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RPCV (2018) 113 (605-606) 1-9
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Revisão dos parasitas gastrointestinais em carnívoros selvagens na
Europa
Review of the gastrointestinal parasites in wild carnivores in Europe
Ana I. Martins1, Ricardo Brandão2, Teresa L. Mateus*1,3,4
1Departamento de Medicina Veterinária, Escola Universitária Vasco da Gama, Coimbra,
Portugal; 2CERVAS - Centro de Ecologia, Recuperação e Vigilância de Animais
Selvagens, Gouveia; Portugal; 3Escola Superior Agrária, Instituto Politécnico de Viana
do Castelo, Ponte de Lima, Portugal; 4EpiUnit – Instituto de Saúde Pública da
Universidade do Porto, Porto, Portugal
Resumo: A proximidade dos animais silvestres
às áreas urbanas permite um maior contacto
entre estes, os animais domésticos e o Homem,
aumentando a probabilidade de transmissão de
doenças zoonóticas. Grande parte das doenças,
nomeadamente as parasitárias, que afetam
humanos têm origem em animais selvagens.
Com este artigo pretendemos fazer uma revisão
dos estudos existentes na Europa sobre parasitas
gastrointestinais de carnívoros selvagens,
nomeadamente em lobo ibérico (Canis lupus
signatus), lobo europeu (Canis lupus lupus),
raposa vermelha (Vulpes vulpes), lince ibérico
(Linx pardinus), marta (Martes martes), fuinha
(Martes foina), texugo euroasiático (Meles
meles) e gineta (Genetta genetta). Para o efeito,
realizamos uma pesquisa bibliográfica online,
nomeadamente nos sites PubMed e
ResearchGate, colocando como palavras chave
de pesquisa “parasites/parasitas” e o nome
científico dos diferentes carnívoros estudados.
A maioria dos parasitas identificados
correspondem a agentes potencialmente
zoonóticos (ancilostomatídeos, Taeniidae,
Toxocara, entre outros), alertando para a
importância dos estudos epidemiológicos nesta
área, que podem gerar evidências da
necessidade de aplicação de medidas
profiláticas para minimizar a disseminação
destes agentes, em prol da manutenção da saúde
ambiental, animal e humana.
Abstract: The so-called urbanization of the
wild animals allows great contact between these
animals, the domestic ones and humans,
increasing the probability of transmission of
zoonotic diseases. Most of the diseases, namely
the parasitic ones, that affect humans, come
from wild animals. This study intends to review
studies in Europe on gastrointestinal parasites of
wild carnivores such as iberian wolf (Canis
lupus signatus), european wolf (Canis lupus
lupus), red fox (Vulpes vulpes), iberian lynx
(Linx pardinus), marten (Martes martes), stone
marten (Martes foina), eurasian badger (Meles
meles) and common genet (Genetta genetta).
For this purpose, we carried out an online
bibliographical research, namely in the sites
PubMed and ResearchGate, placing
“parasitas/parasites” as keywords for the search
and the scientific name of the different
carnivores studied. Most of the identified
parasites correspond to potentially zoonotic
agents (Ancylostomatidae, Taeniidae, Toxocara,
among others). These results generate
awareness on the importance of the
epidemiological studies in this area, and
evidence the need of applying prophylactic
measures to minimize the dissemination of these
parasites, protecting the environmental, animal
and human health.
*Correspondência tlmateus@gmail.com
Martins et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 1-9
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Introdução
As atividades antropogénicas têm-se tornado
cada vez mais prejudiciais para a manutenção
dos ecossistemas, e fatores como a destruição de
habitats, a expansão da população humana e as
alterações climáticas têm levado a uma
proximidade dos animais silvestres às áreas
urbanas, permitindo um maior contacto entre
estes, os animais domésticos e o Homem
(Carmena e Cardona, 2014; Figueiredo et al.,
2016). Esta evidência aliada ao facto de cerca de
61% dos agentes considerados patogénicos para
o Homem serem zoonóticos, levaram à
emergência do conceito One Health, cujo
objetivo geral é atingir níveis ótimos de saúde
para os animais, para o Homem e para o
ambiente (Rabozzi et al., 2012; OIE, 2013;
Carmena e Cardona, 2014).
Sabendo que 71,8% das doenças emergentes em
humanos têm origem em animais selvagens
(Jones et al., 2008) e tendo em conta o forte
impacto que os parasitas podem ter nestes
animais, os estudos de prevalência e diversidade
de parasitas gastrointestinais na fauna selvagem
tornam-se fundamentais, nomeadamente nos
animais que se encontram em estado de
conservação ameaçado, já que estará em causa
não só a saúde animal e humana, mas também a
biodiversidade – condição absolutamente
necessária para a manutenção saudável dos
ecossistemas (Carmena e Cardona, 2014;
Figueiredo et al., 2016).
Neste artigo pretendemos fazer uma revisão dos
parasitas gastrointestinais mais prevalentes em
carnívoros selvagens da Europa, com base em
estudos realizados a partir de amostras
coprológicas e de cadáveres de espécies como o
lobo europeu (Canis lupus lupus), o lobo ibérico
(Canis lupus signatus), a raposa vermelha
(Vulpes vulpes), o lince ibérico (Linx pardinus),
a marta (Martes martes) e a fuinha (Martes
foina), o texugo euroasiático (Meles meles) e a
gineta (Genetta genetta). Para o efeito,
realizamos uma pesquisa bibliográfica online,
nomeadamente nos sites PubMed e
ResearchGate, colocando como palavras chave
de pesquisa “parasites/parasitas” e o nome
científico dos diferentes carnívoros estudados.
Parasitas gastrointestinais no lobo europeu
(Canis lupus lupus) e no lobo ibérico (Canis
lupus signatus) A população de lobo ibérico (Canis lupus
signatus) diminuiu ao longo do século XX (em
particular em Portugal), bem como a do lobo
europeu (Canis lupus lupus) que se encontra,
atualmente, em apenas algumas zonas limitadas
da Europa (Figueiredo et al., 2016; Hermosilla
et al., 2017).
Como grandes carnívoros que são, os lobos
são hospedeiros de uma elevada diversidade de
parasitas gastrointestinais, tendo sido relatada
por Craig & Craig (2005) a presença de 72
espécies de helmintes em lobos, 93% dos quais
foram identificados em necrópsias. A Tabela 1
apresenta uma compilação de estudos de
prevalência de helmintes identificados em
amostras fecais de lobos na Europa.
Os ancilostomatídeos e os ascarídeos são os
parasitas mais frequentes em carnívoros
selvagens de todo o mundo (Borecka et al.,
2013). Os ancilostomatídeos são nematodes que
podem ser hematófagos ou histiófagos que
parasitam o trato gastrointestinal de mamíferos
como os carnívoros domésticos, carnívoros
selvagens e o Homem. Em ancilostomoses
severas verifica-se a ocorrência de anemia,
perda de peso, fadiga, mau estado do pêlo, perda
de apetite, diarreia mucosa ou hemorrágica e
pode existir picacismo. Entre os
ancilostomatídeos, os que ocorrem com maior
frequência são Uncinaria stenocephala e
Ancylostoma caninum que, associados a fatores
de stress, podem ser fatais para animais jovens
(Seguel e Gottdenker, 2017). Ancylostoma
caninum é um parasita de grande interesse
devido ao potencial zoonótico que apresenta.
Este pode ser transmitido por via oral,
galactogénea, percutânea e a ingestão de
hospedeiros paraténicos também é importante
na perpetuação do seu ciclo.
Os ascarídeos são de grande importância
epizoótica para mamíferos predadores das
famílias Canidae e Felidae (Okulewicz et al.,
2012). Apesar de se ter verificado que a
prevalência de Toxocara canis decresceu nos
últimos 30 anos em cães domésticos, os níveis
de infeção em cães errantes continuam elevados,
a rondar os 25%. A contaminação ambiental de
zonas urbanas e rurais funciona como foco de
infeção para o Homem e para os animais
domésticos e selvagens, crendo-se que os
animais selvagens funcionem como principais
reservatórios (Guerra et al., 2012). A infeção
pode ocorrer por ingestão dos ovos embrionados
presentes no ambiente, por ingestão de tecidos
de roedores contendo estádios larvares dos
parasitas e, no caso de T. canis, por via
transplacentária e galactogénica. A baixa
prevalência de ascarídeos pode ser explicada
devido ao reduzido número de cachorros (lobos
com menos de 6 meses) nos estudos em causa,
uma vez que são estes os maiores reservatórios,
principalmente, da espécie T. canis (Hermosilla
et al., 2017).
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Tabela 1 - Prevalência (%) de helmintes identificados em amostras fecais de lobos (Canis lupus) na
Europa
País Trematodes % Cestodes % Nematodes % Referência
Bibliográfica
Alemanha n.i. - Taenia krabbei 77,0 n.i. - Lesniak et al.
(2017) Taenia hydatigena 15,0
Mesocestoides
litteratus
9,0
Croácia Alaria alata 0,
3
Taenia spp. 1,5 Ancilostomatídeos 13,1 Hermosilla et al.
(2017) Toxocara canis 2,8
Toxascaris
leonina
0,3
Espanha n.i. - n.i. - Ancilostomatídeos 15,5 Pereira et al. (2017)
Espanha n.i. - Taenia hydatigena 44,7 Ancilostomatídeos 71,4 Segovia et al.
(2001) Taenia multiceps 29,8 Toxocara canis 6,4
Dipylidium caninum 6,4 Toxascaris leonina
4,8
Mesocestoides
litteratus
4,2
Taenia serialis 2,1
Irlanda n.i. - n.i. - Toxocara canis 20,0 Stuart et al. (2013)
Polónia n.i. - n.i. - Trichuris vulpis 13,9 Borecka et al.
(2013) Toxocara canis 6,0
Portugal n.i - n.i. - Toxocara canis 9,09 Figueiredo et al.
(2016) Toxascaris
leonina
9,09
Portugal n.i. - Taeniidae 4,3 Ancilostomatídeos 45,7 Silva (2010)
Moniezia spp. 0,6 Strongyloides spp. 21,3
Eucoleus aerophila
4,3
Toxocara canis 7,3
Toxascaris
leonina
7,3
Trichuris spp. 3,7
Nematodirus spp. 0,6
Portugal n.i. - Taenia hydatigena 11,8 Toxocara spp. 11,8 Guerra (2012)
Taenia serialis 5,9 Ancilostomatídeos 17,6
Taenia pisiformis 2,9 Toxascaris leonina 7,4
Taenia polyacantha 1,5 Trichuris vulpis 5,9
Echinococcus granulosus
1,5 Strongyloides sp. 1,5
Sérvia n.i. - Taenia hydatigena 9,8 n.i. - Ćirović et al.
(2015) Taenia multiceps 3,9
Taenia polyacantha 2,9
Taenia taeniaeformis 2,0
Taenia pisiformis 1,0
Taenia serialis 1,0
Mesocestoides
litteratus
1,0
n.i. – não identificado
Martins et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 1-9
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A prevalência de cestodes foi baixa em
países como a Polónia, a Bielorrúsia, a Sérvia e
a Croácia, mas elevada na Alemanha e em
Espanha.
Embora com prevalências muito baixas,
esporadicamente podem aparecer ovos de
trematodes como Diphyllobothrium spp.,
Opisthorchis felineus e Alaria alata nas fezes
de lobos e de mustelídeos (Segovia et al., 2001;
Hermosilla et al., 2017). A presença destas
espécies de parasitas demonstra a capacidade de
adaptação destes carnívoros a diferentes
ecossistemas e diferentes fontes alimentares. A
transmissão de Alaria alata aos hospedeiros
definitivos (cão, gato, lobo, raposa, marta e
outros carnívoros selvagens) ocorre através da
ingestão do hospedeiro intermediário (molusco
gastrópode) e é também facilitada pela vasta
diversidade de hospedeiros paraténicos que
apresenta (anfíbios, répteis, aves e mamíferos)
(Cordero del Campillo et al., 1999). O género
Diphyllobothrium apresenta um primeiro
hospedeiro intermediário - crustáceos (Diemert,
2017) e pequenos invertebrados aquáticos
(Kelly e Mutengo, 2017) que funciona como
fonte de infeção para o segundo hospedeiro
intermediário (peixes anádromos e de água
salgada) (Diemert, 2017). Já Opisthorchis
felineus tem como hospedeiros intermediários
gastrópodes e peixes de água doce da família
Cyprinidae (Jones, 2015).
Comparando com os helmintes, há um
número mais reduzido de estudos sobre a
prevalência de protozoários em carnívoros
selvagens. Contudo, num estudo recente
realizado na Alemanha, foram identificadas 12
espécies do género Sarcocystis em carcaças de
lobos com uma prevalência total de 95%
(Lesniak et al., 2017). Este parasita apresenta
um ciclo de vida indireto, reproduz-se
sexualmente no intestino do carnívoro, que
funciona como hospedeiro definitivo, e a forma
infetante é libertada para o ambiente com as
fezes. Esta é, depois, ingerida pelo hospedeiro
intermediário onde invade o tecido muscular
cardíaco e esquelético. A transmissão ocorre
quando o carnívoro ingere a presa, normalmente
herbívoros, como os cervídeos e o javali,
contendo os quistos musculares com os
bradizoítos (Lesniak et al., 2017). Na Croácia, a
prevalência foi mais baixa (19,1%) (Hermosilla
et al., 2017), e em Portugal, ainda que com
prevalências ainda mais baixas, duas espécies
são referidas por Silva (2010), Sarcocystis canis
(7,9%) e Sarcocystis felis (0,6%). As espécies
dos géneros Cryptosporidium e Giardia
parecem ser menos frequentes, o que, e em
relação a Cryptosporidium, se pode dever ao
facto de ser mais difícil recolher amostras de
fezes de crias de lobo (Hermosilla et al., 2017).
Em Espanha, Pereira et al. (2017) reportam,
contudo, uma prevalência de 20% em amostras
de lobo ibérico para os géneros Giardia e
Cryptosporidium, o que revela a suscetibilidade
destes animais a estes agentes, assim como o
seu potencial papel enquanto disseminadores
dos mesmos. Mateo et al. (2017), também em
Espanha, identificaram Giardia duodenalis
numa amostra de lobo ibérico. Em Portugal,
Silva (2010) identificou os géneros
Cryptosporidium (13,5%), Eimeria (4,9%) e
Cystoisospora (3,7%).
Parasitas gastrointestinais em raposas
vermelhas (Vulpes vulpes) A raposa vermelha (Vulpes vulpes) é um
carnívoro selvagem cuja população se encontra
em expansão e está bem distribuída a nível
global. Este carnívoro é a espécie selvagem
mais estudada, devido à sua proximidade às
áreas urbanas e à facilidade de recolher
amostras fecais que lhe pertençam (Borecka et
al., 2013). No entanto, em Portugal, em
particular na região a Sul do rio Douro, os
estudos parasitológicos que a envolvem são
escassos (Figueiredo et al., 2016). Enquanto
espécie sinantrópica, a raposa permite a ligação
entre as áreas silvestres e zonas urbanas, o que
aumenta a probabilidade de transmissão de
zoonoses entre animais selvagens e domésticos
e o Homem (Figueiredo et al., 2016). A Tabela
2 apresenta uma compilação de estudos de
prevalência de helmintes identificados em
amostras fecais de raposas vermelhas (Vulpes
vulpes) na Europa.
As raposas vermelhas são vistas como
principal veículo de disseminação de ascarídeos
devido ao elevado número de hospedeiros
paraténicos ingeridos por esta espécie (Guerra et
al., 2012). Dentro deste grupo, as espécies
Toxocara canis e Toxascaris leonina são
parasitas muito importantes na medida em que
têm carácter zoonótico.
Os ancilostomatídeos caracterizam-se por
ser hematófagos, provocando anemia e morte
neonatal em cães e gatos domésticos. Dado o
seu caracter zoonótico, revestem-se de elevada
importância a nível médico e veterinário, uma
vez que podem ser transmitidos não só a
animais domésticos como ao Homem (Zajac e
Conboy, 2012)
.
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Tabela 2 – Prevalência (%) de helmintes identificados em amostras fecais de raposas vermelhas (Vulpes
vulpes) na Europa.
Países Trematodes % Cestodes % Nematodes % Referências
bibliográficas
Croácia n.i. - Echinococcus multilocularis 7,2 n.i. - Beck et. al. (2018)
Eslovénia Mesocestoides spp. 27,6 Uncinaria stenocephala 58,9 Rataj et al. (2013)
Taenia crassiceps 22,2 Toxocara canis 38,3
Taenia polyacantha 6,5 Toxascaris leonina 2,5
Taenia pisiformis 2,1 Trichuris vulpis 0,7
Dypilidium caninum 1,4
Echinococus multilocularis 2,6
Grã-Bretanha n.i. - n.i. - Toxocara canis 61,1
Uncinaria stenocephala 41,3 Smith et al. (2003)
Grécia n.i. - n.i. - Uncinaria stenocephala 43,9 Papadopoulos et al.
(1997)
Toxocara canis 28,6
Itália n.i. - Dypilidium caninum 57,3 n.i. - Magi et al. (2009)
Itália n.i. - Echinococcus multilocularis 9,2 n.i. - Casulli et al. (2005)
Letónia n.i. - Echinococcus multilocularis 17,1 n.i. - Bagrade et al. (2016)
Polónia n.i. - n.i. - Trichuris vulpis 64,4 Borecka et al. (2013)
Portugal n.i. - n.i. - Toxocara canis 15-40 Guerra et al. (2012)
Portugal n.i. - n.i. - Toxocara canis 37,1 Eira et al. (2006)
Portugal Trematodes 20,9 Taenia polyacantha 3,0 Ancilostomatídeos 43,5 Guerra (2012)
Taenia hydatigena 3,0 Capillaria sp. 6,4
Mesocestoides spp. 1,6 Physaloptera sp. 4,8
Hymenolepis spp.
1,6
Strongyloides sp. 4,8
Trichuris vulpis 3,2
Toxascaris leonina 3,2
Spirocerca sp. 1,6
Portugal n.i. - Anoplocephala spp. 1,2 Strongyloides sp. 42,0 Silva (2010)
Paranoplocephala spp. 1,2 Ancilostomatídeos 64,2
Toxocara canis 24,7
Eucoleus aerophilus 3,7
Trichuris spp. 2,5
Toxascaris leonina 1,2
Suíça n.i. - n.i. - Toxocara canis 14,0 Okulewicz et al.
(2012)
Toxascaris leonina 14,0
n.i. – não identificado
Martins et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 1-9
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O aumento da população de raposas que se
verificou devido ao sucesso dos programas de
vacinação contra a raiva permitiu uma expansão
na presença do cestode Echinococcus
multilocularis em várias capitais europeias da
Europa central e de leste, uma vez que este
animal funciona como o principal hospedeiro
definitivo do agente (Brossard et al., 2007;
Bagrade et al., 2016). Echinococcus é um
género de cestode da família Taeniidae, de
carater zoonótico e com distribuição mundial.
Na sua forma adulta, o parasita encontra-se no
intestino de canídeos (cães domésticos, chacais,
lobos, raposas, guaxinins), de felídeos (leões,
pumas e jaguares) e de hienas, e os ovos saem
para o exterior com as fezes. Os roedores e
ungulados ingerem os ovos do ambiente e
funcionam como hospedeiro intermediário,
desenvolvendo o metacestode. Os humanos
podem também ingerir os ovos e desenvolver
hidatidose (Echinococcus granulosus) ou
equinococose alveolar (Echinococcus
multilocularis). Apesar da elevada prevalência
que Echinococcus multilocularis apresenta em
carnívoros selvagens, a ocorrência em gatos e
cães domésticos na Europa é rara (Brossard et
al., 2007). Esta é uma doença grave e de elevada
mortalidade em humanos, e de disseminação
lenta em grande parte da Europa continental
(Learmount et al., 2012), mas que pode
contribuir para aumentar a ocorrência de ciclos
sinantrópicos entre os cães domésticos e os
roedores silváticos, aumentando a probabilidade
de transmissão deste parasita ao Homem.
Comparando com Echinococcus multilocularis,
a informação acerca de Echinococcus
granulosus é escassa. O ciclo silvático de
Echinococcus granulosus foi documentado
apenas num limitado número de países da
Europa, como a Finlândia (Hirvelä-Koski et al.,
2003), Itália (Guberti et al., 2004), Bulgária
(Breyer et al., 2004), Espanha (Sobrino et al.,
2006) e Portugal (Guerra et al., 2013).
No que diz respeito a protozoários há pouca
informação nesta espécie de carnívoro, no
entanto, em Portugal existe um estudo onde se
verificou a presença dos géneros
Cryptosporidium (22,1%) , Eimeria (11,1%) e
Cystoisospora (1,2%), assim como da espécie
Sarcocystis canis (1,2%) (Silva, 2010). Giardia
duodenalis e o género Cryptosporidium , ambos
com uma prevalência de 8%, foram reportados
em Espanha por Mateo et al. (2017) e na
Eslovénia foram identificados os géneros
Sarcocystis (2,8%) e Cystoisospora (0,4%)
(Rataj et al., 2013).
Parasitas gastrointestinais em linces ibéricos
(Linx pardinus)
O lince ibérico é o felídeo mais ameaçado do
mundo, segundo o International Union for the
Conservation of Nature (IUCN), e os estudos
parasitológicos nesta espécie são igualmente
raros. Na nossa revisão identificamos dois
estudos dos mesmos autores, que reportam a
ocorrência de Ancylostoma tubaeforme,
Toxocara cati, Joyeuxiella pasqualei, Taenia
polyacantha e Mesocestoides sp. em linces
ibéricos de Espanha (Milan e Casanova, 2007).
Vicente et al. (2003), também em Espanha
enfatizam a elevada prevalência de Ancylostoma
spp. (57,8%) nestes animais, e referem a sua
elevada prevalência e carga sobretudo em
animais jovens, que poderão ser mais
suscetíveis a este agente. Millan e Blanco-Costa
(2012) notam mesmo que os nematodes do
género Ancylostoma são parasitas muito
patogénicos para felídeos jovens e que A.
tubaeforme pode causar morbilidade e
mortalidade elevadas no lince ibérico.
Parasitas gastrointestinais em mustelídeos
Os estudos com mustelídeos são raros,
identificamos apenas quatro, um em Portugal,
um na Polónia e dois em Espanha. Os
mustelídeos, alimentam-se essencialmente de
roedores, apesar de também fazerem parte da
sua dieta aves, répteis, insetos e frutos. A marta
encontra-se distribuída por toda a Europa
continental (Segovia et al., 2007). Borecka et al.
(2013) na Polónia, identificaram os seguintes
parasitas em martas: Trichuris spp. (40,0%),
Toxocara cati (13,3%), Ancylostoma spp.
(13,3%) e Uncinaria spp. (6,7%). Em Espanha,
Segovia et al. (2007) referem Taenia martis
(5,88%) e Uncinaria criniformis (0,98%), sendo
que ambos os parasitas apresentam elevada
especificidade. Ainda em Espanha, Mateo et al.
(2017) reporta a ocorrência de Giardia
duodenalis numa amostra de fuinha (Martes
foina). Num estudo realizado recentemente em
Portugal, Crenosoma vulpis foi identificado
com elevada prevalência (31%), seguido do
género Toxocara (15%) (Figueiredo et al.,
2018). Neste mesmo estudo, os
ancilostomatídeos, e o género Strongyloides
também foram identificados com uma
prevalência de 8%, bem como a espécie
Toxascaris leonina (Figueiredo et al., 2018).
O texugo europeu é dentro da família dos
mustelídeos, a espécie mais estudada, mas ainda
assim, no que diz respeito a parasitas os dados
são escassos. Stuart et al. (2013) refere a
identificação de Uncinaria criniformis, com
uma prevalência de 40%, e Cystoisospora sp.
com uma prevalência de 16%. Mateo et al.
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(2017) reporta a identificação de
Crysptosporidium sp. (3%).
Parasitas gastrointestinais em ginetas
(Genetta genetta)
Os estudos com ginetas também não são muito
frequentes. Casanova et al. (2000) realizaram
um estudo em Espanha com um número de
amostras considerável (n=299) e identificaram
uma grande diversidade de helmintes:
Brachylaima sp., Metorchis albidus, Taenia
parva, Mesocestoides sp., Joyeuxiella
pasqualei, Diplopylidium monoophorum, D.
triseriale, Trichinella sp., Ancylostoma
martinezi, Toxocara canis, T. genettae, Spirura
sp., Cyathospirura seurati, Mastophorus muris,
Physaloptera sp., Pterygodermatites affinis e P.
leiperi. Também em Espanha, Mateo et al.
(2017), identificaram Cryptosporidium sp. em
amostras desta espécie. Em Portugal, Mateus e
Barrocas (2012) reportaram Toxocara (60,7%) e
ancilostomatídeos (46,4%), em amostras de
gineta do norte do país.
Considerações finais
A diversidade de resultados obtidos pelos
diferentes estudos, quer no distinto número de
espécies de parasitas identificados, quer nas
suas prevalências, destaca a importância da
promoção e desenvolvimento de estudos à
escala local, já que as dietas destes animais
variam consoante os ecossistemas em que estão
inseridos, o que determina fortemente o risco de
infecção parasitária. Não alheio à diversidade de
resultados deverá também ser o muito variável
tamanho da amostra – desde estudos com menos
de 20 amostras até os que têm mais de 500 -,
assim como a origem das mesmas (ambiental ou
recolha em necrópsias). Finalmente, a
dificuldade maior na comparação de resultados,
passa também pela diversidade de métodos
coprológicos usados pelos diferentes estudos
(desde técnicas de flutuação com diferentes
soluções, técnicas de sedimentação, técnicas de
biologia molecular, entre outras).
Dado o forte impacto das parasitoses na
conservação de espécies selvagens e na
manutenção dos ecossistemas, e sabendo que
existe um elevado risco de transmissão destas
doenças para as espécies domésticas e para o
Homem devido à conhecida urbanização dos
animais selvagens, torna-se necessário
desenvolver estudos epidemiológicos,
principalmente nas espécies sinantrópicas.
No caso dos lobos, as parasitoses podem
reduzir drasticamente o número de indivíduos
em populações isoladas, mesmo em áreas
geográficas protegidas, pelo que, o
desenvolvimento de estudos que permitam um
melhor conhecimento acerca do parasitismo é
essencial, pois só assim se podem aplicar ações
corretivas e profiláticas que contribuirão para a
sua conservação.
A consciencialização de que existe uma
elevada probabilidade de disseminação de
doenças zoonóticas em áreas cosmopolitas deve
funcionar como catalisador para o
desenvolvimento de mais estudos na área da
parasitologia, uma vez que só aprofundando o
conhecimento acerca da epidemiologia do
parasita é que é possível proteger a saúde
ambiental, animal e humana, ou seja, no âmbito
de Uma Saúde.
Bibliografia
Bagrade G, Deksne G, Ozolina Z, Howlett SJ,
Interisano M, Casulli A, Pozio E (2016).
Echinococcus multilocularis in foxes and
raccoon dogs: an increasing concern for
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10
Os insetos do género Culicoides em Portugal e a sua relevância em
Medicina Veterinária
Insects of Culicoides genus in Portugal and their relevance in Veterinary
Medicine
David W. Ramilo§, Graça Alexandre-Pires§, Marcos Santos§ e Isabel Pereira da Fonseca§*
Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal (CIISA), Faculdade de
Medicina Veterinária, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal
§Todos os autores contribuíram de igual modo para este trabalho.
Resumo: Os insetos do género Culicoides
compreendem um elevado número de espécies,
algumas das quais importantes vetores de
doenças com relevância em medicina veterinária
e humana. A vigilância destes insetos, a correta
identificação e a monitorização das espécies
capazes de veicular agentes de doenças, como
Língua Azul e Peste Equina Africana, é
essencial. Surtos da Língua Azul, doença que
causa elevada mortalidade e morbilidade nos
hospedeiros suscetíveis, ocorreram em Portugal
entre 1956-60 e entre 2004-2015 com elevado
impacto económico. Atualmente, as técnicas
laboratoriais disponíveis para identificação de
espécies de Culicoides englobam a microscopia
(estereoscópica, ótica e eletrónica) e as técnicas
moleculares, como a reação em cadeia da
polimerase, do inglês Polymerase Chain
Reaction, e as suas variantes (multiplex e real-
time), com importância em estudos
filogenéticos. Na última década, 22 espécies de
Culicoides foram referidas pela primeira vez em
Portugal, assim como uma nova espécie para a
ciência, Culicoides paradoxalis.
Abstract: The insects of the genus Culicoides
comprise a large number of species, some of
which are important vectors of diseases with
relevance in veterinary and human medicine.
The surveillance of these insects, their correct
identification and monitoring of species
carrying disease agents such as Bluetongue and
African Horse Sickness viruses, are essential.
Outbreaks of Bluetongue, a disease that causes
high mortality and morbidity in susceptible
hosts, occurred for the first time in Portugal
between 1956-60 and since 2004 until 2015
with high economic impact. Currently, the
available laboratory techniques for identifying
Culicoides species include microscopy
(stereoscopic, optical and electronic) and
molecular techniques, such as Polymerase
Chain Reaction and its variants (multiplex and
real-time), with importance in phylogenetic
studies. Over the past decade, 22 species of
Culicoides were reported for the first time in
Portugal, as well as a new species for science,
Culicoides paradoxalis.
*Correspondência: ifonseca@fmv.ulisboa.pt
Introdução
Os insetos do género Culicoides (Diptera:
Ceratopogonidae) possuem dimensões muito
reduzidas (Fig. 1A e 1B), apresentam
distribuição cosmopolita e são conhecidas cerca
de 1401 espécies (Borkent, 2015). As fêmeas
adultas são hematófagas e alimentam-se num
vasto leque de hospedeiros como os mamíferos,
incluindo o Homem, anfíbios e aves; os machos
alimentam-se do néctar das plantas. Os
culicóides transmitem agentes patogénicos
causadores de diversas doenças com
importância em saúde pública e em medicina
veterinária nas quais se incluem a doença da
Língua Azul (febre catarral ovina) e de
Schmallenberg nos ruminantes, a Peste Equina
Africana nos equídeos, a doença epizoótica
hemorrágica nos veados e filarioses como
oncocercose e mansonelose, as quais afetam
animais e humanos. A picada destes insetos
pode ainda causar reações de hipersensibilidade
em equinos conhecidas por dermatite estival
(Linley et al., 1983; Mellor et al., 2000).
Ramilo et al., RPCV (2018) 112 (605-606) 10-17
11
Figura 1 – Comparação do tamanho entre diferentes insectos: A) mosca do género Calliphora (1),
culicídeo do género Culex (2) e um inseto do género Culicoides (3); B) Exemplar de Culicoides fêmea do
grupo Obsoletus: 1 – Cabeça; 2 – Tórax; 3 – Abdómen; 4 – Asa; C) Cabeça de Culicoides vista ao
microscópio eletrónico de varrimento: a – antenas; b – palpos; c – olho composto; d – tórax e – 1.º par de
patas.
Os adultos das espécies de Culicoides com
interesse veterinário alimentam-se geralmente
em ruminantes e cavalos. Os ovos e as larvas
encontram-se em ambientes aquáticos ou
semiaquáticos (criadouros) nas imediações dos
estábulos. Os agentes etiológicos transmitidos
por estes insetos são introduzidos em novas
regiões quer através do vento que os transporta
quer por importação acidental de hospedeiros
infetados (Barros et al., 2007; WAHID, 2015).
Crê-se que as alterações climáticas têm sido
responsáveis pela propagação dos agentes
etiológicos na Europa (Purse et al., 2005;
Wilson and Mellor, 2008). Em Portugal
Continental, ocorreu, em 2004, um grande surto
da doença da Língua Azul, 44 anos após o
último caso registado.
Estes insectos possuem antenas divididas em
15 segmentos, observando-se, ao longo do
flagelo, diferentes tipos de sensilla - trichodea,
chaetica, coeloconica, basiconica e ampulácea.
O número e tipo de sensilla varia consoante a
espécie e o sexo (Jamnback, 1965; Rowley and
Cornford, 1972; Kline and Axtell, 1977; Wirth
and Navai, 1978; Delécolle, 1985; Kline and
Axtell, 1999). Alguns autores referem que as
sensilla dos palpos são sensíveis à estimulação
pelo CO2, um semioquímico que o inseto
associa à presença do hospedeiro vertebrado
(Grant and Kline, 2003).
No tórax localizam-se as asas e as patas
(Fig. 1B e C). As asas destes insetos são
importantes na identificação de espécies, pois
exibem padrões típicos que ajudam na
identificação das espécies e são frequentemente
utilizados em estudos epidemiológicos (Fig. 2B)
(Rawlings, 1996). Existem três pares de patas,
apresentando o quinto segmento tarsal um
empódio rudimentar e garras. A presença ou
ausência de espinhos no 4.º tarsómero das patas
medianas é muito importante para a
diferenciação de espécies de Culicoides (Fig.
2C). No que diz respeito à genitália, no caso das
fêmeas as espermatecas estão localizadas no
interior do abdómen e a sua arquitetura
morfológica, assim como o seu número, é usado
como carácter taxonómico (Fig. 2A).
Nos machos, a genitália é constituída por
várias estruturas (aedeagus, paraméros,
gonocoxitos, gonoestiletes, tergitos, lamelas e
membrana basal, entre outros) (Fig. 2D), com
grande importância na diferenciação de espécies
(Delécolle, 1985).
Técnicas laboratoriais aplicadas ao
estudo de Culicoides
Microscopia
Os insetos Culicoides, capturados com
armadilhas luminosas (Miniature CDC light
trap, Fig. 3), são primeiramente avaliados
intactos através de microscopia estereoscópica,
tendo como referência os padrões alares (Fig.
2B) (Delécolle, 1985; Rawlings, 1996; Pena,
2003; Mathieu et al., 2012; Ramilo, 2016).
Quando não é possível identificar as espécies
através do padrão alar procede-se à disseção do
inseto em diferentes partes corporais. Estas são
montadas entre lâmina e lamela usando meio de
Hoyer e secas a 37 ºC numa estufa durante 3 a 4
dias. A visualização das diferentes estruturas
morfológicas (Fig. 2) é efectuada ao microcópio
ótico composto e são usadas chaves de
identificação apropriadas para determinação da
espécie (Delécolle, 1985; Rawlings, 1996; Pena,
2003; Mathieu et al., 2012; Ramilo, 2016).
1
2 3
4
1
2
3
A B
200 m
C
a
b
c
d
e
Ramilo et al., RPCV (2018) 112 (605-606) 10-17
12
Figura 2 – Várias estruturas corporais de insetos Culicoides observadas ao microscópio ótico composto.
A) Espermatecas; B) Asa; C) Espinho no 4.º tarsómero da pata mediana (seta); D) Genitália masculina; E)
Palpos maxilares (1) e aparelho bucal (2); F) Olhos.
Quando se pretende a visualização de
estruturas tridimensionais para identificação de
espécies próximas (como as do grupo
Obsoletus) (Alexandre-Pires, et al., 2010),
recorre-se à microscopia eletrónica de
varrimento (Fig. 1C). Para tal, os insetos são
imersos em álcool etílico, fixados com
glutaraldeído em tampão calcodilato,
desidratados em concentrações crescentes de
acetona, colocados em suportes e revestidos por
uma liga de ouro-paládio.
Figura 3 – Armadilha luminosa Miniature CDC
Biologia Molecular
O desenvolvimento de técnicas de biologia
molecular veio trazer novas ferramentas na
identificação de espécies dentro do género
Culicoides. A utilização de técnicas moleculares
é particularmente relevante na diferenciação de
espécies próximas, como no caso de indivíduos
dos grupos Obsoletus e Pulicaris. A inclusão de
exemplares nestes grupos é relativamente fácil
através da análise dos seus padrões alares, mas a
distinção de espécies dentro de cada um dos
grupos requer a utilização de técnicas
morfológicas de maior detalhe e de técnicas de
biologia molecular.
Protocolos baseados em técnicas de PCR
(Polymerase Chain Reaction), como o PCR em
tempo real e PCR multiplex, que,
respectivamente, permitem visualizar a
amplificação da porção do gene alvo em tempo
real, obtendo-se uma maior sensibilidade, e a
amplificação de mais do que um alvo genético
ao mesmo tempo, assim como a própria
sequenciação de genes e porções de genes-alvo,
têm sido de extrema importância neste tipo de
análise. Alguns dos genes alvo utilizados nestas
técnicas são o marcador mitocondrial da
Citocromo Oxidase I (COI) (Ramilo et al.,
2013) e o espaço intergénico 2 (ITS2)
(Gomulski et al., 2006). Estas abordagens
possibilitam a elaboração de árvores
filogenéticas, onde se podem ordenar as
diferentes espécies de Culicoides, contribuindo,
assim, com mais alguma informação para além
da obtida através das características
morfológicas individuais de cada espécie. Os
estudos moleculares permitem a definição de
cada espécie a nível genético, possibilitando
também a descoberta de novas espécies para a
ciência e que de outra forma seria difícil
somente pela observação de caracteres
fenotípicos.
A B C
1 1 2
D E F
Ramilo et al., RPCV (2018) 112 (605-606) 10-17
13
Estas ferramentas revelam-se também muito
importantes na detecção dos agentes da doença
da Língua Azul e da Peste Equina Africana
(transmitidos por C. imicola, C. pulicaris e
espécies do grupo Obsoletus) (Mellor et al.,
1990; Alexandre-Pires et al., 2010). No caso
particular do vírus da Língua Azul, apesar de se
usarem habitualmente protocolos de ELISA
(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para
detecção de antigénios e anticorpos contra estes
agentes, estes tornam-se ineficazes na detecção
de todos os serótipos existentes (27 no caso da
Língua Azul) (Belbis et al., 2017) assim como
não confirmam a virémia do animal, somente o
seu contacto com o vírus (Shad et al., 1997).
Existem assim protocolos que recorrem ao PCR
convencional e PCR em tempo real tendo como
alvos habituais um de 10 segmentos existentes
no genoma do vírus (Jiménez-Clavero et al.,
2006; Shaw et al., 2007; Subhadra et al., 2014;
Maan et al., 2015). Estas abordagens têm-se
verificado muito promissoras na deteção dos
agentes, não só pela especificidade do protocolo
como também pela sua alta sensibilidade
quando comparadas com outras técnicas
utilizadas (Maan et al., 2015).
O género Culicoides enquanto vetor
de doenças em Portugal
A primeira referência à doença da Língua
Azul em Portugal remonta ao ano de 1956, onde
um surto matou cerca de 180 mil ovinos em
quatro anos na Península Ibérica, afetando as
regiões a sul do rio Tejo, excluindo o Algarve,
tendo a doença sido causada pelo serótipo BTV-
10 (Manso-Ribeiro et al., 1957; Barros et al.,
2007; Ribeiro et al., 2015).
Depois de um silêncio epizoótico de 44
anos, a doença da Língua Azul apareceu
novamente em Portugal Continental, em 2004,
afetando as áreas da região centro-oeste e sul de
Portugal Continental, perto da fronteira com
Espanha. Foi então criado um Plano Nacional
Entomológico de Vigilância para a doença da
Língua Azul (PNEVLA), abrangendo Portugal
Continental e os Arquipélagos dos Açores e da
Madeira, com o objetivo de recolher e
identificar Culicoides e entender a distribuição
das diferentes espécies capturadas.
Este surto, causado pelo serótipo BTV-4,
persistiu até ao final de 2006 (Barros et al.,
2007; Ribeiro et al., 2015). Um ano depois, em
setembro de 2007, o serótipo BTV-1 foi
detetado no Alentejo, perto com a fronteira
espanhola, dois meses depois deste serótipo ter
sido detetado em Espanha (DGAV, 2012). Entre
setembro e dezembro do mesmo ano foram
vários os focos da doença observados nas
regiões centro e sul do país. Contudo, em 2008,
este serótipo mostrou ter uma distribuição
diferente da registada para os dois serótipos
atrás mencionados, tendo 17% dos focos
ocorrido nas regiões do norte de Portugal
Continental. Em 2009, a maioria dos focos
ocorreu no norte do país (67%). Entre 2010 e
2012 alguns focos causados por este serótipo
voltaram a ser registados no centro e sul do país
(Ribeiro et al., 2015). Em 2013, o serótipo
BTV-4 reemergiu na região do Algarve
(DGAV, 2014), onde foram tomadas medidas
de controlo da doença, com a vacinação
obrigatória de ovinos e opcional em bovinos.
Em setembro de 2015, o serótipo BTV-1 foi
novamente detetado nas regiões do Alentejo e
do Algarve (DGAV, 2015). A 3 de novembro de
2017 entrou em vigor o Edital n.º 45 da Língua
Azul no qual Portugal se declara livre do
serótipo BTV-4, com levantamento da zona de
restrição e das condicionantes previamente
existentes no que concerne a movimentação
animal, deixando de ser obrigatória a vacinação
contra o referido serótipo, mas mantendo a
restrição de todo o território de Portugal
Continental para o serótipo BTV-1 (DGAV,
2017).
Até 2005, estavam descritas em Portugal 47
espécies dentro deste género (Capela et al.,
2003; Pena, 2003; Vila-Viçosa et al., 2009). No
âmbito do PNEVLA, verificou-se que C.
imicola (75,3%) foi a espécie mais prevalente
em Portugal Continental, seguida das espécies
pertencentes ao grupo Obsoletus (6,5%). Estas
últimas foram as mais prevalentes no
arquipélago dos Açores, representando 96,7%
do total de espécies identificadas.
Um dos principais objetivos do PNEVLA,
que decorreu durante 8 anos (2005-2013), foi a
análise das espécies de Culicoides presentes em
Portugal, assim como a sua distribuição
geográfica (Ramilo et al., 2012a). Todas as
espécies previamente mencionadas por outros
autores (com a exceção de C. brunnicans, C.
chiopterus, C. furcillatus, C. nuntius, C.
pictipennis, C. riethi, C. rochenus, C.
shaklawensis em Portugal Continental e C.
puncticollis no arquipélago da Madeira) foram
identificadas durante o PNEVLA (Ramilo et al.,
2012b, 2012c).
Para além disso, vinte e duas espécies de
Culicoides foram mencionadas pela primeira
vez em Portugal (Ramilo et al., 2012a): C.
alazanicus, C. deltus, C. dewulfi, C. heliophilus,
C. jumineri semelhante a C. bahrainensis, C.
jurensis, C. kingi, C. lupicaris, C. malevillei, C.
montanus, C. paolae, C. picturatus, C. remmi,
C. riebi, C. santonicus, C. semimaculatus, C.
simulator e C. subfagineus em Portugal
Continental, C. obsoletus e C. scoticus nas ilhas
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do arquipélago dos Açores onde ainda não
tinham sido referidas e C. circumscriptus e C.
newsteadi em todas as ilhas do arquipélago,
com exceção das Flores e do Corvo.
Aquando da avaliação de alguns exemplares
capturados verificou-se que o seu padrão alar
não correspondia a nenhum dos padrões
conhecidos até então, havendo algumas
semelhanças com os de C. newsteadi e C.
lupicaris. Após uma avaliação morfológica
desses exemplares usando várias técnicas
microscópicas (estereoscopia microscópica,
microscópia ótica composta e microscopia
eletrónica de varrimento) e moleculares (análise
do gene da COI) verificou-se que esses
exemplares correspondiam a uma nova espécie
para a ciência: Culicoides paradoxalis Ramilo
& Delécolle, 2013, formando esta um grupo
isolado doutras espécies de Culicoides
conhecidas (Ramilo et al., 2013). Na Tabela 1
estão referidas as espécies de Culicoides
referidas em Portugal até 2016.
Para além da importância do género
Culicoides na transmissão da doença da Língua
Azul, pode-se também referir o seu importante
papel na transmissão da Peste Equina Africana,
cujo último surto importante na Península
Ibérica foi observado entre 1987 e 1990,
matando um total de 202 cavalos nas regiões do
Algarve e do Alentejo, na fronteira com
Espanha (Pena, 2003).
A doença de Schmallenberg, descoberta pela
primeira vez em novembro de 2011 na região
alemã com o mesmo nome, provoca abortos e
malformações em ruminantes, tendo também os
insetos Culicoides como vetores (EFSA, 2014).
Esta doença já foi detetada em ovinos em
Portugal, nos quais se registou uma prevalência
estimada de 12,8% de anticorpos IgG contra o
vírus de Schmallenberg (Esteves et al., 2016).
Conclusões
Embora de dimensões reduzidas, os insetos
do género Culicoides apresentam grande
complexidade enquanto vetores de agentes
patogénicos de doenças animais e humanas e
também a nível morfológico. Tendo em conta a
expansão destes insetos nos últimos anos para
novas áreas geográficas devido ao aquecimento
global, é de extrema importância a avaliação das
espécies presentes em cada região/país usando
diferentes técnicas laboratoriais, de forma a
monitorizar e controlar futuros surtos de doença
que possam vir a surgir e, assim, prevenir a sua
propagação.
Agradecimentos: Ao Professor Doutor
Fernando Boinas, Coordenador do Plano
Nacional Entomológico de Vigilância para a
doença da Língua Azul (DGAV-
FMV/ULisboa), ao Dr. Telmo Nunes da
Faculdade de Ciências, Universidade de Lisboa,
pelo apoio na realização das técnicas de
microscopia eletrónica de varrimento e à Mestre
Ana Valente pela imagem (A) da Figura 1.
Ramilo et al., RPCV (2018) 112 (605-606) 10-17
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Tabela 1 – Espécies de Culicoides referidas em Portugal até 2016.
Espécies de Culicoides
C. achrayi C. impunctatus C. parroti
C. alazanicus C. indistinctus C. picturatus
C. albihalteratus C. jumineri C. pseudopallidus
C. atripennis C. jumineri semelhante a C.
bahrainensis C. pulicaris
C. begueti C. jurensis C. punctatus
C. cataneii C. kibunensis C. puncticollis
C. circumscriptus C. kingi C. remmi
C. clastrieri C. kurensis C. riebi
C. corsicus C. longipennis C. sahariensis
C. deltus C. lupicaris C. santonicus
C. derisor C. malevillei C. scoticus
C. dewulfi C. maritimus C. semimaculatus
C. fagineus C. montanus C. simulator
C. fascipennis C. newsteadi C. subfagineus
C. festivipennis C. nubeculosus C. subfasciipennis
C. gejgelensis C. obsoletus C. tbilisicus
C. haranti C. odiatus C. univittatus
C. heliophilus C. pallidicornis C. vexans
C. heteroclitus C. paolae
C. imicola C. paradoxalis
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18
Efeito de extrato hidroalcoólico de pau-d’alho Gallesia integrifolia
(Sprengel) Harms sobre larvas infectantes de Haemonchus contortus de
ovinos in vitro
Effect of hidroalcoholic extracts of garlic's wood Gallesia integrifolia
(Sprengel) Harms on Haemonchus contortus infective larvae of sheep in
vitro
Anderson Silva Dias1*, Vitor Dalmazo Melloti2, Renan Melo Spadeto3
1Laboratório de Controle de Produtos Biológicos, Laboratório Nacional Agropecuário
Brasil, Av Romulo Joviano, s/n, Pedro Leopoldo, MG, Brasil, CEP 33600-000 2Faculdades Integradas Promove de Brasília e Faculdade ICESP
Curso de Medicina Veterinária, Campus Brasília, DF 3Instituto Nacional de Tecnologia, Inovação e Meio Ambiente
Conceição do Castelo, ES, Brasil
Resumo: Apesar de haver aumento significativo
de criação de ovinos no Brasil, verifica-se baixo
desenvolvimento zootécnico na criação desses
animais quanto a aspectos sanitários,
nutricionais e produtivos e poucos avanços no
controle de nematoides gastrintestinais que
parasitam e causam perdas produtivas a ovinos.
Nematoides gastrintestinais, principalmente
Haemonchus contortus, apresenta-se como a
principal causa de perdas produtivas em
ovinocultura no Brasil. Considerando o uso
quase restrito de antihelmínticos como
ferramenta para o controle desses nematoides, a
resistência a parasiticidas químicos no mercado
apresentam-se também como um grande entrave
e contribui para elevar as perdas produtivas. O
objetivo do presente trabalho foi testar a
eficácia, in vitro, de extrato hidroalcoólico de
folhas de Gallesia integrifolia no controle de
larvas de H. contortus parasito de ovinos. O
extrato hidroalcoólico de folhas de G.
integrifolia apresentou eficácia acima de 95%
em concentração à 10% (ou seja, o extrato foi
diluído 10 vezes em relação à solução
hidroalcoólica preparada previamente). Esses
resultados validam o uso tradicional de folhas
de pau d'alho como antihelmíntico eficaz no
controle de nematodioses gastrintestinais em
ovinos causada por H. contortus. Além disso,
esse é o primeiro trabalho a relatar a eficácia de
G. integrifolia in vitro sobre larvas infectantes
de H. contortus e possibilita futuras
investigações sobre compostos com potencial
antihelmíntico presentes em folhas de G.
integrifolia.
Summary: Although there is a significant
increase in sheep rearing in Brazil, it is verified
low development in the health, nutritional and
productive aspects and few advances in control
of gastrointestinal nematode that parasite and
causes productive losses to sheep.
Gastrointestinal nematodes, particularly the
specie Haemonchus contortus, is presented as
the main cause of productive losses in sheep
rearing in Brazil. Considering the use almost
restricted of anthelmintics as a tool for control
of this nematodes, the resistance to chemical
parasiticides on the market are presented also as
a major deterrent and contribute to increase the
losses in livestock. The aim of this study was to
test the efficacy in vitro of the hydroalcoholic
extract of leaves of Gallesia integrifolia in
control H. contortus infective larvae parasite of
sheep. Hydroalcoholic extract of leaves of G.
integrifolia showed efficacy above of 95% at
10% concentration (that is, the extract was
diluted 10 times in relation to the previously
prepared hydroalcoholic solution). These
results validate the traditional use of leaves of
wood d'garlic as an effective anthelmintic in the
control of gastrointestinal nematodiosis in sheep
caused by H. contortus. Also, this is the first
study to report the efficacy of leaves of G.
integrifolia in vitro on infective larvae of H.
contortus and open possible future research on
compounds with potential anthelmintic present
in leaves of G. integrifolia.
*Correspondência: andersonsilvadias@yahoo.gov.br
Dias et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-22
19
Introduction
Apesar da expansão da ovinocultura no
Brasil, os nematoides gastrintestinais são os
principais responsáveis por perdas produtivas,
doença e mortalidade em criação de pequenos
ruminantes (Angulo-Cubillán et al., 2010;
Ferreira et al., 2013; Preet e Tomar, 2017).
Dentre os nematoides gastrintestinais, há uma
gama desses como Cooperia spp.,
Oesophagostomum columbianum,
Trichostrongylus colubriformis, Ostertargia
spp., porém, na maior parte do mundo,
Haemonchus contortus é o mais severo e
prevalente (Hajaji et al., 2018; Zouyed et al.,
2018), e o que apresenta os maiores problemas
relacionados a resistência anti-helmíntica no
Brasil e no mundo; (Angulo-Cubillán et al.,
2010; Jasso-Díaz et al., 2017; Hernández-Bolio
et al., 2018).
A planta Gallesia integrifolia (Sprengel)
Harmson, é conhecida por pau d'alho, por exalar
cheiro semelhante a tal, e pertence à família
Phytolaccaceae, sendo comum na região
Sudeste e nativa da Mata Atlântica do Brasil
(Akisue et al., 1986; Bacarin et al., 2016). No
conhecimento popular, essa planta é empregada
para tratamento de verminoses e infecções
bacterianas em humanos (Akisue et al., 1986).
Raimundo et al. (2017) verificou a eficácia de
G. integrifolia em larvas de carrapatos de
Rhipicephalus Boophilus microplus (parasito de
bovinos) indicando que esse formulação
fitoterápica pode apresentar-se promissora
também para o controle de nematoides, que
também possui alta resistência à anti-
helmínticos químicos. Arunachalam et al.
(2016) relatam efeito bacterida de extrato de G.
integrifolia, Arunachalam et al. (2017)
verificaram efeito protetor em úlceras gástricas.
É relatado que taninos, alcaloides e
cumarinas, substâncias presentes nas folhas de
pau d'alho (G. integrifolia) podem ser extraídas
em elevada proporção em extratos dessa planta
e apresentam elevada ação antimicrobiana
(Maia et al., 2013), indicando que essa planta
possui potencial a ser explorado (Arunachalam
et al., 2016; Bacarin et al., 2016). Não há relato
na literatura do emprego dessa planta no
controle de helmintos que causam perda na
pecuária, como nematoides gastrintestinais de
ruminantes, que apresentam grandes problemas
com resistência à anti-helmínticos químicos
(Castañeda-Ramírez et al., 2017; Ramos et al.,
2018). O objetivo do presente trabalho foi testar
a eficácia de extrato hidroalcoólico de folhas de
G. integrifolia in vitro no controle de larvas de
Haemonchus contortus parasito de ovinos.
Material e Métodos
Preparo do extrato de gallesia integrifolia
Folhas de G. integrifolia foram coletadas em
algumas propriedades localizadas na zona rural
de Castelo, estado do Espírito Santo, a seguir as
mesmas foram encaminhadas para o Laboratório
de Parasitologia Veterinária da Facastelo. Foi
preparado um extrato com 20% de folhas
moídas do pau d’alho e mantivera-se a mesma
por três dias em vidro âmbar em solução
hidroalcoólica 70% em 20% de massa de pau
d'alho, assim, após isso, foram preconizadas
concentrações a realizou-se a diluição dessa
solução a 100, 50, 25, 10, 5, 2,5 e 1% (Chagas
et al., 2016).
Obtenção de larvas
As larvas foram adquiridas de um rebanho
de ovinos de corte, criados em um sistema
semiextensivo na qual os mesmos pernoitavam
em uma área coberta, a propriedade era
localizada na zona rural de Castelo, estado do
Espírito Santo. Esses animais estavam
naturalmente infectados por nematoides
gastrintestinais, o que foi verificado através de
triagens por diagnóstico parasitológico de
exames de fezes realizado previamente, na qual
foram realizadas coproculturas para
identificação de larvas. Buscou-se realizar a
coleta de amostras fecais desses ovinos e as
mesmas foram encaminhadas para o Laboratório
de Parasitologia Veterinária da Faculdade de
Castelo, onde as mesmas foram processadas e
foi realizado a coprocultura, de acordo com o
preconizado por Roberts e O’Sullivan (1950),
na qual 20 gramas de fezes dos animais foram
misturados com vermiculita fragmentada e
umedecida e colocados em um frasco coberto
com papel alumínio perfurado e levadas à estufa
a 26 ºC, durante 14 dias, após o conteúdo da
coprocultura foi enrolado em uma gaze e
disposto em um funil com um tubo com um
recipiente na extremidade inferior, na qual na
extremidade do funil foi adicionado água de
torneira aquecida à 37 ºC de forma a todo
conteúdo ficar completamente cheio de água, as
larvas por serem termo-hidrotrópicas e
geotérmicas, descem para o recipiente disposto
abaixo do tubo do possibilitando a obtenção
dessas larvas de nematoides gastrintestinais.
Após isso, as larvas foram identificadas em
microscopia de luz em objetiva de 10x (ocular
em aumento de 10x) através dos procedimentos
descritos por van Wyk et al. (2004). Apenas
larvas de H. contortus foram consideradas nas
leituras e foram consideradas até o número de
100 larvas de H. contortus.
Dias et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-22
20
Teste de motilidade larval
Foi também realizado o teste de motilidade
das larvas no estágio três (L3) de acordo com os
procedimentos modificados por Ueno e
Gonçalves (1998). Esses ensaios tiveram
período de incubação de 24 horas em
incubadora a 27 ºC. As larvas (em volume de
100 µl) foram submetidas a concentrações
seriadas de extrato hidroalcoólico de G.
integrifolia de 100, 50, 25, 10, 5, 2,5 e 1% em
um recipiente com 30 ml de solução. Foram
considerados três grupos para controle: o
primeiro, na qual as larvas L3 foram desafiadas
em solução hidroalcoólica a 70%, o segundo, na
qual as larvas foram desafiadas em água
(comum) e um terceiro grupo, na qual as larvas
foram desafiadas com albendazole (diluído em
água comum a 10%). Foram avaliadas o
percentual de larvas sem motilidade em lâmina-
lamínula. Os resultados foram apresentados
como percentual de inibição de motilidade. Esse
teste foi realizado em triplicata. Foram
considerados apenas as larvas classificadas
como H. contortus na leitura de desse teste até o
número de 100 larvas dessa espécie com ou sem
motilidade.
Análise estatística
Análise de variância e teste de Kruskal-
Wallis foram realizados para verificar
diferenças entre os tratamentos a 1 e 5% de
significância.
A avaliação da eficácia dos tratamentos foi
conduzida de acordo com o proposto por
Niciura et al. (2009), na qual propõe que o
cálculo da eficácia de um antihelmíntico seja
baseada na razão da diferença da média do
número de ovos por gramas de fezes (OPG) do
grupo controle e o do grupo tratado sobre a
média do OPG e o resultado é multiplicado por
100.
Resultados
Uma alíquota do volume resultante das
coproculturas foram destinadas à identificação
de larvas em lâminas com solução lugol a 10%.
Do total dessas larvas identificadas, 79% foram
classificadas como H. contortus, 15% foram
classificadas como Cooperia punctata 6%
foram classificadas como Trichostrongylus
colubriformis. O extrato hidroalcoólico de G.
integrifolia apresentou-se eficaz no controle de
larvas de Haemonchus contortus na diluição a
10% (tabela 1), considera-se eficaz, apenas
quando a eficiência 90%. O albendazol a 10%
apresentou eficácia menor que 25% sobre as
larvas infectantes (L3) de H. contortus e uma
solução hidroalcoólica a 70% apresenta ação
sobre as larvas após 24 h em temperatura ideal
(27 ºC) menor que 15%.
Tabela 1 - Percentual de inibição de motilidade
de larvas infectantes (L3) de Haemonchus
contortus dos tratamentos com água, solução
hidroalcoólico a 70%, albendazole a 10%
(controles) e extrato hidroalcoólico a 20% de
folhas de Gallesia integrifolia a 100, 50, 25, 10,
5, 2,5 e 1% em placas de Petri, incubadas por 24
h a 27 ºC.
Repetição Inibição da
motilidade (%)
Água 0,00 ± 0,00
Solução
hidroalcoólica 70% 14,40 ± 1,30
Albendazole 10% 24,60 ± 4,50
Extrato1% 22,40 ± 3,20
Extrato 2,5% 48,30 ± 4,74
Extrato 5% 69,34 ± 3,20
Extrato 10% 97,80 ± 2,86
Extrato 25% 100,00 ± 0,00
Extrato 50% 100,00 ± 0,00
Extrato 100% 100,00 ± 0,00
Discussão
Algumas investigações relatam a presença
de resistência múltipla a antihelmínticos em
populações de H. contortus em várias regiões do
mundo, como a classes como benzimidazois e
lactonas macrocíclicas (Muchiut et al., 2018;
Politi et al., 2018; Ramos et al., 2018, Olivas-
Salazar et al., 2018). Verifica-se nesse presente
trabalho que a população de H. contortus
presente na propriedade de ovinos na qual as
amostras de fezes foram coletadas a presença de
resistência a benzimidazois confirmada. Esse
fato deve-se ao caso de que os benzimidazois
tiveram eficácia menor que 25% nos testes
realizados em larvas, verifica-se que o
fenômeno de resistência para uma população
helmíntica é determinado quando observa-se
eficiência menor que 90% de acordo com os
procedimentos descritos por Niciura et al.
(2009). Dessa forma, o extrato de G. integrifolia
pode ser considerado eficaz em diluição em até
10 vezes, ou seja, diluído a 10% (tabela 1).
Nesse presente trabalho, foram avaliados a
ação desses extratos unicamente sobre as larvas
classificadas como H. contortus, porque são
essas as principais responsáveis pelo fenômeno
de resistência (Ramos et al., 2018; Zouyed et
al., 2018) e esses estudos são conduzidos pela
maioria dos estudos em relação a essa espécie
de nematoide, que em geral também são os
Dias et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-22
21
principais responsáveis pelas perdas produtivas
(Castañeda-Ramírez et al., 2017).
Verifica-se que essas interações entre as
soluções e as larvas são avaliadas em condições
ideais na qual só há praticamente o meio e as
larvas em uma solução na qual elas foram
recuperadas e, portanto, a ação, após 24 h de
incubação, é direta sobre o revestimento das
mesmas, vale lembrar que essas larvas não se
alimentam, por isso essas substâncias testadas
apresentam ação quase estritamente via
tegumento das larvas (Castañeda-Ramírez et al.,
2017, Sharifi-Rad et al., 2017), que são
duplamente revestidas, portanto, mais
protegidas que as outras formas de vida
verificadas em outras fases desse nematoides.
Arunachalam et al., 2016 e Brito et al., 2018
relatam que o pau-d’alho possui elevadas
concentrações em sua folha de substâncias
voláteis do grupo de taninos, alcaloides e
cumarinas. Esses mesmos autores relatam, que
essas substâncias têm eficácia comprovada
sobre as cutículas de larvas de nematoides. A
análise fitoquímica do extrato dessa planta
deveria ser realizada de forma a identificar
potenciais moléculas antiparasitárias na mesma
(Akisue et al., 1986; Arunachalam et al., 2017;
Raimundo et al., 2018).
Conclusão
A eficácia da formulação de extrato
hidroalcoólico a 70% de folhas de G.
integrifolia sobre larvas infectantes L3 de H.
contortus foi avaliada após estudos prospectivos
e observou-se que a mesma apresentou eficácia
satisfatória acima de 97% desse extrato diluído
a 10%. Esse estudo apresenta-se como apoio
para futuros estudos fitoquímicos para
identificar possíveis moléculas ou grupos da
mesma com eficácia helminticida.
Agradecimentos: Gostaríamos de agradecer a
Facastelo pelo apoio técnico, atualmente,
Multivix Campus Castelo, Espírito Santo.
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18
Parasitas gastrointestinais em produção de frango ao ar livre
Gastrointestinal parasites in free-range chicken production
João M. Pestana Lozano1*, Lídia Gomes2, Luís M. Madeira de Carvalho2
1Instituto Superior de Agronomia - ULisboa, Tapada da Ajuda, 1349-017, Lisboa; 2Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal, Faculdade de Medicina
Veterinária, Universidade de Lisboa (CIISA-FMV-UL), Avenida da Universidade
Técnica, Lisboa
Resumo: A investigação em sanidade animal
realizada a nível nacional em sistemas
extensivos de produção de frango é essencial,
atendendo à frequente longa exposição dos
animais ao ambiente exterior e aos parasitas que
o contaminam. Estudos parasitológicos são
extremamente relevantes de forma a conhecer
quais as espécies parasitárias mais prevalentes e
ajudar os produtores a definirem melhores
medidas profiláticas. Esta pesquisa procurou
identificar os parasitas gastrointestinais
associados a este tipo de produção aviária e
ocorreu numa exploração agropecuária
localizada na extremidade noroeste do distrito
de Lisboa, onde foram avaliados Frangos do
Campo através de amostragem fecal aos 75 e 85
dias de idade. O parasitismo gastrointestinal foi
analisado através de métodos coprológicos
qualitativos, quantitativos e coproculturas para
obtenção de oocistos esporulados e larvas L3 de
nematodes estrongilídeos. Na 1ª amostragem, a
prevalência de Eimeria spp. totalizou 40,0%,
sendo Eimeria mitis (13,3%) e E. maxima
(11,7%) as mais prevalentes, tendo-se
identificado também ovos de Capillaria sp., (1,7
% de prevalência). Nas coproculturas de
oocistos, esporularam as seguintes espécies: E.
necatrix, E. mitis, E. praecox, E. maxima, E.
acervulina e E. tenella. Na 2ª amostragem, as
coccídeas continuaram a ser o grupo mais
prevalente, 90,0% de amostras positivas com
oito espécies identificadas, sendo de novo E.
mitis a espécie mais frequente (41,7%), seguida
por E. acervulina (26,7%) e E. tenella (25%).
Foram também observados ovos de Heterakis
sp. (3,33%) e novamente de Capillaria sp.
(10,0%) A carga parasitária fecal de oocistos na
1ª e 2ª amostragens foi de 370,8 ± 2055,3 OoPG
e 599,2 ± 1289,2 OoPG, respetivamente,
verificando-se um aumento superior a 60% do
valor médio deste parâmetro parasitológico da
1ª para a 2ª colheita. O crescimento da erva, a
idade e densidade animal, bem como o tempo de
exposição a parasitas com períodos pré-patentes
curtos, constituíram fatores chave para o
aumento da prevalência de oocistos de Eimeria
spp. e ovos de helmintes entre as duas
amostragens, em particular de espécies com
reconhecida patogenicidade. Isto permite-nos
concluir que no final da fase de engorda, as
cargas parasitárias são as mais elevadas
detetadas neste sistema de produção de Frango
do Campo, podendo desencadear patologia
associada e interferir com a sua performance
produtiva.
Summary: Animal health research performed at
national level in extensive chicken production is
essential, due to the frequently long exposure of
animals to the outdoor environment and the
parasites contaminating it. Parasitological
studies are extremely relevant in order to
identify the most prevalent parasitic species and
to help producers define the best prophylactic
methods. This research aimed the identification
of gastrointestinal parasites associated with this
avian production and took place in an
agricultural, livestock farm located in the
northwest end of the Lisbon district, where
faecal sampling of Free-Range Chickens at 75
and 85 days of age was performed for its
assessment. Gastrointestinal parasitism was
analysed by means of coprological methods,
namely qualitative, quantitative and faecal
cultures for oocyst sporulation and isolation of
L3 larvae of strongyle nematodes. In the 1st
sampling date, the prevalence of Eimeria spp.
was 40,0%, being Eimeria mitis (13.3%) and E.
maxima (11.7%) the most prevalent ones, as
well as Capillaria sp. eggs with 1.7%
prevalence. In faecal cultures for oocysts, the
following species were isolated after
sporulation: E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E.
maxima, E. acervulina and E. tenella. In the 2nd
sampling date, coccidia continued to be the
most prevalent group of parasites, 90,0%
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
19
positive samples with eight species isolated,
being again E. mitis the most frequent (41,7%),
followed by E. acervulina (26.7%) and E.
tenella (25%). Heterakis spp. eggs were also
identified (3.33%) and again Capillaria sp.
(10,0%). The faecal oocysts shedding in the 1st
and 2nd samplings were 370.8 ± 2055.3 OoPG
and 599.2 ± 1289.2 OoPG, respectively,
showing more than 60% increase of this
parasitic parameter between the first and second
collection dates. Pasture growth, age and animal
density, as well as, the time exposure to
parasites with short pre-patent periods, were key
factors that contributed to the increasing
Eimeria spp. oocysts and helminth prevalence
between the two samplings, particularly by well
know pathogenic species. This allows us to
conclude that at the end of the fattening phase,
the parasitic burdens reported in Free-Range
Chicken breeding system are the highest, may
trigger associated pathology and interfere with
their productive performance.
*Correspondência: joao.lozano@sapo.pt
Introduction
As razões pelas quais a carne de aves e,
neste caso específico a carne de frango, é eleita
pelo consumidor são várias: a sua fácil
confeção, as diversas faixas etárias que podem
alimentar-se de carne de aves, os baixos custos
associados à sua produção comparativamente
com outros segmentos da Produção Animal, a
ausência de limitações de carácter religioso e o
elevado valor nutritivo desta carne (Lordelo,
2016).
Episódios como a gripe aviária e a crise dos
nitrofuranos constituíram dois dos principais
motivos que levaram o consumidor a mudar
drasticamente a forma como encara a sua
alimentação diária e as questões de qualidade e
segurança alimentar (Baptista, 2010).
Assim, houve a necessidade de implementar
um sistema alternativo à produção de aves em
regime intensivo, o qual transmitisse por sua
vez maior confiança ao consumidor e a
ideologia associada a um produto final mais
saudável e natural: o Frango do Campo (Filho et
al., 2003).
A Produção de Frango do Campo define-se
com sendo uma atividade económica inserida na
Produção Animal, na qual os frangos possuem
acesso a espaços exteriores durante pelo menos
50 % do seu tempo de vida. Este abrange cerca
de 12 semanas, contrastando com as 5 semanas
com que um frango produzido em regime
intensivo/industrial é abatido (Lozano &
Mourato, 2016).
Desta forma, as questões sanitárias deverão
ser mais tomadas em conta, uma vez que ao
contactarem em grande parte do seu ciclo
produtivo com espaços exteriores, os animais
ficam expostos a um grande número parasitas,
quer de forma direta (pela ingestão das formas
parasitárias no ambiente), quer indireta (pela
ingestão de hospedeiros intermediários de
potenciais agentes parasitários), contrastando
neste aspeto com a produção em sistema
intensivo (Baptista, 2010).
O presente trabalho pretendeu estudar o
parasitismo gastrointestinal de Frangos do
Campo com base em duas amostragens de
elementos fecais de animais não-desparasitados
e na fase de engorda, numa exploração
agropecuária localizada no distrito de Lisboa,
alicerçado na utilização de técnicas
coprológicas, como forma de avaliar a sua
expressão na idade peri-abate.
Material e Métodos
O trabalho de campo foi efetuado numa
exploração agropecuária situada no distrito de
Lisboa, consistindo em duas amostragens no
respetivo parque de engorda, incluindo 60
amostras fecais (40 do exterior do parque e 20
do interior dos alojamentos) a 8 e 17 de Maio de
2017, provenientes de frangos perto da idade de
abate, com 75 dias e 85 dias de idade,
respetivamente.
A alimentação ingerida pelos animais era à
base de milho, cevada e bagaço de soja (regime
isento de antimicrobianos), bem como de uma
pastagem espontânea. Os cerca de 200 frangos
encontravam-se no parque (≈ 1200 m2) desde as
6/7 semanas até à idade de abate (3 meses),
sendo que durante o dia frequentavam o exterior
e à noite recolhiam para dois alojamentos, cada
um com 10 m2.
A identificação parasitológica foi realizada
através da pesquisa de elementos parasitários
nas fezes. As técnicas coprológicas quantitativas
e qualitativas realizadas foram as seguintes:
método de McMaster para contagem de oocistos
e ovos por grama de fezes, flutuação de Willis e
Sedimentação Natural para identificação de
ovos e oocistos e cálculo da prevalência de
género/espécie e coproculturas para obtenção de
oocistos esporulados de Eimeria spp. e larvas
L3 de Estrongilídeos Gastrointestinais.
As técnicas de McMaster, Flutuação e
Sedimentação Natural basearam-se no referido
por Thienpont et al. (1986) e Fazendeiro (1989),
sendo executadas de forma consecutiva.
Para o método de McMaster, a metodologia
específica foi adotada a partir de Anastácio
(2011) para classificar as cargas parasitárias de
oocistos de Eimeria spp. expressas em Oocistos
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
20
por Grama de fezes (OoPG), adaptando-a a este
caso concreto e criando três classes de
eliminação: “0-100 OoPG” (eliminação fraca),
“100-500 OoPG” (média) e “>500 OoPG”
(forte). Este método também permitiu a
contagem do número de Ovos por Grama de
fezes (OPG) e, de acordo com Thienpont et al
(1986), com um limiar de deteção de 50 OPG.
O procedimento adotado para cada elemento
fecal consistiu numa primeira homogeneização
com solução saturada de açúcar com uma
densidade de 1,2, seguida de uma filtração da
mistura e sua transferência para uma câmara de
McMaster e visualização ao microscópio na
objetiva de 10x. Posteriormente, verteu-se a
mistura remanescente para um tubo de ensaio,
até se observar a formação de um menisco
convexo no topo, cobrindo-se de seguida com
uma lamela. Depois de retirar a lamela após a
flutuação, o sobrenadante remanescente foi
eliminado e observou-se o sedimento após
coloração com azul de metileno, cerca de 10-20
minutos depois. Tanto as lâminas de flutuação,
como as de sedimentação, foram observadas
com as objetivas de 10x e 40x.
Para a coprocultura de oocistos de Eimeria
spp., os autores basearam-se no procedimento
realizado por Baptista (2010) e Anastácio
(2011), utilizando papel de filtro em placa de
Petri, impregnado com dicromato de potássio a
2% (agente microbicida), sobre o qual foram
depositadas 5-10g de fezes. O conjunto foi
colocado na estufa a 26-27 °C e a sua
observação foi efetuada regularmente durante
uma semana.
Realizaram-se também coproculturas para
obtenção de larvas infetantes L3 de
estrongilídeos, a partir dos ovos presentes nas
amostras, em cada uma das datas de
amostragem. O procedimento baseou-se no
referido por Madeira de Carvalho (2001) e
Anastácio (2011), consistindo numa incubação
em copo descartável de plástico de 10g de fezes
em estufa a 26-27 °C durante 7 dias. Esta
cultura incluiu no total 6 copos (4 do exterior do
parque e 2 do interior dos alojamentos) por cada
data de colheita, secundada pela inversão dos
copos após os 7 dias de permanência na estufa,
seguindo-se o preenchimento do espaço
compreendido entre o bordo dos mesmos e a
parede das placas de Petri com água. Decorridas
24 horas, a solução de cada um destes espaços
foi transferida para 6 tubos de ensaio e após
agitação dos mesmos e transferência para
lâminas, efetuou-se a sua observação ao
microscópio ótico com as objetivas de 10x e
40x para pesquisa de larvas infectantes de
terceiro estádio (L3).
A compilação dos dados obtidos e o cálculo
de valores médios e desvio padrão foram
efetuadas com recurso ao software gratuito “R”
da R Foundation for Statistical Computing
(https://www.r-project.org) e o software
Microsoft Excel® 2010 da Microsoft
Corporation foi utilizado para armazenamento
de dados e construção de gráficos e tabelas.
Dado que a exploração na qual foram
efectuadas as amostragens se localiza no distrito
de Lisboa, foi efectuada uma caracterização
climatérica da região com base em dados
extraídos do Portal do Clima
(http://portaldoclima.pt/pt/).
Os dados meteorológicos afectos a cada dia
do mês de Maio de 2017, tendo em cono
período de amostragens e a região onde se
localiza a exploração agropecuária, foram
extraídos do website da AccuWeather Inc.
(https://www.accuweather.com).
Resultados
Segundo dados obtidos a partir da Estação
Meteorológica de Lisboa para o período entre
1971-2016, a precipitação média mensal
observada para o mês de Maio totalizou 55,64
mm, com mínimo de 0,3 mm e máximo de 156
mm. Já a temperatura média mensal observada
igualmente para o mês de Maio foi de 17,38 ºC,
com mínimo de 14,85 ºC e máximo de 19,6 ºC.
Entre as duas amostragens (8 e 18 de Maio
de 2017) verificaram-se os maiores índices de
precipitação, sendo que o máximo foi atingido
no dia 11 de Maio. Ao nível das temperaturas
máximas e mínimas, constatou-se um carácter
ameno das mesmas, sendo que o 2º maior valor
de temperatura máxima para o mês de Maio foi
atingido no dia 16 (31ºC) (Gráficos 1 e 2).
Na 1ª amostragem foram identificadas cinco
espécies diferentes de coccídeas do género
Eimeria, sendo as mais prevalentes Eimeria
mitis (13,3 %) e E. maxima (11,7%), tanto na
totalidade da amostra, como também no exterior
do parque de engorda. Já no interior dos
alojamentos, somente foram identificadas estas
duas espécies. A Tabela 1 ilustra os resultados
obtidos para este parâmetro na 1ª amostragem.
Os resultados obtidos para o parâmetro
“Prevalência de coccídeas na 1ª amostra” foram
subdivididos nos dois domínios amostrados,
sendo que para o exterior do parque e interior
dos alojamentos, as prevalências foram
respetivamente 50,0% e 20,0%, com o total da
1ª amostra a atingir uma prevalência de
coccídeas igual a 40,0 %.
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Gráfico 1 – Precipitação (mm) verificada no mês de Maio de 2017.
Gráfico 2 – Temperaturas Máximas e Mínimas (ºC) verificadas no mês de Maio de 2017
Tabela 1 – Prevalência de casos positivos para coccídeas, incluindo a sua prevalência total e por domínio,
na 1ª amostragem (N=60).
Espécie Casos
Positivos
Prevalência
Total (N=60)
Casos
Positivos
Exterior
Prevalência
Exterior
(N=40)
Casos
Positivos
Interior
Prevalência
Interior
(N=20)
E. mitis 8 13,3% 6 15,0% 2 10,0%
E. maxima 7 11,7% 5 12,5% 2 10,0%
E. necatrix 4 6,7% 4 10,0% 0 0,0%
E. tenella 4 6,7% 4 10,0% 0 0,0%
E. brunetti 3 5,0% 3 7,5% 0 0,0%
Coccídeas* 24 40,0% 20 50,0% 4 20,0%
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Na 2ª amostragem, constatou-se uma
alteração no panorama de agentes parasitários
identificados, sendo que apesar de E. mitis
continuar a ser a coccídea mais prevalente
(41,7%), outras espécies surgiram e com
prevalências consideráveis, nomeadamente E.
acervulina (26,7%) e E. tenella (25,0%). Realça-
se também que enquanto na 1ª amostragem
foram assinaladas cinco espécies, na 2ª foram
identificadas oito. Os resultados obtidos para
este parâmetro na 2ª amostra encontram-se na
Tabela 2.
Na totalidade da 2ª amostragem, a
prevalência de coccídeas foi de 90%, com o
exterior a totalizar 95,0% de casos positivos e o
interior dos alojamentos 80,0%.
A nível global (Tabela 3), E. mitis, E. tenella
e E. acervulina foram as espécies mais
prevalentes (27,5%, 15,8% e 13,3%,
respetivamente) e a frequência de coccídeas
atingiu no total 65,0% (72,5% no exterior e
50,0% no interior dos alojamentos).
Apesar de na 1ª amostragem e
comparativamente com as prevalências obtidas
para as diferentes espécies de coccídeas, os
valores obtidos para os ovos de helmintes e
pseudoparasitas serem quase desprezíveis,
merece especial atenção o facto de apenas terem
sido encontrados casos positivos no exterior do
parque, resultando em prevalências iguais a 1,7
%, tanto para Capillaria sp., como também para
os ovos de ácaros.
Já na 2ª amostragem (Tabela 4), foram
identificados também casos positivos de
Capillaria sp. e ovos de ácaros, bem como ovos
de Heterakis sp., género helmíntico que não foi
identificado na 1ª colheita.
As prevalências de helmintes na 2ª
amostragem foram superiores às que se
verificaram na 1ª, levando a que globalmente a
prevalência de Capillaria sp. atingisse
aproximadamente 6 % e a dos ovos de
Heterakis spp. cerca de 2 % (Tabela 4).
Em termos de carga parasitária fecal (OoPG
e OPG), na 1ª amostragem não foram
encontrados ovos de helmintes na câmara de
McMaster. Já na 2ª amostragem, apenas se
encontrou um caso positivo de Capillaria sp. na
câmara de McMaster e o helminte Heterakis sp.
foi detectado na Coprocultura para obtenção de
oocistos esporulados. As cargas parasitárias
fecais calculadas para estes dois nematodes
gastrointestinais foram 400 OPG e <50 OPG,
respetivamente.
Para além da distribuição dos valores de
OoPG pelas três classes estipuladas,
encontram-se presentes os valores médios e
desvio padrão obtidos para a 1ª e 2ª
amostragem, bem como para a amostra total
(Tabelas 5 e 6).
Verifica-se pela observação destas tabelas
um aumento do número de casos positivos para
classes de OoPGs mais elevadas e dos OoPGs
médios, da 1ª para a 2ª colheita.
Espécie Casos
Positivos
Prevalência Total
(N=60)
Casos Positivos Exterior
Prevalência Exterior (N=40)
Casos Positivos Interior
Prevalência Interior (N=20)
E. mitis 25 41,7% 20 50% 5 25,0%
E. acervulina
16 26,7% 16 40% 0 0,0%
E. tenella 15 25,0% 14 35,0% 1 5,0%
E. praecox 9 15,0% 9 22,5% 0 0,0%
E. necatrix 4 6,7% 2 5,0% 2 10,0%
E. maxima 2 3,3% 1 2,5% 1 5,0%
E. mivati 2 3,3% 1 2,5% 1 5,0%
E. brunetti 1 1,7% 1 2,5% 0 0,0%
Coccídeas* 54 90,0% 38 95,0% 16 80,0%
Tabela 2 – Prevalência de casos positivos encontrados para cada espécie de
Eimeria no total e por domínio, na 2ª amostragem (N=60).
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
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Tabela 3 – Prevalência de casos positivos encontrados para cada espécie de Eimeria no total e por
domínio, na amostragem total (N=120).
Espécie Casos
Positivos
Prevalência
Total
(N=120)
Casos
Positivos
Exterior
Prevalência
Exterior
(N=80)
Casos
Positivos
Interior
Prevalência
Interior
(N=40)
E. mitis 33 27,5% 26 32,5% 7 17,5%
E. tenella 19 15,8% 18 22,5% 1 2,5%
E. acervulina 16 13,3% 16 20,0% 0 0,0%
E. necatrix 10 8,3% 6 7,5% 4 10,0%
E. maxima 9 7,5% 6 7,5% 3 7,5%
E. praecox 9 7,5% 9 11,3% 0 0,0%
E. brunetti 4 3,3% 4 5,0% 0 0,0%
E. mivati 2 1,7% 1 1,3% 1 2,5%
Coccídeas* 78 65,0% 58 72,5% 20 50,0%
* Casos positivos de Coccídeas no Total, Exterior e Interior dos alojamentos, independentemente da espécie.
Tabela 4 – Prevalências de ovos de helmintes e pseudoparasitas identificados, no total e por domínio, na
2ª amostragem.
Espécie
2ª Amostragem
(+) Prevalência
Total (N=60)
(+)
Exterior
Prevalência
Exterior (N=40)
(+)
Interior
Prevalência
Interior (N=20)
Ácaros 9 15,0% 8 20,0% 1 5,0%
Capillaria sp. 6 10,0% 2 5,0% 4 20,0%
Heterakis sp. 2 3,33 % 0 0,0 % 2 10,0%
Espécie
Amostra Total
(+)
Prevalência
Total
(N=120)
(+)
Exterior
Prevalência
Exterior (N=80)
(+)
Interior
Prevalência
Interior (N=40)
Ácaros 10 8,3% 9 11,3% 1 2,5%
Capillaria sp. 7 5,8% 3 3,8% 4 10,0%
Heterakis sp. 2 1,7% 0 0,0% 2 5,0%
* (+) - Casos Positivos
A tabela 7 revela a evolução das espécies de
coccídeas que esporularam ao longo dos sete
dias de coprocultura, nas duas amostras. A 1ª
amostragem revelou que as espécies de Eimeria
spp. presentes esporularam a partir de 1,5 dias
de Coprocultura, embora a maioria tenha
esporulado só ao fim de 7 dias. Em
contrapartida, na 2ª colheita, todas as espécies
assinaladas do género Eimeria apresentaram
esporulação ao fim do 1º dia de cultura.
Relativamente às coproculturas para
nematodes, não foram encontradas larvas L3 de
estrongilídeos gastrointestinais (EGI) nas duas
amostras. Somente se visualizaram larvas e
adultos de nematodes de vida livre.
Discussão
O presente trabalho de cariz parasitológico
mostrou que os animais podem apresentar neste
sistema de produção avícola um parasitismo
gastrointestinal maioritariamente composto por
coccídeas do género Eimeria e nematodes como
os dos géneros Capillaria e Heterakis, em
particular no término da sua vida produtiva.
Na 1ª amostragem foram identificadas cinco
espécies de coccídeas (Eimeria tenella, E.
brunetti, E. mitis, E. maxima e E. necatrix),
sendo que a totalidade de casos positivos
identificados nesta amostra foi de 40 %. No
entanto, averiguou-se uma divergência
considerável a nível da prevalência de oocistos
no exterior do parque (50,0% e interior dos
alojamentos (20,0%). A espécie de coccídea
mais prevalente na 1ª amostra foi E. mitis (13,3
%) seguida por E. maxima (11,7 %).
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Tabela 5 – Frequências Absolutas e Relativas de Oocistos por Grama de Fezes na 1ª e 2ª amostragem no
total, exterior do parque e interior dos alojamentos.
Frequências Classes de OoPG
0-100 100-500 > 500
Frequência Absoluta Total
1ª 48 8 4
2ª 29 20 11
T 77 28 15
Frequência Relativa Total
1ª 80,0 % 13,3 % 6,7 %
2ª 48,3 % 33,3 % 18,33 %
T 64,2 % 23,3 % 12,5 %
Frequência Absoluta Exterior
1ª 28 8 4
2ª 15 14 11
T 43 22 15
Frequência Relativa Exterior
1ª 46,7 % 13,3 % 6,7 %
2ª 25,0 % 23,3 % 18,33 %
T 35,8 % 18,3 % 12,5 %
Frequência Absoluta Interior
1ª 20 0 0
2ª 14 6 0
T 34 6 0
Frequência Relativa Interior
1ª 33,3 % 0,0 % 0,0 %
2ª 23,3 % 10,0 % 0,0 %
T 28,3 % 5,0 % 0,0 % * 1ª – 1ª Amostragem; 2ª – 2ª Amostragem; T – Total.
Tabela 6 – Valor Médio e Desvio Padrão de OoPG no total, exterior do parque e interior dos
alojamentos, na 1ª e 2ª amostragem, bem como na amostra total.
Tabela 7 – Evolução das espécies que esporularam ao longo dos 7 dias de ensaio, utilizando elementos
fecais da 1ª e 2ª amostragem.
Domínio 1ª Amostragem 2ª Amostragem Total
Geral 370,83 ± 2055,29 599,167 ± 1289,215 489,06 ± 1718,80
Exterior 556,25 ± 2506,867 855 ± 1519,27 705,63 ± 2065,07
Interior 0 87,5 ± 99,835 46,05 ± 84,13
Espécie Dias após o início do ensaio – 1ª Amostragem Dias após o início do ensaio – 2ª Amostragem
1 1,5 2 5 6 7 1 1,5 2 5 6 7
E. tenella - - - X - X X X - - X -
E. brunetti - - - - - - X X - - - -
E. acervulina - - - - - X X - X - - -
E. mitis - - - - - X X X X - - -
E. maxima - X - - - - - - - - - -
E. necatrix - - - - - X X X - - - -
E. praecox - - - - - X X X - - - X
E. mivati - - - - - - - - - - - -
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
25
Especial destaque para E. necatrix que, tal
como E. tenella, é extremamente patogénica e
responsável por causar hemorragias intestinais
e, por conseguinte, uma prevalência de 6,7 %
não deverá ser subvalorizada (Moyle et al.,
2014).
Conway & McKenzie (2007) constataram
que determinadas espécies de Eimeria apenas
eram identificadas em animais mais adultos, tais
como E. necatrix e E. brunetti. Por conseguinte,
uma vez que os frangos já se encontram em fase
de engorda e com cerca de 75 dias de idade, os
resultados obtidos encontram-se em
conformidade com os obtidos por estes autores.
Verificou-se também que a prevalência no
exterior superou a do interior dos alojamentos,
sendo que nestes últimos apenas se
identificaram E. mitis e E. maxima.
Poucos foram os ovos de helmintes, tais
como Capillaria sp. e Heterakis sp., e de ácaros,
identificados nestas amostras, sendo que a
prevalência de ambos totalizou 1,7 %. Apesar
de apenas ter sido encontrado um caso positivo
de Capillaria sp. na 1ª amostragem, constata-se
que o mesmo apareceu no exterior do parque. O
facto de os animais passarem a maior parte do
tempo no exterior, e portanto, contactando com
anelídeos, hospedeiros intermediários de
Capillaria sp., apoia o resultado obtido para este
helminte na 1ª amostragem. Radfar et al. (2012)
concluíram no seu trabalho em frangos
produzidos ao ar livre Irão, que elevadas
prevalências de determinados parasitas em
Frangos do Campo, tais como céstodes do
género Raillietina, poderão ter como principal
causa a elevada dispersão dos seus hospedeiros
intermediários, mais acessíveis para a sua
respetiva ingestão pelas aves.
Ashenafi & Eshetu (2004) identificaram
uma prevalência de ovos de Capillaria spp.
igual a 1,58 %, no seu trabalho efetuado com
frangos de diversas idades e também produzidos
ao ar livre, em explorações na Etiópia,
constatando-se que este valor não diferiu muito
do obtido neste trabalho para a 1ª amostragem.
Em termos de carga parasitária fecal,
verificou-se que 80% dos valores da 1ª amostra
se inseriam na classe “0-100 OoPG”. No
entanto, é necessário realçar que dos 48
elementos pertencentes a esta classe, 42 eram
nulos. Os restantes 20 % correspondiam a
elementos fecais com mais de 100 OoPG.
Destaca-se os quase 7% com mais de 500
OoPG, com um elemento a apresentar 15900
OoPG.
Ainda analisando este parâmetro, verifica-se
que os maiores valores foram identificados no
exterior do parque, comparativamente com o
que se verificou nos alojamentos. Assim como
Baptista (2010) referiu no seu trabalho com
Frangos do Campo, ou seja, que os animais
contactam com espaços exteriores em grande
parte do ciclo produtivo e por conseguinte com
maior exposição a um grande número parasitas,
no presente trabalho verificou-se também que
foi precisamente no exterior do parque que se
obtiveram os maiores valores de OoPG. De
realçar que as formas parasitárias do género
Eimeria possuem um ciclo de vida monóxeno
ou direto, não necessitando de um hospedeiro
intermediário para completarem o seu ciclo de
vida, perpetuando-se rapidamente pelo bando.
O valor de OoPG médio total da 1ª amostra
foi de 370,83 ± 2055,29 OoPG, sendo que
apenas o exterior (556,25 ± 2506,867 OoPG) foi
alvo de avaliação neste parâmetro, devido ao
facto de a técnica de McMaster ter dado
resultados negativos no interior dos
alojamentos.
O elevado desvio padrão obtido tanto para o
total como também para o exterior, poderá ter
sido influenciado pela elevada frequência de
elementos fecais com valor nulo de OoPG.
Ao nível da coprocultura para oocistos,
verificou-se que apenas nas 36 horas após o
início do ensaio é que começaram a surgir casos
positivos de coccídeas esporuladas (E. maxima).
De notar que se confirma o valor mínimo de 30
horas para a esporulação desta espécie referido
por Kaufmann (1996). Segundo o referido autor,
o período mínimo de esporulação das restantes
espécies isoladas na 1ª amostra varia entre 12 e
18 horas. No entanto, E. maxima, com um
período mínimo de esporulação superior às
restantes coccídeas isoladas, esporulou
primeiro.
Na 2ª amostragem, o panorama parasitário
sofreu grandes modificações, registando-se
diferenças tanto ao nível dos parasitas
identificados como também das suas
prevalências. A espécie E. mitis continuou a ser
a mais prevalente (41,7%), sendo que a sua
frequência sofreu um aumento de mais de 200
% relativamente à 1ª amostragem. Já a espécie
E. maxima passou a ser uma das menos
prevalentes (3,3%).
Destaque para outras espécies que apenas
foram identificadas na 2ª amostra, sendo as
prevalências de duas delas extremamente
interessantes e de relevar, nomeadamente E.
acervulina (26,7%) e E. praecox (15,0%). Este
facto corrobora os resultados obtidos por
Baptista (2010), na medida em que também na
sua investigação determinadas espécies
parasitárias apenas surgiram em animais com
uma idade mais avançada.
Ao nível da prevalência total de coccídeas,
este parâmetro atingiu 90 % na 2ª amostragem.
Kaboudi et al. (1016) identificaram no seu
trabalho com frangos do campo uma maior
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
26
prevalência de coccídeas em frangos mais
jovens (idade < 10 semanas), comparativamente
com o que se verificou em frangos mais adultos
(idade > 10 semanas). A sua principal
explicação assentou na aquisição de imunidade
para coccídeas ao longo do ciclo produtivo. No
entanto, o presente trabalho foi efetuado em
frangos na mesma faixa etária (≈ 3 meses),
sendo que as duas amostragens foram realizadas
com um espaçamento de 10 dias. Neste caso, o
aumento da prevalência de coccídeas para 90%
poderá ser explicado sobretudo pelas condições
climatéricas que se verificaram entre as duas
amostragens (temperaturas amenas e elevados
índices de precipitação), bem como pelo tempo
de exposição dos animais às coccídeas.
Também se constatou que a prevalência de
coccídeas continuou a ser superior no exterior
do parque, apesar de se registar um aumento
percentual de coccídeas no interior dos
alojamentos, nomeadamente E. mitis e E.
necatrix, da 1ª para a 2ª amostragem.
Analisando os ovos de helmintes e ácaros
identificados na 2ª amostragem, também se
constatam grandes diferenças em relação ao
verificado na 1ª colheita.
Foi identificada uma prevalência de ovos de
Capillaria sp. e ácaros igual a 10,0% e 15,0 %,
respetivamente. No entanto, detetaram-se ovos
de Heterakis sp. com uma prevalência reduzida,
mas não negligenciável, de 3,33 % (dois casos
positivos no interior dos alojamentos), helminte
não identificado em animais 10 dias mais
jovens.
Em termos de carga parasitária fecal, 18%
dos elementos inseriram-se na classe “>500
OoPG”, revelando uma vez mais que o tempo
de exposição, a densidade de elementos
parasitários no parque de engorda e a idade dos
animais, poderão ser fatores explicativos da
maior prevalência e carga parasitária dos
parasitas identificados.
Na 2ª amostragem, a média de OoPG
calculada tanto para o total como para o exterior
do parque foram superiores às que se
verificaram na 1ª colheita (599,167 ± 1289,215
OoPG e 855 ± 1519,27 OoPG, respetivamente)
e, contrariamente ao obtido nesta, o valor médio
de OoPG no interior dos alojamentos não foi
nulo, atingindo 87,5 ± 99,835 OoPG.
Esta diferença poderá ser explicada não só
devido à maior densidade parasitária no parque
e idade dos animais, como também fruto da
elevada precipitação ocorrida entre as duas
amostragens, a qual levou a que os frangos
estivessem alojados mais tempo. Tal como
mostra o Gráfico 1, verificaram-se nos dias 10 e
11 do mês de Maio, os maiores índices de
precipitação.
Para além destes dois fatores, o decorrer do
tempo de permanência dos hospedeiros
infetados no mesmo ecossistema e uma
densidade animal elevada, terão contribuído
para a contaminação ambiental e, por
conseguinte, para uma maior infeção dos
hospedeiros suscetíveis. Segundo Baba et al.
(1982) e Singla et al. (2007), a densidade animal
constitui um fator chave para o aumento do
número de casos de coccidiose num bando.
O crescimento da pastagem também poderá
ter contribuído para este aumento na prevalência
de coccídeas e helmintes, sendo que na 2ª
amostragem a altura do coberto vegetal era
superior, fruto não só da precipitação ocorrida
entre as duas amostragens, como também das
temperaturas amenas registadas. Ao
alimentarem-se da pastagem, os animais
provavelmente acabaram por ingerir oocistos de
coccídeas e hospedeiros intermediários de
helmintes, tornando-se assim mais uma fonte de
infeção parasitária no exterior. Num estudo
efetuado por Percy et al. (2012) em Frangos do
Campo no Zimbabué, os autores concluíram que
os parasitas e respetivas prevalências associadas
variavam consoante a estação do ano, sendo que
no Verão, fruto do aumento no número de
hospedeiros intermediários e sua ingestão por
parte dos animais, as prevalências de
determinadas formas parasitárias foram
superiores.
O período pré-patente dos parasitas (período
que decorre desde a infeção dos hospedeiros até
estes começarem a emitir os seus ovos nas
fezes) é variável. O de Heterakis sp. ronda os
24-30 dias e o de Capillaria sp. totaliza 3
semanas (Permin et al., 1998). Este facto poderá
explicar também o incremento verificado na
prevalência de helmintes em animais com cerca
de 3 meses de idade.
Na coprocultura de oocistos da 2ª colheita,
verificou-se a esporulação de E. tenella, E.
brunetti, E. acervulina, E. mitis, E. necatrix e E.
praecox, sendo que não foi identificado
qualquer oocisto esporulado de E. maxima, bem
como foram necessárias apenas 24 horas de
incubação para que todas as espécies referidas
esporulassem.
Possivelmente a precipitação conjugada com
temperaturas amenas poderão ter estimulado o
desenvolvimento precoce dos oocistos, bastando
apenas 24 horas para induzir a esporulação.
Segundo Fanatico (2006), condições
meteorológicas medianas, em termos de
temperatura e humidade relativa, poderão
favorecer a esporulação dos oocistos no terreno,
pelo que no decorrer da coprocultura de oocistos
na 2ª amostragem, era expectável que fosse
preciso menos tempo de ensaio para se isolarem
as primeiras espécies esporuladas.
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
27
Em ambas as amostragens não foram
encontradas larvas L3 de estrongilídeos, sendo
que somente se identificaram larvas e adultos de
nematodes de vida livre. No seu trabalho com
Frango Campestre, Baptista (2010) também não
encontrou quaisquer formas larvares L3 no
grupo de frangos com idade compreendida entre
76 e 91 dias (idade de abate).
Globalmente, a espécie mais prevalente foi
E. mitis (27,5%), seguida por E. tenella (15,8%)
e E. acervulina (13,3%). Estes resultados
corroboram os obtidos por Baptista (2010), o
qual no seu trabalho também realizado com
Frangos do Campo, concluiu que E. mitis era a
espécie mais prevalente.
A prevalência total de coccídeas no exterior
e interior dos alojamentos foi de 72,5% e
50,0%, respetivamente, sendo que estes
resultados estão em conformidade com o facto
de os frangos contactarem com o exterior em
mais de metade do seu tempo de vida,
alimentarem-se de uma pastagem que entre as
duas amostragens cresceu de forma
considerável, devido à precipitação e a
temperaturas amenas. Além disso, a não
desparasitação dos frangos e um regime
alimentar desprovido de antimicrobianos,
também proporcionaram os resultados
parasitológicos obtidos.
Por último, a prevalência global de
Capillaria sp. e Heterakis sp. foi de 5,8% e
1,7%, respetivamente, resultados estes que
foram fortemente influenciados pelos fatores já
mencionados previamente à 2ª colheita, os quais
culminaram num aumento do número de
hospedeiros intermediários e consequentemente
na infeção dos frangos. Como já foi referido
anteriormente, estes resultados corroboram a
constatação que Percy et al. (2012) efetuaram,
na medida em que as condições climatéricas
constituem um fator chave na dispersão das
espécies parasitárias no bando.
O sistema de produção de Frangos do
Campo estudado pelos autores demonstrou um
parasitismo dominado pelas coccídeas do
género Eimeria e por alguns nematodes
gastrointestinais. Este panorama tende a
agravar-se no final da vida produtiva destes
animais, com aumento das prevalências e cargas
parasitárias dos agentes referidos, estando
associado em grande medida às características
extensivas deste tipo de exploração aviária.
A não-desparasitação dos frangos, poderá ter
sérias consequências zootécnicas num futuro
próximo, na medida em que os animais poderão
começar a não atingir as performances
expectáveis, traduzindo-se num agravamento do
índice de conversão global e, por conseguinte,
em perdas económicas para a exploração.
Verificou-se que foram precisos apenas 10
dias entre as duas amostragens para que
houvesse uma mudança substancial no
panorama parasitário gastrointestinal. A idade
dos animais e sua densidade, bem como as
condições climatéricas, reuniram as condições
ideais para que os frangos se infetassem com
helmintes e coccídeas.
Destaca-se também o aumento da
prevalência de coccídeas que se verificou no
interior dos alojamentos entre as duas
amostragens, alertando para a necessidade de se
executarem vazios sanitários mais frequentes e
eficazes.
Em relação à pastagem espontânea, até que
ponto é que compensa mantê-la e obter um
produto final diferenciado, mas em simultâneo
surgirem agravamentos na performance dos
frangos e, por conseguinte, aumentando as
perdas económicas?
Neste caso concreto, a manutenção da
pastagem apenas será viável se forem tomadas
medidas profiláticas como a monitorização
regular do parasitismo nos frangos por
intermédio da colheita e exame de amostras
fecais, a fim de se analisarem as respetivas
cargas parasitárias, pois com base nos resultados
obtidos, o produtor deverá decidir se os limiares
de patogenicidade foram ultrapassados e, em
caso afirmativo, recorrer aos serviços médico-
veterinários.
Futuros estudos são necessários neste
sistema de produção, como forma de se obterem
mais dados de carácter epidemiológico destas e
doutras parasitoses em Frangos do Campo,
alertando os produtores para esta temática e
visando o alcance de melhores eficiências
produtivas.
Agradecimentos: Em primeiro lugar,
gostaríamos de agradecer à Faculdade de
Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa
e ao seu Presidente, Professor Doutor Luís
Manuel Morgado Tavares, pelo facto de ter
permitido a execução deste trabalho no
Laboratório de Parasitologia e Doenças
Parasitárias e ao Centro de Investigação
Interdisciplinar em Sanidade Animal (CIISA)
por ter financiado esta componente laboratorial
através da Fundação para a Ciência e
Tecnologia (FCT) e do Projecto
UID/CVT/00276/2013 (CIISA, FMV,
Universidade de Lisboa).
Um agradecimento ao Dr. António Miguel
Palomero, da Faculdade de Veterinária de Lugo
(Universidade de Santiago de Compostela), pela
leitura, apreciação crítica e conselhos para a
melhoria do manuscrito.
Um obrigado especial também à exploração
agropecuária e seus técnicos que colaboraram
Lozano et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 18-28
28
connosco, os quais se demonstraram
prontamente disponíveis para nos receber e
cooperar com a realização das amostragens.
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34
Influence of origin and genetic background on veal quality
Influência da origem e genética na qualidade da carne de vitela
I.C. Antunes1,2, M.A.G. Quaresma*1, J.N. Matos Costa3, J.B. Fraga3, L.S. Correia3, S.P. Alves1, J.P.C. Lemos1, R.J.B. Bessa1, A.C.G. Monteiro2
1Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal (CIISA), Faculdade de
Medicina Veterinária, Universidade de Lisboa, Pólo Universitário Alto da Ajuda, 1300-
477 Lisboa, Portugal 2LEAF, Instituto Superior de Agronomia, Universidade de Lisboa, Tapada da Ajuda,
1349-017 Lisboa, Portugal 3Grupo Jerónimo Martins, Lisboa, Portugal
Summary: The study aimed to compare the
regular veal commercialized in Portugal from
different origins. Meat samples from crossbred
beef (CB) calves from Portuguese production
(PCB) and holstein-friesian (HF) calves from
Dutch (DHF), Spanish (SHF) and Portuguese
(PHF) production were used for comparison.
Veal from SHF and PHF were associated with
high pH (6.2 and 5.9, respectively) being
classified as DFD. Veal from HF calves of all
origins displayed higher contents of total fatty
acids, total saturated and total monounsaturated
fatty acids (SFA and MUFA, respectively) and
lower content of total polyunsaturated fatty
acids (PUFA) and total PUFA from the n-3
family (n-3PUFA) than veal from PCB.
Differences between HF and PCB extend to the
percentages of C18:0, C18:1trans-11, C18:2cis-
9,trans-11, C18:3n-3, C20:5n-3, C22:5n-3,
C22:6n-3, which were higher in PCB than HF.
It is also noteworthy that HF veal, no matter the
origin, presented a larger amount of C18:1trans-
10 than C18:1trans-11 and very low C18:2cis-
9,trans-11 which is indicative of deviation of
biohydrogenation pathways (i.e. trans-10 shift).
Regarding lipid quality indices, PCB revealed
healthier indices than HF calves. All veal
groups displayed a α-tocopherol content below
the minimum value required to retard lipid
oxidation. The study results revealed that veal
obtained from different origins enclosed an
intrinsic and undesirable variability with
potential consequences to retailers profit and
negative health concerns to consumers
Resumo: O estudo teve por objectivo comparar
a carne de vitela comercializada em Portugal
proveniente de diferentes origens. A
comparação foi realizada com amostras de carne
de vitela de cruzados de carne da produção
nacional (PCB) e Holstein-Frísia (HF)
proveniente da produção nacional (PHF), da
produção espanhola (SHF) e da produção
holandesa (DHF).
A carne de vitela SHF e PHF apresentou um pH
elevado (6,2 e 5,9, respectivamente), sendo por
essa razão classificada como carne DFD. A
carne de vitela HF, independentemente da
origem, apresentou um teor superior de ácidos
gordos saturados e monoinsaturados (SFA e
MUFA, respectivamente) e um teor inferior de
ácidos gordos polinsaturados (PUFA) e de
PUFA da família n-3 (n-3PUFA)
comparativamente à carne de vitela PCB. As
diferenças entre HF e PCB estendem-se às
percentagens de C18:0, C18:1trans-11,
C18:2cis-9,trans-11, C18:3n-3, C20:5n-3,
C22:5n-3 e C22:6n-3, que foram superiores na
carne de vitela PCB. É de salientar que a carne
de vitela HF, independentemente da origem,
apresentou uma quantidade superior de
C18:1trans-10 do que C18:1trans-11 e de
C18:2cis-9,trans-11, o que é indicativo do
desvio das vias de bio-hidrogenação (isto é,
mudança trans-10). Relativamente aos índices
de qualidade lipídica, a carne de vitela PCB
revelou índices mais saudáveis
comparativamente à carne de vitela HF. Todos
os grupos apresentaram um conteúdo em α-
tocoferol abaixo do valor mínimo necessário
para retardar a oxidação lipídica. Os resultados
do estudo revelaram que a carne de vitela
proveniente de diferentes origens apresenta uma
variabilidade intrínseca e indesejável com
potenciais consequências para o lucro dos
retalhistas e preocupações com a saúde dos
consumidores.
*Correspondência: mquaresma@fmv.ulisboa.pt
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
35
Introduction
Portuguese production of beef is quite below
the country needs, with the self-sufficiency rate
estimated in 58%, which means that more than
40% of the overall beef sold in Portugal has to
be acquired from other regions, representing
around 68.3 thousand tons/year (G. P. P., 2015).
Among Portuguese consumers, price is the
prime decision factor influencing beef
acquisition (Monteiro, 2012). Therefore,
competitiveness of beef retail relies on the
purchase of bovine carcasses at low price,
which is essential to assure a constant delivery
of beef to the domestic market. Spain and
Netherlands are two of the major suppliers of
beef to Portugal, accounting for 65.8% and
15.3% of total beef acquisition, respectively (G.
P. P., 2015). Bovine carcass value in the market
is influenced by the conjugation of different
factors as age, breed and the production system.
Breed strongly influences beef cut category
yields, and differences between beef and dairy
breeds are well recognised, for this reason,
carcasses from holstein-friesian (HF) animals
are less valorised than those of beef breeds,
since it presents significantly lower yields of
prime beef cuts, due to higher bone and lower
muscle proportions (Knapp et al., 1989;
Agabriel, 2010). On the other hand, age has a
strong influence on meat sensory attributes, as
colour and tenderness, characteristics that are
much appreciated by consumers (Troy and
Kerry, 2010).
The quality of meat marketed in Portugal is
poorly studied and the purchasing decisions are
mainly based on price, deviating meat quality to
a second plan, which is undesirable. Such
situation contrasts with consumers demand for
quality. Therefore, and despite a regular
delivery of beef, it is associated with great
variability which confuses consumers and
creates distrust in the purchase act.
This research was planned to compare veal
quality attributes from the four major sources in
the Portuguese market. The comparison
encloses physicochemical parameters with
highest impact on consumers purchasing
choices (colour and tenderness) and the
nutritional quality of intramuscular fat, a prime
issue on consumer’s health.
Material and methods
Animals and samples
Veal used in this study represented the
regular veal commercialized in Portugal by one
of the prime supermarket chains. Meat samples
(n=10 from each variety) were obtained from
carcasses of HF bull calves (age 10-12 months
old) randomly selected among Dutch (DHF),
Spanish (SHF) and Portuguese (PHF)
production and also from crossbreed beef (CB)
bull calves from national production (PCB)
under the same age range.
Sampling was performed throughout a 10
week period (between March and May 2016),
randomly selecting one carcass from each group
in comparison. Two meat samples with different
thickness from each carcass were collected from
longissimus lumborum muscle at the L1-L3
level. The sample with 3 cm thick were used for
physicochemical analysis (colour assessment
and Warner Bratzler shear force (WBSF)
measurements), while the 1 cm thick samples
were used for pH evaluation and assessment of
intramuscular lipid composition (total fatty acid
content, fatty acid profile, total cholesterol,
vitamin E homologues and β-carotene).
Meat samples were trimmed from the major
connective and adipose tissues surrounding
muscle tissue. The thicker sample was vacuum
packaged, frozen and stored at -20 ºC until
analysis, while the thinner one was blended on a
food processor (Moulinex, France), and
afterwards divided in two portions: one was
weighted, frozen and stored at -20°C in a 50 ml
container (Greiner, Germany), while the other
was vacuum packaged, frozen and stored at -80
ºC.
Colour, pH and shear force measurements
The colour measurements were carried out
with a Minolta CR 300 colorimeter (Konica
Minolta Holdings Inc., Tokyo, Japan) with a C
iluminant and a 2º standard observer in the
CIELAB space, after 1 hour of blooming to
allow oxygenation. In each sample, colour
measurements were performed in triplicate,
recording lightness (L*), redness (a*) and
yellowness (b*). The Chroma (C*) was
calculated as √("(a*2+b*2)" ), and the hue angle
(hº) as tan-1 (b*/a*). The pH of each sample
was measured in triplicate with a HI 99163
portable pH-meter (Hanna Instruments, USA)
coupled with a perforating blade. For the WBSF
determination, the samples were thawed at 0–4
°C for 24 h and were grilled using the same
equipment and procedures previously used
(Monteiro et al., 2013). The veal sample
resistance to shearing was recorded in a force-
deformation plot. The maximum shear force in
kg corresponded to the highest peak of the
curve.
Analytical methods
The frozen samples stored in the 50 ml
containers were lyophilized (−60 °C and 2.0 h
Pa) until constant weight using a lyophilisator
Edwards Modulyo (Edwards High Vacuum
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
36
International, West Sussex, UK). Lyophilized
samples were then grounded and homogenized
using a home-style coffee grinder and
maintained desiccated at room temperature.
The fatty acid methyl esters were
prepared from freeze-dried samples with 14%
boric trifluoride in methanol (Rule, 1997) and
further analyzed by gas-liquid chromatography
using a Shimadzu GC2010-plus (Shimadzu,
Kyoto, Japan) with flame ionization detection
and a fused-silica capillary column (BPX70, 60
m × 0.25 mm × 0.25 μm, SGE Europe Ltd, UK).
Helium was used as carrier gas at a flow rate of
1 ml/min. The oven temperature was
programmed to begin at 50ºC (kept for 1 min),
raised to 150 °C at 5 Cº/min (kept for 1 min),
raised at 1° C/min to 200 ºC (kept for 2 min),
and finally raised at 3 °C/min to 220 °C. The
injector and detector were maintained at 250 °C.
The simultaneous determination of
total cholesterol, tocopherols and tocotrienols
was performed as previously described (Prates
et al., 2006). The contents of total cholesterol,
tocopherols and tocotrienols were estimated in
duplicate for each sample based on the external
standard technique from the standard curve of
peak area versus compound concentration.
Lipid quality indices
The lipid quality indices and FA ratios were
calculated as follows:
- Peroxidability index (PI) = (% monoenoic
× 0.025) + (% dienoic × 1) + (% trienoic × 2) +
(% tetraenoic × 4) + (% pentaenoic × 6) + (%
hexaenoic × 8) (Arakawa and Sagai, 1986);
- Atherogenicity index (AI) =
(C12:0+4×C14:0+C16:0) / [(∑MUFA+∑(n−6)
+∑(n−3)] (Ulbricht and Southgate, 1991);
-Thrombogenicity index (TI) =
(C14:0+C16:0+C18:0)/[(0.5×∑MUFA)
+0.5×(n−6)+3×(n−3)+(n−3)/(n−6)] (Ulbricht
and Southgate, 1991);
- Hypocholesterolemic/hypercholesterolemic
ratio (h/H) = [(C18:1n−9 + C18:2n-6 + C18:3n-
3 + C20:4n−6 + C20:5n-3 + C22:5n−3 +
C22:6n-3) / (C14:0 + C16:0)] (Santos-Silva et
al., 2002b);
- Polyunsaturated/saturated fatty acid (P/S) =
[(18:2 n-6+18:3 n-3)/(14:0+16:0+18:0)] (British
Department of Health, 1994);
- (n-6/n-3) = [(∑n-6)/( ∑n-3)].
Statistical analysis
The variables in study were subjected to
analysis of variance (ANOVA), considering the
type of veal as a single effect, using the GLM
procedure of Statistical Analysis Systems
Institute (SAS Institute Inc., 2013). Whenever a
significant difference was detected in ANOVA,
least squares means were compared for alpha =
0.05, using the LSD test adjusted by Tukey
method.
Results
Beef colour, pH and Warner Bratzler shear
force
Data on veal ultimate pH, colour parameters
(lightness (L*), redness (a*), yellowness (b*),
hue angle (hº), chroma (C*)) and WBSF are
presented in Table 1. Meat pH showed some
significant differences between groups
(P<0.001). Among veal from HF calves, the
SHF veal displayed the highest pH value (6.2),
while DHF veal displayed the lowest value (5.5)
diverging significantly in between, while the
PHF calves presented a halfway value for veal
pH (5.9), not differing significantly from other
meats obtained from HF calves (P>0.05). Veal
from PCB calves displayed the lowest pH
values (5.4), not differing significantly from the
pH values observed on veal from DHF and PHF
calves. Meat displaying a pH value >6.0 is
classified as dark, firm and dry (DFD) (Mach et
al., 2008). Thus meat from SHF calves should
be classified as DFD, while meat from PHF
calves is near the threshold of DFD meat.
DFD meat is consequence of glycogen
depletion in muscle during the pre-slaughter
period. The absence of sufficient amounts of
glycogen at muscle level after slaughter does
not allow the formation of proper lactic acid
content and the subsequent pH decline.
Therefore, the ultimate conditions for
conversion of muscle into meat are not gathered
(Purchas et al., 1999). Meat with pH values
higher than 6.0 is undesirable because of its
dark colour, high variation in tenderness,
increased water holding capacity, poor
palatability and low microbiologic stability
(Muchenje et al., 2009). DFD meat is also a
problem for industry, since high ultimate pH
allows rapid bacteria proliferation (Lawrie,
1985) and the development of precocious
spoilage odours, which become evident at low
bacterial cell densities (Gill and Newton, 1979).
Regarding veal colour measurements, SHF
veal displayed the lowest L* value, being
significantly lower than all other groups, which
revealed no significant differences in between
(P>0.05). DHF veal presented the highest a*
value, which represents a redder meat, and no
significant differences were observed between
the SHF and PHF veal types. DHF veal
displayed a significantly higher b* value than
SHF veal (P<0.05), while the PHF veal
displayed an intermediate value, not differing
significantly from other veal types (P>0.05).
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
37
Table 1 - Beef colour parameters (lightness (L*), redness (a*), yellowness (b*), hue angle (hº), chroma
(C*)), Warner Bratzler shear force (WBSF) and pH of longissimus lumborum muscle from veal with
different origins or genetic background
Veal Statistics
Type Holstein-Friesian Crossbred beef SEM P
Origin Spain Netherlands Portugal Portugal
pH 6.18a 5.51b 5.87a,b 5.42b 0.1124 <0.0001
L* 30.87b 35.20a 36.11a 37.59a 1.0025 0.0003
a* 15.52b 18.03a 14.34b 14.20b 0.5742 <0.0001
b* 1.42b 3.66a 3.00a,b 3.08a,b 0.5629 0.0481
hº 3.51 5.73 5.49 4.90 7.0543 0.3486
C* 15.79b 18.44a 14.75b 14.55b 0.5741 <0.0001
WBSF (kg) 4.87 6.78 5.54 7.75 0.837 0.0825
Different superscripts in the same row are associated with significant differences (P<0.05)
The highest redness and yellowness from
DHF veal resulted in the highest C*, which is a
reflex of these two colour coordinates and
depends on ultimate meat pH (Renerre, 2000).
No significant differences were observed in h⁰
value between veal groups, which means that
the wavelength of reflected light is similar
(Sahin and Summu, 2006).
With the exception of SHF veal, the L*
values (35.2-37.6) are in the range of values
previously found on autochthonous bovine
breeds (35.0-39.0) (Simões, 2006). On the other
hand, the values observed in this study for a*
(14.2-18.00) and b* (1.40-3.66) are on the edge
of values previously observed on autochthonous
bovine breeds for a* (15.9-18.2) and b* (1.9-
3.1) (Simões, 2006).
The lower L* values observed on SHF veal
represent a darker colour, which is consistent
with their higher pH value. On the other hand,
veal from PCB calves showed the lowest pH
value and the highest L* value. Besides pH,
meat colour is determined by the amount and
chemical state of heme pigments, mainly
myoglobin, responsible for 95% of total meat
iron after slaughter (Damodaran et al., 2008).
Abril et al. (2001) showed that DFD meat
(pH ≥ 6.1) had a significant influence on all
colour parameters, and that DFD meat was
associated with reduced L*, a*, b*, C* and hº,
which is in partial agreement with our results,
since veal from SHF was associated with lower
L*, a* and b*. On the other hand, DHF veal
displayed higher values of a*, which may be
dependent of pigment (myoglobin) content and
its redox state (Mancini and Hunt, 2005).
No statistical significant differences were
observed in WBSF between groups (p=0.08).
Although, SHF veal tended to be the less hard
(P=0.08) which can result from the highest pH
presented by this beef type, since DFD beef is
recognized as being tender, due to the highest
muscle enzyme activity post-mortem. The high
pH and the low WBSF values obtain in meat
from PHF and SHF calves seem to be in
accordance with the aforementioned. The high
WBSF observed on PCB has been previously
identified in another study (Monteiro, 2012) and
is probably a consequence of the crossbreeding
between native and exotic bovine breeds and the
Portuguese native bovine were not selected for
meat production.
Total fatty acid and total cholesterol
contents, fatty acid partial sums and lipid
quality indices
The total fatty acid and total cholesterol
contents of meat, as well as fatty acid partial
sums, fatty acid ratios and lipid quality indices
are presented in Table 2, while the detailed fatty
acid profile is presented in Table 3.
Veal from HF calves presented higher total
fatty acid contents, independently of their
origin, than veal from PCB calves (P<0.05).
Among HF calves, DHF and SHF veal
displayed the highest and lowest total fatty acid
content, differing significantly in between,
while the PHF veal presented a halfway content,
not differing significantly from the other
origins. The high intramuscular total fatty acid
content found in HF veal compared with those
from PCB cattle might be due to the feeding
management, as HF calves are weaned much
earlier (6 weeks versus 6 months) and thus are
fed high density diets for a longer period than
calves of PCB cattle. Moreover, HF animals,
start to deposit fat earlier than continental beef
breeds which means that at same age they
would have different carcass composition
(Agabriel, 2010).
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
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Table 2 - Total cholesterol content (mg/100 g of muscle), total fatty acid content (g/100 g of muscle),
partial sums of fatty acids (% w/w) and nutritional indices of longissimus lumborum muscle from veal
with origins or different genetic background
Veal Statistics
Type Holstein-Friesian Crossbred beef SEM P
Origin Spain Netherlands Portugal Portugal
Total cholesterol 44.55 45.06 46.85 42.78 7.694 0.379
Total fatty acids 6.37b 8.52a 7.13a,b 4.29c 0.554 <0.0001
Partial sums
SFA 40.60a 40.14a 37.95a 33.68b 0.693 <0.0001
SFA linear 40.35a 39.70a,b 37.52b 33.02c 0.694 <0.0001
SFA branched 0.25c 0.44b 0.43b 0.67a 0.024 <0.0001
DMA 5.88b,c 4.79c 6.79b 9.09a 0.396 <0.0001
MUFA 33.83b 40.67a 30.87b 25.72c 1.275 <0.0001
MUFA trans 4.69a 2.64b 3.46a,b 2.52b 0.337 0.0003
MUFA cis 29.14b 38.02a 27.41b,c 23.19c 1.171 <0.0001
PUFA 19.30b,c 13.82c 23.75b 30.47a 1.441 <0.0001
n-3PUFA 0.81b 1.32b 1.20b 8.36a 0.272 <0.0001
n-6PUFA 18.34a 12.40b 22.37a 22.01a 1.289 <0.0001
n-3LCPUFA 0.55b 0.90b 0.86b 5.66a 0.152 <0.0001
n-6LCPUFA 4.71b 4.14b 6.87a 7.15a 0.406 <0.0001
Others 0.38c 0.57b 0.64b 1.03a 0.037 <0.0001
Nutritional Indices
P/S 0.35b,c 0.22c 0.44a,b 0.55a 0.038 <0.0001
n6/n3 22.77a 9.60c 18.77b 2.70d 0.501 <0.0001
AI 0.58a 0.54a 0.47b 0.39c 0.019 <0.0001
TI 1.39a 1.28a,b 1.23b 0.66c 0.039 <0.0001
h/H 1.64c 1.82b,c 2.11b 2.47a 0.088 <0.0001
Different superscripts in the same row are associated with significant differences (P<0.05)
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
39
Table 3 - Intramuscular fatty acid profile (g/100 g of total FA) of longissimus lumborum muscle from
veal with different origins or genetic background
Veal Statistics
Type Holstein-Friesian Crossbred beef SEM P
Origin Spain Netherlands Portugal Portugal
C14:0 1.87a 1.83a 1.41a,b 1.06b 0.134 0.0003
C14:1c9 0.31a,b 0.34a 0.20b,c 0.16c 0.031 0.0004
C15:0 0.33a 0.34a 0.26b 0.32a 0.017 0.0073
C16:0 23.04a 22.06a 19.71b 17.93c 0.443 <0.0001
C16:1c9 2.24a 2.48a 1.61b 1.19b 0.130 <0.0001
a-C17:0 0.13c 0.23b 0.23b 0.32a 0.014 <0.0001
C17:1c9 0.49b 0.81a 0.47b 0.43b 0.050 <0.0001
C18:0 14.90a 15.28a 15.94a 13.45b 0.396 0.0008
C18:1t10 3.39a 1.37b,c 2.26a,b 0.97c 0.336 <0.0001
C18:1t11 0.35b 0.52b 0.55b 1.08a 0.102 0.0001
C18:1t12 0.30a 0.21b 0.17b 0.17b 0.013 <0.0001
C18:1c9 23.05b 31.05a 22.09b,c 18.20c 0.020 <0.0001
C18:1c11 2.24 2.26 2.21 2.38 0.067 0.339
C18:1c12 0.21 0.21 0.24 0.22 0.027 0.746
C18:1c13 0.19a,b 0.25a 0.15b,c 0.12c 0.016 <0.0001
C18:1c15 0.15b 0.27a 0.15b 0.22a 0.015 <0.0001
C18:2n-6 13.54a 8.16b 15.40a 14.71a 0.909 <0.0001
C18:3n-3 0.25b 0.42b 0.34b 2.70a 0.127 <0.0001
CLA(cis-9,trans-11) 0.03b 0.08b 0.06b 0.19a 0.015 <0.0001
C20:3n-6 0.77c 0.65c 1.09b 1.36a 0.069 <0.0001
C20:4n-6 3.35b 2.91b 4.84a 5.43a 0.295 <0.0001
C20:5n-3 0.14b 0.20b 0.19b 2.18a 0.051 <0.0001
C22:4n-6 0.49b 0.47b 0.77a 0.28c 0.042 <0.0001
C22:5n-3 0.36 b 0.61 b 0.59 b 2.85a 0.085 <0.0001
C22:6n-3 0.05 b 0.08b 0.07b 0.55a 0.017 <0.0001
Others* 0.98b 1.05a 1.06a 1.15a 0.037 0.036
DMAs
DMA-C16:0 3.19b 2.45c 3.32b 4.96a 0.186 <0.0001
DMA-C18:0 1.89b 1.80b 2.59a 3.07a 0.187 <0.0001
DMA-C18:1 0.80b 0.54c 0.87b 1.06a 0.083 <0.0001
*Representing the sum to co-eluted fatty acids;
Different superscripts in the same row are associated with significant differences (P<0.05)
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
40
Independently of the origin, veal from HF
calves displayed higher contents of total
saturated and monounsaturated fatty acids (SFA
and MUFA, respectively) and lower content of
total polyunsaturated fatty acids (PUFA), the n-
3 family PUFA (n-3PUFA) and long chain n-
3PUFA (n-3LCPUFA) than PCB calves. Muscle
fatness has a direct effect on fatty acid profile,
since phospholipids and triacylglycerols present
distinct fatty acid profiles and phospholipids
remains quite constant in muscle cell
membranes while the triacylglycerols
accumulates when muscle get fatter (Smet et al.,
2004). This explains that the veal displaying the
lowest total fatty acid content (PCB), presented
the lowest total SFA and total MUFA content,
which are the most predominant fatty acids of
triacylglycerols (Smet et al., 2004), as well as
the highest PUFA and dimethylacetals (DMA)
content, associated to phospholipids. DMA are
formed from cleavage of plasmalogens, a group
of glycerophospholipids which are structural
components of cellular membranes (Horrocks,
1972; Nagan and Zoeller, 2001), for that reason
leaner meat presented higher proportion of
phospholipids, including plasmalogens.
Fatty acid profile presented herein is similar
to those previously reported in both veal and
beef by other authors (Realini et al., 2004;
Nuernberg et al., 2005; Costa et al., 2006;
Alfaia et al., 2007, 2009) with C18:1cis-9,
C16:0, 18:0, C18:2n-6 and C20:4n-6 comprising
the majority of the fatty acids.
Besides the effect of muscle fatness,
differences observed between veal from HF and
PCB cattle could also be dependent of different
feeding management during the finishing
period, as higher percentages of C18:0,
C18:1trans-11, C18:2cis-9,trans-11, C18:3n-3,
C20:5n-3, C22:5n-3 and 22:6n-3 are usually
found in higher amounts on beef from pasture
grazing systems relatively to meat from animals
fed on concentrate feeding (Noci et al., 2005;
Nuernberg et al., 2005; Leheska et al., 2008).
It is noteworthy that HF veal, no matter the
origin presented a larger amount of C18:1trans-
10 than C18:1trans-11 and very low C18:2cis-
9,trans-11, which is indicative of the occurrence
of altered biohydrogenation pathways (i.e. trans-
10 shift) characteristic of ruminants fed high
concentrate diets (Bessa et al., 2015).
Considering the potential health effects of
C18:1trans-11 and C18:2cis-9,trans-11 and the
deleterious health effects of C18:1trans-10
(Mapiye et al., 2015), the fatty acid profile of
HF veal can be considered less favourable than
PCB veal.
Moreover, veal from the PCB calves
contained a significantly (P<0.001) lower
percentage of total SFA (33.7 versus 39.6% of
total fatty acids) and presented higher
percentage of branched chain SFA (BCFA).
BCFA in ruminant tissues arise from the
digestion of rumen microorganisms and the
absorption of bacterial structural lipids, the
content found on ruminant tissues is dependent
of rumen bacterial biomass outflow (Jenkins,
1994; Fievez et al., 2012). These fatty acids
have revealed an inhibitory effect on fatty acid
synthesis in tumour cells (Wongtangtintharn et
al., 2004), which has been recognised as a
useful approach in cancer therapy, since cancer
cells are more dependent on fatty acid
biosynthesis than healthy cells (Kuhajda, 2000).
Regarding fatty acid ratios and lipid quality
indices, the values found in veal from PCB
calves revealed a healthier profile, displaying
significantly higher P/S and h/H ratios and
lower TI and AI indices and also lower n6/n3
ratio than veal from HF calves. On the other
hand, veal from the PHF calves displayed the
most favourable results in the lipid quality
indices among HF, except for the n6/n3 ratio.
Within the trans-octadecenoates, major
intermediates formed during rumen
biohydrogenation, vaccenic acid can be
regarded as a “beneficial trans” fatty acid,
because of its conversion into rumenic acid, a
fatty acid with important health attributes.
Additionally, it has been suggested that
vaccenic acid, itself, could have beneficial
health effects (Turpeinen et al., 2002; Field et
al., 2009).
In the past, nutritional indices were regarded
as a useful tool to evaluate the health effect of
the fatty acids. However, their value as
indicators of lipid quality has been questioned,
since the P/S, was only based on the chemical
structure of FA, which may not be adequate to
evaluate the nutritional value of fat, because it
considers that all SFA are harmful and ignore
the effects of MUFA (Santos-Silva et al.,
2002a). Moreover, nowadays it is well known
that only a few saturated fatty acids, namely
lauric (C12:0), myristic (C14:0), and palmitic
(C16:0) acids, raise LDL-cholesterol and HDL-
cholesterol, being considered
hypercholesterolemic fatty acids (Skeaff and
Miller, 2009). On the other hand, the n-6/n-3
ratio assumes that lowering n-6 family PUFA
(n–6 PUFA) intake would have the same health
effects as increasing n–3 PUFA intake, which is
not correct (Smit et al., 2009). The
atherogenicity (AI) and thrombogenicity (TI)
indices, as the hypo/hypercholesterolemic (h/H)
ratio, are also used as lipid quality indicators
and regarded as more appropriated indicators as
they focus on the fatty acid contribution to
cardiovascular diseases and endogenous
cholesterol synthesis.
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
41
It is important to notice that the BCFA, have
been neglected in their contribution to human
health, as they have not been included in any of
the nutritional ratios and indices. Nevertheless,
BCFA have shown some anti-cancer activity
against various cancer cell lines, and such
cytotoxicity was comparable to that of
conjugated linoleic acid (Wongtangtintharn et
al., 2004). Meat from the PCB calves displayed
significantly higher contents of BCFA than
meat from HF animals, independently of their
origin.
According to Givens and Gibbs (2008), the
nutritional quality of beef lipid fraction is not
solely dependent of nutritional indices, but is
also dependent on the amount of long chain
PUFA (LCPUFA) with recognized health
beneficial effects, like the n−3 PUFA
(C20:5n−3 (EPA) and C22:6 n−3 (DHA)).
Therefore, it was suggested the ingestion of 150
mg/day of EPA+DHA in order to prevent
chronic diseases. A portion of 150 g of veal, a
normal serving steak, contributes with 0.01-0.18
mg, representing 0.01-0.12% of the
recommended content. Despite veal low
contribution to EPA+DHA ingestion, veal from
the PCB calves provides 4.9-9.7 times more
EPA+DHA than veal from HF calves,
independently of their origin.
Total cholesterol
The total cholesterol contents in veal of all
groups are displayed in Table 2. The total
cholesterol content comprises free and esterified
cholesterol present in the muscle. No significant
differences were observed among groups in
total cholesterol content, which was expected,
since veal samples were all obtained from the
similar portion of the same muscle (sirloin
cranial portion), and differences in total
cholesterol content are commonly observed
between different muscles, due to differences in
their muscle fibre composition (Chizzolini et al.,
1999; Dinh et al., 2011).
Total cholesterol in a regular serving portion
(150 g fresh veal) would only contribute with
16.2% of the recommended maximum daily
cholesterol intake (<300 mg per day) (Krauss et
al., 2000). The total cholesterol content obtain
herein (42.8-46.9 mg/100 g of muscle) is in
agreement with the cholesterol content
previously quantified in veal and beef of several
Portuguese autochthonous breeds (Prates et al.,
2006; Monteiro, 2012; Quaresma et al., 2012,
2013).
Vitamin E and β-carotene
The longissimus lumborum total vitamin E
(α- and γ-tocopherols) and β-carotene contents
-Tocopherol was the
major vitamin E homologue in veal, ranging
between 1.0 and 2.8 μg/g of meat (84.3-96.6%
-tocopherol was
accountable for 0.10-0.37 μg/g of meat (3.4-
15.7% of vitamin E). Veal from PCB calves had
-
-
carotene content in veal from national
production (independently of the genetics) was
more than twice the value observed on veal
from SHF and DHF (P<0.05). Veal from SHF
and DHF showed no significant differences in
between the aforementioned variables,
displaying the lowest values of all groups for
- -carotene.
Regardin -tocopherol, PHF calves displayed
-tocopherol content (0.37 μg/g of
meat) followed by the SHF veal (0.21 μg/g of
meat) and DHF veal (0.13 μg/g of meat). Veal
-
tocopherol value (0.10 μg/g of meat), but not
significantly different from the DHF veal.
Previously, a study performed in veal from
Portuguese native breeds raised on pasture
-tocopherol contents (0.09-
0.12 μg/g of meat) (Quaresma et al., 2013).
All veal groups displayed a total vitamin E
content below the minimum value required to
retard lipid oxidation (3.0 µg/g of meat)
(Faustman et al., 1989; Mitsumoto et al., 1991),
which can compromise meat colour and lipid
oxidative stability. Veal from PCB animals
presented the highest value (2.91 µg/g of meat),
which was close to the aforementioned
minimum value required to retard lipid
-carotene content found on
veal from calves raised in Portugal suggests that
the feeding regime of these animals included
fresh green forage, considering that green forage
- -
tocopherol (Arnold et al., 1992; Realini et al.,
2004; Descalzo et al., 2005; Insani et al., 2008;
De la Fuente et al., 2009; Daley et al., 2010;
Quaresma et al., 2012). β-Carotene is an
important fat-soluble antioxidant that quenches
sites localised within the hydrophobic region of
biological membranes, contrasting with the
-tocopherol close to the
membrane surface (Fukuzawa et al., 1998). The
higher β- -tocopherol contents of
veal from PCB animals suggest that this meat is
less prone to lipid oxidation and displays for a
longer period the red cherry colour appreciated
by consumers. However, veal from PCB calves
presented also the highest peroxidability index
(PI) being more prone to lipid peroxidation, due
to the higher degree of unsaturation of its fatty
acid profile.
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 34-45
42
Table 4 – Total vitamin E, prime tocophero - - -carotene and the
peroxidability index (PI) of longissimus lumborum muscle from veal with different origins or genetic
background
Veal Statistics
Type Holstein-Friesian Crossbred beef SEM P
Origin Spain Netherlands Portugal Portugal
Total vitamin E* 1.44c 1.14c 2.35b 2.91a 0.149 <0.0001
-tocopherol* 1.23c 1.01c 1.98b 2.81a 0.143 <0.0001
-tocopherol* 0.21b 0.13c 0.37a 0.10c 0.013 <0.0001
-carotene* 0.05b 0.03b 0.11a 0.11a 0.006 <0.0001
PI 36.4b,c 31.5c 48.5b 82.2a 3.30 <0.0001
* μg/g of meat; Different superscripts in the same row are associated with significant differences (P<0.05)
Conclusion
The study results showed that veal obtained
from different origins enclosed an undesirable
variability with potential consequences to
retailers profit and negative health concerns to
consumers. Spanish veal received the DFD
classification, which encloses a variety of
unfavourable features to both consumers and
retailers, which recommend their avoidance. On
the other hand, veal from SHF and DHF
revealed a lipid profile similar to beef obtained
from intensive production systems based on
concentrate feeding, and low concentration of
major lipid-soluble antioxidants. Among veal
from national production, it was observed
important differences between the two varieties
in comparison. Veal from PCB displayed a
healthier lipid profile and higher contents of
vitamin E and β-carotene. Nevertheless, veal
from all varieties in comparison displayed
vitamin E content below the concentration that
is required to delay the oxidation process.
In Europe, beef market value is
associated with the animal’s genetic background
and carcass classification, while the animal’s
feeding management and diet composition has
no influence on beef market value, despite their
influence on meat composition.
The study revealed that the national
limitations on beef production recommend the
establishment of quality standards that should
be used throughout negotiation. Such standards,
as the establishment of a meat pH limit would
be particularly useful to avoid acquisition of
DFD meat. The establishment of quality
standards on vitamin E content seems to be of
great value to the retailer, since vitamin E is of
prime importance has it delays the development
of oxidation reactions, stabilizing the
appreciated red-cherry colour of beef
throughout a longer period. On the other hand,
the establishment of standards on the nutritional
quality of meat lipid profile, does not seem
realistic at this point, still, we think that it would
contribute to the improvement of meat
nutritional value and the valorisation of less
intensive feeding regimes.
Acknowledgments:
We are grateful to Ana Maria Reigado for all
the help provided in Biochemistry Laboratory,
Faculty of Veterinary Medicine, University of
Lisbon;
We are grateful to Sourcing Talho of
Jerónimo Martins, namely Sr. Salgueirinho, for
providing us the conditions necessary for beef
sampling throughout a 10 week period;
We would like to thank CIISA-FMV-
ULisboa, under project CIISA:
UID/CVT/00276/2013 provided the funding for
sample analysis.
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Performance and quality of quail eggs submitted to different light
programs
Desempenho e qualidade de ovos de codornas japonesas submetidas a
diferentes programas de luz
Luiz Felipe M. Souza1, Mônica Patrícia Maciel2*, Cinara C. S. Carvalho2, Felipe S. Aiura2, Daiane B. Silva2, Vítor Hugo S. Moura2
1Granja Avis, Janaúba, MG, Brasil 2Universidade Estadual de Montes Claros, Janaúba, MG, Brasil
Summary: The use of intermittent lighting
programs has already been studied frequently
with layer hens, with good results. However,
there are still few studies with laying quails that
demonstrate that these programs can be applied
at breeding, without affecting performance.
Therefore, this experiment was conducted to
evaluate the use of lighting programs on the
performance and egg quality of quails. A total
of 600 quails with an initial age of 14 weeks
were subjected to the following treatments:
Increasing Natural Photoperiod; Intermittent
Photoperiod 1(one period of 15 min of artificial
light/day); Intermittent Photoperiod 2 (two
periods of 15 min of artificial light/day);
Continuous Photoperiod with 15 h of light and 9
h of darkness; and Continuous Photoperiod with
17 h of light and 7 h of darkness. The
experimental design was completely
randomized, with five treatments, and four
replicates, totaling 20 plots with 30 birds in
each. Lighting programs had no effect on egg
weight; eggshell weight, yield, and thickness;
specific weight; or Haugh Unit. The quails that
received only natural light had worse results for
egg production, feed intake, and feed
conversion in kg of diet/dozen eggs and in kg
diet/kg eggs. Intermittent lighting programs can
be adopted for quails at the age of 14 to 26
weeks as they reduce artificial lighting time
without affecting egg quality and egg quality
Resumo: A utilização de programas de luz
intermitentes já vem sendo estudados com
frequência com galinhas poedeiras, com a
obtenção de bons resultados. Porém, não se sabe
se estes mesmos programas podem ser aplicados
às codornas, sem afetar o desempenho. Portanto,
o experimento foi conduzido para avaliar a
utilização de programas de luz sobre o
desempenho e a qualidade de ovos de codornas.
Foram utilizadas 600 codornas com idade inicial
de 14 semanas, as quais foram submetidas aos
seguintes tratamentos: Fotoperíodo Natural
Crescente; Fotoperíodo Intermitente 1 (um
período de 15 minutos de luz artificial/dia);
Fotoperíodo Intermitente 2 (dois períodos de 15
minutos de luz artificial/dia); Fotoperíodo
Contínuo com 15 horas de luz e 9 de escuro e
Fotoperíodo Contínuo com 17 horas de luz e 7
de escuro. O delineamento experimental foi o
inteiramente casualizado com 5 tratamentos e 4
repetições, totalizando 20 parcelas de 30 aves
cada. Não houve efeito dos programas de luz
sobre o peso dos ovos; peso, rendimento e
espessura da casca; peso específico e Unidade
Haugh. As codornas que receberam somente luz
natural apresentaram piores resultados de
produção de ovos, consumo de ração e
conversão alimentar em kg de ração/dúzia e em
kg de ração/kg de ovos. Os programas de
iluminação intermitentes podem ser adotados,
para codornas em postura na idade de 14 a 26
semanas, pois reduzem o tempo de iluminação
artificial, sem afetar o desempenho zootécnico e
a qualidade dos ovos.
*Correspondência: monicapmaciel@hotmail.com
Introduction
Quail farming is a poultry activity that has
stood out in world and that has become another
important segment of the poultry industry. Such
growth is explained by the fact that quails
(Coturnix coturnix japonica) have desirable
animal-production features such as easy
adaptation, rapid growth, early sexual maturity,
high egg production, low feed intake, and high
resistance to disease. Moreover, raising these
birds requires little labor, management is easy,
and it can generate good profitability.
Souza et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 46-51
47
Overall, quails are subjected to the same
management applied to hens, with manipulation
of light as one of these factors. According to
Gewehr et al. (2005), in quail farming, long
days are used for increasing egg production.
However, an interesting aspect of the
physiology of layer birds is that they do not
need to be subjected to continuous long days.
This phenomenon is called “subjective day”, in
which adult birds in the laying phase ignore
periods of darkness between the 12 and 15
stimulatory hours. The “subjective day” denotes
the period during which the bird remains awake,
physiologically active, even in the dark. This
phenomenon allows for the use of intermittent
lighting period for layer birds, which can be
defined as one of those formed by more than
one light (photophase) and darkness
(scotophase) period in a 24-h cycle.
In hens, this concept has already been
extensively studied, with satisfactory results
demonstrating no harms to their performance
and egg quality (Lewis et al., 1992; Morris and
Butler, 1995; Freitas et al., 2005; Freitas et al.,
2010), in addition to the advantage of energy
saving (Freitas et al., 2005). However, it is not
known, for certain, whether intermittent
programs can be used for quail without harming
the performance and quality of eggs
Research evaluating intermittent programs
with laying quails is scarce, especially with
birds at the beginning of laying. There is also no
consensus as to how much lighting time should
be given in the evening to compose the
intermittent lighting.
In research with quail, Gewehr et al.(2005)
evaluated continuous and intermittent lighting
programs on egg production. The continuous
program included a photoperiod of 15 h 30 min
(natural + artificial) and main night of 08 h 30
min. The intermittent program 1 counted on 2
photoperiods totaling 15 h 30 min and with a
main night of 8 h 30 min, but the lights were on
for 30 min at dawn, followed by a scotoperiod
until dawn. The intermittent program 2 was
composed of 3 photoperiods, also totaling 15 h
30 min, with a scotoperiod of 8 h 30 min, but
with the lights on in two periods of 30min at
night. The lamps were turned on at dawn for 30
min, followed by a dark period until dawn with
the sequence of the natural photoperiod, and
after sunset, the second moment of dark
occurred and the lamps were lit at night for
30min. The authors concluded that the
intermittent periods reduce the artificial
illumination time, without affecting production,
egg weight and mass, or feed conversion per
dozen eggs. However, feed intake was reduced
and feed conversion per egg weight was
improved with the intermittent regime 1.
Given the above, this study aimed to
evaluate the action of different lighting
programs on the performance and egg quality of
quails at the beginning of the laying phase.
Material and methods
The experiment lasted 12 weeks, and was
held on a commercial farm located in Janaúba,
MG, Brazil. A total of 600 quails with an initial
age of 14 weeks were housed in a conventional
shed for laying quails. Birds received water and
feed ad libitum. The diet, based on corn and
soybean meal, contained 18.71% of crude
protein and 2,800 Kcal/kg of metabolizable
energy. Before the onset of the experiment,
quails went through a period of acclimation of
seven days to the environment, management,
and experimental treatments. Before arriving at
the experimental site, birds were accustomed to
receiving 17 h 30 min of continuous
photoperiod and 6 h 30 min of the dark.
Five treatments were tested, according to
five different lighting programs, as follows:
INP= increasing natural photoperiod (11 h 11
min at the beginning and 12 h 37 min at the end
of the experiment); IP 1= intermittent
photoperiod 1 (one period of 15 min of artificial
light/day); IP 2= intermittent photoperiod 2 (two
periods of 15 min of artificial light/day); CP 1=
continuous photoperiod with 15 h of light and 9
h of darkness; and CP 2= continuous
photoperiod with 17 h of light and 7 h of
darkness. The intermittent photoperiod 1 (IP1)
presented two photophases (light periods)
divided in 15 h and with a main night
(scotoperiod) of 9 h. The bulbs were lit at dawn,
with a 15 min photophase, followed by a
scotophase (dark period) until dawn. The time
elapsed between the lighting of the lamps at
dawn and the natural nightfall was composed of
15 h. The intermittent photoperiod 2 presented
three photophases, with a main night of 9 h. The
lamps were turned on at 4h and turned off at 4 h
15 min (first artificial photophase), followed by
a dark period until dawn. After sunset, the other
moment of dark occurred and the lamps were lit
at 18 h 45 min and off at 19 h (second artificial
photophase). The time elapsed between the
lighting of the dawn lamps (4 h) and the erasing
of the lamps at night (19 h) was composed of 15
h. To compose the experimental rooms, two
layers of black plastic canvas were used to
avoid the incidence of light from one room to
another. A 25-W fluorescent bulb was used per
room, installed in front of the cages such that all
birds received luminosity equally (5 lux).
Each environment (except for that in which
only natural light was used) was equipped
individually with a timer to control the
Souza et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 46-51
48
illumination time. The light intensity was
similar between the environments and was
checked regularly with a light meter and the
temperature within the shed was recorded daily,
during the entire experimental period, using dry
and wet bulb thermometers placed in each
environment that obtained the average
temperature and humidity.
The following characteristics were
evaluated: feed intake (g/bird/day); egg mass
(g); feed conversion (kg of diet/dozen eggs and
kg diet/egg weight); total egg weight (%
eggs/bird/day), production of marketable eggs
(% of viable eggs, excluding broken and
cracked eggs and those without a shell or with a
soft shell); egg weight (g); eggshell weight (g),
thickness (mm), and yield (% - ratio between
shell weight and egg weight × 100); specific
weight (g/cm3); and Haugh Unit.
The experimental design was completely
randomized, with five treatments and four
replicates, totaling 20 plots. Each plot consisted
of three cage separators, each containing 10
birds, totaling 30 birds/plot.
The data were subjected to analysis of
variance, using Sisvar computer software
(Ferreira, 2011), and when the F test indicated
significance, means were evaluated by the
Scott-Knott test at 5% probability level.
Results and Discussion
Performance results are shown in Table 1.
There was an effect (P <0.05) of treatments on
egg production, feed consumption and feed
conversion.
Quails raised under continuous programs (15
h or 17 h) or intermittent programs of 15 h had
similar egg production. The explanation for this
result may be the concept of “subjective day”,
which explains that birds ignore the scotophases
and remain with their reproductive tract active
even in the darkness. These results demonstrate
the physiological phenomenon mentioned by
Sauveur (1996), who stated that even in dark
periods, birds produce sex hormones once
stimulated by even a quick contact with light.
This allows the time of artificial illumination to
be shortened with no harm to egg production.
Gewehr et al.(2005) found similar results for
egg production in layer quails reared in open
sheds under an intermittent photoperiod with
two 30-min photophases in the early morning
(totaling 15 h 30 min of light) compared to a
continuous photoperiod of 15 h 30 min of light.
This result also confirms the feasibility of using
intermittent systems.
Worse results for egg production (P<0.05)
were obtained when increasing natural light was
used, which culminated in lower feed
conversions (kg/kg and kg/dz). This result can
be explained by the amount of light provided by
this treatment being less than that required by
laying birds. According to Etches (1996), short
days do not stimulate the reproductive tract of
birds; on the contrary, long photoperiods
stimulate the sexual function of layers and
increase egg production, with a long day
considered to be that with a light period longer
than 12 h. Contrasting results to those obtained
in the present experiment were found by Freitas
et al.(2005), who, working with white-egg layer
hens, subjected to continuous and intermittent
15 h light programs and a growing natural light
program (natural photoperiod) observed that the
birds reared only with increasing natural light
managed to maintain their egg production.
This result confirms those found by Charles
and Tucker (1993), who, in a review on layer
hybrids, observed that these birds are so
genetically predisposed to laying that they
almost appear to be refractory to changes in the
light regime. However, this is not yet the case of
quails, because they have not yet undergone
such intense genetic breeding, thus requiring an
accrual in artificial light to maintain their laying
rate at satisfactory levels.
Feed intake was lower (P<0.05) in the birds
that received only natural light. This can be
because the birds from that treatment received a
shorter light period than the others did (11 h 11
min at the beginning of the experiment and 12 h
37 min at the end) and thus had less time for
consumption, which may occur in the
scotophase (Lewis et al. 1995).
There was no difference in feed intake
between intermittent and continuous treatments
(P> 0.05). This result differs from that found by
Gewehr et al. (2005), who observed a reduction
of 1.6% in the consumption of Japanese quails
submitted to an intermittent program (half an
hour of light at dawn) when compared to the
consumption of those of the continuous program
(16 h of light). According to the authors, the
birds submitted to the intermittent program
decrease the consumption due to the lower
nutritional need caused by the reduction of the
physical activity of the birds without the
presence of light (in the scotophase). However,
in the present experiment, scothophases in
intermittent programs did not affect
consumption. Lewis and Perry (1990) cite that,
in intermittent regimes, there is a decrease in the
feeding activity of laying hens in the
scotophase, however, a slightly higher
consumption in the photophases. This may be
related to compensatory consumption.
Souza et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 46-51
49
Table 1: Egg production (PROD), feed intake (FI), egg mass (EM), feed conversion per kg (FCK) and
per dozen eggs (FCD), and egg weight (EW) of Japanese quails under different lighting programs.
Lighting program*
Variable**
PROD FI EM FCK FCD EW
(%) (g/bird/day) (g) (kg/kg) (kg/dz) (g)
INP 85.09B 27.96A 7.93A 2.88A 0.396A 11.47
IP 1 92.69A 28.63B 7.95 A 2.72B 0.369B 11.70
IP 2 94.85A 28.44B 8.16 A 2.60B 0.360B 11.53
CP 1 95.37A 28.98B 8.33 A 2.66B 0.364B 11.41
CP 2 95.00A 29.03B 8.27 A 2.66B 0.368B 11.75
CV 2.15 2.83 3.13 3.73 2.33 2.29
PROB 0.0000 0.0020 0.1360 0.0153 0.0002 0.3531
*INP = increasing natural photoperiod; IP 1= intermittent photoperiod 1 (one period of 15 min of
artificial light/ay); IP 2= intermittent photoperiod 2 (two periods of 15 min of artificial light/day); CP 1=
continuous photoperiod with 15 h of light and 9 h of darkness; CP 2= continuous photoperiod with 17 h
of light and 7 h of darkness.**Means followed by different letters in the column differ by the Scott-Knott
test (p<0.05).
According to the authors, the birds
submitted to the intermittent program decrease
the consumption due to the lower nutritional
need caused by the reduction of the physical
activity of the birds without the presence of
light (in the scotophase). However, in the
present experiment, scothophases in intermittent
programs did not affect consumption. Lewis and
Perry (1990) cite that, in intermittent regimes,
there is a decrease in the feeding activity of
laying hens in the scotophase, however, a
slightly higher consumption in the photophases.
This may be related to compensatory
consumption.
Freitas et al. (2005) observed lower intakes
by white-egg layer hens reared under
intermittent and natural light. However, in the
experiment developed by these authors, the
birds from the treatment with intermittent light
received only a “flash” of 15 s in the early
morning, which did not contribute to
complementary intake. The birds from the
present experiment reared in the intermittent
photoperiods might have consumed in a
compensatory manner in the 15 min of light that
they received at night, which might have led
them to reach similar intake values to those in
the continuous photoperiod. This assertion
agrees with those made by Lewis et al. (1995),
who found that laying hens decrease their
feeding activity in the scotophase and increase it
in the photophases, displaying the compensatory
effect.
Egg weight was not influenced by the
different treatments (P>0.05). Similar results
were found by Gewehr et al. (2005), with quail,
and by Freitas et al. (2005), with white-egg
layer hens. Besides genetics, the room
temperature, nutritional levels, and photoperiod
influence a bird’s weight, which is directly
linked to its egg weight. In this experiment, the
only source of variation was the lighting
programs. According to Gewehr et al. (2005), in
the physiological aspect, it is noted that, in
intermittent regimes, the endocrine functions
and activities of the oviduct and ovary are likely
maintained in relation to egg formation.
No effects (P>0.05) of the lighting programs
were detected on the egg quality variables
(Table 2).
Lighting programs had no influence on
eggshell weight. Agreeing with this result,
Lewis and Perry (1990), in an experiment with
four lines of white-egg layer hens, and Freitas et
al.(2010), with brown-egg layers, also did not
observe differences in this variable with the use
of intermittent light as compared with the
continuous program. Eggshell yield also did not
vary with the programs, but this was an
expected result, since there was no effect on
eggshell weight or egg weight, either.
Souza et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 46-51
50
Table 2: Eggshell weight (SW), eggshell yield (SY), eggshell thickness (ST), specific weight (SW), and
Haugh Unit (HU) of eggs from Japanese quails under different lighting periods.
Lighting
program*
Variable
SW SY ST SW HU
(g) (%) (g) (g/cm3)
INP 0.985 8.42 0.238 1.078 89.71
IP 1 1.000 8.42 0.238 1.077 90.61
IP 2 1.032 8.57 0.237 1.077 89.59
CP 1 1.002 8.53 0.240 1.078 89.37
CP 2 0.995 8.44 0.241 1.077 90.08
CV 2.69 1.78 3.23 0.09 1.73
PROB 0.1944 0.5140 0.9408 0.8734 0.8101
*INP = increasing natural photoperiod; IP 1 = intermittent photoperiod 1 (one period of 15 min of
artificial light/ay); IP 2 = intermittent photoperiod 2 (two periods of 15 min of artificial light/day); CP 1 =
continuous photoperiod with 15 h of light and 9 h of darkness; CP 2= continuous photoperiod with 17 h
of light and 7 h of darkness.
Eggshell thickness was not influenced by the
different programs. Contrasting results were
found by Rowland (1985), Sauveur and Mongin
(1983), and Lewis and Perry (1990), who
observed an improvement in the shell thickness
of eggs from laying hens with the use of
intermittent light compared with continuous
programs. The authors explained that these
responses may be linked to the locomotor
activity of the bird, which is reduced to its
lowest in periods of darkness. As their
movement is reduced, the energy expenditure is
also reduced, which causes their feed efficiency
to increase in intermittent programs, resulting in
better availability of calcium for the formation
of the egg. In the present experiment, the
darkness periods did not contribute to
improving the use of nutrients to improve shell
thickness, and even in the birds from the
treatment with natural light, which consumed
less feed than the others, this fact did not
contribute for them to produce eggs with thinner
shells.
The results for specific weight demonstrate
there was no effect of the different programs on
this variable. Similar results were found by
Freitas et al. (2010) and Gewehr et al. (2012),
who also did not observe an effect of
continuous, natural, and intermittent programs
on the specific weight of eggs from brown-egg
layer hens. According to Gewehr et al. (2012),
the analysis of this variable has been used as a
routine practice on farms to evaluate shell
quality. This procedure is supported by the fact
that the albumen and yolk of fresh eggs have
almost the same density as that of water,
whereas the density of the eggshell is 2.2 times
higher than that of water. Therefore, the
eggshell quality increases as the specific weight
is increased (Castelló Llobet et al., 1989).
The Haugh unit is a method utilized to
evaluate the albumen quality. It is the result of
albumen height corrected for egg weight, and its
use is universal due to its easy applicability and
high correlation with the appearance of the egg
once it is cracked (Williams, 1992). Because the
programs had no effects on this variable, it can
be stated that the intermittent light did not affect
the physiology of the oviduct in the egg white
synthesis negatively. Similar results were
observed by Freitas et al.(2010), in studies with
brown-egg layers.
Overall, based on the results of the research
studies cited here and on those found in the
present experiment, intermittent programs do
not change the quality of the eggs, and so this
can be an alternative to be adopted by the quail
farmer as a way to reduce electric power
consumption.
Conclusion
The use of increasing natural light during the
period of experiment was detrimental to the
performance of laying quails at the age of 14 to
26 weeks, as it compromised egg production
and feed conversion in kg of feed / dozen eggs
Souza et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 46-51
51
in kg of feed / kg of eggs. However, there is a
need for more research, in longer natural
photoperiods, to see if the results would be
different than those presented in this research.
Lighting programs with intermittent
photoperiods can be used to raise quails in the
laying period from 14 to 26 weeks of age, since
it does not compromise their productive
performance or egg quality.
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RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
52
Effect of transport and lairage period on veal ultimate pH
Efeito do transporte e do tempo de permanência na abegoaria no pH final
da carne de vitela
I.C. Antunes1,2, M.A.G. Quaresma*1, L.S. Correia3, J.B Fraga3, J.N. Matos Costa1,3
1Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal (CIISA), Faculdade de
Medicina Veterinária, Universidade de Lisboa, Pólo Universitário Alto da Ajuda, 1300-
477 Lisboa, Portugal 2CEER, Instituto Superior de Agronomia, Universidade de Lisboa, Tapada da Ajuda,
1349-017 Lisboa, Portugal 3Grupo Jerónimo Martins, Lisboa, Portugal
Summary: The present study evaluates the
influence of different ante-mortem management
measures related to transport (type and duration)
and lairage resting time on veal ultimate pH
(pHu) according to animal’s sex and breed
(Holstein- Friesian (HF) and Crossbred beef
(CB)).
Indirect transport to the slaughterhouse was
associated with higher pHu than was observed
on direct transport type (P<0.001; 5.78 versus
5.68). In indirect transport, the pHu value varied
positively with the number of animal loading
events, while in direct transport, longer
distances corresponded to higher pHu values.
Irrespective of the transport type and the lairage
resting time, the HF veal presented higher pHu
mean value than CB counterparts (P<0.001;
5.73 versus 5.65). The results also suggested
that males react to indirect transport in a more
stressful way than females, since their pHu
appeared significantly higher (P<0.05; 5.80
versus 5.60). Such differences between sexes
were not observed under direct transport.
Lairage resting periods equal or higher than 15
and 20 hours were associated with significant
higher pHu values in male and female calves,
correspondingly. On the other hand, CB calves
seem to be more tolerant to the lairage
environment than HF calves, since lairage
resting periods higher than 10 hours result in a
significant pHu rise on HF, while in CB calves
such was only observed in resting periods
longer than 20 hours.
Resumo: O presente estudo avalia a influência
de diferentes medidas de maneio ante-mortem
relacionadas com o transporte (tipo e duração) e
período de tempo em abegoaria no pH último
(pHu) da carne de vitela em função do sexo e
raça dos animais (Holstein-Frísia (HF) e
Cruzados de carne (CC)).
O transporte indirecto para o matadouro
originou um pHu mais elevado do que o
observado no transporte directo (P<0.001; 5,78
versus 5,68), tendo aquele valor variado na
razão directa do número de carregamentos
efectuados. No transporte directo, a viagens
mais longas corresponde um valor de pHu mais
elevado. Independentemente do tipo de
transporte e do período em abegoaria, a carne
dos vitelos HF apresentou um valor médio de
pHu superior aos de origem CC (P<0.001; 5,73
versus 5,65). Os resultados sugerem ainda que
os machos reagem ao transporte indirecto com
maior nível de stress acumulado, pois
apresentaram um valor de pHu superior ao das
fêmeas (P<0.001; 5,80 versus 5,60). Estas
diferenças entre sexos não foram observadas no
transporte directo.
Períodos de repouso em abegoaria iguais ou
superiores a 15 e 20 horas foram associados
com valores de pHu significativamente mais
elevados nos machos e fêmeas, respectivamente.
Por outro lado, os vitelos CC parecem tolerar
melhor o ambiente de abegoaria do que os
vitelos HF, uma vez que, nestes últimos,
períodos de abegoaria superiores a 10 horas
contribuem para um aumento significativo do
pH, enquanto nos vitelos CC isso só se verifica
em períodos de abegoaria superiores a 20 horas.
*Correspondência: mquaresma@fmv.ulisboa.pt
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
53
Introduction
Purchasing decisions related to red meat are
mostly influenced by its appearance, more than
any other quality attribute. The bright cherry-red
colour is perceived as an indicator of
wholesomeness, while purple and brownish
colours are believed to come from older animals
and to be less suitable for consumption,
respectively (Mancini and Hunt, 2005).
The final stage of animal husbandry is
associated with several procedures that usually
induce stress, which is detrimental to both
animal welfare and meat quality (Trunkfield and
Broom, 1990; Van de Water et al., 2003;
Schwartzkopf-genswein et al., 2012).
Transportation can be associated with various
stressors, as restrain, loading and unloading, fast
or forced movements, breakdown of social
groups, noise, vibrations, climatic conditions,
etc. (Marenčić et al., 2012). The lairage
environment can also be stressful by either
psychological or physical factors, such as
restraint, handling, the novelty of the lairage
environment, hunger, thirst, fatigue, injury or
thermal extremes (Grandin, 1997; Fazio and
Ferlazzo, 2003; Apple et al., 2005). Stress
throughout the pre-slaughter period promotes an
intense activation of the sympathetic nervous
system, with the consequent release of
catecholamines, which are responsible for
increased heart rate and glycogenolysis
stimulation at muscle level (Tarrant, 1989;
Lensink et al., 2001), which may result in
muscular depletion of energy reserves, as ATP
and glycogen, leading to meat with a higher
ultimate pH (pHu) (Kannan et al., 2002).
Bleeding in the slaughter process makes the
oxygen and nutrient delivery to the tissues
impossible, and glucose metabolism involved in
ATP synthesis shifts from aerobic to anaerobic,
which results in lactate production and the pH
decline. The pH decline is of crucial importance
in the conversion of muscle to meat and to the
meat quality status (Immonen et al., 2000).
Therefore the ante-mortem decline of glycogen
reserves, results in low lactate production after
slaughter, leading to meat with pHu values
above 5.5 and, and in extreme cases to pHu
values above 5.8, which are associated with
quality problems (Marenčić et al., 2012). Such
high pHu condition results in a dark, firm and
dry meat, known as DFD meat (Ngapo and
Gariépy, 2006), which is depreciated due to its
unattractive dark colour, reduced shelf life and
weaker beef flavour (Immonen et al., 2000).
The aim of this study was to evaluate the
effect of transportation (type, distance and
number of loads) and lairage resting period on
meat pHu.
Material and methods
A population of 553 calves with 8 months
old (150 females and 394 males) and two
genetic backgrounds: Crossbred beef (CB) (335
animals) and Holstein-Friesian (HF) (218
animals) were used in this study. In each
animal, the right half-carcass was used to
measure the ultimate pH (pHu) (24 hours post
mortem), which was performed in two muscles
(longissimus thoracis and semitendinosus) with
a potentiometer with glass membrane electrode
sensitive to hydrogen ions coupled with
perforating blade (Testo, Hampshire,
Inglaterra). The potentiometer calibration was
performed on a daily basis, and was conducted
in pH 4 and pH 7 buffering solutions.
The transport to the slaughterhouse was
performed by two ways: direct transport, when
animals were transported directly from a single
loading point to the slaughterhouse; and indirect
transport, when animals loaded from different
farms were included in the same vehicle to the
slaughterhouse. The groups of each loading
were kept isolated inside the truck, and those
animals loaded earlier travelled a longer
distance, and expectably suffered an higher
level of stress associated to the repeated vehicle
stops. The vehicle used in this study was a
double decker truck with the capacity to carry a
total of 60 calves under a density of 0.87
animal/m2, that was the animal density used
throughout the study. Animal loading and
unloading to the first deck was made by a ramp,
while the transfer from the first to the second
deck was made with a lift
In direct and indirect transportations, the
travel was previously defined before
transportation start and a tachograph was used
to measure the distance and travel time.
At slaughterhouse, independently of
transportation type, all unloaded animals were
allowed to rest in lairage pens, for no less than 2
hours. Considering that animals were held in
lairage for quite variable period, the lairage
resting period was also recorded.
To assess the effect of time on transport
(expressed on minutes) on pHu, this variable
was grouped into 3 classes (<60; 60-120; >120
minutes), likewise, transport distance (expressed
on km) was also divided into 3 classes (<50; 50-
100; >100 km). The so called lairage resting
period was converted into 3 classes (<5;10-15;
15-20; >20 hours) to access the effect on pHu.
Statistical analysis
The statistical analysis was accomplished
using the MIXED procedure of SAS (SAS Inst.,
Cary, NC, USA), version 9.3. Since pHu
measurements on two different muscles from
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
54
the same animal are not independent
observations, pHu was treated as repeated
measure within the same animal. Considering
the Mixed procedure of SAS, firstly we tested
the effect of Sex, Breed and Muscle and the
existence of a statistical significant interaction
between these three main effects, which was not
confirmed. Afterwards, we tested the influence
of several main effects on pHu, and tested them
in pairs, including the existence of a statistical
significant interactions between these main
effects, namely: Breed (B) Transport (T) and
B*T; Sex (S) Transport (T) and S*T; Breed (B)
Time (T) and B*T; Sex (S) Time (T) and S*T;
Breed (B) Stops (S) and B*S; Sex (S) Lairage
(L) and S*L; Breed (B) Lairage (L) and B*L.
Least square means were presented and
compared using the LSMEANS/PDIFF option
when interaction effect was significant
(P<0.05).
Results
The analysis of the results revealed that sex
(S), breed (B) and muscle (M) had a highly
significant influence on pHu (P<0.001; Table
1), but no significant interactions were observed
between main effects S*B, S*M and B*M
(P=0.13; P=0.31and P=0.10, respectively; data
not shown). Males displayed higher pHu (5.72)
than females (5.66), and HF veal presented
higher pHu (5.73) than was observed on CB
veal (5.65). The longissimus thoracis (LT)
muscle presented higher pHu (5.72) than was
observed on semitendinosus (ST) muscle (5.66).
The effect of transport type on pHu (Table
2) revealed that indirect transport to
slaughterhouse was for both genetics associated
with higher pHu than was observed on their
counterparts transported directly to the
slaughterhouse. On the other hand, a statistical
significant interaction was observed between
sex and transport type (P<0.001) showing that
direct transport to the slaughterhouse did not
contribute to pHu differences between sexes,
while higher pHu was observed on males (5.80)
than females (5.60), whenever multiple loads
were used (Table 3).
Under direct transport to slaughterhouse, the
effect of distance and breed on pHu (Table 4)
and the effect of distance and sex on pHu (Table
5), revealed a significant interaction (P<0.001)
between breed and transport distance (B*D),
showing that in HF calves, a transport distance
between 50 and 100 km was associated with
higher pHu (5.84) than was observed in shorter
transports (<50 km; pHu=5.69), conversely in
CB calves higher pHu values were observed in
shorter (<50 km; pHu=5.67) or longer transport
distances (>100 km; pHu=5.69) than on
intermediate transport distances (between 50-
100 km; pHu=5.60). In direct transport, still it
was observed that veal from male calves tended
(P=0.09) to present higher pHu than when it was
obtained from female calves.
When considering the number of stops for
loading (Table 6), it was observed that higher
number of loading stops was associated with
higher pHu. The results also suggest that a
single stop in HF calves was associated with
superior levels of stress than was experienced
by CB calves in equal or superior number of
stops (between 1 and 3 stops), since HF veal
presented higher pHu values.
The pre-slaughter period ends in lairage
environment that is regarded as a resting period,
but it can still be associated with some stress.
Regarding the effects of sex and lairage time
(Table 7), an interaction was observed between
these two variables (P=0.006) revealing that in
male calves resting periods up to 15 hours had
lower pHu than those kept for longer resting
periods (5.64 versus 5.83), while in females
calves resting periods until 20 hours were
associated with lower pHu than longer periods
(5.62 versus 5.78). Similarly, a statistical
significant interaction was observed between
breed and lairage resting period (Table 8;
P=0.02), evidencing that CB calves can rest
with lairage environment up to 15 hours without
any significant change on pHu value, while for
HF calves changes in pHu occurred much
earlier (somewhere between 5 and 10 hours).
Discussion
Considering the overall data, the average
pHu values presented for both genetic groups
(HF and CB) and sexes were below 5.8, the
limit value for beef DFD status (Van de Water
et al., 2003). Nevertheless, the study presented
herein showed that, even at younger ages,
animal characteristics as sex and genetic
background influences meat pHu and the
muscle used for pH assessment is also an issue
of prime relevance to meat pHu. Male calves
were associated with higher pHu than female
calves, independently of the genetic
background. The results presented herein for
veal pHu are in agreement with the results
previously reported by Mach and Bach (2008),
in which the incidence of DFD beef (pHu>5.8)
tended to be higher in males than in females (P
= 0.08). Moreover, when considering older
animals, an higher incidence of DFD beef
(pHu>5.8) was observed in males (bulls and
steers) than in females (Viljoen, 2000).
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
55
Table 1 – Effect of sex, breed (Holstein-Friesian (HF) and Crossbred beef (CB)) and muscle
(longissimus thoracis (LT) and semitendinosus (ST)) on veal pHu
Sex Breed Muscle P
Male Female HF CB LT ST Sex Breed Muscle
pHu 5.72 5.66 5.73 5.65 5.72 5.66 <0.001 <0.001 <0.001
Table 2 –Effect of Transport type and breed on veal pHu
Direct Indirect P
HF CB HF CB Breed Transport B*T
pHu 5.73 5.62 5.86 5.69 <0.001 <0.001 0.18
Table 3 –Effect of transport type and sex on veal pHu
Direct Indirect P
Male Female Male Female Sex Transport S*T
pHu 5.69b 5.63b,c 5.80a 5.60c <0.001 0.06 <0.001
Table 4 –Effect of breed and transport distance (km) on veal pHu
CB HF P
Distance <50 50-
100
>100 <50
50-
100 Breed Distance B*D
pHu 5.67b 5.60c 5.69b 5.69b 5.84a <0.001 0.08 <0.001
Different superscripts correspond to statistical significant differences (P<0.05)
Table 5 –Effect of sex and transport distance (km) on veal pHu
Male Female P
Distance <50 50-
100
>100 <50
50-
100
>100 Sex Distance S*D
pHu 5.69 5.71 5.74 5.65 5.60 5.68 0.09 0.65 0.36
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
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Table 6 –Effect of Breed and Number of Stops on veal pHu
CB HF P
0 1 2 3 0 1 Breed Stops B*S
pHu 5.62 5.68 5.71 5.79 5.73 5.85 0.001 <0.001 0.44
Table 7 –Effect of Sex and Lairage Resting Period on veal pHu
Male Female P
<5 10-
15
15-
20
>20 <5
10-
15
15-
20
>20 Sex Lairage S*L
pHu 5.59b 5.66b 5.79a 5.87a 5.58b 5.62b 5.62b 5.78a 0.001 <0.001 0.006
Table 8 –Effect of Breed and Lairage Resting Period on veal pHu
CB HF P
<5 10-
15
15-20 >20 <5 10-15
15-
20
>20 Breed
Lairag
e
B*
L
pH
u
5.59
d
5.56
d
5.69b,
c
5.82
a
5.64c,
d
5.75a,
b
5.81
a
5.88
a
<0.00
1 <0.001
0.0
2
Concerning differences observed between
breeds, HF calves presented higher pHu values
than CB calves, which is in agreement with the
higher incidence of DFD meat previously
observed by Mach and Bach (2008) and may be
explained by differences in reactiveness to
stressful handling manoeuvres between breeds
(Shackelford et al., 1994; Önenç, 2004), which
could influence muscular glycogenolysis rate
(Mach and Bach, 2008). In our study differences
between breeds could be due to differences in
the maturity stage, i.e., despite equal age at
slaughter, HF calves tend to enter puberty
earlier (10-12 months) than CB animal (11-15
months) (Jainudeen and Hafez, 2016).
Higher pHu values were obtained from the
longissimus thoracis muscle than from the
semitendinosus muscle. Differences observed
between different muscles from the same animal
may be explained by: 1) the muscle fibre type
composition; 2) variability of glycogen reserves
among different muscle fibres; 3)
glycogenolytic response to epinephrine is
variable between different muscle fibre types
(Tarrant, 1989; Alasnier et al., 1996; Larzul et
al., 1997). The muscle fibre composition of
longissimus thoracis and semitendinosus
muscles reveals some dissimilarities, i.e.,
semitendinosus muscle comprises a higher
percentage of fibre type IIB (53-68% of total
muscle fibres) than longissimus thoracis (40-
53% of total muscle fibres), (Vestergaard et al.,
2000). The type IIB fibres possess higher
glycogen reserves than other muscle fibre types
(Klont et al., 1998). After slaughter, these
glycogen reserves are potentially converted into
lactate, which is responsible for a lower pHu
observed on the semitendinosus muscle.
The pre-slaughter phase includes the
conditions and practices that allow the
movement of the animals from the farm to the
slaughterhouse. During this period, animals can
be exposed to a broad range of stress factors,
such as handling and increased human contact,
strange environments, food and water
deprivation in long distance transport, mixing of
animals and changes in climatic conditions
(Ferguson and Warner, 2008). The intensity and
length of those stress factors and also the
susceptibility of the animal to stress will result
inevitably in product quality and quantity losses
(Ferguson et al., 2001). The results presented
herein shown that indirect transport (mixed
loads) encloses higher pHu values than direct
transport (single load). The explanation for this
may rely on the fact that, cattle interactions lead
to the establishment of a social hierarchy that is
based on a dominant-subordinate nature
Antunes et al., RPCV (2018) 113 (605-606) 52-58
57
(Jainudeen and Hafez, 2016) established by
agonistic behaviour, particularly in young bulls.
Such agonistic behaviour is associated with
intense physical activity and, consequently,
consumption of muscular glycogen reserves
(Warriss, 1990), compromising meat quality
(Ferguson et al., 2001). Therefore, mixing
animals from different social groups has been
associated with poor animal welfare (Broom,
2005). When animals from different social
groups are mixed in the vehicle during transport
to slaughterhouse, they are kept mixed on
lairage and it might stimulate dominance
behaviours, even in young calves with just 6
months of age (Trunkfield and Broom, 1990).
Herein, mixed loads were associated with higher
pHu values, but only in males suggesting that
the establishment of a social hierarchy in males
comprises more physical activity or is
associated with an increase level of stress than
occurs in females.
The total transport event (loading, journey,
unloading and new environment) is stressful for
calves, even if it concerns only a short journey
(Van de Water et al., 2003). In contrast with our
results, Mach and Bach (2008) observed that
longer transport distance/time (≥150 km or
≥3.45 h), had no effect on meat pHu, which
suggest that stress factors associated with this
transport distance/time were probably too low to
exert negative effects on meat pHu. Moreover,
Villarroel et al. (2003) demonstrated that
transport time (30 min, 3 h or 6 h) had no effect
on pHu. The explanation for the contradictory
results may be on the use of different animal
breeds and different conditions prevailing
during the journeys between studies, since these
are two aspects that will meddle the influence of
transport stress in cattle (Ferguson and Warner,
2008).
Węglarz (2011), considered that transport is
less stressful than lairage for bulls, if they are
kept in groups, because fights and attempted
mounts are unavoidable. Additionally, Raj et al.
(1992) suggest that the mixture of animals in
lairage, even in a short period of time, must be
avoided to prevent the occurrence of DFD meat
(pHu> 5.8). In our study, the animals that stayed
for long periods in lairage had a higher pHu
value, independently of gender or breed, which
is in agreement with the results obtained by
Mach and Bach (2008).The explanation for this
fact may be on lairage environment, that is
different from usual, a higher animal density,
breakdown of social group or mixture of
animals from different farms. However,
Mounier et al. (2006) reported contradictory
results, in which the meat pHu of bulls
decreased when lairage resting period was
greater. Moreover, these authors suggested that
bulls should stay at slaughterhouse more than 17
h to avoid high meat pHu.
Conclusion
The study results shows that even in younger
ages the ante-mortem period should be planned
carefully. Special attention should be given to
male calves, and particularly to HF calves,
which revealed to be more sensible to stressors
and prone to higher pHu. Moreover, in the
direct transport attention should be given to
reduce the distance between farm and
slaughterhouse, while in indirect transport the
number of loads should be reduced, to avoid
high pHu. Concerning the lairage resting period,
shorter periods embrace lower pHu values,
being for that reason recommended.
Acknowledgments: We are grateful to
Sourcing Talho of Jerónimo Martins, namely Sr.
Salgueirinho, for providing us the conditions
necessary for pH assessment.
We would like to thank CIISA-FMV-ULisboa,
under project CIISA: UID/CVT/00276/2013
provided the funding for sample analysis.
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