non spora. Sel-selnya
berbentuk batang yang panjangnya sekitar 2 µm dan diameternya 0,5 µm, dengan
volume sel 0,6-0,7 µm3. E.coli memiliki karakter khusus yaitu : (1) mampu
menguraikan asam amino menjadi indol tetapi tidak menghasilkan residu sulfur,
yang dideteksi melalui penambahan reagen Kovacs dan memiliki motilitas pada
media atau habitat alaminya karena adanya flagel (Flagellum peritrikus), (2)
mampu menguraikan beberapa jenis gula dalam fermentasinya (glukosa, laktosa,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
manitol, maltosa, dan sukrosa) menjadi asam laktat, asam cuka, CO2 dan asam
tertentu lainnya tergantung dari spesies bakterinya, (3) sumber karbon yang
digunakan sebagai sumber energi adalah asetat (Holt, 2002).
G. Identifikasi Escherichia coli
Uji Identifikasi bakteri E.coli adalah serangkaian uji berdasarkan
karakteristik E.coli. Uji dilakukan dengan menggunakan media dan reagen khusus
seperti, uji fermentasi gula-gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sukrosa), uji
Sulfur Indol Motility (SIM), dan uji IMVIC (Indol, Metil merah, Voges Proskauer,
dan Sitrat). Hasil uji idetifikasi dibandingkan dengan karakterisktik E.coli (Holt,
dkk, 2000).
1. Uji fermentasi gula-gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa dan sukrosa)
Uji fermentasi gula-gula bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri
dalam menguraikan gula-gula spesifik yang mencerminkan sifat bakteri tersebut
dan dapat digunakan sebagai salah satu cara identifikasi bakteri. Masing-masing
mikroba mempunyai kemampuan yang berbeda-beda dalam memfermentasikan
berbagai karbohidrat. Fermentasi merupakan proses oksidasi biologi dalam
keadaan anaerob dimana yang bertindak sebagai substrat adalah karbohidrat. Hasil
dari fermentasi berbeda-beda tergantung dari jenis bakterinya. Uji fermentasi
karbohidrat dilihat dari pembentukan asam yang akan ditunjukkan dengan adanya
perubahan warna medium menjadi kuning dan terbentuknya gas yang terjebak
dalam tabung durham (Nugraheni, 2010).
Bakteri E.coli adalah bakteri yang mampu memfermentasikan gula-gula
spesifik seperti glukosa, laktosa, maltosa, manitol, dan sukrosa. Karakteristik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
kemampuan E.coli dalam memfermentasikan gula-gula spesifik dapat digunakan
sebagai dasar untuk uji identifikasi E.coli (Holt dkk, 2000).
2. Uji Sulfur Indol Motility (SIM)
Uji ini terdiri dari tiga parameter pengamatan, yaitu uji pembentukan
sulfur (H2S), uji pembentukan Indol dari hasil peruraian asam amino, dan
pengamatan pergerakan pertumbuhan bakteri dalam media tabung. Media yang
digunakan adalah media SIM yang memiliki komposisi sebagai berikut : (1)
Pancreatic Digest of Casein, (2) Peptic Digest of Animal Tissue, (3) Ferrous
Ammonium Sulfate, (4) Sodium Thiosulfate, (5) Nutrient Agar. Komposisi media
SIM tersebut memungkinkan untuk dilakukan tiga pengujian sekaligus dalam satu
media. Kandungan Ferrous Ammonium Sulfate dan Sodium Thiosulfate digunakan
untuk uji sulfur, kandungan Nutrien Agar (NA) dapat digunakan untuk uji
motilitas sedangkan uji Indol perlu penambahan reagen kovacs (Finegold dan
Baron, 1996).
Uji sulfur bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam
menguraikan asam amino menjadi sulfur. Sulfur dihasilkan oleh beberapa jenis
mikroba melalui pemecahan asam amino yang mengandung unsur belerang (S)
seperti lisin dan metionin. Hasil peruraian sulfur dapat diamati dengan
penambahan garam-garam logam berat kedalam medium. Hasil positif apabila
H2S bereaksi dengan senyawa-senyawa ini yang ditandai dengan terbentuknya
logam sulfit yang berwarna hitam. Hasil negatif adalah tidak terbentuk logam
sulfit yang berwarna hitam karena bakteri yang berada dalam medium tidak
mampu menghidrolisis logam-logam berat yang terkandung dalam medium
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
(Nugraheni, 2010). Menurut Holt dkk (2000), bakteri E.coli tidak mampu
menghasilkan residu sulfur dalam proses peruian asam amino.
Uji motilitas adalah metode yang digunakan untuk mengidentifikasi
E.coli terhadap bakteri lainnya berdasarkan penyebaran koloni karena E.coli
memiliki kemampuan bergerak (motil) dalam media SIM. Adanya kandungan NA
semisolid dalam media SIM memungkinkan bakteri yang memiliki flagel
melakukan pergerakan dalam media tersebut. E.coli memiliki karakteristik
mempunyai flagel di seluruh badan (peritrich) sebagai alat gerak dalam
habitatnya. Apabila dalam media terdapat pertumbuhan bakteri yang menyebar,
maka dinyatakan bakteri yang diidentifikasi tersebut adalah golongan
Enterobacter termasuk E.coli (Holt dkk, 2000).
3. Uji IMVIC
a) Uji indol
Uji indol digunakan untuk mendekteksi ada tidaknya indol dari peruraian
triptofan oleh bakteri Coliform. E.coli merupakan jenis bakteri Coliform. Uji ini
menggunakan media Sulfur Indol Motility (SIM) dengan penambahan reagen
kovacks. Hasil positif ditandai dengan warna merah atau merah muda di
permukaan media. Uji ini dilakukan setelah pengamatan motilitas agar tidak
menganggu pengamatan motilitas pada media uji (Anonim, 1993).
b) Uji metil merah
Uji metil merah bertujuan untuk mengetahui apakah bakteri mampu
memfermentasi asam campuran. Beberapa jenis bakteri yang mampu
memfermentasi glukosa akan menghasilkan produk yang bersifat asam yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
meyebabkan terjadinya penurunan pH media pertumbuhan menjadi lebih rendah.
Hasil positif ditunjukkan dengan adanya perubahan warna menjadi merah (Lay,
1994).
c) Uji Voges Proskauer
Uji ini berguna untuk mengidentifikasi mikroba yang mampu
memfermentasi 2,3-butanadiol. Apabila mikroba mampu memfermentasikan
karbohidrat menjadi 2,3-butanadiol sebagai produk utama maka akan terjadi
penumpukan bahan tersebut dalam media pertumbuhan. Penambahan reagen
kalium hidroksida dan alfanaftol dapat menentukan adanya setoin yang
merupakan suatu senyawa perkusor dalam sintesis 2,3-butanadiol. Setelah
penambahan reagen kalium hidroksida, adanya asetoin akan ditunjukkan oleh
perubahan warna menjadi merah pada medium yang akan diperjelas dengan
penambahan alfanaftol (Lay, 1994).
d) Uji sitrat
Uji sitrat bertujuan untuk mengetahui penggunaan sitrat sebagai satu-
satunya sumber karbon dan energi terutama untuk bakteri gram negatif golongan
Enterobacter. Uji ini menggunakaan media Simmon’s Citrate Agar yang
merupakan medium sintetik dengan Na sitrat sebagai satu-satunya sumber karbon,
NH4 sebagai sumber N, dan indikator pH Brom Thymol Blue. Apabila bakteri
mampu menggunakan sitrat, maka akan terjadi peningkatan pH dan mengubah
warna medium dari hijau menjadi biru. Bakteri E.coli tidak menggunakan sitrat
sebagai sumber karbon tetapi menggunakan asetat (Lay, 1994).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
H. Keterangan Empiris
Penelitian ini ingin melihat besarnya Angka Kapang Khamir (AKK),
Angka Lempeng Total (ALT), dan ada tidaknya bakteri Escherichia coli dalam
jamu cekok yang dijual penjual jamu racik “X” di Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian non eksperimental dengan rancangan
penelitian deskriptif eksploratif.
B. Variabel dan Definisi Operasional
Variabel – variabel yang digunakan pada penelitian ini adalah :
1. Variabel utama
a. Variabel bebas
Waktu pengambilan sampel jamu cekok penjual jamu racik jamu racik
“X” di Yogyakarta
b. Variabel tergantung
Angka Lempeng Total, Angka Kapang/Khamir dan keberadaan E.coli
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali
Media pertumbuhan, yaitu Potato Dextrose Agar (PDA) dan Plate
Count Agar (PCA), suhu inkubasi 35oC untuk uji ALT dan 25oC untuk
uji AKK, waktu inkubasi 24 – 48jam untuk uji ALT dan 5 – 7hari
untuk uji AKK. Media selektif, yaitu media E.coli Broth (ECB), media
pertumbuhan (Media Nutrien Agar miring, media Lauryl Triptone
Broth, Tryptone Bile X-Glucoronide (TBX), media Simmon Citrate
Agar), Simmon’s Citrate Agar, Methyl Red-Voges Proskauer, Kovacks,
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
larutan metil merah, larutan alfa naftol, lauratan kalium hidroksida,
kristal violet, larutan iodium, alkohol 70%, safranin. Suhu inkubasi
(37-44oC), dan waktu inkubasi (24-48 jam) untuk uji Identifikasi
E.coli.
b. Variabel pengacau tak terkendali
Cara pembuatan jamu cekok, cara penyimpanan setelah pembuatan
jamu cekok, waktu penyimpanan jamu cekok setelah pembuatan,
kualitas bahan yang digunakan.
3. Definisi operasional
a. Jamu cekok yang digunakan adalah jamu cair dengan komposisi
Curcuma xanthorriza, Roxb. (temulawak), Zingiber zerumbet L.
(lempuyang gajah), Tinospora crispa L. (brotowali), Curcuma
aeruginaosa Roxb. (temu ireng) serta Carica papaya L. (pepaya).
b. Angka kapang/khamir (AKK) adalah suatu uji cemaran mikroba yang
dilakukan dengan menghitung jumlah kapang dan atau khamir yang
terdapat dalam jamu cekok.
c. Angka lempeng total (ALT) adalah suatu uji cemaran mikroba yang
dilakukan dengan menghitung jumlah bakteri aerob mesofil yang
terdapat dalam jamu cekok
d. Uji identifikasi E.coli adalah serangkaian uji untuk mengidentifikasi
bakteri E.coli yang terdapat dalam jamu cekok, sehingga dapat diketahui
ada atau tidaknya keberadaan E.coli pada jamu cekok.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
C. Bahan Penelitian
1. Bahan utama
Bahan utama yang digunakan yaitu jamu cekok yang dijual oleh penjual
jamu racik “X” di kota Yogyakarta
2. Bahan kimia
a. Media yang digunakan untuk pengujian AKK adalah Potato Dextrose
Agar (PDA).
b. Media yang digunakan dalam pengujian ALT adalah Plate Count Agar
(PCA).
c. Media untuk uji konfirmasi (IMVIC) E.coli menggunakan media
TryptonBroth (TB), Methyl-Red Voges Proskauer (MR-VP), Simon’s
Citarte agar (SCA).
d. Kloramfenikol 1%, PDF (Pepton Dilution Fluid), aquadest steril,
etanol 70%, pereaksi indol, larutan metil merah, larutan α-naftol,
larutan KOH 40%
e. Larutan gula-gula (glukosa, laktosa, manitol, maltosa, sukrosa),
Kontrol positif E.coli ATCC 25922, Media Tryptone Bile X-
Glucoronide (TBX), Media E.coli Broth (ECB)
D. Alat Penelitian
Microbiologycal Safety Cabinet, Autoclaf (KT-40 ALP), Inkubator, Oven
(WTB binder), Stomacher Seward, mikroskop, Pipet tetes, Tabung reaksi
dilengkapi tabung Durham, Cawan petri, Pipet volume, beker glass, gelas ukur,
Neraca analitic (Mettler AE 200), Erlenmeyer, waterbath dan jarum ose.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
E. Tata Cara Penelitian
1. Pemilihan sampel
Sampel jamu yang dipilih diambil dari jamu cekok yang dijual
olehpenjual jamu racik X di kota Yogyakarta.
2. Penanganan wadah/kemasan penyiapan sampel
Kemasan jamu yang akan dibuka dibersihkan dengan kapas beralkohol
70% kemudian dibuka secara aseptis di dekat nyala api spiritus.
3. Tahap pra-pengkayaan
a. Homogenisasi sampel untuk uji AKK
10 ml jamu cekok diambil dan dimasukan kedalam labu ukur 100 ml
kemudian ditambahkan larutan pengencer Pepton Dilution Fluid (PDF)
hingga tanda batas sehingga diperoleh pengenceran 10-1.
b. Homogenisasi sampel untuk uji ALT
Secara aseptis diambil sebanyak 10 ml sampel ke dalam labu ukur 100
ml, lalu ditambahkan 90 ml BPW dan dihomogenkan hingga diperoleh
pengenceran 10-1
c. Pengenceran sampel untuk uji AKK
3 buah labu ukur 10 ml disiapkan, masing-masing telah diisi dengan 9 ml
PDF. Dipipet 1 ml sampel pengenceran 10-1 dan dimasukkan ke dalam
tabung pertama yang telah berisi PDF hingga diperoleh pengenceran 10-2
lalu dikocok homogen dengan vortex. Dibuat pengenceran berikutnya
sampai 10-5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
d. Pengenceran sampel untuk uji ALT
5 buah labu ukur 10 ml disiapkan, masing-masing telah diisi dengan 9 ml
pengencer BPW. Dipipet 1 ml pengenceran 10-1 dari hasil homogenisasi
pada penyiapan sampel dan dimasukkan ke dalam tabung pertama yang
telah diisi 9 ml BPW hingga diperoleh pengenceran 10-2 dan
dihomogenkan dengan menggunakan vortex. Kemudian dibuat
pengenceran selanjutnya hingga 10-5.
4. Pengujian Angka Kapang Khamir
a. Pembuatan larutan kloramfenikol
Sebanyak 1 gram kloramfenikol dilarutkan ke dalam 100 ml aquadest
steril.
b. Pembuatan media Potato Dextrose Agar (PDA)
Sebanyak 39 gram serbuk PDA disuspensikan dalam 1000 ml aquadest,
kemudian dilarutkan dengan pemanasan dan diaduk hingga merata,
dimasukkan dalam wadah yang sesuai. Kemudian ditambahkan
kloramfenikol 100 gram/L media dicampur hingga merata. Sterilisasi
dengan autoklaf selama 15 menit pada suhu 121°C. Kemudian dituang ke
dalam cawan petri atau tabung reaksi steril dan dibiarkan memadat.
c. Uji Angka Kapang Khamir
Dari masing-masing pengenceran dipipet 1 ml ke dalam cawan petri
steril secara duplo. Media PDA yang telah dicairkan (suhu 45±1oC)
sebanyak 20 ml dituangkan ke dalam cawan petri yang sebelumnya telah
ditambah dengan 1 ml larutan kloramfenikol dan digoyangkan sehingga
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
campuran tersebut merata. Setelah agar membeku, cawan petri dibalik dan
diinkubasikan pada suhu 25oC atau pada suhu kamar selama 5 hari.
Pengamatan dilakukan setiap hari sampai hari ke-5. Koloni kapang dan
khamir dihitung setelah 5 hari.
Uji sterilitas media dilakukan dengan menuangkan media PDA dalam
cawan petri dan dibiarkan memadat. Uji sterilitas pengencer dilakukan
dengan cara menuangkan media PDA dan 1 ml pengencer (PDF) lalu
dibiarkan memadat.
d. Cara menghitung dan menyatakan Hasil
Cara menghitung dan menyatakan hasil AKK sesuai dengan MA
PPOMN nomor 96/mik/00. Cawan petri dipilih dari suatu pengenceran
yang menunjukkan jumlah koloni antara 10-150 koloni. Jumlah koloni dari
kedua cawan dihitung lalu dikalikan dengan faktor pengencerannya. Bila
pada cawan petri dari 2 tingkat pengenceran yang berurutan menunjukkan
jumlah antara 10-150, maka dihitung jumlah koloni dan dikalikan faktor
pengenceran, kemudian diambil angka rata-rata. Hasil dinyatakan sebagai
angka kapang/khamir dalam tiap ml atau gram contoh. Untuk beberapa
kemungkinan lain yang berbeda dari pernyataan diatas, maka diikuti
petunjuk sebagai berikut.
a. Bila hanya salah satu diantara kedua cawan petri dari pengenceran yang
sama menunjukkan jumlah koloni antara 10-150 koloni, dihitung jumlah
koloni dari kedua cawan dan dikalikan dengan faktor pengenceran.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
b. Bila pada tingkat pengenceran yang lebih tinggi didapat jumlah koloni
lebih besar dari dua kali jumlah koloni pada pengenceran dibawahnya,
maka dipilih tingkat pengenceran terendah (misal pada pengenceran 10-2
diperoleh 60 koloni dan pada pengenceran 10-3 diperoleh 20 koloni, maka
dipilih jumlah koloni pada tingkat pengenceran 10-2 yaitu 20 koloni).
c. Bila dari seluruh cawan petri tidak ada satupun yang menunjukkan
jumlah antara 10-150 koloni, maka dicatat angka sebenarnya dari tingkat
pengenceran terendah dan dihitung sebagai angka kapang/khamir
perkiraan
d. Bila tidak ada pertumbuhan pada semua cawan dan bukan disebabkan
karena faktor inhibitor, maka angka kapang/khamir dilaporkan sebagai
kurang dari satu dikalikan faktor pengenceran terendah.
(MA PPOMN, 2006)
5. Uji Angka Lempeng Total
a. Pembuatan Media Plate Count Agar (PCA)
Sebanyak 7,05 g PCA ditimbang dan di campurkan dengan 300 ml
aquadest, dipanaskan hingga larutan jernih. Kemudian disterilkan dengan
autoklaf selama 15 menit pada suhu 121oC
b. Larutan Pengencer Buffered Pepton Water (BPW)
Sebanyak 20 g serbuk BPW dilarutkan dalam 1 L air suling dan diukur
pH 7,0 ± 1. Kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf selama
15 menit pada suhu 121°C.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
c. Uji Angka Lempeng Total (ALT)
Dari masing-maisng pengenceran dipipet 1 ml ke dalam cawan petri
steril secara duplo. Dalam setiap cawan petri dituangkan sebanyak 15 ml
media PCA yang telah dicairkan yang bersuhu 45±1oC dalam waktu 15
menit dari pengenceran pertama. Cawan petri digoyangkan dengan hati-
hati agar sampel tersebar merata kemudian dibuat duplo. Dilakukan pula
uji kontrol untuk mengetahui sterilitas media dan pengencer. Uji sterilitas
media dilakukan dengan cara menuangkan media PCA dalam suatu cawan
petri dan biarkan memadat. Uji sterilitas pengencer dilakukan dengan cara
menuangkan media PCA dan 1 ml pengencer BPW lalu dibiarkan
memadat.
Seluruh cawan petri diinkubasi terbalik pada suhu 35oC selama 24 jam
hingga 48 jam. Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan dihitung. Dihitung
Angka Lempeng total dalam 1 ml contoh dengan mengkalikan jumlah rata-
rata koloni pada cawan dengan faktor pengenceran yang digunakan.
(SNI, 1992)
d. Cara menghitung dan menyatakan hasil
Cara menganalisis hasil pengujian sesuai Prosedur baku pengujian
mikrobiologi, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan DepKes
RI (1992)
1) Cawan petri dipilih dari satu pengeceran yang menunjukkan jumlah
koloni antara 25-250 setiap cawan petri. Hitung rata-rata jumlah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
koloni dan kalikan dengan faktor pengencer. Nyatakan hasilnya
sebagai jumlah bakteri per ml atau gram.
2) Jika cawan duplo dari pengeceran terendah terdapat jumlah
koloninya lebih kecil dari 25, hitung jumlah koloni yang ada pada
cawan dari setiap pengenceran, rerata jumlah koloni per cawan dan
kalikan dengan faktor pengencerannya untuk menetukan nilai Total
Plate Count (TPC). Nyatakan hasilnya sebagai jumlah bakteri per ml
atau gram (Tabel 1 nomor 3)
3) Jika hasil dari cawan duplo, cawan yang satu dengan 25 koloni
sampai dengan 250 koloni dan cawan yang lain lebih dari 250
koloni, hitung kedua cawan dalam penghitungan TPC (Tabel 1
nomor 7)
4) Jika hasil dari cawan duplo, cawan yang satu dengan koloni 25-250
dan cawan yang lain kurang dari 25 atau menghasilkan lebih dari
250 koloni, hitung keempat cawan dalam penghitungan TPC (tabel 1
nomor 8)
5) Jika kedua cawan dari satu pengeceran menghasilkan 25-250 koloni
hitung keempat cawan termasuk cawan yang kurang dari 25 atau
yang lebih dari 250 koloni dalam penghitungan TPC (tabel 1 nomor
9)
6) Jika jumlah koloni dari semua lebih dari 250 koloni :
i. Maka setiap dua cawan petri dengan pengenceran tertinggi
dibagi ke dalam 2,4, atau 8 sektor. Hitung jumlah koloni dalam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
satu bagian atau lebih, untuk mendapatkan jumlah koloni dalam
satu cawan petri, hitung rata-rata jumlah koloni dan kalikan
dengan faktor pembagi dan pengenceran.
ii. Jika 1/8 bagian cawan petri terdapat lebih dari 200 koloni maka
jumlah koloni yang didapat 8x200 = 1600, kemudian dikalikan
dengan faktor pengencer dan nyatakan hasilnya sebagai jumlah
bakteri perkiraan per ml atau gram lebih besar dari jumlah yang
didapat (lebih besar dari 1600xfaktor pengencer) (table 1 nomor
4)
7) Jika tidak koloni yang tumbuh dalam cawan petri, nyatakan jumlah
bakteri perkiraan lebih kecil dari satu dikalikan dengan faktor
pengencer terendah (<10) (Tabel 1 nomor 6)
8) Menghitung koloni merambat (spreader). Ada tiga macam perambat
pada koloni, yaitu :
i) Merupakan rantai yang tidak terpisah-pisah,
ii) perambat yang terjadi di antara dasar cawan petri dan perbenihan,
dan
iii) perambat yang terjadi pada pinggir atau permukaan perbenihan
Maka cara menghitungnya adalah sebagai berikut.
i. Apabila cawan yang disiapkan untuk contoh lebih banyak yang
ditumbuhi oleh spreader seperti pada butir pertama dan total
area yang melebihi 25% dan 50% pertumbuhannya dilaporkan
sebagai cawan spreader.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
ii. Apabila terjadi hanya satu perambatan seperti rantai, maka
koloni dianggap satu. Tetapi apabila satu atau lebih rantai yang
terbentuk dan berasal dari sumber yang terpisah-pisah, maka
tiap sumber dihitung sebagai satu koloni.
iii. Rerata jumlah koloni dari setiap pengenceran, dilaporkan
jumlahnya sebagai TPC (Tabel 1 nomor 5)
iv. Gabungkan perhitungan koloni dan perhitungan spreader untuk
menghitung TPC
v. Apabila butir kedua dan ketiga yang terjadi, sebaiknya
pemeriksaan diulang, karena koloni dalan keadaan sulit
dihitung.
Tabel I. Petunjuk penghitungan Total Plate Count (TPC)
NO 10-2 10-3 10-4TPC perml ataugram
Keterangan
(1) (2) (3) (4) (5) (6)
1∞∞ 175
208
16
17190.000
bila hanya satu pengenceranyang berada dalam batas yangsesuai, hitung jumlah reratadari pengenceran tersebut
2 ∞∞ 224225
2530
250.000
bila ada dua pengenceran yangberada dalam batas yang sesuai,hitung jumlah masing-masingdari pengenceran sebelummerata-ratakan jumlah yangsebenarnya
318
14
2
0
0
01.600*
Jumlah koloni kurang dari 25koloni pada pengenceranterendah, hitung jumlahnyadan kalikan dengan faktorpengencerannya dan beritanda*
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
NO 10-2 10-3 10-4TPC perml ataugram
Keterangan
(1) (2) (3) (4) (5) (6)
4∞∞ ∞∞ 523
487
5.100.000*
Jumlah koloni lebih dari 250koloni, hitung koloni yangdapat dihitung atau yangmewakili, beri tanda*
5
∞∞ 245
230
35
spreader
290.000
Bila ada dua pengencerandiantara jumlah koloni 25sampai dengan 250, tetapiada spreader, hitungjumlahnya dan kalikandengan faktor pengenceran,namun untuk spreader tidakdihitung.
60
0
0
0
0
0100*
Bila cawan tanpa koloni,jumlah TPC adalah kurangdari 1 kali pengenceranterendah yang digunakan danberi tanda *
7 ∞∞ 245
278
23
20260.000
Jumlah koloni 25 sampaidengan 250 dan yang lainlebih dari 250, hitung keduacawan petri, termasuk yanglebih dari 250, dan reratajumlahnya
8∞∞ 225
255
21
40270.000
Bila salah satu cawan denganjumlah 25 koloni sampaidengan 250 koloni dari tiappengenceran, hitung jumlahdari tiap pengencerantermasuk yang kurang dari 25koloni, lalu rerata jumlahyang sebenarnya
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
NO 10-2 10-3 10-4TPC perml ataugram
Keterangan
(1) (2) (3) (4) (5) (6)
9∞∞∞∞
220240260230
18483028
260.000
270.000
Bila hanya satu cawan yangmenyimpang dari setiappengenceran, hitung jumlah daritiap pengenceran termasuk yangkurang dari 25 koloni atau lebihdari 250 koloni, kemudian reratajumlah sebenarnya.
e. Cara menghitung dan membulatkan angka
Dalam melaporkan jumlah koloni atau jumlah koloni perkiraan hanya 2
angka penting yang digunakan, yaitu angka yang pertama dan kedua (di
mulai dari kiri), sedangkan angka ketiga diganti dengan 0, apabila kurang
dari 5 dan apabila 5 atau lebih dijadikan 1 yang ditambah pada angka yang
ke dua.
Contoh: 523.000 dilaporkan sebagai 520.000 (5.2 x 105),
85.700 dilaporkan sebagai 86.000 (8.6 x 104)
6. Uji identifikasi Escherichia coli
1. Uji pra-pengkayaan
Prosedur dilakukan sesuai dengan MA No.94/MIK/00. Secara aseptik
dipipet 10 ml cuplikan ke dalam wadah steril yang sesuai. Kemudian
ditambahkan 90 ml LB dan dihomogenkan hingga memperoleh
suspensi pengenceran 1:10
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
2. Pengkayaan
Secara aseptik dipipet 10 ml suspensi hasil homogenisasi contoh dan
diinokulasikan pada 90 ml ECB. Kemudian diinkubasi pada suhu 35-
37oC selama 18-24 jam.
3. Isolasi
Dari biakan pengkayaan diinokulasikan sengkelit pada permukaan
TBX dan diinkubasi dengan posisi lempeng terbalik pada suhu 35-
37oC selama 24-28 jam. Diamati koloni spesifik yang tubuh dengan
ciri-ciri bentuk bulat, diameter 2-3 mm, berwarna hijau dengan kilap
logam dan bintik biru kehijauan ditengahnya.
4. Identifikasi dan konfirmasi
Dua atau lebih koloni spesifik pada TBX diinokulasikan pada NA
miring, kemudian diinkubasi pada suhu 35-37oC selama 18-24 jam.
Dari biakan NA miring akan dilanjutkan dengan uji biokimia melalui
Uji IMVIC (Indol, Metil merah, Voges Proskauer, dan Sitrat) dan
pewarnaan Gram sebagai berikut :
a. Uji indol
Dari biakan NA miring diinokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam
Trypton Broth dan diinkubasikan pada suhu 35-37oC selama 18-24
jam. Setelah diinkubasi ditambahkan 1 ml pereaksi indol (Reagen
Kovacs) ke dalam masing-masing tabung dan dikocok beberapa
menit. Warna merah tua yang yang membentuk cincin pada
permukaan biakan menunjukkan reaksi indol positif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
b. Uji metil merah
Dari biakan NA miring diinokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam
MR-VP dan diinkubasikan pada suhu 35-37oC selama 48 jam.
Setelah diinkubasi tambahkan 5 tetes larutan metil merah dan
dikocok homogen selama beberapa menit. Warna kuning
menunjukkan reaksi negatif dan warna merah menunjukkan reaksi
positif
c. Uji Voges Proskauer
Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media MR-VP dan
diinkubasi pada suhu 35-37°C selam 48 jam. Setelah diinkubasi
tambahkan 12 tetes larutan alfa naftol dan 4 tetes larutan KOH
40%, dikocok kemudian didiamkan selama 2-4 jam. Jika warna
biakan menjadi merah muda hingga merah menyala menunjukkan
reaksi positif, warna tidak berubah menunjukkan reaksi negatif
d. Uji sitrat
Dari biakan NA miring diinokulasikan pada media Simmon’s
citrate agar lalu diinkubasikan pada suhu 35-37oC selama 24-48
jam. Warna biru menunjukkan reaksi positif, warna hijau
menunjukkan reaksi negatif.
7. Pengecatan Gram
Sediaan dibuat di atas kaca alas. Keringkan di udara dan fiksasikan
dengan panas. Warnai sediaan dengan larutan kristal violet (larutan gram A)
selama 1 menit. Cuci dengan air dan tiriskan. Bubuhkan larutan larutan lugol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
(gram iodine) selama 1 menit. Cuci dengan air dan tiriskan. Cuci (hilangkan
warna) dengan alkohol 95% selama 30 detik. Cuci dengan air, tiriskan dan
bubuhkan larutan safranin selama 10-30 detik. Cuci dengan air dan tiriskan.
Serap dengan kertas saring, keringkan dan dilakukan pengamatan dengan
menggunakan mikroskop pada perbesaran 1000 kali.
8. Interpretasi hasil
Escherichia coli merupakan bakteri gram negatif dan berbentuk batang.
Idenifikasi bakteri dilakukan dengan pengamatan menggunakan mikroskop
dengan uji sifat biokimia. Sampel dikatakan positif mengandung Escherichia
coli menurut MA PPOMN nomor 97/mik/00 bila menunjukkan hasil pada
reaksi biokimia IMVIC sebagai berikut :
Tabel II. Hasil uji IMVIC
(SNI, 1992)
F. Analisis Hasil
Analisis data dilakukan secara deskriptif eksploratif yaitu dengan
menganalisis hasil uji AKK dengan metode MA PPOMN nomor 96/mik/00,
analisis ALT dengan metode SNI 01-2897-1992, dan identifikasi E.coli dengan
metode MA PPOMN nomor 97/mik/00
Uji Indol Uji Metil MerahUji PogesProskauer
Uji Sitrat
+ + - -
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Kecenderungan masyarakat untuk back to nature menjadikan obat
tradisional sebagai pilihan pendamping atau alternatif dari obat sintetik. Hal ini
menjadikan jamu sebagai salah satu obat tradisional asli Indonesia menjadi
semakin diminati.
Sebagaimana diatur dalam Keputusan Menteri Kesehatan RI No :
661/Menkes/SK/VII/1994, bahwa persyaratan obat tradisional meliputi
keseragaman volume, angka kapang khamir, angka lempeng total, mikroba
patogen, aflatoksin, bahan tambahan cairan obat dalam seperti pengawet dan
pewarna, wadah dan peyimpanan. Angka kapang khamir tidak boleh lebih dari 103
dan lempeng total yang diperbolehkan adalah tidak lebih dari 104. Mikroba
patogen harus mempunyai nilai negatif. Di Yogyakarta ada salah satu produk jamu
cekok yang sangat diminati baik oleh warga kota Yogyakarta maupun konsumen
yang berasal dari luar kota Yogyakarta. Jamu cekok ini kebanyakan dikonsumsi
oleh anak-anak sehingga harus memenuhi persyaratan yang berlaku untuk
melindungi konsumen.
Uji yang dilakukan meliputi uji Angka Kapang Khamir (AKK), Uji
Angka Lempeng Total (ALT) dan uji identifikasi bakteri E.coli.
a. Pengambilan sampel
Penelitian ini merupakan penelitian non eksperimental dengan rancangan
penelitian deskriptif eksploratif. Sampel yang diambil merupakan sampel yang
diproduksi dan di jual oleh penjual jamu racik “X” di kota Yogyakarta. Pemilihan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
sampel ini berdasarkan produk jamu cekok penjual jamu racik “X” mempunyai
banyak peminat/konsumen dan merupakan produsen pembuat jamu cekok yang
terkenal di kota Yogyakarta. Penjual jamu racik “X” ini menjual 20 macam jenis
jamu racik, namun yang paling banyak diminati adalah jamu cekok. Konsumen
penjual jamu racik “X” tidak hanya berasal dari wilayah kota Yogyakarta tetapi
ada pula yang berasal dari luar kota bahkan luar pulau Jawa. Sampel yang diambil
hanya dari satu penjual jamu yaitu penjual jamu racik “X” dikarenakan jamu racik
“X” sudah lama dan sangat terkenal serta diminati banyak konsumen, sehingga
dianggap dapat mempresentasikan cara pembuatan jamu pada penjual jamu yang
lain.
Menurut Gay dan Diehl (1992) analisis penelitian deskriptif dapat
menggunakan jumlah sampel sebanyak 10% dari total populasi. Menurut survey
yang sudah peneliti lakukan di kota Yogyakarta terdapat lima penjual jamu racik
jamu cekok, sehingga dipilih satu sampel yang dianggap dapat mempresentasikan
pembuatan jamu cekok oleh penjual yang lain.
Pengambilan sampel dilakukan tiga kali selama tiga minggu berturut-
turut setiap pagi hari sekitar pukul 08.00 dimana pada jam tersebut ramai pembeli.
Pengambilan sampel menuju tempat dilakukannya uji menggunakan cool box agar
meminimalisir terjadinya kontaminasi selama dalam perjalanan (Lampiran 2)
b. Uji Angka Kapang Khamir (AKK)
Uji kapang/khamir merupakan salah satu syarat suatu produk obat
tradisional untuk melihat kualitas produk ditinjau dari segi cemaran mikrobianya.
Jumlah kapang khamir yang besar menunjukkan kemunduran mutu obat
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
tradisional. Kapang khamir akan berkembang biak bila tempat tumbuhnya cocok
untuk pertumbuhan. Kapang khamir dapat tumbuh pada kondisi kelembaban
tinggi dan lingkungan yang hangat. Jamu cekok setelah pembuatan langsung
disimpan pada wadah tertutup sehingga dapat menyebabkan timbulnya uap air.
Uap air yang timbul ini dapat meningkatkan kelembaban jamu cekok. Kondisi
penyimpanan yang lembab serta waktu penyimpanan selama hampir 24 jam dapat
menyebabkan pertumbuhan kapang khamir.
Uji kapang khamir mempunyai prinsip menumbuhkan kapang khamir
dari sampel jamu cekok pada media yang mempunyai nutrisi yang sesuai. Kapang
bersifat aerob yaitu membutuhkan oksigen untuk hidup sedangkan khamir bersifat
fakultatif yang berarti dapat hidup dengan atau tanpa oksigen. Suhu optimum
pertumbuhan kapang dan khamir adalah 25-30°C. Dalam penelitian ini digunakan
suhu inkubasi 25°C dan lama inkubasi 5 hari. Inkubasi dilakukan selama lima hari
dikarenakan pertumbuhan kapang khamir yang lebih lambat dibandingkan dengan
pertumbuhan bakteri. Bakteri memiliki struktur sel yang lebih sederhana, yaitu
materi genetik (DNA) yang tidak terstruktur dalam bentuk nukleus, struktur
eksternal sel (glikokaliks, flagela, fimbria, fili) , dinding sel (peptidoglikan) , dan
struktur internal sel (membran sitoplasma, sitoplama, area nukleus, ribososom,
mesosom dan inklusi). Sedangkan khamir memiliki morfologi tidak mempunyai
flagel dan ukurannya lebih besar dari sel bakteri dengan lebar 1-5mm dan panjang
berkisar 5-30mm. Pada kapang terdapat miselium dan spora, pembentukan spora
memerlukan watu beberapa hari dalam kondisi yang optimal. Karena bakteri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
memiliki struktur sel yang lebih sederhana, sehingga dapat tumbuh lebih cepat
dibanding kapang khamir yang struktur selnya lebih rumit (Radji, 2009)
Media yang digunakan adalah PDA (Potato Dextrose Agar) yang
ditambah dengan kloramfenikol Penggunaan PDA ini berdasarkan kandungan
nutrisi pada PDA yang meliputi ekstrak kentang, Glukosa, dan Agar yang
merupakan nutrien yang baik untuk pertumbuhan kapang khamir. PDA adalah
media yang direkomendasikan untuk mendeteksi, menumbuhkan dan menghitung
kapang khamir pada produk makanan atau minuman (Oxoid 9th edition, 2006).
Fungsi penambahan kloramfenikol adalah sebagai antibakteri sehingga
diharapkan koloni yang tumbuh pada media PDA adalah kapang khamir.
Kloramfenikol digunakan karena kloramfenikol merupakan antibiotik spektrum
luas sehingga banyak bakteri dapat dihambat pertumbuhannya. Kloramfenikol
bekerja dengan cara mengikat sub unit ribosom 50s dan menghambat
pembentukan ikatan peptida bakteri dan sel prokariotik lainnya (Fardiaz,1992).
Ikatan peptida berperan untuk pembentukan dinding sel bakteri. Apabila ikatan
peptida tidak terbentuk, maka pembentukan dinding sel akan terganggu dan sel
akan lisis. Kloramfenikol tidak akan menghambat pertumbuhan kapang khamir
karena kapang khamir adalah sel eukariotik.
Pada uji AKK dilakukan pula homogenisasi sampel yang bertujuan untuk
meratakan distribusi kapang khamir. Dalam uji AKK ini dilakukan pembuatan seri
pengenceran yang bertujuan untuk mendapatkan koloni yang terpisah dan
jumlahnya diantara 10-150 koloni serta untuk memudahkan perhitungan hasil.
Jika tidak dilakukan pengenceran maka koloni yang tumbuh akan saling
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
bertumpuk sehingga susah diamati dan dilakukan perhitungan. Pengenceran
dilakukan hingga 10-5, karena pada tingkat pengenceran kelima sudah didapatkan
koloni terpisah. Uji AKK ini menggunakan metode pour plate agar sampel yang
ditanam dapat tersebar merata pada cawan petri dan lebih memudahkan dalam
melakukan pengamatan serta perhitungan. Untuk mengetahui sterilitas dari media
dilakukan uji sterilitas media dengan cara menuangkan media ke dalam cawan
petri dan dibiarkan memadat. Selain dilakukan uji sterilitas media dilakukan pula
uji pengencer atau kontrol pelarut dengan menuang BPW dan media dalam cawan
petri dan dibiarkan memadat.Uji sterilitas media dan pengencer ini bertujuan
untuk melihat apakah cara kerja yang dilakukan aseptis atau tidak sehingga dapat
dipastikan kapang khamir yang tumbuh benar-benar berasal dari sampel bukan
kontaminan dari cara kerja.
Seri pengenceran dilakukan hingga 10-5. Setelah sampel diencerkan dan
ditanam pada media PDA, sampel diinkubasi terbalik selam 5 hari pada suhu 20-
25°C dan diamati pertumbuhan koloni setiap harinya hingga hari kelima. Inkubasi
terbalik ini bertujuan agar uap air yang terbentuk selama masa inkubasi tidak
menetes ke media dan mempengaruhi pertumbuhan mikroba.
Tabel III. Angka Kapang Khamir (AKK) Jamu Cekok Waktu 5 hariInkubasi
PengenceranJumlah koloni
sampel 1Jumlah koloni
sampel 2Jumlah koloni
sampel 3Kontrol media - - -10-1 184 ∞ ∞10-2 88 222 20610-3 42 172 5910-4 18 50 1410-5 7 6 7
Keterangan :
Memenuhi syarat untuk dihitung
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
Nilai AKK dihitung dari cawan petri yang memiliki 10-150 koloni.
Berdasarkan tabel III, maka AKK dari tiap sampel dapat ditentukan (Tabel IV) :
Tabel IV. Angka Kapang Khamir (AKK) dari ke-3 sampel jamucekok
SampelAKK
(CFU/mlsampel)
1 2,5x104
2 5,0x104
3 10,0x104
Berdasarkan data yang diperoleh (tabel IV) dari ketiga sampel jamu
cekok yang diambil, ketiganya melebihi ambang batas yang sudah ditetapkan oleh
Keputusan Menteri Kesehatan RI No : 661/Menkes/SK/VII/1994 dimana AKK
yang diperbolehkan tidak melebihi 103. Hal ini mungkin disebabkan karena
bahan atau air yang dipergunakan memiliki kualitas yang kurang baik, proses
pembuatan jamu yang kurang memperhatikan atau bahan yang digunakan untuk
pembuatan jamu cekok sudah disimpan cukup lama pada kondisi yang lembab.
Kondisi yang lembab dan lingkungan yang hangat merupakan tempat
pertumbuhan yang baik bagi kapang dan khamir (Radji, 2009). Nilai AKK yang
melebihi 103 disebabkan karena beberapa faktor. Faktor pertama, bahan baku yang
digunakan dalam pembuatan dibeli dalam kurun waktu 3 bulan sekali. Bahan baku
disimpan pada keranjang yang diletakkan pada ruang terbuka dan didekat kandang
burung. Kondisi ini dapat menyebabkan kontaminasi kotoran serta debu yang
dapat menimbulkan tumbuhnya cemaran kapang khamir. Faktor kedua yaitu
penyimpanan jamu setelah pembuatan. Jamu cekok setelah pembuatan langsung
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
disimpan pada wadah tertutup yang dapat menimbulkan uap air. Uap air yang
timbul menyebabkan kelembaban pada wadah meningkat. Kelembaban yang
tinggi dapat menjadi tempat pertumbuhan yang baik bagi kapang khamir.
c. Uji Angka Lempeng Total (ALT)
Uji Angka Lempeng Total (ALT) adalah metode yang digunakan untuk
menetapkan angka bakteri aerob mesofilik yang terdapat pada sediaan obat
tradisional. Uji ALT dilakukan dengan melihat pertumbuhan bakteri aerob
mesofilik setelah diinokulasikan pada media lempeng agar dengan cara pour plate
dan diinkubasikan pada suhu 35°C selama 48 jam. Dalam uji ALT ini dilakukan
homogenisasi sampel yang bertujuan untuk memperoleh distribusi bakteri sebaik
mungkin dalam sampel yang ditetapkan (Badan Standar Nasional, 1992). Selain
untuk mendapatkan sebaran distribusi bakteri yang baik homogenisasi sampel
juga dilakukan untuk menggiatkan kembali sel-sel mikrobia yang mungkin
terganggu kelangsungan hidupnya karena kondisi yang kurang menguntungkan
dalam sampel. Homogenisasi sampel dilakukan dengan menggunakan pelarut
Buffered Pepton Water (BPW). BPW mengandung pepton yang merupakan suatu
protein. Komponen utama dari protein adalah nitrogen (N2) yang dibutuhkan
bakteri untuk mensintesis protein. BPW juga mengandung natrium klorida,
disodium hidrogen fosfat dan potasium hidrogen fosfat yang berfungsi sebagai
mineral yang dibutuhkan untuk kelangsungan hidup bakteri. Selain itu, BPW juga
merupakan suatu buffer yang menyediakan pH optimum (Ph6,5 sampai 7,5) untuk
pertumbuhan bakteri (Tarigan, 1988). Pada uji ALT dilakukan pula pembuatan
seri pengeceran hingga 10-5. Pengenceran dilakukan agar mendapatkan koloni
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
terpisah dengan jumlah 25 sampai dengan 250 koloni untuk mempermudah
perhitungan. Apabila tidak dilakukan pengenceran maka koloni bakteri yang
tumbuh akan saling bertumpuk dan sangat pekat karena konsentrasinya tidak
diketahui sehingga akan sulit dilakukan pengamatan serta perhitungan koloni
(Tarigan, 1988). Media yang digunakan dalam uji ALT ini adalah Plate Count
agar (PCA) yang mempunyai kandungan ekstrak yeast, glukosa dan agar yang
berguna untuk nutrisi bagi pertumbuhan bakteri. Media yang digunakan terlebih
dahulu disterilkan dengan pemanasan basah menggunakan autoklaf pada suhu
121°C selama 20 menit agar tidak terjadi kontaminan yang berasal dari media
yang digunakan. Seri pengenceran sampel jamu cekok kemudian di tanam pada
media PCA secara pour plate dan diinkubasikan selama 24-48jam pada suhu 35-
37°C. Inkubasi dilakukan secara terbalik agar uap air yang terbentuk selama masa
inkubasi tidak menetes ke media karena akan mempersulit pengamatan.
Dilakukan pula kontrol media dengan cara media PCA yang digunakan dituang
kedalam cawan petri dan diinkubasikan secara terbalik pada suhu 35-37°C selama
24-48 jam untuk melihat apakah cara kerja sudah aseptis atau belum.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
Tabel V. Angka Lempeng Total (ALT) Jamu Cekok Waktu Inkubasi 48 jam
Pengenceran
Jumlahkolonisampel
1
Jumlahkoloni
sampel 1Duplo
Jumlahkoloni
sampel 2
Jumlahkoloni
sampel 2Duplo
Jumlahkoloni
sampel 3
Jumlahkolonisampel3 Duplo
Kontrolmedia
- - - - - -
10-1 ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞10-2 ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞10-3 ∞ ∞ ∞ ∞ ∞ ∞10-4 380 303 306 330 276 27210-5 328* 212* 170* 156* 224* 252
Keterangan : * memenuhi syarat untuk dihitung
Berdasarkan data tabel V dapat dilihat data yang memenuhi syarat untuk
dihitung. Nilai AKK dihitung mengikuti prosedur SNI01-2879-1992 tentang uji
ALT pada obat tradisional.
Tabel VI. Angka Lempeng Total (ALT) dari ke-3 sampel jamu cekok
SampelALT
(CFU/ml sampel)1 2,7x107
2 1,6x107
3 2,4x107
Data ALT tabel VImenunjukkan bahwa ketiga sampel jamu cekok
melebihi ambang batas yang diperbolehkan dalam Keputusan Menteri Kesehatan
RI No : 661/Menkes/SK/VII/1994. Nilai ALT yang diperbolehkan tidak melebihi
104. Hal ini dikarenakan pada saat proses pembuatan yang kurang memperhatikan
kebersihan, kualitas air yang digunakan kurang baik, proses pembuatan tanpa
pemanasan sampai mendidih. Proses pembuatan jamu yang dilakukan pada pukul
09.00 untuk dijual keesokan harinya, kemungkinan dapat terjadi kontaminasi
selama penyimpanan. Jamu disimpan pada ruangan yang kurang higienis, seperti
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
ada banyaknya debu, dan wadah penyimpanan yang lembab. Penyimpanan selama
kurang lebih 24 jam dapat menjadi masa inkubasi untuk petumbuhan mikrobia
kontaminan. Dalam pembuatannya jamu cekok ini juga tidak dipanaskan hingga
mendidih, sehingga memungkinkan segala kontaminan mikroba dapat tumbuh
dengan baik. Pemanasan tidak dilakukan sampai mendidih karena menurut
penjual apabila sampai mendidih dikhawatirkan khasiat dari masih-masing bahan
akan hilang. Menurut Menkokesra (2013) pada umumnya mikrobia akan mati
dengan pemanasan pada suhu 70°C.
d. Uji identifikasi Escherichia coli
Uji identifikasi E.coli bertujuan untuk mengetahui apakah dalam sampel
jamu cekok yang digunakan mengandung cemaran bakteri E.coli atau tidak,
karena menurut observasi yang sudah peneliti lakukan pada bulan September
2013 pengolahan produksi jamu cekok yang dijual oleh penjual jamu racik “X”
kurang terjamin kebersihannya selama proses pembuatannya serta
penyimpanannya yang terlalu lama.
1. Uji Pengkayaan dalam Media Escherichia coli Broth
Uji pengkayaan merupakan uji yang digunakan untuk menumbuhkan
mikroba dari sampel jamu cekok supaya dapat tumbuh optimal dalam media
pengkaya, yaitu Escherichia coli Broth (ECB). ECB adalah media selektif untuk
mengidentifikasi E.coli baik pada produk makanan maupun minuman. Hasil
positif akan ditunjukkan dengan terbentuknya gas yang terjebak pada tabung
durham yang menandakan bahwa di dalam sampel yang diuji mengandung bakteri
E.coli. Pada uji ini dilakukan pula kontrol positif yang berisi biakan murni E.coli
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
yang digunakan sebagai pembanding apakah reaksi dan karakteristiknya sama
dengan sampel, apabila sama maka hasilnya adalah positif. Selain sebagai
pembanding, kontrol positif juga berfungsi untuk mencegah terjadinya bias.
Sampel kemudian diinkubasikan pada suhu 44°C selama 24 jam. Suhu 44°C
adalah suhu pertumbuhan optimum bagi E.coli.
Gambar 1. Uji dalam Media Escherichia coli Broth
Keterangan : K : kontrol positif ; P :sampel uji
Tanda panah menunjukkan adanya gas yang terjebak padatabung Durham
Berdasarkan data yang diperoleh (gambar 1), semua sampel positif
menunjukkan gas yang terjebak pada pada tabung durham. Gelembung gas
terbentuk karena bakteri dalam sampel mampu memfermentasikan laktosa dan
dapat memproduksi gas. Laktosa yang merupakan polisakarida harus dipecah
terlebih dahulu agar dapat masuk ke dalam sel bakteri. Laktosa akan dipecah oleh
enzim β-galaktose menjadi glukosa dan galaktosa, glukosa selanjutnya akan
dibawa masuk ke dalam sel bakteri dengan jalur transport aktif. Glukosa pada
mikroba areob akan akan diproses menjadi asam piruvat melalui jalur glikolisis.
Asam piruvat ini kemudian akan melalui siklus krebs dan menghasilkan asam-
asam campuran dan gas CO2. Sedangkan pada mikroba fakultatif anaerob, glukosa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
akan dimetabolisme dan menghasilkan asam-asam campuran serta O2 (Atlas,
1997).Setelah didapatkan hasil positif pada media ECB, maka selanjutkan
dilakukan isolasi E.coli untuk lebih menegaskan hasil.
2. Isolasi E.coli pada sampel jamu cekok dalam media Trypton BileX-Glucoronide (TBX)
Tujuan isolasi ini adalah untuk menegaskan bakteri yang tumbuh selama
uji pengkayaan adalah E.coli. Pada uji isolasi E.coli digunakan media yang
spesifik terhadap pertumbuhan E.coli yaitu media TBX. Media TBX mengandung
χ-β-D-glucoronide yang merupakan agen kromofor. Dalam E.coli terdapat banyak
enzim glukoronidase yang akan terdekteksi oleh χ-β-D-glucoronide. E.coli akan
menyerap χ-β-D-glucoronide sehingga akan terjadi interaksi antara χ-β-D-
glucoronide dengan enzim glukoronidase. Ketika E.coli memfermentasikan gula
maka χ-β-D-glucoronide akan dilepaskan keluar sel sehingga menyebabkan koloni
E.coli yang tumbuh akan berwarna hijau kebiruan (Bridson, 2006).
Uji isolasi dilakukan dengan cara 1 sengkelit dari hasil uji pengkayaan
diinokulasikan pada media TBX dengan cara streak. Cara streak plate dipilih agar
mendapatkan koloni terpisah, koloni terpisah ini akan digunakan untuk uji
selanjutnya. Bila koloni yang didapatkan tidak terpisah maka akan dapat
mengacaukan hasil. Sesudah diinokulasikan maka diinkubasikan pada suhu 37°C
selama 24 jam. Kontrol positif digunakan sebagai pembanding hasil dari biakan
sampel jamu cekok. Kontrol positif yang digunakan adalah biakan murni E.coli
ATCC 25922. Apabila positif maka biakan pada sampel jamu cekok akan
menunjukkan reaksi dan warna yang sama dengan kontrol positif
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Gambar 2. Hasil Isolasi E.coli pada sampel jamu cekok dalam media TryptonBile X-Glucoronide (TBX)
Keterangan : tanda panah merah menunjukan koloni terpisah E.coli yangberwarna hijau kebiruan
Dari data (Gambar 2) didapatkan ketiga sampel positif mengandung
E.coli yang ditunjukkan dengan adanya koloni berwarna hijau biru. Maka
selanjutnya dilakukan uji identifikasi dan konfirmasi keberadaan E.coli pada
sampel jamu cekok.
3. Identifikasi dan konfirmasi keberadaan E.coli pada sampel jamu cekok
Uji konfirmasi bertujuan untuk memastikan dan menegaskan sampel
jamu cekok benar mengandung E.coli. Tahap identifikasi merupakan serangkaian
uji yang berguna untuk mengidentifikasi apakah sampel benar-benar mengandung
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
E.coli. Uji dilakukan dengan cara mengambil satu sengkelit mikroba yang tumbuh
pada media TBX (yang berwarna hijau kebiruan) dari ketiga sampel jamu cekok.
Tahap uji identifikasi meliputi pengujian biokimia, yaitu uji fermentasi gula-gula
dan uji SIM, dan uji IMVIC.
Uji identifikasi dan konfirmasi menggunakan kontrol positif E.coli ATCC
25922. E.coli ATCC 25922 merupakan salah satu strain murni bakteri E.coli. Pada
umumnya ada tiga jenis strain murni E.coli yang sering digunakan dalam
penelitian yaitu E.coli ATCC 25922, E.coli ATCC 25922D-5, dan E.coli ATCC
700927. Ketiga strain E.coli ini dibedakan berdasarkan struktur DNA, serotype
dan antigen. E.coli ATCC 25922D-5 merupakan modifikasi dari strain E.coli
ATCC 25922. E.coli ATCC 25922 dan E.coli ATCC 25922D-5 biasa digunakan
untuk pengujian pada makanan, minuman, dan antibiotik. Sedangkan E.coli
ATCC 700927 digunakan untuk pengujian antibiotik dan penelitian Enterobacter.
E.coli ATCC 29522 memiliki karakteristik bakteri gram negatif, patogen, bersifat
aerob, mempunyai antigen O, dan negatif preseptrol (ATCC, 2014).
a. Uji biokimia
Tujuan dilakukannya uji biokimia adalah untuk menegaskan keberadaan
E.coli dalam sampel jamu cekok. Setelah dilakukan tahap isolasi pada media
Tryptone Bile X-Glucoronide (TBX), keberadaan positif E.coli ditunjukkan
dengan koloni yang berwarna hijau kebiruan.
Pengujian biokimia dilakukan dengan uji fermentasi gula-gula yang
terdiri dari beberapa jenis gula yaitu glukosa, laktosa, manitol, maltosa, dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
sukrosa. Tujuan uji biokimia adalah untuk melihat apakah bakteri yang terdapat
pada sampel jamu cekok memiliki kemampuan memfermentasikan jenis gula-gula
spesifik yang dapat mencerminkan sifat bakteri tersebut sehingga dapat digunakan
sebagai salah satu cara untuk menegaskan keberadaan bakteri (Soemarno, 2000).
Uji biokimia dilakukan dengan menanam satu sengkelit dari media TBX dan
diinokulasikan ke dalam tabung yang sudah berisi gula-gula, lalu diinkubasikan
selama 24 jam pada suhu 37°C.
Bakteri E.coli adalah bakteri yang mampu menguraikan gula-gula
spesifik seperti glukosa, laktosa, manitol, maltosa, dan sukrosa agar dapat
ditranspor ke dalam sel (Hotl dkk, 2000). Apabila bakteri positif
memfermentasikan gula-gula dalam uji biokimia maka akan terjadi perubahan
warna dari merah ke kuning. Perubahan warna disebabkan adanya indikator
Phenol red. Indikator Phenol red berwarna merah dan akan berubah warna
menjadi kuning apabila terjadi penurunan pH menjadi lebih asam. Kondisi asam
dihasilkan dari proses fermentasi gula oleh bakteri yang menghasilkan asam
piruvat dan asam laktat yang akan menyebabkan terjadinya penurunan pH.
Penurunan pH akan menyebabkan suasana menjadi lebih asam sehingga dengan
kondisi asam warna indikator akan berubah menjadi kuning. Bakteri E.coli adalah
bakteri yang mampu menghasilkan asam piruvat dan laktat dalam proses
penguraian gula-gula, sehingga uji biokimia dapat digunakan sebagai penegasan
karakteristik E.coli (Soemarno, 2000).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
Gambar 3. Hasil uji fermentasi gula-gula sampel jamu cekok
Keterangan :Larutan gula-gula : 1(glukosa, 2 (laktosa), 3 (Manitol), 4 (Maltosa), 5 (Sukrosa).K : Kontrol positif (biakan murni E.coli ATCC 25922)S : Warna merah larutan gula-gula sebelum diinkubasi
Data pada gambar 3 menunjukkan bahwa ketiga sampel mengalami
perubahan warna dari merah menjadi kuning. Perubahan warna dari indikator
tersebut menandakan bakteri uji mampi menguraikan gula-gula. Hasil uji
fermentasi gula-gula akan dilanjutkan dengan uji SIM untuk melengkapi data
identitas bakteri.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
b. Uji SIM
Uji SIM merupakan uji identifikasi E.coli dengan menggunakan tiga
indikator yaitu, pembentukan sulfur (H2S), pembentukan Indol dari hasil
peruraian asam amino, dan pengamatan pergerakan pertumbuhan bakteri dalam
media tabung. Media yang digunakan adalah media SIM yang memiliki
komposisi sebagai berikut : (1) Pancreatic Digest of Casein, (2) Peptic Digest of
Animal Tissue, (3) Ferrous Ammonium Sulfate, (4) Sodium Thiosulfate, (5)
Nutrient Agar. Komposisi media SIM tersebut memungkinkan untuk dilakukan
tiga pengujian sekaligus dalam satu media. Kandungan Ferrous Ammonium
Sulfate dan Sodium Thiosulfate digumakan untuk uji H2S, kandungan Nutrien
Agar (NA) dapat digunakan untuk uji motilitas sedangkan uji Indol perlu
penambahan reagen kovacs (Finegold dan Baron, 1996).
Uji sulfur bertujuan untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam
menguraikan asam amino menjadi sulfur (H2S). H2S dihasilkan oleh beberapa
jenis mikroba melalui pemecahan asam amino yang mengandung unsur belerang
(S) seperti lisin dan mentionin. H2S dapat diproduksi melalui reduksi senyawa-
senyawa belerang anorganik seperti tiosulfat, sulfit, atau sulfat. Hasil peruraian
H2S dapat diamati dengan penambahan garam-garam logam berat kedalam
medium. Hasil positif terbentuknya sulfur adalah adanya endapan berwarna hitam.
Hasil negatif pada uji sulfur adalah tidak terbentuknya endapan hitam. Endapan
hitam tidak terbentuk karena bakteri tidak mampu menghasilkan sulfur
(Nugraheni, 2010). Menurut Holt dkk (2000), bakteri E.coli tidak mampu
menghasilkan residu sulfur dalam proses peruraian asam amino. Jika bakteri
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
mampu menghasilkan sulfur maka sulfur tersebut akan berinteraksi dengan
Sodium Thiosulfat membentuk kompleks Ferrous Thiosulfate berupa logam
berwarna hitam pada permukaan media SIM. Reaksi pembentukan kompleks
Ferrous Sulfate ini dijadikan sebagai indikator kemampuan bakteri dalam
menghasilkan sulfur sebagai hasil proses metabolismenya (Finegold dan Baron,
1996).
Gambar 4. Hasil Uji Sulfur sampel jamu cekokKeterangan :K : kontrol positif ; P : sampel jamu cekok
Berdasarkan data (gambar 4) dari ketiga sampel jamu cekok tidak
menunjukkan pembentukan sulfur. Hasil dibandingkan kontrol yang juga tidak
ada pembentukan sulfur. Hasil dari uji ini tidak dapat digunakan sebagai acuan
untuk menyatakan bakteri yang diuji adalah E.coli. oleh karena itu, pengujian
dilanjutkan dengan uji motilitas dan indol.
Uji motilitas adalah metode yang digunakan untuk mengidentifikasi
E.coli terhadap bakteri lainnya berdasarkan penyebaran koloni karena E.coli
memiliki kemampuan bergerak (motil) dalam media SIM. Adanya kandungan NA
semisolid dalam media SIM memungkinkan bakteri yang memiliki flagel
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
melakukan pergerakan dalam media tersebut. E.coli memiliki karakteristik
mempunyai flagel di seluruh permukaan sel (peritrik) sebagai alat gerak dalam
habitatnya. Apabila dalam media terdapat pertumbuhan bakteri yang menyebar,
maka dinyatakan bakteri yang diidentifikasi tersebut adalah golongan
Enterobacter termasuk E.coli (Holt dkk, 2000).
Gambar 5. Hasil Uji Motilitas Sampel Jamu Cekok pada Media SIMKeterangan:K: kontrol positifP: sampel jamu cekokTanda panah merah menunjukkan adanya pertumbuhan koloni bakteri yangmenyebar
Hasil uji yang diperoleh yaitu baik sampel 1, 2, dan 3 mengalami kekeruhan
dan hanya pada sampel 1 dan 2 yang terlihat adanya pertumbuhan koloni yang
menyebar dibandingkan dengan kotrol positif E.coli ATCC 25922. Hasil uji ini
digunakan selanjutnya untuk uji indol.
c. Uji IMVIC (Indol, Metil Merah, Voges Prokaeur, Sitrat)
Uji IMVIC merupakan tahap uji identifikasi dimana hasil biakan dari
media TBX yang sudah ditanam di media NA diambil satu sengkelit dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
dilakukan uji yang meliputi uji metil red, uji indol, uji sitrat dan uji voges
proskaeur.
1. Uji Indol
Uji indol menggunakan media Sulfur Indol Motility (SIM) dan
penambahan reagen kovacs. Hasil dinyatakan positif jika terbentuk warna
merah pada permukaan media. Reagen kovaks mengandung amil
alkohol, dengan adanya indol maka amil alkohol akan berubah warna
menjadi merah tua. E.coli adalah bakteri yang memiliki enzim
triptofanase sehingga dapat memecah asama amino triptofan dan amonia
sebagai sumber energi (Fardiaz, 1993).
Asam amino merupakan komponen protein yang secara umum
terdapat dalam bakteri karena penguraian protein sebagai sumber energi.
E.coli akan menguraikan triptofan sebagai sumber energi. Enzim
triptofanase yang dimiliki oleh bakteri E.coli mampu mengkatalis
peruraian gugus indol dari triptofan. Pembentukan indol oleh E.coli dapat
diketahui apabila menumbuhkan bakteri pada media yang kaya triptofan,
oleh sebab itu digunakan media SIM yang kaya akan triptofan.
Penumpukan indol dalam media dapat diketahui dengan
penambahan reagen kovaks yang mengandung para-dimetil
aminobenzaldehide. Reagen pada media SIM (khususnya kandungan
triptofan) akan bereaksi dengan indol membentuk warna merah yang
tidak larut dalam air pada permukaan medium.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
Gambar 6. Hasil Uji Indol Sampel Jamu Cekok pada Media SIM
Keterangan : Tanda panah biru menunjukkan warna merah yang terbentukdi permukaan media
Berdasarkan data yang diperoleh (gambar 6), semua sampel
menunjukkan hasil positif yang ditandai dengan terbentunya warna
merah muda pada permukaan medium setelah ditetesi reagen kovacs.
Sehinga dapat dinyatakan bawa ketiga sampel bereaksi postif terhadap
indol yang berarti bakteri dalam sampel mampu menghasilkan indol dari
peruraian asam amino triptofan.
2. Uji Metil merah
Uji metil merah bertujuan untuk mengetahui adanya fermentasi
asam campuran. Beberapa jenis bakteri mampu memfermentasikan
glukosa dan menghasilkan berbagai produk yang bersifat asam sehingga
dapat menurunkan pH media pertumbuhan. Pada uji ini ditambahkan
indikator Methyl red yang berfungsi menunjukkan adanya perubahan pH
menjadi asam dengan ditandai adanya perubahan warna media menjadi
merah. Indikator Methyl red akan berwarna merah pada ph 4,4 dan
berwarna kuning pada pH 6,2. Hasil positif uji metil merah adalah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
adanya perubahan warna media menjadi merah atau merah muda.
Perubahan warna ini menunjukkan bakteri mampu memfermentasikan
asam campuran. Hasil negatif uji metil merah adalah tidak terjadinya
perubahan warna. Hal ini menunjukkan bakteri tidak mampu
memfermentasikan asam campuran.
Gambar 7. Hasil Uji Metil Merah Sampel Jamu Cekok
Data pada gambar 7 menunjukkan sampel positif mengalami
perubahan warna media menjadi merah setelah penambahan reagen
methyl red. Sehingga dapat dinyatakan bahwa bakteri yang terkandung
dalam sampel jamu cekok mampu memfermentasi asam campuran.
3. Uji Voges Proskaeur
Uji ini digunakan untuk mengidentifiksai bakteri yang
menghasilkan 2,3-butanadiol. Bakteri yang dapat melakukan ini antara
lain Enterobacter, Serratia, Erwinia (Hadioetomo, 1993). Uji Voges
Proskauer merupakan uji tidak langsung untuk mengetahui adanya 2,3-
butanadiol, tetapi karena adanya setoin (asetilmetilkarbinol) yang
merupakan senyawa pendahulu 2,3-butanadiol dan selalu didapatkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
serentak, maka uji Voges Proskaeur ini dapat digunakan sebagai penentu
adanya 2,3-butanadiol.
Apabila bakteri mampu memfermentasikan karbohidrat menjadi
2,3-butanadiol sebagai produk utama maka akan terjadi penumpukkan
bahan tersebut di dalam media pertumbuhan. Oleh karena itu
ditambahkan 40% KOH dan 5% latutan alfanaftol yang dapat menetukan
adanya asetoin yang merupakan perkusor 2,3-butanadiol. Adanya asetoin
akan ditunjukkan oleh perubahan warna media menjadi merah muda
karean adanya penambahan KOH, dan warna akan semakin jelas oleh
penambahan alfanaftol. Hasil positif ditandai dengan terjadinya
perubahan warna menjadi merah, hal ini berarti bakteri mampu
menghasilkan 2,3-butanadiol. Hasil negatif ditandai dengan tidak adanya
perubahan warna.
Gambar 8. Hasil Uji Voges Proskaeur Sampel Jamu Cekok
Berdasarkan data yang diperoleh (gambar 8), sampel tidak
mengalami perubahan warna. Hasil uji pada kultur murni E.coli ATCC
25922 yang berfungsi sebagai kontrol positif juga tidak mengalami
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
perubahan warna. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri yang terkandung
dalam sampel jamu cekok memfermentasikan karbohidrat namun tidak
melalui jalur 2,3-butanadiol, melainkan lewat jalur asam campuran
seperti hasil uji pada metil merah.
4. Uji sitrat
Tujuan uji sitrat adalah mengetahui pengunaan sitrat sebagai
satu-satunya sumber karbon dan energi oleh bakteri. Bakteri E.coli dapat
mengunakan asetat sebagai sumber karbon, tapi tidak dapat mengunakan
sitrat.
Media yang digunakan adalah Simmon’s Citrate Agar yang
merupakan medium sintetik dengan Na sitrat yang berfungsi sebagai
satu-satunya sumber karbon, NH4 sebagai sumber N dan Brom Thymol
Blue sebagai indikator pH. Apabila bakteri menggunakan sitrat sebgai
satu-satunya sumber karbon maka akan menghilangkan asam dari
medium biakan sehingga terjadi peningkatan pH dan akan terjadi
perubahan warna dari hijau menjadi biru (Lay, 1994). Peningkatan pH
terjadi karena kemampuan bakteri dalam menghasilkan asam piruvat dan
CO2 dalam proses metabolisme. Asam piruvat dan CO2 akan berinteraksi
dengan NA sitrat menjadi NA karbonat. Pembentukan NA karbonat akan
menyebabkan perubahan pH menjadi lebih basa sehinga menyebabkan
indikator Brom Thymol Blue berubah warna dari hijau menjadi biru
(Lenette, 1995). Pertumbuhan bakteri yang menggunakan sitrat sebagai
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
sumber karbon dapat dilihat dari adanya kekeruhan dan perubahan warna
dari media.
Hasil uji positif akan ditunjukkan dengan adanya kekeruhan dan
perubahan warna dari hijau menjadi biru sedangkan bila hasilnya negatif
maka tidak akan terjadi kekeruhan dan tidak ada perubahan warna (warna
tetap hijau) (Supardi dan Sukamto, 1999).
Gambar 9. Hasil Uji Sitrat Sampel Jamu CekokKeterangan : tanda panah merah menunjukkan warna media tetap hijau
Hasil uji sitrat pada ketiga sampel tidak menunjukkan terjadinya
perubahan warna. Hal ini berarti bakteri dalam sampel uji tidak mampu
tumbuh dan tidak ammpu menghilangkan asam-asam dalam medium uji.
Bateri dalam sampel jamu cekok juga tidak menggukan sitrat sebagai
sumber karbon dan energi (Gambar 9).
d. Pengecatan Gram
Tujuan pengecatan gram adalah untuk membedakan sifat bakteri antara
bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Pengecatan ini dilakukan dengan
pulasan bakteri. Zat warna yang digunakan ada 4 macam yaitu : (1) larutan gram
A yang berisi larutan kristal violet yang berfungsi sebagai cat utama, (2) larutan
gram B yang berisi iodine yang berfungsi sebagai penguat cat utama, (3) larutan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
gram C berisi alkohol 70% yang berfungsi sebagai larutan peluntur, (4) larutan
gram D yang berisi safranin berfungsi sebagai cat lawan.
Pada bakteri gram positif hasilnya akan berwarna ungu karena kompleks
zat warna kristal violet-iodium tetap dipertahankan meskipun diberi larutan
peluntur. Sedangkan bakteri gram negatif hasilnya akan berwarna merah karena
kompleks zat warna kristal violet-iodium larut sewaktu pemberian larutan gram C.
Penambahan larutan gram D akan memberikan warna merah setelah pengecatan.
Perbedaan warna ini disebabkan karena perbedaan struktur dinding sel antara
bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Bakteri gram positif dinding selnya
lebih banyak mengandung peptidoglikan dibanding dengan bakteri gram negatif.
Sedangkan dinding sel bakteri gram negatif banyak mengandung lipopolisakarida.
Lipida yang cukup tinggi dibandingkan sel bakteri gram positif. Lipida akan larut
dalam larutan gram C yang berisi alkohol dan aseton, sehingga pori-pori dinding
sel membesar dan meningkatkan daya larut kompleks violet-iodium pada dinding
sel bakteri gram negatif, sedangkan pada bakteri gram positif akan terbentuk
persenyawaan kompleks kristal violet-iodium ribonukleat yang tidak larut dalam
larutan gram C. Persenyawaan kompleks kristal violet-iodium ribonukleat ini
tidak terbentuk pada bakteri gram negatif. Hal ini disebabkan karena adanya
perbedaan kandungan asam ribonukleat antara bakteri gram positif dan bakteri
gram negatif (Radji, 2009)
Penambahan larutan gram D yang berisi safranin pada bakteri gram
positif tidak menyebabkan warna merah karena kompleks violet-iodium tetap
terikat pada dinding sel. Pada bakteri gram negatif penambahan safranin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
menyebabkan warna sel menjadi merah atau merah muda karena persenyawaan
kompleks violet-iodium telah larut sehingga dapat mengikat zat warna safranin.
Hasil pengecatan gram pada sampel jamu cekok menunjukkan warna
merah muda. Warna merah muda disebabkan kompleks kristal violet-iodium dapat
dilunturkan dengan pemberian larutan gram C yang berisi alkohol dan kemudian
terwarnai oleh cat safranin yang berwarna merah. Pada mikroba uji, struktur
dinding selnya mempunyai lapisan peptidoglikan tipis. Selain itu permeabilitas
dinding selnya besar sehingga memungkinkan lunturnya warna kompleks kristal
violet-iodium. Penambahan safranin menyebabkan warna merah menjadi semakin
jelas.
Gambar 10. Hasil pengecatan Gram biakan bakteri dari sampeljamu cekok
Keterangan : koloni bakteri berwarna merah bakteri gram negatif
Berdasarkan hasil pengecatan gram (gambar 10) dapat disimpulkan
bahwa bakteri hasil isolasi merupakan kelompok bakteri gram negatif.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
Dari berbagai hasil pengujian biokimia, SIM, dan IMVIC maka diperoleh
hasil rangkuman (tabel VII)
Tabel VII. Hasil Uji Identifikasi E.coli
PengujianHasil SampelJamu Cekok
Hasil Kontrol(+) Kultur
Murni E.coliATCC 25922
Hasil UjiidentifikasiE.coli SNI
SNI 01-2897-1992
Uji Fementasigula-gula
+ + +
Uji Sulfur - - -Uji Motilitas + + +Uji Indol + + +Uji Metil Merah + + +Uji VogesProskaeur
- - -
Uji Sitrat - - -Keterangan :+ : sesuai dengan hasil kontrol positif biakan E.coli ATCC 25922- : berbeda hasil dari kontrol positif biakan E.coli ATCC 25922
Dari tabel VII dapat disimpulkan bahwa sampel jamu cekok penjual jamu
racik “X” positif mengandung bakteri E.coli. Kontaminasi mungkin disebabkan
karena adanya kontaminan E.coli dari air yang digunakan, sarana-prasarana
produksi yang tidak terjamin kebersihannya. E.coli dapat hidup dalam usus besar
manusia dan hewan sebagai flora normal, E.coli juga dapat hidup dalam tanah dan
dalam air. Pada saat proses pembuatan pemanasan jamu cekok tidak dididihkan
secara sempurna sehingga mengakibatkan bakteri E.coli tidak mati, juga didukung
dengan lama penyimpanan sebelum dijual yang dapat menambah jumlah
kontaminan. Alasan penjual tidak melakukan proses pemanasan hingga mendidih
karena khawatir khasiat dari jamu cekok akan hilang. Menurut Menkokesra
(2013) untuk mematikan bakteri E.coli penjual dapat melakukan pemanasan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
hingga suhu 70°C. Penularan E.coli biasanya melalui fecal oral route yaitu kontak
langsung dengan air dan makanan yang tercemar E.coli (Radji, 2009).
e. Uji MPN (Most Probable Number)
Dalam penelitian ini juga dilakukan uji Most Probable Number (MPN)
untuk mengetahui apakah air yang digunakan oleh penjual tercemar oleh bakteri
coliform termasuk coliform fekal dan E. Coli. Metode MPN didasarkan pada tiga
deret tabung dengan konsetrasi 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, dan 10-5 melalui 2 tahap uji
yaitu uji pendugaan dan konfirmasi. Uji pendugaan merupakan tahap screening
atau perkiraan awal kemungkinan adanya bakteri coliform dengan media LTB
(Lauryl Triphtose Broth) dan BGLB (Briliant Green Lactose Bile Broth 2%)
(Soemarmo, 2000).
Cara menghitung jumlah bakteri dengan metode MPN didasarkan pada
kombinasi tiga konsentrasi sampel deret lima tabung yang memberikan reaksi
positif. Reaksi positif ini dapat dilihat dari pembentukan gas pada tabung durham
yang diletakkan pada tabung reaksi yang berisi media LTB. Dari kombinasi
tersebut dicatat kemudian dicocokan dengan tabel MPN berdasarkan Badan
Standarisasi Nasional (1995).
1. Uji Pendugaan bakteri coliform
Uji ini bertujuan untuk mengetahui adanya dugaan keberadaan bakteri
coliform dalam air yang digunakan untuk pembuatan sampel jamu cekok. Media
yang digunakan adalah Lauryl Triphtose Broth (LTB), yaitu media cair yang
mengandung laktosa yang merupakan salah satu bahan yang mampu diuraikan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
oleh bakteri coliform. Laktosa yang terurai ini dapat diamati dengan terbentuknya
gas yang terjebak didalam tabung durham yang diletakkan di dalam tabung reaksi
(Universitas Gadjah Mada, 1993).
Hasil uji pendugaan bakteri Coliform adalah sampel air pada lima
konsentrasi pengenceran terbentuk gas.
Gambar 11. Hasil uji air pada media LTB yang digunakan untukpembuatan jamu cekok
Keterangan : tanda panah merah menunjukkan adanya gas
Bakteri golongan coliform terdiri dari bakteri jenis aerob, yaitu bakteri
yang membutuhkan oksigen dalam melakukan proses metabolisme dan
fakultatitof anaerob yaitu bakteri yang proses metabolismenya dapat berlangsung
dengan atau tanpa adanya oksigen. Terbentuknya gas yang terjebak dalam tabung
durham oleh bakteri coliform terjadi karena peruraian laktosa sebelum masuk ke
dalam sel. Laktosa akan dipecah menjadi glukosa dan galaktosa dengan bantuan
enzim β-galaktosidase yang selanjutnya ditanspor masuk kedalam sel melalui
proses transpor aktif. Pada mikroba aerob glukosa akan diproses melalui jalur
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
glikolisis yang menghasilkan asam piruvat. Asam piruvat yang dihasilkan ini akan
diproses kembali melalui siklus Krebs yang menghasilkan asam-asam campuran
serta residu gas CO2. Pada bakteri fakultatif anaerob, glukosa akan mengalami
proses metabolisme dan menghasilkan asam-asam campuran dan gas CO2 (Atlas,
1997).
2. Uji penegasan bakteri coliform
Uji penegasan bakteri coliform bertujuan untuk menegaskan apakah
dalam air yang digunakan untuk pembuatan jamu cekok mengandung bakteri
coliform atau tidak. Uji penegasan bakteri coliform menggunakan media selektif
bakteri coliform, yaitu BGLB (Briliant Green Lactose Bile Broth 2%). Media
BGLB adalah media cair yang mengandung laktosa empedu berwarna hijau dan
hanya bakteri yang dapat memfermentasikan laktosa yang dapat bertahan hidup
pada media ini, yaitu bakteri coliform. Hasil positif adalah adanya gas dalam
tabung durham(Anonim, 1993).
Gambar 12. Hasil uji air pada media BGLB yang digunakan untukpembuatan jamu cekok
Keterangan : tanda panah merah menunjukkan adanya gas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Data pada gambar 12 menunjukkan adanya gas yang terjebak dalam
tabung durham pada sampel air yang digunakan untuk pembuatan jamu cekok.
Gas yang terdapat dalam tabung durham mengindikasikan adanya bakteri
coliform, sebaliknya pada tabung yang tidak terdapat gas dinyatakan tidak
mengandung bakteri coliform.
Laktosa pada media BGLB hanya dapat difermentasikan oleh bakteri
Coliform menjadi asam suksinat dan asam fumarat diikuti dengan pembentukan
O2 oleh bakteri Coliform fakultatif anaerob dan gas CO2 Oleh bakteri Coliform
aerob. Pembentukan gas O2 dan CO2 tersebut dijadikan parameter ada tidaknya
bakteri coliform dalam sampel air (Atlas, 1997).
Angka bakteri coliform dihitung menggunakan metode MPN dengan
tabel MPN 555 menurut formula Thomas (Lampiran 3). Hasil perhitungan
menunjukkan air yang digunakan untuk pembuatan jamu cekok mengandung
bakteri Coliform sebanyak 18/100ml, baku mutu yang diperbolehkan sesuai
Standart baku mutu air bersih No.416/Menkes/Per/IX/1990 adalah 50/100ml
(Lampiran 2).
3. Uji konfirmasi coliform fekal
Uji ini bertujuan untuk membuktikan dan mengkonfirmasi ada tidaknya
bakteri Coliform fekal termasuk E.coli dalam air yang digunakan untuk
pembuatan jamu cekok. Media yang digunakan adalah Escherichia coli Broth
(ECB) yang merupakan media kuning cair berwarna kuning jernih. Media ECB
mengandung laktosa yang hanya dapat diuraikan oleh bakteri yang mampu
memfermentasikan laktosa menjadi asam-asam tertentu dan residu berupa gas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
baik gas O2 dan CO2. Pembentukan inilah yang dijadikan sebagai parameter untuk
mengetahui ada tidaknya bakteri coliform fekal dan E.coli (DepKes RI, 2004).
Uji konfirmasi coliform fekal merupakan pemeriksaan yang
menunjukkan adanya E.coli atau spesies lain yang dekat dengan E.coli. Sebagian
besar bakteri golongan Coliform fekal terdiri dari E.coli tipe I dan tipe II yang
merupakan petunjuk ada tidaknya kontaminasi dari material fekal (BPOM RI,
2008).
Hasil uji MPN adalah air yang digunakan untuk pembuatan jamu cekok
mengandung coliform fekal 5/100ml (Lampiran 2). Hasil uji MPN menunjukkan
bahwa kontaminasi E.coli pada sampel jamu cekok dikarenakan air yang
digunakan dalam pembuatan juga tercemar E.coli.
Dari hasil wawancara secara langsung kepada penjual, selama ini
memang belum ada laporan gangguan kesehatan setelah mengkonsumsi jamu
cekok penjual “X”. Hal ini dikarenakan mungkin ada yang mengalami gangguan
kesehatan tetapi tidak melapor atau tidak diketahui atau bisa juga karena jumlah
bakteri E.coli yang terkandung dalam jamu cekok penjual “X” belum mampu
menimbulkan penyakit bagi yang mengkonsumsinya. Melihat nilai AKK dan ALT
jamu cekok yang melebihi ketentuan yang berlaku serta adanya keberadaan
bakteri E.coli maka perlu ditingkatkannya kebersihan, sanitasi dan higienitas
dalam proses pembuatan dan penyimpanan jamu cekok.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
1. Nilai AKK pada sampel jamu cekok yang diambil dari penjual jamu racik “X”
adalah 2,5 x 104 – 10,0 x 104. Angka tersebut melebihi persyaratan yang
ditentukan
2. Nilai Uji Angka Lempeng Total pada sampel jamu cekok yang diambil dari
penjual jamu racik “X”adalah 1,6 x 107 – 2,7 x 107. Angka tersebut melebihi
persyaratan yang ditentukan
3. Sampel jamu cekok yang dijual oleh penjual jamu racik “X” positif
mengandung bakteri E.coli.
B. Saran
1. Perlu dilakukan penelitian AKK dan ALT sebelum jamu dipanaskan, sesudah
jamu dipanaskan dan sebelum jamu dijual keesokan harinya untuk melihat ada
atau tidaknya perbedaan yang signifikan
2. Perlu penyuluhan oleh pihak yang berwenang terkait cara pembuatan obat
tradisional yang baik, sarana prasana yang digunakan, personil serta ruangan
yang digunakan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
78
DAFTAR PUSTAKA
Agromedia, 2008, Buku Pintar Tanaman Obat, Jakarta, PT. Agromedia Pustaka,pp. 58
Anonim, 1993, Dasar-Dasar Pemeriksaan Mikrobiologi, Yogyakarta, FakultasKedokteran Bagian Mikrobiologi, 15 – 25, 27 – 54, 127 – 134.
ATCC, 2014, Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers (ATCC®25922™), Escherichia coli ATCC 25922-D, Escherichia coli ATCC700927,http://www.lgcstandards-atcc.org/products/all/25922.aspx?geo_country=gb#characteristics Diakses pada tanggal 19 Juni 2014
Atlas, M.R., 1997, Principles of Microbiology 2nded, Iowa, Wm. C. BrownPublisher pp. 98 – 99, 152 – 157
BPOM, 2006, Metode Analisis PPOMN, MA PPOMN nomor 96/mik/00, UjiAngka Kapang/Khamir dalam Obat Tradisional, Jakarta, BPOM, 108 –110
BPOM, 2006, Metode Analisis PPOMN, MA PPOMN nomor 97/mik/00, UjiEscherichia coli dalam Obat Tradisional, Jakarta, BPOM, 112 – 114
Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, 2008, PengujianMikrobiologi Pangan, InfoPOM 9(2):3 – 5
BPOM, 2001, Metode Analisis Prosedur Pengujian Obat dan Makanan Negara,Jakarta, Balai POM
BPOM, 2005, Lampiran Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RINomor : HK.00.05.4.1380 tentang Pedoman Cara Pembuatan ObatTradisional yang Baik
BPOM, 1994, Kepmenkes no.661/MENKES/SK/VII/1994 tentang PersyaratanObat Tradisional
Bridson, E. Y., 2006, The Oxoid Manual, 9th edition, England, Oxoid, pp. 50 - 70Dalimartha, 2006, Atlas Tumbuhan Indonesia jilid 2, Jakarta, PT. Pustaka
Pembangunan Swadaya Nusantara, pp. 182-184DepKes RI, 1998, Pedoman Umum Pemeriksaan Sarana Pengolahan Makanan
Dan Minuman, Keamanan Pangan, Jakarta, Dirjen POM, DepKes RI &WHO
DepKes RI, 2011, Indonesia Cinta Sehat Saatnya Jamu Berkontribusi,http://www.depkes.go.id/index.php?vw=2&id=1723 diakses pada tanggal10 Oktober 2013
DepKes RI, 2012, Peraturan Menteri Kesehatan RI No. 007 tentang RegistrasiObat Tradisional
Fardiaz, S., 1993, Analisis Mikrobiologi Pangan, PAU, Bandung, InstitutPertanian Bogor, pp. 557 – 608
Finegold, S.M., dan E.J.Brandon, 1996, Bailey and Scott DiasnogticMicrobiology, 7th edition, Saint Louis, CV Mostby, pp.110-113
Gay, L.r., dan Diehl P.L., 1992, Research Methods for Bussiness andManagement, New York, Macmillan Coll Div, 67 – 69
Hadioetomo, R.S., 1993, Mikrobiologi Dasar dan Praktek-teknik dan ProsedurDasar dalam Laboratorium, Jakarta, Gramedia, pp. 42 -46
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
79
Hariana, H.A., 2006, Tumbuhan Obat dan Khasiatnya, seri 3, JAkarta, PenebarSwadaya, pp. 92, 129 – 130.
Holt, J.G., Krieg.N.R., Sneath.P.H.A., Stalen.J.T., dan Williams. S.T., 2000,Beryes’s Manual of Determinative Bacteriology, 9th ed, Baltiore,Maryland, USA, William and Wilkins, pp. 175-181, 209, 210, 535, 536,544 – 551
Jawetz, E.J.I., Melnick and Adelberg, E.A, 1996, Mikrobiologi Kedokteran,Diterjemahkan oelh Nugroho E., dan Maulany Edisi XX, Jakarta, EGC,pp. 234-240
Jutono, Sodarsono, J., Hartadi, S., Suhadi, S.K. dan Soesanto, 1980, PedomanPraktikum Mikrobiologi Umum, Yogyakarta, Universitas Gadjah Mada,pp. 60 - 70
Kresnady, B., 2003, Khasiat dan Manfaat Brotowali, Jakarta, AgroMedia, pp. 23-24
Kuswadji, 1999, Ilmu Penyakit Kulit dan Kelamin, Edisi ketiga, Jakarta, FakultasKedokteran Universitas Indonesia, pp. 103 – 106
Lay, B.W., 1994, Analisi Mikroba di Laboratorium, Ed 1, Jakarta, PT RajaGraffindo Persada, pp. 15-22
Lennete, E.H., 1995, Manual of Clinical Microbiology, 4th edition, WashingtonD.C., American Societu for Microbiology, pp.223-231
Limananti, A.I., Triratnawati, A., 2003, Ramuan Jamu Cekok SebagaiPenyembuhan Kurang Nafsu Makan pada Anak : Suatu KajianEtnomedisin,Makara Kesehatan, Vol. 7 No.1
Menkokesra, 2013, Bakteri E.coli Mati pada Suhu 70°,http://www.menkokesra.go.id/content/bakteri-e-coli-mati-pada-suhu-70-derajat, Diakses pada 16 juni 2014
Nugraheni, R., 2010, Pengujian Mikrobiologi Balai Besar Pengawan Obat danMakanan Yogyakarta, Surakarta, Universitas Sebelas Maret, pp.44
Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 007 tahun 2012 tentangRegistrasi Obat Tradisional
Pratiwi, S.T., 2008, Mikrobiologi Farmasi, Jakarta, Penerbit Airlangga, pp. 206 –207
Purnawijayanti, H.A., 2001, Higiene, Sanitasi, dan Keselamatan Kerja DAlamPengolahan Pangan, Yogyakarta, Kanisius, pp.78-80
Radji, M., 2009, Buku ajar Mikrobiologi : Panduan Mahasiswa Farmasi danKedokteran, Jakarta, EGC, pp. 10 – 19, 125 – 130
Rukmana, R., 2004, Temu-Temuan : Apotek di Pekarangan Hidup, Yogyakarta,Penerbit Kanisius, pp. 26
SNI, 1992, Cara Uji Cemaran Mikroba, SNI 01-2897-1992, Jakarta, pp. 4, 36Soedarsono R., Harini S.R., 2002, Jamu as Traditional Medicine in Java
Indonesia,South Pacific Study, Vol.23No.1, Jepang.Soekarto, 2008, Kapang Dalam Bahan Pangan,
http://www.scumdoctor.com/Indonesian/first-aid/kapang/.html. Diaksespada 28 November 2013
Soemarmo, 2000, Analisis dan Pengujian Mikrobiologi, Yogyakarta, DepartemenKesehatan Inonesia, pp.45-48
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
80
Suharmiati. Handayani, L. (2005). Cara Benar Meracik Obat Tradisional, Jakarta,Penerbit Agromedia Pustaka. pp. 1-2, 39-41.
Supardi dan Sukamto, 1999, Mikroorganisme Penyebab Penyakit menular dalam :Mikrobiologi dalam Pengolahan dan Keamanan Pangan, Edisi Pertama,Jakarta, Yayasan Adikarya IKAPI dengan The Ford Foundation, 157 -173
Supardi, Herman, M.J., Yuniar, Y., 2010, Penggunaan Jamu Buatan Sendiri diIndonesia,Buletin Penelitian Sistem Kesehatan, Vol.14, pp.375-381
Tarigan, J., 1988, Pengantar Mirobiologi, Jakarta, Departemen Pendidikan danKebudayaan Dirjen Pendidikan Tinggi Proyek Pengembangan LembagaPendidikan, pp.113 - 114
Thomas, A.N.S., 2008, Tanaman Obat Tradisional, jilid 1, Yogyakarta, PenerbitKanisius, 54-56
Tempo, 2013, Waspada Bakteri E.coli Pada Kolam Renang,http://www.tempo.co/read/news/2013/05/18/061481295/Waspada-Bakteri-E-Coli-pada-Kolam-Renang diakses pada tanggal 28 November2013
Underwood, J.C. E., 1999, General and Systematic Phatology, vol 1, London,Churchill Livingstone, pp.57
Zulaikhah, S.T., 2005, Analisis Faktor-Faktor yang Berhubungan denganPencemaran Mikroba Pada Jamu Gendong, Makara Kesehatan, Vol.2No.1
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
81
LAMPIRAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
82
Lampiran 1. Surat Ijin Laoratorium
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
83
Lampiran 2. Hasil uji MPN coliform dan coliform fekal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
84
Lampiran 3. Tabel MPN 555 menurut formula Thomas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
85PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
86PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
87
Lampiran 4. Foto Penanganan Sampel
Lampiran 5. Nilai ALT sampel jamu cekok inkubasi 24 jam
Sampel PengenceranJumlah koloni masing-masing petri
Petri 1 Petri 2
1
10-1 ∞ ∞10-2 ∞ ∞10-3 ∞ ∞10-4 376 261
10-5 300 212
2
10-1 ∞ ∞10-2 ∞ ∞10-3 380 284
10-4 248 304
10-5 126 140
3
10-1 ∞ ∞10-2 ∞ ∞10-3 ∞ ∞10-4 145 147
10-5 121 130
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
88
Lampiran 6. Perhitungan dan nilai ALT sampel jamu cekok inkubasi 48 jam
Sampel
Pengenceran
Jumlah koloni masing-masingpetri Nilai ALT
Petri 1 Petri 2
1
10-1 ∞ ∞2,7x107
10-2 ∞ ∞10-3 ∞ ∞10-4 380 303
10-5 328 212
2
10-1 ∞ ∞1,6x107
10-2 ∞ ∞10-3 ∞ ∞10-4 306 330
10-5 170 156
3
10-1 ∞ ∞2,4x107
10-2 ∞ ∞10-3 ∞ ∞10-4 276 272
10-5 224 252
Cara perhitungan nilai ALT inkubasi 48 jam= ℎ 1 + ℎ 22×
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
89
Sampel 1
Dipilih pengenceran 10-5 karena jumlah koloninya masuk range, yaitu
cawan yang satu dengan 25 koloni sampai dengan 250 koloni dan cawan
yang lain lebih dari 250 koloni, hitung kedua cawan dalam penghitungan
TPC (Tabel 1 nomor 7).
Perhitungannya adalah sebagai berikut := 328 + 2122 × 100000 = 27.000.000 = 2,7 × 10 Sampel 2
Dipilih pengenceran 10-5 karena jumlah koloninya masuk range 25-250.
Perhitungannya adalah sebagai berikut:
= 170 + 1562 × 100000 = 16.300.000 = 1,6 × 10 Sampel 3
Dipilih pengenceran 10-5 karena jumlah koloninya masuk range, cawan
yang satu dengan 25 koloni sampai dengan 250 koloni dan cawan yang
lain lebih dari 250 koloni, hitung kedua cawan dalam penghitungan TPC
(Tabel 1 nomor 7).
Perhitungannya adalah sebagai berikut:
= 224 + 2522 × 100000 = 23.800.000 = 2,4 × 10
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
90
Lampiran 7. Perhitungan dan nilai AKK inkubasi 5 hari
Sampel
Pengenceran
Jumlah koloni masing-masing petri Rata-rata
koloniNilai AKK
Petri 1 Petri 2
1
10-1 189 178 184
2,5x104
10-2 91 85 88
10-3 43 40 42
10-4 20 15 10
10-5 6 7 7
2
10-1 ∞ ∞ -
5,0x104
10-2 224 220 222
10-3 200 144 172
10-4 40 60 50
10-5 3 8 6
3
10-1 ∞ ∞ -
10,0x104
10-2 212 200 206
10-3 58 60 59
10-4 17 11 14
10-5 10 3 7
Cara perhitungan AKK inkubasi 5 hari Sampel 1
Dipilih pengenceran 10-2, 10-3, dan 10-4 karena jumlah koloninya masuk
dalam range 10-150. Namun sesuai peraturan MA PPOMN 96/MIK/00,
maka dipilih 2 pengenceran berturut-turut yaitu pengenceran 10-2 dan 10-3,
dirata-rata dan dikalikan faktor pengencernya
Perhitungannya adalah sebagai berikut
Pada pengenceran 10-2= rata-rata koloni × faktor pengenceran= 88 x 100 = 8800
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
91
Pada pengenceran 10-3 = 42 x 1000 = 42000
Nilai AKK = = 25400 = 2,5x104
Sampel 2Dipilih pengenceran 10-4 karena jumlah koloninya masuk dalam range 10-150.Perhitungannya adalah sebagai berikutPada pengenceran 10-4= rata-rata koloni × faktor pengenceran= 50 x 10000 = 500000 =5,0x104
Sampel 3Dipilih pengenceran 10-3 dan 10-4 karena jumlah koloninya masuk dalamrange 10-150.Perhitungannya adalah sebagai berikutPada pengenceran 10-3= rata-rata koloni × faktor pengenceran= 59 x 1000 = 59000Pada pengenceran 10-4 = 14 x 10000 = 140000
Nilai AKK = = 99500 = 10,0x104
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
92
Pengenceran 10-1 Pengenceran 10-2
Pengenceran 10-3 Pengenceran 10-4
Pengenceran 10-5
Lampiran 9. Foto ALT inkubasi 48 jam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
93
Pengenceran 10-1 Pengenceran 10-2
Pengenceran 10-3 Pengenceran 10-5
Pengenceran 10-5
Lampiran 10. Foto Hasil AKK inkubasi 48 jam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
94
BIOGRAFI PENULIS
Penulis skripsi dengan judul “Uji Angka
Kapang/Khamir (AKK), Angka Lempeng Total (ALT),
dan Identifikasi Escherichia coli dalam Jamu Cekok dari
Penjual Jamu Racik “X” di Yogyakarta” memiliki nama
lengkap Ribka Alvianita Susetyo. Penulis lahir di
Boyolali pada tanggal 29 Juni 1992, merupakan anak
kedua dari dua bersaudara. Pendidikan formal yang pernah ditempuh yaitu TK
Pertiwi 1 Mojosongo (1998-1999), SD Kragilan 2 Mojosongo (1999-2004), SMP
N 1 Boyolali (2004-2007), SMK Farmasi Nasional Surakarta (2007-2010),
kemudian melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma di tahun 2010. Semasa menempuh kuliah penulis aktif dalam berbagai
kegiatan organisasi dan kepanitiaan. Penulis pernah menjadi volunteer Kampanye
Informasi Obat “Health by herbal, Herbal for Healty” (2010), anggota divisi
teater Tiga Hari Temu Akrab Mahasisawa Farmasi (TITRASI) (2011), Anggota
Seksi Publikasi Dekorasi dan Dokumentasi Seminar Kanker Serviks dan Kanker
Paru-Paru (2011), koordinator seksi acara TITRASI (2012), anggota seksi acara
Pharmacy Performance and Event Cup (2012), Co-Fasilitator Pelatihan
Pengembangan Kepribadian Mahasiswa (2013). Penulis juga aktif dalam
organisasi Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi sebagai Koordinator
Divisi Unit Kegiatan Fakultas (2011-2012), Bendahara Redaksi Pharmaholic
(2011-2012). Penulis pernah menjadi asisten praktikum Bentuk Sediaan Farmasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
95
(2011), Mikrobiologi (2014), dan Komunikasi Farmasi (2014). Penulis pernah
mengikuti Program Kratifitas Mahasiswa dengan judul PKM-KC Keranjang
Pemusnah Sampah-KERAMAS Plastik yang kemudian didanai oleh Direktorat
Pendidikan Perguruan Tinggi (Dikti) pada tahun 2013.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
top related