poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol...

Post on 06-Jul-2016

218 Views

Category:

Documents

2 Downloads

Preview:

Click to see full reader

TRANSCRIPT

����� ����������� ����� ��� ,4:%'%+*%'&& 4&00&5;<�: %0�%00&8���.-7

Poly(hydroxyethyl methacrylate-��-glycidylmethacrylate) reactive membrane utilised forcholesterol oxidase immobilisationSinan Akgol,1 Gulay Bayramoglu,2 Yasemin Kacar,3 Adil Denizli1 andM Yakup Arıca3�1Department of Chemistry, Hacettepe University, 06532 Beytepe-Ankara, Turkey2Department of Chemistry, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey3Department of Biology, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey

(Rec

� CoE-ma

� &

��������� �� ������������� ������������������������ ������������� � ��������� ��������

��� �������� �� !���������� ��������������� " ������������� ������������ ����� ���

�������� ������������ ���� �� ��� �������� " �� ��������# �$������%���������� �&'(�)

*�������� ������ ��� ���������� �������� � ��� �������� �� "����� �+����� ���� �������

��� ���� ��%�� ��� ��� ������ ��%�� " ��� ��������) �� �+����� " ,-�� " ��$��� ������������� ��� ��� " ��������# ��� ��� �%�� ��$��� �������� ��%� ./0 " ��� ������� ����+���)

&����������� ����+�� ��� �� ��������� " ��� ��$��� �� ���� �� ��� ��������%�� ���������) 1��

����%� ��������%�� ��� ,°* ������ ���� ���� " ��� "��� ��$��� ��� ��� �����2������ ������) 1��������� ������+���� ���� �������� "� "��� ��� ���������� ����������� �� /3°* ���� ����%����� ���� "���� 4)3.�43�4 ����4 ��� �� ���� �).5�43�� ����4# ��������+���) 1�� ���������� ��$��� ����+������ "%�� � �� 6%��� ������ �� ��� �������� �����������)

� �33� 7����� " *������� &��%����

8������� ����� ������� �� �� ���� �� ��� ������� �� � ����� ��������� �� ����� � �����

INTRODUCTION��� ������� ������� ��� ��� ����� � ������

�� ��� �������� �� �� ������� � � � ������� ��

������� ��������� �� ��� � ��� ������� �������

� ������� ������ �� ������� � ��������

������� �� ����� ���� !��� � �� �� ���� � ����

� " # ��$���� � ��� ���� � � ��� �� �����

������ �� ���� �� �������%�& �� ���� �� ��

���� �� ���� ��� � ������ ��� ������� � �

�� ��� � ����� ��� ������� ������ � � ������

������� �� ��� �������� �� ���������'�( ���

���� �� � ��� ������� � ��� ���� ����� �����

� � � ����� ��������� � �� ��� �� �������

��������� �� ���� �� ���� � ���� � � ������

������ ����� ���# )� � ���� � ����� #�����

#���� �� �� � � ������ ����� #��� ��� �

���������� ��� ������ �� ���������� ��� ��� ����

��� ���� �� � ��� ������� � ��� � ��� ���

��� ������� � � � ����� �� ������� � � ��

�� � � �� �������� ������(*+

,� ����� � ����� �� "������������� ������

��� ������� ��� ����� � �� �� ������ � � '����� �� ��� ���� �� ������ � ����� �� � ������

� � ��� "��� ������ ������� ����� �� �������

������ ������� �� ������ ����� �� ����� � �

eived 18 April 2001; revised version received 13 November 2001; acc

rrespondence to: M Yakup Arıca, Kırıkkale University, Department ofil: yakuparica@turk.net

00& ! ����� � ,������ �������� ����� ��� 0272*.%0'8&00&89'

��������-�. / �� ���� �� � ���� � �����

%'0*&+0�� � �� ����� � �� %00��� � #���� �# �

����� � �����1�� #��� ���� ���� �� ������� ��

������ � ��� �� �� ��������� � � �� ����� � ��

��� ��� ��� �� ������� ���� ���� ����� ���� ����

�� ����� � ����� �� ������� ����� � ��� ���� ����

�� ���� ������ � �� ����� �� �� ����2

3 ��4&���� ������� ���������5 4�����5

���� ���� � ����� �� ���� ���� ���� ���� ��

��� ������� � � ������� �� �� ��� �� � �����

�������� �������� ��� � ��� �������� ����

#��� ����� � ���� � � ����� ��� ����� �� � ��

� ��� �� �� � ������� � ���� #� �� � �� ��� �

��� ������� � �� ���� ��� ��� �� ��� ����� � �

� �� � ���� ������� � ����� � ��� ���� #�� � �����

�� ���� ����������� ���� #�� � ����� ��

���������� � �� ��� ��� �� ��� ��� � ��� �

������� �������� � � �� ������ �������� �

����� � ���� � ����� �� ������ ����� ���

�� ������ ������ ��� ��%0*%&

6������� ��������� 46��5� ��� ���� �

��������� ��� �� &�'��� ��� �� �� ���

������ �� ���� � �� #���� ���� #��� �����������

��� �� �� ���� ��� ��� � ��� � � � �����

� ����� � ��� #��� �� ��������� #��� �� �� ���)��

epted 2 January 2002�

Biology, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey

0�00 %'%+

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

=� � ������� ��)� � ����� � � ������� � ����� ��

������ ��� �� ���� ����� �� �)���� �����%'�%(

! �� � ��� ���� �� ���� ��� � ���� �����

�� �� ������� �: 4%5 ��������� � � ������

����� #��� �� �� �������� ����� 4���� � ��� �

��� � ����� ������ ����� �� �������5� 4&5

����� � � ������ �� � � �������� � � �#

�������� � � ��� � ������� ������ � ��� 4����

� � ��4������� ���������� ���������� ������������5� � ��4��� ������� ����� ���)�����������5 � ��4��� ������������ ���������� �������

���5�%7�%+ �� ����� � � ���� ������ ��� �����

� ����� ��� ���� �� ��� ������ �� ������ ����

�� �� � ��� ��� ������ �� ������ ��� ������

�� �� ������ �� ���� � ���� � ������ ��

� ��� �� �� ��� � ��� ��� ��� ���� ��

�$������ ��� � �� �� � ������ �� � �� �����

� � � ��� �� ��� � �������� � �������

�� ��� ������ ������ � �� �4����*6��5

���� � ������� ������ �� �� ���� � ��� #�

����� �� ��� ������ � � �� � � �������� �

� &���� ������� ��������� 4����5 #��� ��������

��������� 46��5 �� >?��������� �� � � �����

���� � �� ��� ������� � � ������ 4������ ����� ����� ������� ��=/5� ��� ���� � �� ��������� �� ���

��� ������ �� �� � ��� �� ����� �� ��� �����

��� ��� ������ ���� #��� �� ��� ���� � ��

������ � � � � � � � ����� ��� ������� � �

������ �� � ����� �� ������ �� ������ ����

� � #� ���� � ��� ��� ������� � � �� ����� �

����� �� � ����� ��������� �� ����� � �� ����

�� � ����� ��� ������� � �� �����*6��

� � ���� ������ �� � ������ ������� ������

��� ������ � ��� ������ � ��� �� ���� � ����

�� � ��� � ������� � � � ������ ����� �� �

��������� � � � ������� � � �� ����� � ��

�� � ���� "����� <������ � ����� �� � ��� ��

��� ������� ������ �������� �� ������ ���

�������� �� )������ ������ 4�� �� ���5#�� ���������� �� ����� � � ����� �������� �����

�� �� �� ��������� �� ������ ��� � ��� ���

� ������� ������ #�� �� ��������

EXPERIMENTALMaterials,� ����� � ����� 4�, %�%�'�+� � � ������� ��������� �� �������� � #��� #��� �����1� �������

'(>���%� � ���5 �� �� ����� 43<;� �, %�%%�%�-� ��� ��� � � � ������� &00>���%� � ���� #���������� �� ��� !��� ,������ , 4!� @ ���� �<�

>!�5 �� ���� � �������� &���� ������� �����

����� 4����5 �� �������� ��������� 46��5

#�� ������ � � A��) �6 4!#�������5� ��

� �� #� ��������� ���� ������ ������ �� ���

������� � ��� B��� �� �� )��� � (°, ����� ������������ �� ������� ������ 4��=/5� �� ����� ��

�� � C�%00� ������������ ����� ��� ��� ��

� ���� ���� ������ 4=!�5 #�� ������ � �

!��� ,������ , � ��� ��� �������� #�� �

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

������� ��� �� ������� � � ���) �6

4;������ 6����5�

Preparation of poly(2-hydroxyethyl methacrylate-��-glycidyl methacrylate) membrane �� � ��4&���� ������� ���������� �������������������5 �4����*6��5 ��� ��� �� ��� ����

��� � � #� ����� �� >? �������� �� � � ���

������ �� �� � �������� � #� ���� �� ��

��� ���� � ��� 4������: 2�0��5 � &7°, ���� ��� ��� �� ����� � %�� �� ������ ����

�� � ������ 47��5 � ������ ���� 4%�+��

%�'&�%0�& � �5� 6�� 40�(�� '�'%�%0�& � �5���=/ 4%0��5 � � �������� � ������ �� �� ��

���� ����� 4'��� 70��� �� -�05� �� ��������

������ #� ����� �� �B�������� � &7°, �

%7��� �� ���� ����� #������ �� ������ #�

���� � ��� ��� ��� � ��� �� ��� ��� � � ���#��

����� ��� ���� � � &0���� ���� � �������� ��

��� �4����*6��5 ������� #�� #���� �����

����� #��� ��������� #�� �� ��� ��� ����� ������

4������: %�0��5 #��� ��� � �

Membrane characterisation studies���������� �� �� ��� ������ �� �������#�� �� #�� � � ) �� ��������� #�� � (.�� �# ����

������ ���)� 4�%�5 #�� #������ ��� �� ������� ������ � #��� �� ���� �� ����� ��� �

+0°, � &(� ����� � ����� #������ �� #�� � ����� � ��� ������� �������� �

� �� #�:

D�� � ����� 4%w/w) � ���� � ������� � %00�%�

D��� �� �� �� � ��� #������ � �# ���� �� ��

������� ������������

� ������ � ��� �� �� ���� !������ ����� � ��� ����� � ��� ���� � ��4����*6��5 �������

#�� ������ ����� E�<@ E�! 7+00 �������

����� � ��� �� ��� ��� � ���� #��� � �� ����

������ �������

���� �� ��� A �F ����� � ��� �4����*6��5������ #� ������ ����� !������� A �F

.000 ����� ����� �� � ����� �4����*6��5

������ 40�%�5 �� G= 40�%�5 #�� �� �����

������ ��� ������ #� ������ � � � ����� ��

��� ������� �� ����

Immobilisation of cholesterol oxidaseA����� �� �� �� � �� ����� �4����*6��5

������ ���)� 4%0�� ������ %�0��5 #�� �B�����

���� �� �� ����� ����� 470��� �� .�05 � &��

�� ������� �� � ��� ��� ���� ������ � �����

��� �� ����� � ����� 470��� %�� ���%5� ��� �������� � � �� ����� � ����� � ��� �4����*6��5

������ ���)� #� ���� �� � &&°, � %.��

#���� � ����� ���� ������ ��� ���� � ������� ����

%'%-

� $#��%� �� �

���� ��� �� ��� �4����*6��5 ������ ���)�

#�� �� ��� � � ��� ������ �� #���� #��� %�

/,� �� ���� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05�

�� � ��� � ��� ������� �� ����� � ����� �

��� �4����*6��5 ������ ���)� #� �����

����� �� ������� ��� ������ �� 1�� � ������

�� �� � � ���� #����� ��� ��� ������� � ������

����� , ����� =������ =��� � ��� ���� �

�������� �� =�� ��%- � ������ � ���� � ��

������� #��� =!� � ���� �� � )� #� � ������� �

40�07*0�70�� ���%5 #� ���� �� ��� ������� � �� ���� �� ��� ������ �� #�� � ���� ���

Activity assays of free and immobilised cholesteroloxidase �� ������� � ��� �� ��� ������� �� ����� �

����� #� ��������� �� ���� � ��� � �� #���

� ����� ������ ���� ���

,� ����� �<& �&< �����������,� ����� � �����

,� ��������'� ���&<& �&�

�&<& ��;��������� ������3� �������;����������&<

������ �������

�'�� %00�� �� ����� � � ���� � 4%00��5 #� ���

��� �� ���� ����� �� ����� � 4'�.+�5 �� ������ �

� ���&� � 4%'��5 �� �� � C�%00 4(��5� ����

������ � '0���� ��� � ���� #� ��� �� � %00��

#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05� ��� �����

� ���� � #� ���� �� ��� �� ��� ������

�� ��� ������ � ������ �� ����� 4+�0��5

�� ������������ 4%'�&��5 �� �� ����� �����

4%00��� 0�%�� �� -�05� �� ��B� � � (�.�� � ����

������ �� 0�%�� � �� ����� � � ���� � 40�7*

%0��5 #�� ����� �� ���������� � '7°, �

%0��� �� #�� ���� �� ���� � #� ���� �����

�� ����� 0�%�� � ������ � ���� � 4� �������

�� ����� � ����� %�� ���%5 ��� ������� ���

���� 4�# ������ ���)�5� ���� ����� � �

�������� ��� 4%�7��� '0H5 �� ���� #�

������ � 7&7�� �� >?8?�� ����� �� � ����

4!������� � ��� %+0%� )� � E��5�

���� ������� ���� #�� ���� �� �� ��� ��

��� (�0*.�0 �� �������� ��� &0*(7°, �

�������� ��� �� �� �������� � 1��� � ��� ���

�� ��� ��� ������� ��������

<�� �� ����� � ����� ���� � ��� ���� � � �

����� � � %�� � �� ��������'� �� �� �&<& �� ������� ��� � ����� ��� �� �����1� ������� �� ���

����� � �� ����� � ����� ����� �� �� � � �����

Stability of immobilised cholesterol oxidase inrepeated use �� ������ � � ��� ��� ������� �� ����� � �����

������� ��� ������ ���� ��� #� ������ �

�������� � �� �� ��� �������� ���� !���� �� ����

��� ��� ��� ������������� ���)� #�� #����

%'%.

#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���� �

����� ��� ���� ������ '0 ����� �������������

Thermal stability �� ����� ���������� � ��� ��� �� ��� �������

�� ����� � ����� #�� ���� �� �� ������� ���

������ ������� � ��� ������ ��� ��� � ����

�������� ��������� 470� +0 �� -0°,5 �� �� ������ ����� 40�%�� �� -�05 � %00���� ���� ���

%0��� ���� ������� ����� #� �� ��� ��

����� � �������� ������� � �������� � ���

�� 1��� �� �������� � �� � ������ #� #���������� � �

��$ � ��$0 � #�� �(�#��� $0 �� ��� ������ ������� �� $ �� ��� ������� ������� � 4���5�

Storage stability ��� ��������� #� � ������� � �������� ���

�������� � ��� �� ��� ������� �� ����� � �����

����� �� ��� �� �� �� �� ����� ����� 40�%��

�� -�05 � (°, � +0 ���� �� ������ ���������

#�� ���� ��������� � �������� � ��� �� ���

������� � ��� ����� � #� �������� � ������

��� � ��� ������ ������� � ���� � ��� ������

��������

RESULTS AND DISCUSSIONProperties of the p(HEMA–GMA) membrane support�� ��� ������ ������ � �� �� ���� � ����

� ������� ������ ���� #� ����� �� � � ���

������ � � ��� ������ � � ��� &���� �������

���������� #��� �������� ��������� �� >?

�������� �� � � �������� � �� ��� ������� � �

������ 4��=/5� �� � �� ��B������ ���� ���� ��

�� �� ����� � �� � � ����� ������ ��� ������� �

��� ���� ������ ��� ������ � � ���� ��

��������� � ����� ���� � ������� ������ ��� �����

� ���� �� � ��4����� �� � �5� �� ������ ���� �

#� ��������� �� ��� ��� ������ �� �� � �� #�

����� ��� ����� ��� ��� ���� #��� �� �� � ���

1��� �� �� �� ���� � ��� � ��� � �������� � 8

� ����� ��� ������� � � � ������ �� <I, ��

/I, � ��� � ��� �� ��� �� ���� � ��� �

�������� ������ � ��� ��� �� ������ �������

���� � ������ � ��� �� ���� � ��� ��� ������� �

� ������� �� � ������ A����� �� �� �� ����

���� ���� �� � ��� � � � � ����� ���)��� #���

�������� ���� ���� � ��� 4��� � ��� �� ���� ���

� ���5 � ��� � ���� ������� ���� �������

���������� � ����� �� 4�� �� -�05%+ �� �������

������� � ��� �4����*6��5 ������ �� ���

������ �� A�� %�

�� ������ �� �4����*6��5 ������ ���

������ ��� �� ��� ������� ��� � �������� ��� ����

!����� ��� � �� � � #�� #�)��� ��� ��� ���

� ��� #����� ��� ��� ���� ��� ������ ��� �������

���#��� ��� � ���� ����� �� ����� � ���)� �

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Figure 1. Chemical structure of p(HEMA–GMA) membrane.

Figure 2. SEM micrographs of poly(HEMA–GMA) membrane: (A) surface;(B) cross-section.

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

#��� �� #�� � ����� �� ��� �� ��� ��� ���

#��� ��� ��� � ������� �� ������ ��� ������� �

�� � ���������� �� #�� � ����� � ��� �4����*

6��5 ������ #� ��������� �� ��� #�����

��������� ���#��� ��� #�� �# ���� �� ��� ��

������� �� �� #� (-H�

!������ ����� � ��� ���� 4!��5 �������� ��

A�� &4�5 �� 4=5 �� # ��� ����� �� � �������� ��

������� � �4����*6��5 ������� ������

������� �� ������ �� #� ������ � �� �����

�� ���) �������� #���� � ��� � ���� ��� �

� ��� ������� � � �������� �� ����� � ������

� ��� �4����*6��5 ������ �� �� � ����

���� ��� ����� �� ��� � ���� ������ �����

� #��� � # ������� �� ��� ����� �������� �� ���

�����

�� � � ����� � � �� ��� � ���� �� 6��

����� � � ��� �� A �F ����� �� ��� �� �� #� ��

A�� '� ��� A �F ����� � �4����*6��5 ��� ���

���������� ��������� ����� � ��� � ��� ��� �

����� ���� �� � � � ���� � �'700���%��� �� ��� ���������� ����� �� � � �� ����

�� 6�� � ��� ��������� ����� � � �&2'0���%

�� ��� ������ ����� � � &2+0���%� �� ����� �� %-(0���% �������� ��� ���� � �1���� � � � ������ �� 6��� �� �� ���� � �� ����� ��� ���

� 2%0���%�

Figure 3. FTIR Spectrum ofp(HEMA–GMA) membrane.

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Immobilisation of cholesterol oxidase �� ������ #� ��� ������� � ��� �4����*

6��5 ������ �� � ����� � ����� ���� �)����

� ����� ��� �� ������ �� ���� � ��� � ���

������ �� ��� ��� � ��� � ��� ������ #��

%'%2

Figure 4. Covalent immobilisation of cholesterol oxidase onp(HEMA–GMA) membrane.

Figure 5. Effect of pH on the activity of free and immobilised cholesteroloxidase.

Figure 6. Effect of temperature on the activity of free and immobilisedcholesterol oxidase.

� $#��%� �� �

� ���� ��� � ���� �� ���� ������ � ������ ���

��� ������� � ���� � 4A�� (5� �� ���� �� A�� &� ���

������ �� ��� �� ��� ������� � �� � ��� ������

����� � ��� ������ �� #����� ��� � � ����

�� ��� ������ �� ���� � ���� ��� ����� �

� ��� ���� � � ��� ������� #��� ��� ��� �������

������� �� ���� � 7'�� � ������ #� ��� �������� �� ��& � ������� �� ��� � ��� ������

������ � �� +-H � ��� ������ ��������

?���� � ��� )������ ������ �� � ��� � ����� ��� ������� �� ����� � ������ #�� ���������

����� �� ����� � � �������� �� ��� ��� ��

��� ������� ������ �������� ��������*������

)������ ����� � #� ������� A ��� ��� ������

�� #� %�2��� ��� � � ������� ��� �������

�� ����� � ������ ��� ����� �� #� &�-���

�� ������� '.H ����� ��� ��� � ��� ���

������� A ��� ��� ������� ��� #� '&>���%

� ����� ��� �� � � ����� ��� ������� � � ���

������ � ��� �4����*6��5 ������� ���������� �����1����� � &%>���%� �� ����� ����� )������ ������ � ��� ��� ������� ������

� ��� �� ��� � ��� ��� ����� ������� �� 4�������

�� � ����5� � ����� � ������� �������

������ �� ��� ������ � ������ 4��� ����� ��

� ����� ��������5� A����� �� �� �� ��� ��

����� ��� ��� ������� � � ��� ������ �� �����

������ ��� � �� ���� � ��� ������� ����

�������� ��� ����� ��������� �� �� ���� ���

��� ������� �� ����� � ����� �� #�� � #� ������

1���� � ������ � ���� � ��� ��� � �������

Effect of pH and temperature on catalytic activity �� �� ������ � ��� ������� � ��� �� ��� �������

�� ����� � ����� �� ���� ������� �� ����� � ���� �

� �������� �� ����� 4(�0*.�05 �� ��� ������ �

�������� �� A�� 7� �� ����� � ������ ������� �

��� ��� ��� ������� �� ����� � ����� � �� �� ���

��� 4 ��� �� -�05� �� �� � 1�� � ��� ��� �

������� ������ �� � �������� �������� ���� ���

��� ������� �� ����� � ����� ������� �����1�����

%'&0

��� ��� �������� �� ��� ��� � � � � #� ��

������ ��� ����� �� � ���� �� �������� � ���

��������� � � �� ����� � ����� � ������� ��������

� � ������ ��� �������� � ��� ������ � �������

� ��� ����� � ��� �4����*6��5 �������

�� ������ � �������� � ������ ������� #�

����������� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���

�������� ��� &0*(7°,� �� ����� ��������� ������ � ��� ��� ������ #� � �� '7°,�#���� ��� � ��� ��� ������� ������ �� ��� � �

��������� �� � ����� ��� ������� � #� � �� (0°,4A�� +5� �� ��� �������� � �� ��� ������� �������

��������� ����� ������ �������� ����� ���

���� ��� � �������.�%2 �� ������ ��� � ����� �

��� ������ � ��� ���� � �� ����� � �� ��� ��

"��������� �� ����� �� ����� ������ � ����� � ���

������ � ������ � � ����� ��� � �� � �� ��

�� � � ������� � ��� ��������&0

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

Figure 7. Stability in repeated use of immobilised cholesterol oxidase.

Figure 9. Thermal stability of immobilised cholesterol oxidase at threedifferent temperatures.

��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��

Stability in repeated use �� ���� �� �������� � ��� ������� ������

������� �� ��� ��� ��� �� � ������� �� �������

�������� � ��� �)� ��� ������� ������� � �

������ �� ��� ���� ��� � �������� <���

�� �� �������� � ��� ��� ������� �� ����� � �����

#� ��������� � ���������� ���� ���� �� �

'7°,� �� ������ �������� �� A�� - �� # ��� ���

��� ������� ������ ������� ������ �� �� ���

��� � ��� ����� ������� ��� %+ ������� ���� ����

����� ������ �� �� ����� � ����� � �� #�

������� �� ���� � �� ����� &(H ��� '0 ������ �

���� ���� �� � ������ �������� � � ��� �������

�� � � �� ����� � ����� �� � ����

Thermal stability �� ������ � �������� � ��� �������� � ��� ���

�� ��� ������� �� ����� � ����� �� �� #� �� A��� .

�� 2� ������������ �� ����� � ��� ��������

Figure 8. Thermal stability of free cholesterol oxidase at three differenttemperatures.

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

�������� ��� ����� �� � ����� �������� �

#� ������ � ��� ��� ������� �� ����� � �����

� ��� �4����*6��5 ������ � ���� #���

��� � ��� ��� ������� �� 70°,� ��� ��� ����� ������� ������� ������ +'H �� ..H ��������

������������ ��� %00��� � ��� �������� �� +0°,���� ��� ������� � � #� ��������� � ���� �� #�

�� ��� ��� ��� � �� = �� ��� ��� �� ��� �������

������� � �� �� � ���� ������ ������� � -0°, ���

(0��� �� .0��� � ��� �������� ������������ ��

�������� �� ����� �������� � �� � ������ �

��� �� ��� ������� ������� #�� ��������� � �

��� �������� ������ ������� &�'� ����� � ������������ ���������� ��� ������ � �������� ��

��� %� �� ����� �������� � �� � ������ �

��� �� ��� ������� ����� �� � -0°, #��

�������� � #� 4���5 %�0+�%0�% ����% �� #� 4���5&�+.�%0�& ����%� ������������ ���� ������ ���������� ��� ���� �������� � ��� ������� �� ����� �

����� ��� ��� �����1����� ����� � ����� ����

������� �� ��� ��� �������� � ������� �������

�� � ��� ������� �� ��� � ������ ������� � � �����

������� # ��� �� ��������� ������� �����

�������� �� ���� �� ��� � ����� � ��� ���

����� �������� �� ��� � ���� ���# ) �� ������

� ��� �������� �� � ����� ��� ������� � ���� ��

� ���� ��� � ������ ��� ����� ������� �

��������&0 �� ����� �� �� �� �� ���� �� ��� ���

��� ��� ���� ���� � !������� !��� ���

� ��4��� ������� ���������5 �� � ���������

� ���� ������� � � ����� �������� � �� �����

����� ����� �����������&% <� ��� ���� � �����

������ ��� �4����*6��5 ������ �� ��� �

������ ���# ) #���� ������� ����� ����� ��������

��� ��� � ��� ��� � �������

%'&%

Table 1. Half-life (t1/2) and inactivation rate constant (ki) of the free andimmobilised cholesterol oxidase at three temperatures

�����������

°�

���� � ���� ����������� � ����

�� ���� �� � �� ���� �� �

�� ��������� ��� ��������� ��

�� ��������� �� �������� ���

� ��������� �� �������� ��

Figure 10. Storage stability of free and immobilised cholesterol oxidase,stored at 4°C in phosphate buffer (0.1M, pH 7.0).

� $#��%� �� �

Storage stabilityA�� �� ��� ������� �� ����� � ����� ����� ��

#�� �� �� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �

(°, �� ������� ���������� ���� �� �

��� � � +0 ��� 4A�� %05� �� ��� ������ � ��

� �������� ��� ������� #����� &0 ���� ��� �������

����� �� � �� '7H ������� ����� ��� ��� ��� ��

��� ������� � ����� ���� � � �� ��� ������ ��

����� � ���� � �� � ���� � � ��� ��� � �������

�� ��� ������� �� ����� � ����� ������� � ��

('H � ��� ������ ������� � ����� ��� +0 ��� �� ��

��� ��

CONCLUSIONS<�� � ��� � �� ��� ��� ��� � ��� ������ �����

%'&&

� � �� �� ��� ���������� � ��� � �� ��� ��

�������� � �������� �� ������ � ��������� �

������� � ��� ������ �������� ��� ��� ������� �

���� ��� �� ���� � ���� �� �� ��� ������ ������

������ �� ���� � ����� ������� �4����*6��5

������ ���� �� #�� ����� �� � � �������

�� � � &���� ������� ��������� #��� ��������

��������� �� ���� � � ����� ��� ������� � �

�� ����� � ������ �� �������� ��� ������ ����

� � �� � ���� � ��1��� �� ���� ��� �

���� ����� � ��� ������� �� ������ �� ����

� ����� ������� �4����*6��5 ������� ��

����� � � � ������ � ������ ���� � ��

�������� )���� � ������ � ��� �� ��� ������� �����

�� ������ ���� #��� �� ���� � �� ������ � �����

��� ������ ������ ���� � #��� �� ������ �� ���

�� ���� ����� � �� � �� � ������ ����� ���

REFERENCES% A�# E� �� ���� ��<� $��� (�� ,9:2'' 4%2.-5�

& ,�� ��6� )�������* � �� �� �� ����� �� �F� 3���� <�� �

4%2205�

' J� � KJG �� ,��� C;� + ���� ,���� :5:+- 4&00%5�

( ����� �E �� , �� ;�6� ,�-�� .� �" � ���� �/:&+

4&0005�

7 6 �$��� � � G ���� � ? �� ;�� � �� + .�" � � 4,�:&'7

4%2225�

+ ��� ,� ���� <� A�������@������ F �� 6���� E��

,�-�� .� �" � ���� �.:702 4&0005�

- G�� �� ��� � F� ��� � =; �� 6 �� !G� $��� (���

$ �� :4::(' 4&0005�

. D�� � �� �� !� ����� / $ �'���� ) ,.:&& 4%2225�

2 ?������ 3 �� J� � � )��� ���� )���� ,-:'2% 4%22-5�

%0 !����� =� F����� � �� ���� 3?� + .�� (����� )* ,�-����� /:.7

4%2225�

%% ��� �L� G�M L� ����� � �� ;������ �� �� �� )�� ��

-.:.(- 4&00%5�

%& ��� �L� + $��� ����� � � //:&000 4&0005�

%' G�����)��G��� � �� G��� ;�� + .�� (���� )* ,�-�����

43:%7- 4&0005�

%( ��$� !G� G �� �� F$� ,F� 3 ����� ! �� !�����

E6� + )��� ���� /,:%% 4&0005�

%7 6 ���� EE �� ��� ��� )������� / )��� ��� 44:%0'%

4%22+5�

%+ 6�� DA� F���� D �� >����� �� �� ���'� ������� ,�

����� /�# L )� �� %(+ 4%22&5�

%- =�� � ��� $����� )�� �� /�:&(. 4%2-+5�

%. ����L� !M���� !� ������� �N�� 6� 3�� ! ��;������ �� + $���

����� � � /,:%+.7 4&0005�

%2 ��� �L� L��� �� 3�� ! �� ;������ �� + .�� (���� )*

,�-����� 44:%&- 4&0005�

&0 ��� �L� ����� ��� :9:--7 4&0005�

&% ��� �L� ;������ �� =� �� ����� ?� ����� ��� :.:'(7

4%22.5�

����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5

top related