poly(hydroxyethyl methacrylate-co-glycidyl methacrylate) reactive membrane utilised for cholesterol...
Post on 06-Jul-2016
218 Views
Preview:
TRANSCRIPT
����� ����������� ����� ��� ,4:%'%+*%'&& 4&00&5;<�: %0�%00&8���.-7
Poly(hydroxyethyl methacrylate-��-glycidylmethacrylate) reactive membrane utilised forcholesterol oxidase immobilisationSinan Akgol,1 Gulay Bayramoglu,2 Yasemin Kacar,3 Adil Denizli1 andM Yakup Arıca3�1Department of Chemistry, Hacettepe University, 06532 Beytepe-Ankara, Turkey2Department of Chemistry, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey3Department of Biology, Kırıkkale University, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey
(Rec
� CoE-ma
� &
��������� �� ������������� ������������������������ ������������� � ��������� ��������
��� �������� �� !���������� ��������������� " ������������� ������������ ����� ���
�������� ������������ ���� �� ��� �������� " �� ��������# �$������%���������� �&'(�)
*�������� ������ ��� ���������� �������� � ��� �������� �� "����� �+����� ���� �������
��� ���� ��%�� ��� ��� ������ ��%�� " ��� ��������) �� �+����� " ,-�� " ��$��� ������������� ��� ��� " ��������# ��� ��� �%�� ��$��� �������� ��%� ./0 " ��� ������� ����+���)
&����������� ����+�� ��� �� ��������� " ��� ��$��� �� ���� �� ��� ��������%�� ���������) 1��
����%� ��������%�� ��� ,°* ������ ���� ���� " ��� "��� ��$��� ��� ��� �����2������ ������) 1��������� ������+���� ���� �������� "� "��� ��� ���������� ����������� �� /3°* ���� ����%����� ���� "���� 4)3.�43�4 ����4 ��� �� ���� �).5�43�� ����4# ��������+���) 1�� ���������� ��$��� ����+������ "%�� � �� 6%��� ������ �� ��� �������� �����������)
� �33� 7����� " *������� &��%����
8������� ����� ������� �� �� ���� �� ��� ������� �� � ����� ��������� �� ����� � �����
INTRODUCTION��� ������� ������� ��� ��� ����� � ������
�� ��� �������� �� �� ������� � � � ������� ��
������� ��������� �� ��� � ��� ������� �������
� ������� ������ �� ������� � ��������
������� �� ����� ���� !��� � �� �� ���� � ����
� " # ��$���� � ��� ���� � � ��� �� �����
������ �� ���� �� �������%�& �� ���� �� ��
���� �� ���� ��� � ������ ��� ������� � �
�� ��� � ����� ��� ������� ������ � � ������
������� �� ��� �������� �� ���������'�( ���
���� �� � ��� ������� � ��� ���� ����� �����
� � � ����� ��������� � �� ��� �� �������
��������� �� ���� �� ���� � ���� � � ������
������ ����� ���# )� � ���� � ����� #�����
#���� �� �� � � ������ ����� #��� ��� �
���������� ��� ������ �� ���������� ��� ��� ����
��� ���� �� � ��� ������� � ��� � ��� ���
��� ������� � � � ����� �� ������� � � ��
�� � � �� �������� ������(*+
,� ����� � ����� �� "������������� ������
��� ������� ��� ����� � �� �� ������ � � '����� �� ��� ���� �� ������ � ����� �� � ������
� � ��� "��� ������ ������� ����� �� �������
������ ������� �� ������ ����� �� ����� � �
eived 18 April 2001; revised version received 13 November 2001; acc
rrespondence to: M Yakup Arıca, Kırıkkale University, Department ofil: yakuparica@turk.net
00& ! ����� � ,������ �������� ����� ��� 0272*.%0'8&00&89'
��������-�. / �� ���� �� � ���� � �����
%'0*&+0�� � �� ����� � �� %00��� � #���� �# �
����� � �����1�� #��� ���� ���� �� ������� ��
������ � ��� �� �� ��������� � � �� ����� � ��
��� ��� ��� �� ������� ���� ���� ����� ���� ����
�� ����� � ����� �� ������� ����� � ��� ���� ����
�� ���� ������ � �� ����� �� �� ����2
3 ��4&���� ������� ���������5 4�����5
���� ���� � ����� �� ���� ���� ���� ���� ��
��� ������� � � ������� �� �� ��� �� � �����
�������� �������� ��� � ��� �������� ����
#��� ����� � ���� � � ����� ��� ����� �� � ��
� ��� �� �� � ������� � ���� #� �� � �� ��� �
��� ������� � �� ���� ��� ��� �� ��� ����� � �
� �� � ���� ������� � ����� � ��� ���� #�� � �����
�� ���� ����������� ���� #�� � ����� ��
���������� � �� ��� ��� �� ��� ��� � ��� �
������� �������� � � �� ������ �������� �
����� � ���� � ����� �� ������ ����� ���
�� ������ ������ ��� ��%0*%&
6������� ��������� 46��5� ��� ���� �
��������� ��� �� &�'��� ��� �� �� ���
������ �� ���� � �� #���� ���� #��� �����������
��� �� �� ���� ��� ��� � ��� � � � �����
� ����� � ��� #��� �� ��������� #��� �� �� ���)��
epted 2 January 2002�
Biology, 71450 Yahsihan-Kırıkkale, Turkey
0�00 %'%+
��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��
=� � ������� ��)� � ����� � � ������� � ����� ��
������ ��� �� ���� ����� �� �)���� �����%'�%(
! �� � ��� ���� �� ���� ��� � ���� �����
�� �� ������� �: 4%5 ��������� � � ������
����� #��� �� �� �������� ����� 4���� � ��� �
��� � ����� ������ ����� �� �������5� 4&5
����� � � ������ �� � � �������� � � �#
�������� � � ��� � ������� ������ � ��� 4����
� � ��4������� ���������� ���������� ������������5� � ��4��� ������� ����� ���)�����������5 � ��4��� ������������ ���������� �������
���5�%7�%+ �� ����� � � ���� ������ ��� �����
� ����� ��� ���� �� ��� ������ �� ������ ����
�� �� � ��� ��� ������ �� ������ ��� ������
�� �� ������ �� ���� � ���� � ������ ��
� ��� �� �� ��� � ��� ��� ��� ���� ��
�$������ ��� � �� �� � ������ �� � �� �����
� � � ��� �� ��� � �������� � �������
�� ��� ������ ������ � �� �4����*6��5
���� � ������� ������ �� �� ���� � ��� #�
����� �� ��� ������ � � �� � � �������� �
� &���� ������� ��������� 4����5 #��� ��������
��������� 46��5 �� >?��������� �� � � �����
���� � �� ��� ������� � � ������ 4������ ����� ����� ������� ��=/5� ��� ���� � �� ��������� �� ���
��� ������ �� �� � ��� �� ����� �� ��� �����
��� ��� ������ ���� #��� �� ��� ���� � ��
������ � � � � � � � ����� ��� ������� � �
������ �� � ����� �� ������ �� ������ ����
� � #� ���� � ��� ��� ������� � � �� ����� �
����� �� � ����� ��������� �� ����� � �� ����
�� � ����� ��� ������� � �� �����*6��
� � ���� ������ �� � ������ ������� ������
��� ������ � ��� ������ � ��� �� ���� � ����
�� � ��� � ������� � � � ������ ����� �� �
��������� � � � ������� � � �� ����� � ��
�� � ���� "����� <������ � ����� �� � ��� ��
��� ������� ������ �������� �� ������ ���
�������� �� )������ ������ 4�� �� ���5#�� ���������� �� ����� � � ����� �������� �����
�� �� �� ��������� �� ������ ��� � ��� ���
� ������� ������ #�� �� ��������
EXPERIMENTALMaterials,� ����� � ����� 4�, %�%�'�+� � � ������� ��������� �� �������� � #��� #��� �����1� �������
'(>���%� � ���5 �� �� ����� 43<;� �, %�%%�%�-� ��� ��� � � � ������� &00>���%� � ���� #���������� �� ��� !��� ,������ , 4!� @ ���� �<�
>!�5 �� ���� � �������� &���� ������� �����
����� 4����5 �� �������� ��������� 46��5
#�� ������ � � A��) �6 4!#�������5� ��
� �� #� ��������� ���� ������ ������ �� ���
������� � ��� B��� �� �� )��� � (°, ����� ������������ �� ������� ������ 4��=/5� �� ����� ��
�� � C�%00� ������������ ����� ��� ��� ��
� ���� ���� ������ 4=!�5 #�� ������ � �
!��� ,������ , � ��� ��� �������� #�� �
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
������� ��� �� ������� � � ���) �6
4;������ 6����5�
Preparation of poly(2-hydroxyethyl methacrylate-��-glycidyl methacrylate) membrane �� � ��4&���� ������� ���������� �������������������5 �4����*6��5 ��� ��� �� ��� ����
��� � � #� ����� �� >? �������� �� � � ���
������ �� �� � �������� � #� ���� �� ��
��� ���� � ��� 4������: 2�0��5 � &7°, ���� ��� ��� �� ����� � %�� �� ������ ����
�� � ������ 47��5 � ������ ���� 4%�+��
%�'&�%0�& � �5� 6�� 40�(�� '�'%�%0�& � �5���=/ 4%0��5 � � �������� � ������ �� �� ��
���� ����� 4'��� 70��� �� -�05� �� ��������
������ #� ����� �� �B�������� � &7°, �
%7��� �� ���� ����� #������ �� ������ #�
���� � ��� ��� ��� � ��� �� ��� ��� � � ���#��
����� ��� ���� � � &0���� ���� � �������� ��
��� �4����*6��5 ������� #�� #���� �����
����� #��� ��������� #�� �� ��� ��� ����� ������
4������: %�0��5 #��� ��� � �
Membrane characterisation studies���������� �� �� ��� ������ �� �������#�� �� #�� � � ) �� ��������� #�� � (.�� �# ����
������ ���)� 4�%�5 #�� #������ ��� �� ������� ������ � #��� �� ���� �� ����� ��� �
+0°, � &(� ����� � ����� #������ �� #�� � ����� � ��� ������� �������� �
� �� #�:
D�� � ����� 4%w/w) � ���� � ������� � %00�%�
D��� �� �� �� � ��� #������ � �# ���� �� ��
������� ������������
� ������ � ��� �� �� ���� !������ ����� � ��� ����� � ��� ���� � ��4����*6��5 �������
#�� ������ ����� E�<@ E�! 7+00 �������
����� � ��� �� ��� ��� � ���� #��� � �� ����
������ �������
���� �� ��� A �F ����� � ��� �4����*6��5������ #� ������ ����� !������� A �F
.000 ����� ����� �� � ����� �4����*6��5
������ 40�%�5 �� G= 40�%�5 #�� �� �����
������ ��� ������ #� ������ � � � ����� ��
��� ������� �� ����
Immobilisation of cholesterol oxidaseA����� �� �� �� � �� ����� �4����*6��5
������ ���)� 4%0�� ������ %�0��5 #�� �B�����
���� �� �� ����� ����� 470��� �� .�05 � &��
�� ������� �� � ��� ��� ���� ������ � �����
��� �� ����� � ����� 470��� %�� ���%5� ��� �������� � � �� ����� � ����� � ��� �4����*6��5
������ ���)� #� ���� �� � &&°, � %.��
#���� � ����� ���� ������ ��� ���� � ������� ����
%'%-
� $#��%� �� �
���� ��� �� ��� �4����*6��5 ������ ���)�
#�� �� ��� � � ��� ������ �� #���� #��� %�
/,� �� ���� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05�
�� � ��� � ��� ������� �� ����� � ����� �
��� �4����*6��5 ������ ���)� #� �����
����� �� ������� ��� ������ �� 1�� � ������
�� �� � � ���� #����� ��� ��� ������� � ������
����� , ����� =������ =��� � ��� ���� �
�������� �� =�� ��%- � ������ � ���� � ��
������� #��� =!� � ���� �� � )� #� � ������� �
40�07*0�70�� ���%5 #� ���� �� ��� ������� � �� ���� �� ��� ������ �� #�� � ���� ���
Activity assays of free and immobilised cholesteroloxidase �� ������� � ��� �� ��� ������� �� ����� �
����� #� ��������� �� ���� � ��� � �� #���
� ����� ������ ���� ���
,� ����� �<& �&< �����������,� ����� � �����
,� ��������'� ���&<& �&�
�&<& ��;��������� ������3� �������;����������&<
������ �������
�'�� %00�� �� ����� � � ���� � 4%00��5 #� ���
��� �� ���� ����� �� ����� � 4'�.+�5 �� ������ �
� ���&� � 4%'��5 �� �� � C�%00 4(��5� ����
������ � '0���� ��� � ���� #� ��� �� � %00��
#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05� ��� �����
� ���� � #� ���� �� ��� �� ��� ������
�� ��� ������ � ������ �� ����� 4+�0��5
�� ������������ 4%'�&��5 �� �� ����� �����
4%00��� 0�%�� �� -�05� �� ��B� � � (�.�� � ����
������ �� 0�%�� � �� ����� � � ���� � 40�7*
%0��5 #�� ����� �� ���������� � '7°, �
%0��� �� #�� ���� �� ���� � #� ���� �����
�� ����� 0�%�� � ������ � ���� � 4� �������
�� ����� � ����� %�� ���%5 ��� ������� ���
���� 4�# ������ ���)�5� ���� ����� � �
�������� ��� 4%�7��� '0H5 �� ���� #�
������ � 7&7�� �� >?8?�� ����� �� � ����
4!������� � ��� %+0%� )� � E��5�
���� ������� ���� #�� ���� �� �� ��� ��
��� (�0*.�0 �� �������� ��� &0*(7°, �
�������� ��� �� �� �������� � 1��� � ��� ���
�� ��� ��� ������� ��������
<�� �� ����� � ����� ���� � ��� ���� � � �
����� � � %�� � �� ��������'� �� �� �&<& �� ������� ��� � ����� ��� �� �����1� ������� �� ���
����� � �� ����� � ����� ����� �� �� � � �����
Stability of immobilised cholesterol oxidase inrepeated use �� ������ � � ��� ��� ������� �� ����� � �����
������� ��� ������ ���� ��� #� ������ �
�������� � �� �� ��� �������� ���� !���� �� ����
��� ��� ��� ������������� ���)� #�� #����
%'%.
#��� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���� �
����� ��� ���� ������ '0 ����� �������������
Thermal stability �� ����� ���������� � ��� ��� �� ��� �������
�� ����� � ����� #�� ���� �� �� ������� ���
������ ������� � ��� ������ ��� ��� � ����
�������� ��������� 470� +0 �� -0°,5 �� �� ������ ����� 40�%�� �� -�05 � %00���� ���� ���
%0��� ���� ������� ����� #� �� ��� ��
����� � �������� ������� � �������� � ���
�� 1��� �� �������� � �� � ������ #� #���������� � �
��$ � ��$0 � #�� �(�#��� $0 �� ��� ������ ������� �� $ �� ��� ������� ������� � 4���5�
Storage stability ��� ��������� #� � ������� � �������� ���
�������� � ��� �� ��� ������� �� ����� � �����
����� �� ��� �� �� �� �� ����� ����� 40�%��
�� -�05 � (°, � +0 ���� �� ������ ���������
#�� ���� ��������� � �������� � ��� �� ���
������� � ��� ����� � #� �������� � ������
��� � ��� ������ ������� � ���� � ��� ������
��������
RESULTS AND DISCUSSIONProperties of the p(HEMA–GMA) membrane support�� ��� ������ ������ � �� �� ���� � ����
� ������� ������ ���� #� ����� �� � � ���
������ � � ��� ������ � � ��� &���� �������
���������� #��� �������� ��������� �� >?
�������� �� � � �������� � �� ��� ������� � �
������ 4��=/5� �� � �� ��B������ ���� ���� ��
�� �� ����� � �� � � ����� ������ ��� ������� �
��� ���� ������ ��� ������ � � ���� ��
��������� � ����� ���� � ������� ������ ��� �����
� ���� �� � ��4����� �� � �5� �� ������ ���� �
#� ��������� �� ��� ��� ������ �� �� � �� #�
����� ��� ����� ��� ��� ���� #��� �� �� � ���
1��� �� �� �� ���� � ��� � ��� � �������� � 8
� ����� ��� ������� � � � ������ �� <I, ��
/I, � ��� � ��� �� ��� �� ���� � ��� �
�������� ������ � ��� ��� �� ������ �������
���� � ������ � ��� �� ���� � ��� ��� ������� �
� ������� �� � ������ A����� �� �� �� ����
���� ���� �� � ��� � � � � ����� ���)��� #���
�������� ���� ���� � ��� 4��� � ��� �� ���� ���
� ���5 � ��� � ���� ������� ���� �������
���������� � ����� �� 4�� �� -�05%+ �� �������
������� � ��� �4����*6��5 ������ �� ���
������ �� A�� %�
�� ������ �� �4����*6��5 ������ ���
������ ��� �� ��� ������� ��� � �������� ��� ����
!����� ��� � �� � � #�� #�)��� ��� ��� ���
� ��� #����� ��� ��� ���� ��� ������ ��� �������
���#��� ��� � ���� ����� �� ����� � ���)� �
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
Figure 1. Chemical structure of p(HEMA–GMA) membrane.
Figure 2. SEM micrographs of poly(HEMA–GMA) membrane: (A) surface;(B) cross-section.
��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��
#��� �� #�� � ����� �� ��� �� ��� ��� ���
#��� ��� ��� � ������� �� ������ ��� ������� �
�� � ���������� �� #�� � ����� � ��� �4����*
6��5 ������ #� ��������� �� ��� #�����
��������� ���#��� ��� #�� �# ���� �� ��� ��
������� �� �� #� (-H�
!������ ����� � ��� ���� 4!��5 �������� ��
A�� &4�5 �� 4=5 �� # ��� ����� �� � �������� ��
������� � �4����*6��5 ������� ������
������� �� ������ �� #� ������ � �� �����
�� ���) �������� #���� � ��� � ���� ��� �
� ��� ������� � � �������� �� ����� � ������
� ��� �4����*6��5 ������ �� �� � ����
���� ��� ����� �� ��� � ���� ������ �����
� #��� � # ������� �� ��� ����� �������� �� ���
�����
�� � � ����� � � �� ��� � ���� �� 6��
����� � � ��� �� A �F ����� �� ��� �� �� #� ��
A�� '� ��� A �F ����� � �4����*6��5 ��� ���
���������� ��������� ����� � ��� � ��� ��� �
����� ���� �� � � � ���� � �'700���%��� �� ��� ���������� ����� �� � � �� ����
�� 6�� � ��� ��������� ����� � � �&2'0���%
�� ��� ������ ����� � � &2+0���%� �� ����� �� %-(0���% �������� ��� ���� � �1���� � � � ������ �� 6��� �� �� ���� � �� ����� ��� ���
� 2%0���%�
Figure 3. FTIR Spectrum ofp(HEMA–GMA) membrane.
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
Immobilisation of cholesterol oxidase �� ������ #� ��� ������� � ��� �4����*
6��5 ������ �� � ����� � ����� ���� �)����
� ����� ��� �� ������ �� ���� � ��� � ���
������ �� ��� ��� � ��� � ��� ������ #��
%'%2
Figure 4. Covalent immobilisation of cholesterol oxidase onp(HEMA–GMA) membrane.
Figure 5. Effect of pH on the activity of free and immobilised cholesteroloxidase.
Figure 6. Effect of temperature on the activity of free and immobilisedcholesterol oxidase.
� $#��%� �� �
� ���� ��� � ���� �� ���� ������ � ������ ���
��� ������� � ���� � 4A�� (5� �� ���� �� A�� &� ���
������ �� ��� �� ��� ������� � �� � ��� ������
����� � ��� ������ �� #����� ��� � � ����
�� ��� ������ �� ���� � ���� ��� ����� �
� ��� ���� � � ��� ������� #��� ��� ��� �������
������� �� ���� � 7'�� � ������ #� ��� �������� �� ��& � ������� �� ��� � ��� ������
������ � �� +-H � ��� ������ ��������
?���� � ��� )������ ������ �� � ��� � ����� ��� ������� �� ����� � ������ #�� ���������
����� �� ����� � � �������� �� ��� ��� ��
��� ������� ������ �������� ��������*������
)������ ����� � #� ������� A ��� ��� ������
�� #� %�2��� ��� � � ������� ��� �������
�� ����� � ������ ��� ����� �� #� &�-���
�� ������� '.H ����� ��� ��� � ��� ���
������� A ��� ��� ������� ��� #� '&>���%
� ����� ��� �� � � ����� ��� ������� � � ���
������ � ��� �4����*6��5 ������� ���������� �����1����� � &%>���%� �� ����� ����� )������ ������ � ��� ��� ������� ������
� ��� �� ��� � ��� ��� ����� ������� �� 4�������
�� � ����5� � ����� � ������� �������
������ �� ��� ������ � ������ 4��� ����� ��
� ����� ��������5� A����� �� �� �� ��� ��
����� ��� ��� ������� � � ��� ������ �� �����
������ ��� � �� ���� � ��� ������� ����
�������� ��� ����� ��������� �� �� ���� ���
��� ������� �� ����� � ����� �� #�� � #� ������
1���� � ������ � ���� � ��� ��� � �������
Effect of pH and temperature on catalytic activity �� �� ������ � ��� ������� � ��� �� ��� �������
�� ����� � ����� �� ���� ������� �� ����� � ���� �
� �������� �� ����� 4(�0*.�05 �� ��� ������ �
�������� �� A�� 7� �� ����� � ������ ������� �
��� ��� ��� ������� �� ����� � ����� � �� �� ���
��� 4 ��� �� -�05� �� �� � 1�� � ��� ��� �
������� ������ �� � �������� �������� ���� ���
��� ������� �� ����� � ����� ������� �����1�����
%'&0
��� ��� �������� �� ��� ��� � � � � #� ��
������ ��� ����� �� � ���� �� �������� � ���
��������� � � �� ����� � ����� � ������� ��������
� � ������ ��� �������� � ��� ������ � �������
� ��� ����� � ��� �4����*6��5 �������
�� ������ � �������� � ������ ������� #�
����������� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �� ���
�������� ��� &0*(7°,� �� ����� ��������� ������ � ��� ��� ������ #� � �� '7°,�#���� ��� � ��� ��� ������� ������ �� ��� � �
��������� �� � ����� ��� ������� � #� � �� (0°,4A�� +5� �� ��� �������� � �� ��� ������� �������
��������� ����� ������ �������� ����� ���
���� ��� � �������.�%2 �� ������ ��� � ����� �
��� ������ � ��� ���� � �� ����� � �� ��� ��
"��������� �� ����� �� ����� ������ � ����� � ���
������ � ������ � � ����� ��� � �� � �� ��
�� � � ������� � ��� ��������&0
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
Figure 7. Stability in repeated use of immobilised cholesterol oxidase.
Figure 9. Thermal stability of immobilised cholesterol oxidase at threedifferent temperatures.
��������������� ���� ���� � ��� ���� ���� ����! ��"��
Stability in repeated use �� ���� �� �������� � ��� ������� ������
������� �� ��� ��� ��� �� � ������� �� �������
�������� � ��� �)� ��� ������� ������� � �
������ �� ��� ���� ��� � �������� <���
�� �� �������� � ��� ��� ������� �� ����� � �����
#� ��������� � ���������� ���� ���� �� �
'7°,� �� ������ �������� �� A�� - �� # ��� ���
��� ������� ������ ������� ������ �� �� ���
��� � ��� ����� ������� ��� %+ ������� ���� ����
����� ������ �� �� ����� � ����� � �� #�
������� �� ���� � �� ����� &(H ��� '0 ������ �
���� ���� �� � ������ �������� � � ��� �������
�� � � �� ����� � ����� �� � ����
Thermal stability �� ������ � �������� � ��� �������� � ��� ���
�� ��� ������� �� ����� � ����� �� �� #� �� A��� .
�� 2� ������������ �� ����� � ��� ��������
Figure 8. Thermal stability of free cholesterol oxidase at three differenttemperatures.
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
�������� ��� ����� �� � ����� �������� �
#� ������ � ��� ��� ������� �� ����� � �����
� ��� �4����*6��5 ������ � ���� #���
��� � ��� ��� ������� �� 70°,� ��� ��� ����� ������� ������� ������ +'H �� ..H ��������
������������ ��� %00��� � ��� �������� �� +0°,���� ��� ������� � � #� ��������� � ���� �� #�
�� ��� ��� ��� � �� = �� ��� ��� �� ��� �������
������� � �� �� � ���� ������ ������� � -0°, ���
(0��� �� .0��� � ��� �������� ������������ ��
�������� �� ����� �������� � �� � ������ �
��� �� ��� ������� ������� #�� ��������� � �
��� �������� ������ ������� &�'� ����� � ������������ ���������� ��� ������ � �������� ��
��� %� �� ����� �������� � �� � ������ �
��� �� ��� ������� ����� �� � -0°, #��
�������� � #� 4���5 %�0+�%0�% ����% �� #� 4���5&�+.�%0�& ����%� ������������ ���� ������ ���������� ��� ���� �������� � ��� ������� �� ����� �
����� ��� ��� �����1����� ����� � ����� ����
������� �� ��� ��� �������� � ������� �������
�� � ��� ������� �� ��� � ������ ������� � � �����
������� # ��� �� ��������� ������� �����
�������� �� ���� �� ��� � ����� � ��� ���
����� �������� �� ��� � ���� ���# ) �� ������
� ��� �������� �� � ����� ��� ������� � ���� ��
� ���� ��� � ������ ��� ����� ������� �
��������&0 �� ����� �� �� �� �� ���� �� ��� ���
��� ��� ���� ���� � !������� !��� ���
� ��4��� ������� ���������5 �� � ���������
� ���� ������� � � ����� �������� � �� �����
����� ����� �����������&% <� ��� ���� � �����
������ ��� �4����*6��5 ������ �� ��� �
������ ���# ) #���� ������� ����� ����� ��������
��� ��� � ��� ��� � �������
%'&%
Table 1. Half-life (t1/2) and inactivation rate constant (ki) of the free andimmobilised cholesterol oxidase at three temperatures
�����������
°�
���� � ���� ����������� � ����
�� ���� �� � �� ���� �� �
�� ��������� ��� ��������� ��
�� ��������� �� �������� ���
� ��������� �� �������� ��
Figure 10. Storage stability of free and immobilised cholesterol oxidase,stored at 4°C in phosphate buffer (0.1M, pH 7.0).
� $#��%� �� �
Storage stabilityA�� �� ��� ������� �� ����� � ����� ����� ��
#�� �� �� �� �� ����� ����� 40�%�� �� -�05 �
(°, �� ������� ���������� ���� �� �
��� � � +0 ��� 4A�� %05� �� ��� ������ � ��
� �������� ��� ������� #����� &0 ���� ��� �������
����� �� � �� '7H ������� ����� ��� ��� ��� ��
��� ������� � ����� ���� � � �� ��� ������ ��
����� � ���� � �� � ���� � � ��� ��� � �������
�� ��� ������� �� ����� � ����� ������� � ��
('H � ��� ������ ������� � ����� ��� +0 ��� �� ��
��� ��
CONCLUSIONS<�� � ��� � �� ��� ��� ��� � ��� ������ �����
%'&&
� � �� �� ��� ���������� � ��� � �� ��� ��
�������� � �������� �� ������ � ��������� �
������� � ��� ������ �������� ��� ��� ������� �
���� ��� �� ���� � ���� �� �� ��� ������ ������
������ �� ���� � ����� ������� �4����*6��5
������ ���� �� #�� ����� �� � � �������
�� � � &���� ������� ��������� #��� ��������
��������� �� ���� � � ����� ��� ������� � �
�� ����� � ������ �� �������� ��� ������ ����
� � �� � ���� � ��1��� �� ���� ��� �
���� ����� � ��� ������� �� ������ �� ����
� ����� ������� �4����*6��5 ������� ��
����� � � � ������ � ������ ���� � ��
�������� )���� � ������ � ��� �� ��� ������� �����
�� ������ ���� #��� �� ���� � �� ������ � �����
��� ������ ������ ���� � #��� �� ������ �� ���
�� ���� ����� � �� � �� � ������ ����� ���
REFERENCES% A�# E� �� ���� ��<� $��� (�� ,9:2'' 4%2.-5�
& ,�� ��6� )�������* � �� �� �� ����� �� �F� 3���� <�� �
4%2205�
' J� � KJG �� ,��� C;� + ���� ,���� :5:+- 4&00%5�
( ����� �E �� , �� ;�6� ,�-�� .� �" � ���� �/:&+
4&0005�
7 6 �$��� � � G ���� � ? �� ;�� � �� + .�" � � 4,�:&'7
4%2225�
+ ��� ,� ���� <� A�������@������ F �� 6���� E��
,�-�� .� �" � ���� �.:702 4&0005�
- G�� �� ��� � F� ��� � =; �� 6 �� !G� $��� (���
$ �� :4::(' 4&0005�
. D�� � �� �� !� ����� / $ �'���� ) ,.:&& 4%2225�
2 ?������ 3 �� J� � � )��� ���� )���� ,-:'2% 4%22-5�
%0 !����� =� F����� � �� ���� 3?� + .�� (����� )* ,�-����� /:.7
4%2225�
%% ��� �L� G�M L� ����� � �� ;������ �� �� �� )�� ��
-.:.(- 4&00%5�
%& ��� �L� + $��� ����� � � //:&000 4&0005�
%' G�����)��G��� � �� G��� ;�� + .�� (���� )* ,�-�����
43:%7- 4&0005�
%( ��$� !G� G �� �� F$� ,F� 3 ����� ! �� !�����
E6� + )��� ���� /,:%% 4&0005�
%7 6 ���� EE �� ��� ��� )������� / )��� ��� 44:%0'%
4%22+5�
%+ 6�� DA� F���� D �� >����� �� �� ���'� ������� ,�
����� /�# L )� �� %(+ 4%22&5�
%- =�� � ��� $����� )�� �� /�:&(. 4%2-+5�
%. ����L� !M���� !� ������� �N�� 6� 3�� ! ��;������ �� + $���
����� � � /,:%+.7 4&0005�
%2 ��� �L� L��� �� 3�� ! �� ;������ �� + .�� (���� )*
,�-����� 44:%&- 4&0005�
&0 ��� �L� ����� ��� :9:--7 4&0005�
&% ��� �L� ;������ �� =� �� ����� ?� ����� ��� :.:'(7
4%22.5�
����� ��� ,4�%'%+*%'&& 4&00&5
top related