recubrimiento comestible
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EFECTO DE LA APLICACIN DE UN RECUBRIMIENTO COMESTIBLE ANTIMICROBIAL Y ANTIOXIDANTE A PARTIR DE ACEITE DE OREGANO (Origanum
vulgare ) EN LA CALIDAD Y VIDA TIL DE LA LECHUGA (Lactuca sativa L) MNIMAMENTE PROCESADA REFRIGERADA
Nidia Roco Patio Rincn1, Heidy Milena Moreno Cristancho1, Mara Patricia chaparro Gonzlez1.
1Ingenieras de alimentos Universidad de la Salle
Bogot-Colombia
mchaparro@unisalle.edu.co
Telfono 3535360 ext. 2553
Resumen
Se elabor una pelcula comestible compuesta por: pectina 6%, gelatina 5% como
gelificante y como surfactante aceite de organo en concentraciones de 1% y 2% y se
aplic a la lechuga mnimamente procesada refrigerada. Los resultados mostraron que la
tasa de respiracin se disminuye en un 30%, la prdida de peso en un 21% y la reduccin
de humedad en 94%. Los slidos totales aumentaron en un 35% y la protena aument
en 30%. Su efecto antimicrobial se evalu mediante pruebas microbiolgicas y el efecto
antioxidante mediante pruebas sensoriales, mostrando como resultado el aumento de la
vida til de 9 a 20 das.
Palabras claves: recubrimiento comestible, lechuga mnimamente procesada,
antioxidante, antimicrobiano, aceite de organo.
Abstracts
It was developed an edible film composed of: pectin 6% or 5% gelatin as a gelling agent,
and as surfactant oregano oil was used in concentrations of 1% and 2% and applied to
minimally processed chilled lettuce. The results showed that the respiration rate
decreased by 30%, the weight loss by 21% and there was a reduction of 94% in
moisture. Total solids increased by 35% and the protein increased by 30%. Its
antimicrobial effect was evaluated by microbiological tests and the antioxidant effect by
sensory tests, giving as result an in increase in the shelf life between 9 and 20 days.
Keywords: edible coating, minimally processed lettuce, antioxidant, antimicrobial,
oregano oil.
Vol 21, No 26 (2012), Revista Alimentos Hoy - 43
YURITexto tecleado Recibido 14/08/2010, Aceptado 10/09/2010, Disponible online 31/08/2012
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I. INTRODUCCION
La demanda actual de productos
frescos y fciles de preparar, en especial
frutas y hortalizas, ha trado consigo un
aumento en el mercado de productos
mnimamente procesados o prelistos.
Segn la Asociacin Hortifrutcola de
Colombia (ASOHOFRUCOL), En
Estados Unidos, por ejemplo, el consumo
per cpita de esta categora se estima en
30 Kilogramos anuales, muy lejos del de
Gran Bretaa (12 kg), Francia (6 kg) y
Espaa (1.5 kg), negocio que al ao
mueve unos 80 millones de euros. Segn
la Asociacin Espaola de Frutas y
Hortalizas listas para su empleo, Afhorla,
entre enero y noviembre del ao pasado
se comercializaron 55.600 toneladas de
frutas y hortalizas de dicha categora,
13% ms que en igual periodo del 2006.
En Colombia, el seor Jos Fernando
Camero, jefe de compras de frutas y
verduras de Carulla, informa: Esta
categora, ha tenido un importante
crecimiento anual de 15-20% en el
segmento de los hogares, principalmente
en Bogot, donde se concentra 70% de
dicho mercado nacional, seguida por
Medelln, Barranquilla y Cali. Los
mnimamente procesados es una
tendencia mundial que de manera
efectiva responde a la falta de tiempo
que se observa en la sociedad de hoy.
Durante la manipulacin y
preparacin, las frutas y hortalizas
mnimamente procesadas presentan
cambios debido a la actividad fisiolgica
de los tejidos, provocando sntomas de
deterioro en la textura, color, prdida de
peso, humedad, pardeamiento
enzimtico, aumento de la tasa de
respiracin y rpido desarrollo
microbiano, factor de gran importancia ya
que se trata de alimentos crudos, lo que
obliga a extremar las buenas condiciones
de manipulacin y aplicar otras tcnicas
que permitan cierta inhibicin microbiana.
Las tecnologas tradicionalmente
empleadas en la conservacin de este
tipo de producto son de acuerdo con
Belloso (2007), la refrigeracin (como
requisito indispensable tanto en las
etapas de produccin, como de
distribucin, almacenamiento y
comercializacin), el envasado en
atmsfera modificada, el empleo de
soluciones desinfectantes, antioxidantes,
tratamientos con luz ultravioleta, adicin
de agentes estabilizantes de color y
textura, aplicacin de antimicrobianos o
el uso de recubrimientos comestibles.
Los recubrimientos comestibles son
aquellos elaborados con sustancias
polimricas naturales, de composicin
heterognea las cuales pueden ser
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ingeridas sin riesgo para el consumidor y
que le aportan algunos nutrientes tales
como: protenas, (gelatina, casena,
etc.), celulosa, almidn o materiales con
base en dextrina, alginatos , gomas,
ceras, lpidos o derivados de los
monoglicridos y la mezcla de cualquiera
de estos grupos (Bosquez ,2000), que
tienen como fin inhibir la migracin de
humedad, oxgeno, dixido de carbono,
aroma, lpidos y adems servir como
transporte de antioxidantes,
antimicrobianos y sabores e impartir
integridad mecnica y facilitar la
manipulacin de los alimentos (Martnez,
1999).
El presente trabajo tiene como
finalidad elaborar un recubrimiento
comestible antioxidante y antimicrobial a
partir de aceite de organo para aplicar
a la mezcla de lechuga crespa (verde y
morada) mnimamente procesada
refrigerada y evaluar el efecto en la vida
til y calidad del producto, mediante
anlisis fisicoqumico, microbiolgico y
sensorial.
II. MATERIALES Y MTODOS
Material vegetal
Se utiliz lechuga verde y morada de
la variedad crespa, mnimamente
procesadas empacadas en bandejas de
tereftalato de polietileno (PET), co-
extruido calibre 44, proporcionadas por
la empresa DEFRESCURA el mismo da
que fueron procesadas.
A la materia prima, se le realiz
pruebas fisicoqumicas: humedad
A.O.A.C. 7.003/84, slidos totales,
protena Kjeldahl-Gunning-Arnold,
Carbohidratos (azcares totales), cenizas
A.O.A.C. 7.009/84, tasa de respiracin,
capacidad de adhesin, prdida de
peso, pruebas microbiolgicas y
sensoriales (olor, color, sabor, apariencia
y textura), para identificar sus
caractersticas inciales y de esta manera
tener un patrn de comparacin para los
diferentes ensayos a realizar con las
formulaciones de los diferentes
recubrimientos comestibles.
Formulacin de los recubrimientos
comestibles.
Se elabor una pre experimentacin
con 10 diferentes formulaciones,
variando la concentracin de pectina,
carboximetilcelulosa, aceite de organo,
agua destilada, porcentaje de gelatina
(este se predetermino segn estudios
preliminares por parte de otros autores
como Rojas, 2006, mantenindose el
valor de concentracin fijo en las
respectivas formulaciones). Se evaluaron
caractersticas organolpticas tales
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como: sabor, olor, apariencia y
caractersticas fisicoqumicas como a la
materia prima (antes enunciadas).
Tasa de Respiracin. Se pes de 5 a 10
g de producto, posteriormente se coloc
en el respirmetro (fabricado en la
planta piloto de frutas y hortalizas
universidad de la Salle), durante 1 hora.
Prdida de Peso. Se pesaron 100 g de
producto en el da inicial (da 0), de ah
en adelante se pes cada cuatro das
para determinar as la cantidad de
humedad que se perdi en cada uno de
los tratamientos hasta el final del su vida
til.
Adhesin al recubrimiento. En cada
uno de los tratamientos se cont la
cantidad de burbujas que se presentaron
al ser aplicada a la mezcla de lechugas
con cada uno de los recubrimientos, para
as poder ser analizados
estadsticamente. Para lograr esto se
hizo una escala cuantitativa y as se
pudo determinar la capacidad de
adhesin del recubrimiento. La escala se
muestra a continuacin en la tabla 1.
1Tabla 1. Escala cuantitativa para
medir la adhesin al recubrimiento.
N BURBUJAS CALIFICACIN
0 10
1 , 3 7
4 , 6 4
7 o mas 1
* 1 calificacin ms baja, 10 calificacin
ms alta
Con base a los resultados obtenidos
se determin la seleccin de las 4
mejores formulaciones.
Elaboracin de los recubrimientos
comestibles.
Mezcla de los componentes. Se
realiz en caliente a 50C y se hizo
necesaria la utilizacin de una batidora
(marca Kitchen modelo KSM 5),
mezclando por 15 minutos para lograr la
incorporacin de las materias primas
utilizadas.
Enfriamiento. La mezcla se dej a
temperatura ambiente durante 20
minutos hasta llegar a 18C.
Aplicacin del recubrimiento. La
aplicacin del recubrimiento a la mezcla
de lechuga se realiz por aspersin con
un atomizador plstico para as lograr
una aplicacin ms uniforme.
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Secado. La lechuga con recubrimiento
se dej secar a temperatura ambiente
durante 2 horas.
Empacado. La mezcla de lechugas se
empac en cajas plsticas transparentes
de (PET) tereftalato de polietileno, calibre
44.
Almacenamiento. Las muestras fueron
almacenadas a una temperatura de
refrigeracin de 5C y humedad relativa
del 85%, medicin hecha con higrmetro
marca PCE Referencia: HGP).
Evaluacin del efecto del gelificante y
aceite de organo
La evaluacin de la calidad del
recubrimiento comestible se determin
por medio de pruebas fisicoqumicas
(humedad, slidos, protena, azcares
totales, tasa de respiracin, prdida de
peso, capacidad de adhesin) y de
anlisis sensorial.
Anlisis sensorial. Se realiz un estudio
discriminante- ordenatorio de las
cualidades sensoriales referente al olor,
sabor, color, apariencia y textura
manejando una escala hednica de cinco
puntos donde el numero 0 era la
calificacin ms baja y el numero 5 la
calificacin ms alta. La evaluacin fue
realizada con un panel de 20
evaluadores no entrenados, con un
rango de edad de 15 a 45 aos.
Estimacin de vida til de la lechuga
Al realizar el seguimiento peridico de
los diferentes tratamientos cada cuatro
das, se observaron cada una de las
caractersticas organolpticas que
presentaban, hasta el punto que su
calidad fuera aceptada comercialmente.
En ese momento se le practicaron los
respectivos anlisis microbiolgicos para
garantizar que estuvieran dentro de los
parmetros para ser un producto apto
para el consumo humano y as poder
estimar su vida til.
Pruebas microbiolgicas. Las pruebas
microbiolgicas se realizaron al inicio del
seguimiento (Da 0) y al final de este, de
acuerdo con los resultados de las
caractersticas organolpticas. Estos
anlisis se hicieron en los laboratorios
de la empresa ENZIPAN DE COLOMBIA
LTDA. Usando los mtodos descritos en
la tabla 2.
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Tabla 2. Mtodos de anlisis
microbiolgico en los tratamientos.
ANALISIS MTODO NORMA
Mesfilos
aerobios
Plate count
32/24-48 horas
AACC
4211
NMP.
Coliformes / g
Brila 35/ 24-48
horas
NTC
4516
NMP
coliformes
fecales /g
Brila triptona
44.5 C/ 48
horas
INVIMA
Mohos y
levaduras
UFC/g
Agar ogy 25 C
/ 5 das
INVIMA
Deteccin de
Salmonella /
25g
XLD,3537C
Pruebas
bioqumicas
INVIMA
Deteccin de
E. Coli
Brila triptona
44.5 C/ 48
horas
INVIMA
UFC: unidad formadora de colonias
NPM: numero ms probable
Anlisis Estadstico
El modelo experimental que se sigui
fue el diseo experimental
completamente al azar con tres
repeticiones, con un anlisis de medidas
repetitivas donde se tomo informacin
peridicamente cada cuatro das hasta
que las caractersticas organolpticas del
alimento fueran aceptables.
Las unidades experimentales a tomar
fueron lo ms homogneas posibles
para disminuir la magnitud del error
experimental, ocasionada por la variacin
intrnseca de las unidades
experimentales.
Los datos se analizaron con el
programa estadstico S.A.S.(Statistical
Analysis System). Version 5.0.
De acuerdo a los datos tomados se
realizo: estadstica descriptiva con un
anlisis exploratorio de datos (medidas
de tendencia central),anlisis de varianza
por lectura a travs del tiempo de
medidas repetitivas ,pruebas de
comparacin mltiple, prueba de Tuckey,
anlisis de correlacin, anlisis de
regresin, prueba de Dunnett para
comparar patrn vs el resto de
tratamientos.
Los datos se analizaron con el
programa estadstico S.A.S.(Statistical
Analysis System). Version 5.0.
III. RESULTADOS Y DISCUSIN
La tabla 3 muestra los resultados de
los anlisis fisicoqumicos, en donde se
determin que la composicin qumica
de la lechuga es similar al reportado por
las tablas de composicin de alimentos
del Instituto Colombiano de Bienestar
Familiar (ICBF, 2005), lo que permiti
avanzar en el proceso experimental con
seguridad.
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Tabla 3. Anlisis Fisicoqumico De Materia Prima
Proteina
(%)
Humedad
(%)
Cenizas
(%)
Slidos
Totales
(%)
Carbohidratos
totales (%)
Tasa de
Respiracin
(mgCO2/kg/h)
1,040.08 95,160.60 0,870.01 4,240.08 1.830.10 22,130.24
Tabla 4. Anlisis microbiolgico de la materia prima.
PARAMETROS UNIDAD DE
MEDIDA
A325 LIMITES METODOS
BASADOS EN
NORMA LECHUGA M M
Mesofilos
aerobios UFC/g 7100
30000 - AACC 4211
NMP
Coliformes
totales
NMP/g 120 150
- NTC 4516
NMP
Coliformes
Fecales
NMP/g 3 3
- INVIMA
Salmonella UFC/25g Negativo Negativo
- INVIMA
E.Coli UFC/g 3 3
- INVIMA
Fuente: Enzipan Ltda.
Los resultados microbiolgicos que
muestra la tabla 4, indican unas
Buenas Prcticas de Higiene y Buenas
Prcticas de Manufactura, para el
producto. La carga microbiana se
encuentra entre los rangos que
establecen las respectivas normas, lo
que indica que el producto es apto
para su consumo.
Resultados preexperimentacin
El estudio indic que segn las
caractersticas fisicoqumicas y
sensoriales analizadas, las cuatro
mejores formulaciones son las
indicadas en la tabla 5.
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Tabla 5. Formulaciones de los recubrimientos comestibles
INGREDIENTES
T1 T2 T3 T4 T5
PECTINA
0% 6% 6% 0% 0%
CMC
0% 0% 0% 6% 6%
GELATINA
0% 5% 5% 5% 5%
ACEITE DE OREGANO
0% 1% 2% 1% 2%
AGUA DESTILADA
0% 88% 87% 88% 87%
*T1, T2, T3, T4, T5; son cada uno de los tratamientos que se van a evaluar.
Resultados de las pruebas
fisicoqumicas a las diferentes
formulaciones
Los resultados de las diferentes
pruebas fisicoqumicas a las que
fueron sometidos los tratamientos, se
muestran en las grficas 1 a 8. En
estas se pueden observar los cambios
que tuvieron los diferentes
tratamientos a travs del tiempo en
cuanto a su contenido de humedad,
prdida de peso slidos totales,
carbohidratos, protena, cenizas, tasa
de respiracin y adhesin al
recubrimiento y como la presencia de
cada recubrimiento comestible
modific su comportamiento en cada
una de las variables en relacin con la
muestra patrn.
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Grafica 1. Humedad Vs Tiempo en los Tratamientos
En la Grfica No 1 se ve que la
diferencia del nivel de humedad entre
el patrn (T1) y los dems
tratamientos fueron significativamente
diferentes. Los tratamientos T2, T3,
T4, y T5 perdieron menor humedad
(se redujo en un 94%) a travs del
tiempo, debido al efecto del
recubrimiento comestible que llevaban,
mientras que T1 perdi un mayor
porcentaje de humedad.
El recubrimiento comestible cre
una barrera a la transferencia al vapor
de agua retrasando la deshidratacin
del vegetal tal como lo referencia
Rojas, (2006).
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Grafica 2. Prdida de peso Vs Tiempo en los Tratamientos.
La Grfica 2 muestra que los
tratamientos T2, T3, T4, T5 presentan
una menor prdida de peso debido al
recubrimiento comestible que llevan.
La prdida se disminuy en un 21%
con referencia al patrn.
Grafica 3. Slidos totales Vs Tiempo en los Tratamientos
Los slidos son inversamente
proporcionales a la humedad como se
puede ver en la Grfica 3. Segn
Potter (2001), los slidos van
aumentando a medida que la
humedad disminuye debido a la
concentracin de los carbohidratos y
dems componentes como minerales.
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Grafica 4. Carbohidratos vs Tiempo en los tratamientos.
La Grfica 4 indica que el
porcentaje de es significativamente
diferentes entre el T1 y los dems
tratamientos en los cuatro primeros
das. A partir del da octavo no se
encuentran diferencias
estadsticamente significativas entre
ellos, ya que el aumento de
carbohidratos es menor y tiende a
estabilizarse.
Grafica 5. Protena Vs Tiempo en los tratamientos.
En la grafica 5, se observa un
notable incremento de protena en los
tratamientos que poseen recubrimiento
comestible (T2, T3, T4, T5), en
comparacin con el tratamiento patrn
(T1), debido a que en su formulacin
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contienen gelatina. Segn Multon
(1998), la gelatina contiene de 84 a
90% de protena, su valor biolgico es
mayor que las protenas de origen
vegetal debido a la presencia de
aminocidos esenciales como la
glicina y prolina, lo que justifica un
incremento en un 30% de protena en
el producto final.
Grafica 6. Cenizas Vs Tiempo en los tratamientos.
El porcentaje de cenizas aumenta
en los tratamientos T2, T 3, T4, T5,
debido a la presencia de los distintos
componentes de los recubrimientos
comestibles que pueden llegar a
incrementar su materia inorgnica,
pero como lo muestra la Grfica 6, los
porcentajes disminuyeron en los
tratamientos a travs del tiempo,
posiblemente por la degradacin de
componentes, especialmente
minerales.
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Grafica 7. Tasa de respiracin Vs Tiempo en los tratamientos.
En la Grfica 7 se puede ver que el
T1 presenta una mayor tasa de
respiracin comparado con los dems
tratamientos. Segn Guadarrama
(2005), la velocidad de deterioro es
generalmente proporcional a la
velocidad a la que transcurre la
respiracin. Los tratamientos con
recubrimiento comestible mostraron
una reduccin en la tasa de
respiracin de un 30%, con respecto a
la muestra patrn.
El papel del recubrimiento es crear
una atmsfera modificada en el interior
de la hortaliza que reduce la velocidad
de respiracin y por tanto retrasa el
proceso de senescencia del producto
(Gonzlez, 2005).
Los tratamientos que contienen
pectina en su formulacin (T2, T3)
presentan menor tasa de respiracin
que los contienen CMC (T4, T5).
Segn Gil (2001), la pectina es mejor
barrera al O2 y CO2, que la CMC. Por
otro lado los lpidos como el aceite de
Organo aportan una excelente
barrera al vapor de agua.
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Grafica 8. Adhesin al recubrimiento Vs Tiempo en los tratamientos.
La Grfica 8 indica que los
tratamientos (T2, T3) presentan mejor
adhesin al recubrimiento que los
tratamientos (T4, T5) debido a que la
CMC no se incorpora fcilmente a los
dems componentes del
recubrimiento, formando grumos que
al momento de la aplicacin a la
lechuga, permiten entrada de aire por
lo que su apariencia no es
homognea.
ANALISIS SENSORIAL: De acuerdo
con la aceptacin del consumidor
segn las caractersticas fsicas
analizadas en el panel sensorial se
determin que el tratamiento de mayor
aceptacin fue el tratamiento 2 (T2),
porque el olor y sabor a organo
presenta la calificacin ms baja; es
decir que la percepcin del organo
es mnima. En cuanto a la evaluacin
de color y apariencia se observ el
efecto antioxidante del aceite de
organo en las diferentes
formulaciones en el transcurso de la
experimentacin hasta el final de su
vida til (da 20). (Ver imgenes 1 y 2).
Diferentes estudios demuestran la
actividad antioxidante del aceite de
organo. Segn Contreras (2002), el
aceite de organo tiene alta actividad
antioxidante, aun ms que la vitamina
E.
Los compuestos antioxidantes son
importantes porque poseen la
capacidad de proteger a las clulas
contra el dao oxidativo. Los
principales compuestos qumicos, en
este aceite responsables de su poder
antioxidante son el Carvacrol, y el
timol, Lozano, 2004.
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Imagen 1. Lechuga mnimamente
procesada refrigerada sin
recubrimiento despus de 9 das.
Imagen 2. Lechuga mnimamente
procesada refrigerada, con
recubrimiento despus de 20 das.
En cuanto a la textura las
calificaciones son favorables y no son
significativamente diferentes en cuanto
al tratamiento uno (T1, patrn) lo cual
evidencia la aceptacin por parte del
panel sensorial.
Para determinar la vida til se observ
que el tratamiento 1 (T1) empez a
presentar alteraciones organolpticas
a partir del da 9. En este momento se
le realiz el respectivo anlisis con el
fin de determinar su calidad
microbiolgica. Los dems
tratamientos (T2, T3, T4, T5)
empezaron a presentar alteraciones
organolpticas a partir del da 21, por
lo tanto se dedujo que su vida til era
de aproximadamente de 20 das. Para
comprobar esta afirmacin se
realizaron los respectivos anlisis
microbiolgicos y as asegurar que el
producto era apto para el consumo
humano.
Los resultados microbiolgicos que
se obtuvieron indican que los
tratamientos que tenan recubrimiento
comestible cumplen con los rangos
establecidos de carga microbiana
segn la norma INVIMA (ensalada de
frutas y hortalizas), al inicio (da 0) y al
final de la experimentacin (da 20).
Por el contrario el tratamiento 1
(patrn), en el anlisis del da 9
muestra contaminacin microbiolgica
por lo cual ya no es apto para el
consumo humano.
Los tratamientos que llevan
recubrimiento al contener en su
formulacin aceite de organo inhiben
la proliferacin bacteriana. Existen
mltiples estudios sobre la actividad
antimicrobiana de los extractos de
diferentes tipos de organo. Segn
Albado (2001), el aceite de organo
posee propiedades antimicrobiales,
debido a que sus aceites voltiles son
sumamente activos contra la mayora
de bacterias patognicas como
Salmonella typhimurium, Escherichia
coli, Staphylococcus aureus,
Staphylococcus epidermidis,
Segn Sivropoulou A, 2000. Se ha
evaluado la actividad antimicrobiana
Vol 21, No 26 (2012), Revista Alimentos Hoy - 57
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del aceite de organo y de sus
componentes aislados, Los fenoles
carvacrol y timol poseen los niveles
ms altos de actividad contra
microorganismos gram negativos.
IV. CONCLUSIONES
El tratamiento que no llevaba
ningn recubrimiento (T1, patrn)
present deterioro a partir del da
noveno, manifestando prdida de
humedad, de peso, alta oxidacin y
caractersticas microbiolgicas no
aptas para el consumo. Por otro
lado los tratamientos con
recubrimiento comestible aportaron
disminucin en la prdida de peso
y la tasa de respiracin; factores
relevantes en la calidad y
prolongacin de la vida til
respectivamente. Teniendo en
cuenta los anlisis estadsticos y
fisicoqumicos, los tratamientos
(T2, T3) presentaron mejores
resultados, frente a los dems
tratamientos (T1, T4, T5).
De acuerdo con los resultados
obtenidos en la capacidad de
adhesin al recubrimiento de los
diferentes tratamientos se obtuvo
que presentaron mejor
comportamiento los tratamientos
que llevaban en su formulacin
pectina (T2,T3), en comparacin
de los que contenan CMC (T4,
T5). Adicionalmente el contenido
de aceite de organo en las
diferentes formulaciones aport un
efecto antioxidante a la mezcla de
lechugas, evidenciado el efecto
antimicrobiano y antioxidante.
V. BIBLIOGRAFIA
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Vol 21, No 26 (2012), Revista Alimentos Hoy - 58
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Acribia,. 5 ed. 178p.
ROJAS, M.A. (2006).
Recubrimientoscomestibles y
sustancias de origen naturalen
manzana fresca cortada: Una nueva
estrategia de conservacin. Sao
Paulo: Escuela tcnica superior de
ingeniera agraria.6p.
AGRADECIMENTOS
A la empresa Defrescura S.A, por
contribuir con la materia prima para
este estudio y a la Universidad De La
Salle, por el uso de la planta piloto y
reactivos para la experimentacin.
Vol 21, No 26 (2012), Revista Alimentos Hoy - 59
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