veriryhmÄt ja vasta- aineet · a:n ja b:n heikot variantit • afinn • afinn solussa noin 3500...
Post on 28-Sep-2020
3 Views
Preview:
TRANSCRIPT
VERIRYHMÄT JA VASTA-AINEET
Raskaudenaikaiset immunisaatiot 2016Kati SulinBiokemisti
Sisältö
• Veriryhmät• ABO• Rh-veriryhmäjärjestelmä
• Sikiön veriryhmämääritykset• äidin verinäytteestä• lapsivesinäytteestä
• Veriryhmävasta-aineet• punasoluvasta-aineiden seulonta• vasta-ainetunnistus• vasta-ainetason määritys
www.veripalvelu.fi 2
Veriryhmät• Veriryhmät ovat punasolun pintarakenteita: proteiineja, glykoproteiineja tai glykolipidejä
• geneettistä vaihtelua yksilöiden välillä• veriryhmä määritellään, kun sitä vastaan on löytynyt vasta-aine
• Veriryhmäjärjestelmän veriryhmätekijät eli antigeenit ovat samassa tai toisiinsa läheisesti liittyvissä hyvin samankaltaisissa molekyyleissä
• veriryhmäjärjestelmiä tunnetaan 36 ja ne sisältävät yli 300 veriryhmäantigeenia, lisää löytyy edelleen
• kaikkia näitä veriryhmiä kohtaan voi muodostua vasta-aineita
www.veripalvelu.fi 3
Veriryhmäjärjestelmät ja niiden tärkeimmät antigeenit1. ABO (A, B)2. MNS (M, N, S, s) 48 kpl3. P1PK (P1, Pk)4. Rh (D, C, c, E, e, Cw, Cx) 54 kpl5. Lutheran (Lua, Lub)6. Kell (K, k, Kpa, Kpb) 35 kpl7. Lewis (Lea, Leb)8. Duffy (Fya, Fyb)9. Kidd (Jka, Jkb)10. Diego (Dia, Dib)11. Yt (Yta, Ytb)12. Xg (Xga)13. Scianna (Sc1, Sc2)14. Dombrock (Doa, Dob)15. Colton (Coa, Cob)16. LW (LWa, LWb)17. Ch/Rg (Ch1, Rg1)18. H (H)
19.Kx (Kx)20.Gerbich (Lsa, Ana, Ge2, Ge3)21.Cromer (Cra, WESa)22.Knops (Kna, McCa, Yka)23.Indian (Ina, Inb)24.Ok (Oka)25.Raph (MER2)26.JMH (JMH)27.I (I)28.Globoside (P)29.Gill (GIL)30.RHAG (Ola, Duclos, DSLK)31.FORS (FORS1)32.Langereis (Lan)33.JR (Jra)34.Vel (Vel)35.CD59 (CD59)36.Augustine (Ata)
www.veripalvelu.fi 4
ABO• Henkilön ABO-veriryhmä määräytyy sen
mukaan, onko punasolun pinnalla • A-antigeeneja A• B-antigeeneja B• molempia AB• ei kumpaakaan O
• Henkilöllä on vasta-aineita niitä ABO-antigeeneja vastaan, jotka häneltä itseltään puuttuvat = isoagglutiniinit
• Isoagglutiniinit ovat muodostuneet varhaislapsuudessa ruuansulatuskanavan kautta tapahtuneesta altistuksesta bakteerien pintarakenteisiin
• Veriryhmävastaus annetaan punasoluantigeenien ja isoagglutiniinienmäärityksen perusteella
www.veripalvelu.fi
Neuvolanäytteestä tutkitaan aina ABO- ja RhD-antigeenit- myös muita tilanteen mukaan
5
A:n ja B:n heikot variantit
• Afinn• Afinn solussa noin 3500 A-antigeeniä
(norm. 200 000-900 000), reaktio mikroskooppinen
• Suomessa frekvenssi 1/6000, Varsinais-Suomessa 1/1000
• heikko A-antigeeni hankaloittaa veriryhmän määrittämistä
• ei ole merkitystä äidin tai raskauden kannalta
• Heikko B• heikko B-antigeeni hankaloittaa
veriryhmän määrittämistä • ei ole merkitystä äidin tai raskauden
kannalta• henkilöä pidetään O-veriryhmään
kuuluvana
6www.veripalvelu.fi
Rh-veriryhmäjärjestelmä
• monimuotoisin veriryhmäjärjestelmä• koostuu n. 50 antigeenistä• Rh-fenotyypillä tarkoitetaan
yleisimmin määritettäviä Rhesus-veriryhmäjärjestelmän antigeenejä: D, C, c, E, e
• veriryhmävasta-aineet kohdistuvat yleisimmin näitä antigeenejavastaan
• RhD positiivisia on suomalaisista 87% ja negatiivisia 13%
• RhD negatiivisilta D-antigeeni puuttuu punasolun pinnalta
www.veripalvelu.fi 7
RhD-antigeeni
• D-antigeeni on Rh-veriryhmä-järjestelmän immunogeenisinpunasoluantigeeni
• ilmenee punasoluissa jo 8. raskausviikolla
• erityisen tärkeä huomioida, jotta anti-D immunisaatiolta vältytään
• D-antigeenin esiintyvyys vaihtelee väestöjen välillä
• valkoihoisilla esiintyvyys 85%• afrikkalaisilla 92%• aasialaisista peräti 99% väestöstä
on D-positiivisia
www.veripalvelu.fi 8
RhD-antigeenin eri muodot• D-antigeenin osoituksessa normaalia
heikompi reaktio• D-antigeenin määrä on normaalia pienempi
tai sen rakenteessa on muutoksia• D-variantit
• variantteja tunnetaan yli 200, uusia löytyy jatkuvasti
• yleisyys n. 0,3 – 1,7 %
• variantit tunnistetaan genotyypittämällä
• heikko D tyyppi 1, 2 ja 3• henkilö on RhD positiivinen
• kaikki muut variantit• henkilö on RhD negatiivinen• anti-D –suojaus tarvittaessa
Vuonna 2015 löydetyt D-variantit
www.veripalvelu.fi 9
Sikiön veriryhmämäärityksetÄidin plasmasta
• RhD-veriryhmämääritys:• sikiön RHD-veriryhmä voidaan määrittää äidin
plasmasta anti-D suojauksen kohdentamiseksi niille äideille, joiden sikiö on RhD positiivinen
• näyte otetaan raskausviikolla 24-26• immunisoituneen äidin plasmasta voidaan
määrittää sikiön RHD-veriryhmäraskaudenaikaisen seurannan ja hoidon suunnittelemiseksi
• näyte voidaan ottaa aikaisintaan raskausviikolla 16
Lapsivedestä• tutkimuksella tunnistetaan RH C, c, E, e, (RH D), K
(Kell)• muille ei suurta tarvetta• lapsivesinäyte (n. 10 ml ruiskussa) voidaan ottaa
aikaisintaan raskausviikolla 16 riittävän solumäärän varmistamiseksi
www.veripalvelu.fi 10
Sikiön RhD-veriryhmän määritys äidin näytteestä
• äidin verenkierrossa on vapaata sikiöperäistä DNA:ta
• Lo et al., Lancet 1997• peräisin istukasta• fragmentoitunutta, pääasiassa <200 bp• määrä kasvaa raskauden edetessä
• sikiöperäinen DNA hajoaa nopeasti synnytyksen jälkeen
• tulokset voidaan liittää meneillään olevaan raskauteen
• äidistä voidaan ottaa verinäyte missä laboratoriossa tahansa
• ei näytteenotosta aiheutuvaa riskiä sikiölle
www.veripalvelu.fi 11
Menetelmä
• menetelmänä reaaliaikainen PCR (rtPCR)• TaqMan-kemia• tutkitaan eksonit 5 ja 7
• tulos perustuu Ct-arvoon (Cycle threshold), joka on se monistumiskierros, jossa fluoresenssi nousee yli taustafluoresenssitason
• Ct-arvo on riippuvainen DNA:n määrästä• RHD pos äitien näytteet monistuvat alhaisella
Ct-arvolla• noin 0,5% RhD neg äideistä kantaa varianttia
www.veripalvelu.fi 12
Tulokset
www.veripalvelu.fi
• tutkittuja näytteitä 2015• noin 6100 näytettä, joista
• RHD positiivisia n. 4000 (65%) • RHD negatiivisia n. 2100 (34%)• epäselviä 55 (n. 1%)
• herkkyys 99,9 % ja spesifisyys 98,9 %
• epäselvistä tuloksista suurin osa johtuu RHD-varianteista• äidin D-variantti peittää sikiön tuloksen
13
Veriryhmävasta-aineet• immunisaation seurauksena valkosolut tunnistavat
vieraat antigeenit ja tuottavat spesifisiä vasta-aineita antigeenejä kohtaan
• vasta-aineet voivat olla• luonnollisia
• isoagglutiniinit anti-A ja anti-B• anti-Lea ja anti-Leb
• autovasta-aineita• tarttuvat henkilön omiin punasoluihin• usein vailla spesifiteettiä, esim.
panagglutiniini• kliinisesti merkityksellisiä
• aiheuttavat vastasyntyneen hemolyyttistätautia ja verensiirtoreaktioita
• spesifit vasta-aineet esim. anti-D (RH), anti-c (RH), anti-K (Kell), anti-Jka (JK)
• muodostuvat immunisoivien tapahtumien seurauksena (raskaudet, synnytykset, verensiirrot)
www.veripalvelu.fi
Vasta-aineet löytyvät seulonnassa tai veren sopivuustutkimuksissa
14
Vasta-aineiden seulonta
• kertoo onko tutkittavalla punasoluvasta-aineita
• seulonta tehdään käyttämällä testisoluja, joiden veriryhmätekijät tunnetaan
• testisolujen annetaan reagoida tutkittavan plasman kanssa
• jos plasmassa ei ole vasta-aineita, testisolut eivät agglutinoidu tulos on negatiivinen
• jos plasmassa on vasta-aineita, testisolut agglutinoituvat tulos on positiivinen
• positiivisen seulontatuloksen syy on selvitettävä vasta-ainetunnistus
www.veripalvelu.fi 15
Vasta-aineiden tunnistaminen
• vasta-ainetunnistuksella selvitetään tarkemmin, onko tutkittavalla sellaisia vasta-aineita, jotka voivat aiheuttaa vastasyntyneen hemolyyttistätautia
• tunnistuksessa käytetään samaa menetelmää kuin seulonnassa, mutta useampaa testisolua, joiden veriryhmätekijät tunnetaan
• vasta-aineiden tunnistukseen kuuluu myös niiden punasolutekijöiden määrittäminen, joita vastaan on todettu vasta-aineita fenotyypitys
• Rh-vasta-aineiden kohdalla määritetään aina Rh-fenotyyppi
• tietoa käytetään tarvittaessa mm. sopivan veren valintaan synnytyksen yhteydessä
www.veripalvelu.fi 16
Vasta-ainetason määritys
• titraamalla• laimennossarja 1:2, 1:4, 1:8, 1:16,
1:32, 1:64 jne.• vasta-ainetaso on noussut kun titteri
kasvaa yli yhden pykälän• titteri 1 4 = on noussut• titteri 16 32 = ei ole noussut
• anti-D kvantitaatio• tehdään kun titteri ≥16• virtaussytometrinen menetelmä
www.veripalvelu.fi 17
Kiitos
www.veripalvelu.fi 18
top related