virusne bolesti prenosive hranomnamirnice.vet.bg.ac.rs/001 studentski folder/newsas_bhap/08...
Post on 18-Oct-2020
18 Views
Preview:
TRANSCRIPT
VIRUSNE BOLESTI PRENOSIVE HRANOM
Prof. dr Mirjana Dimitrijević
Prenos virusa i kontaminacija
hrane
RIZIČNA HRANA
Bolesti
Gastroenteritis Hepatitis Ostalo
Norovirus
Hepatitis A virus
Enterični adenovirusi
(tip 40/41)
Hepatitis E virus (prenosivi vodom)
Enterovirus
Humani Rotavirus
(grupe A–C)
Sapporo-like calcivirusi
Astrovirusi
Coronavirus
Aichi virus
ALIMENTARNI VIRUSI
ROD POPULARAN NAZIV BOLEST
Enterovirus Polio Paraliza, meningitis, groznica
Coxsackie A, B Herpangina,Meningitis, groznica,
Respiratorne bolesti, miokarditis,
srčane mane, osip, dijabetes
Echo Meningitis, groznica, Respiratorne
bolesti osip, gastroenteritis
Hepatovirus Hepatitis A Hepatitis
Reovirus Humani reovirus Nepoznata
Rotavirus Humani rotavirus
Gastroenteritis
Mastadenovirus Humani adenovirus Gastroenteritis, Respiratorne
bolesti, konjuktivis
Norovirus Norwalk-like virus Gastroenteritis
Sapovirus Sapporo-like virus Gastroenteritis
Hepervirus Hepatitis E Hepatitis
Mamastrovirus Humani astrovirus Gastroenteritis
Parvovirus Humani parvovirus Gastroenteritis
Coronavirus Humani coronavirus Gastroenteritis, respiratorne bolesti
Torovirus Humani torovirus Gastroenteritis
-Stari naziv „Norwalk-like virus“
-NoV grupa virusa, spada u porodicu Caliciviridae i sačinjava jedan od pet rodova. - Lagovirus, Nebovirus, Vesivirus i Sapovirus.
-NoV je mali okrugli virion, veličine 27- 35 nm, s jednolančanim pozitivno orijentisanim RNK genomom od 7400- 7700 nt
GII.4 – 2006b
EPIDEMIOLOGIJA
Postoji nekoliko faktora koji dovode do eksplozivnog izbijanja
epidemija izazvanih norovirusima:
• niska infektivna doza (10–100 virusnih čestica)
• visoka infektivnost
• prisustvo virusa u životnom okruženju
• otpornost u okolini
• mogućnost prenosa na više načina, kratka inkubacija (1–3
dana)
• prolongirano oslobaĎanje virusa od strane kako
asimptomatski tako i simptomatski obolelih osoba (108 – 1012
kopija virusa po gramu)
• izostanak stvaranja dugotrajnog imuniteta (max. 18 meseci)
• Deca • Trudnice • Starije i
imunokompromitovane osobe
“YOPI”
Epidemije su zabeležene nakon konzumacije:
- školjki (Dowell et al., 1995; Christensen et al., 1998; Berg et
al., 2000; Simmons et al., 2001),
- peciva (Kuritsky et al., 1984),
- delikatesnih proizvoda od mesa (Schwab et al., 2000),
- sendviča (Parashar et al., 1998; Daniels et al., 2000),
- malina (Ponka et al., 1999),
- vode i leda (Beuret et al., 2002).
CDC - od 284 epidemija gastroenteritisa izazvanih norovirusom, od jula 1997. do juna 2000., put prenosa nije ustanovljen kod 42 (24%) (Fankhauser et al., 2002).
SAPOVIRUSI Sapporo-like viruses -SLV Epidemija virusnog gastroenteritisa je prijavljena u 23 škole u Parkville, Mariland, 1997. Utvrđeno je da je hrana bila izvor, a Sapovirus kasnije je označen kao virus Parkville (Noel et al., 1997).
HUMANI ROTAVIRUS -HRV
- Porodica Reoviridae, rodu Rotavirus
11 segmenata dvolančane RNK.
Segmentirani genom objašnjava njihovu izrazitu genetičku
varijabilnost i mogućnost mešovitih infekcija u istom domaćinu.
Rotavirusi su svrstani u sedam seroloških grupa (A – G).
- akutni gastroenteritis
- najčešće virus grupe A
- kod dece (od 3 meseca do 2 godine) je poznata pod nazivom
dečiji proliv
HRV
. Fekalno-oralni put i izazivaju bolesti ljudi i životinja, posebno domacih. Iako se sojevi virusa koji izazivaju infekciju kod životinja i ljudi uglavnom razlikuju, neki sojevi su usko povezani pa se javljaju i unakrsne infekcije među vrstama (Satar i dr., 2001).
ADENOVIRUSI Entero-adenovirusi su nakon rotavirusa, drugi najvažniji uzročnik akutnog gastroenteritisa kod dece do 4 godine starosti (Allard et al., 1990, Bresee i Glass, 1999). Adenovirusi se mogu preneti sa čoveka na čoveka direktnim kontaktom ili fekalno-oralnim, respiratornim ili ekološkim putem. Identifikovani su u različitim uzorcima životne sredine, uključujuci otpadne vode, mulj, školjke, morsku vodu, površine i vodu za pice. Prijavljene su epidemije gde je hrana bila put prenosa, ali i gde nije, a takođe su negde izvori ostali neprepoznati. Nema dokaza o pojavi bolesti nakon konzumacije kontaminiranih školjki.
ASTROVIRUS
Astrovirusi pripadaju porodici Astroviridae koja sadržava
dva roda: Astrovirus i Mamastrovirus
Malobrojni su epidemiološki dokazi o prenosu astrovirusa putem hrane, ali su prijavljene infekcije nakon konzumiranja kontaminiranih školjki i vode (Oishi et al., 1994; Appleton, 2001). Velika epidemija akutnog gastroenteritisa u Japanu bila je 1991., kada je obolelo hiljade dece i odraslih iz 14 različitih škola (Oishi et al., 1994). Postoji nekoliko izveštaja iz Japana da je astrovirus identifikovan u školjkama, kao i dokazi o pojavi gastroenteritisa prouzokovanog kontaminiranim kamenicama (Kitahashi et al., 1999).
Jedini pripadnik roda Hepatovirus, porodica Picornaviridae
HEPATITIS A
U SAD - vodeci uzročnik hepatitisa, sa mortalitetom od 0,3%. Međutim, stvarna incidenca je 10 puta veca od broja prijavljenih slučajeva. Između 1980. i 2001. godine, CDC je registrovao prosečno oko 25.000 slučajeva godišnje, ali kada su podaci korigovani, prosečan broj je iznosio oko 260.000 godišnje (Fiore, 2004).
Infekcija hepatitisom A javlja se širom sveta, a posebno u zemljama u razvoju, gde je zaraženo više od 90% dece starosti od 6 godina, pri čemu je infekcija kod njih često asimptomatska.
Inkubacija bolesti je u proseku 28 dana, a može biti od 15 do 50
Školjke – Kina, Australija, Brazil, Italija, Španija
1988.god. --- 300.000 ljudi
Rod Hepevirus, porodica Hepeviridae, kao jedini predstavnik.
HEPATITIS E
Naročito je rasprostranjen u Aziji, severnoj Africi i Latinskoj Americi, uključujuci Meksiko. Prenos infekcije je generalno preko fekalno zagađene vode. Epidemije gde je hrana put prenosa se javljaju u zemljama u razvoju, gde je neadekvatna sanitacija životne sredine. Zoonotski aspekt ?
PREVENCIJA VIRUSNIH INFEKCIJA PRENOSIVIH HRANOM
- sprečavanje direktnog kontakta fekalnog materijala (u nekim slučajevima i sadržaja izbačenog povracanjem) sa hranom. - prevencija izlivanja otpadnih voda u uzgajališta školjki.
- u proizvodnim pogonima je neophodno poštovanje zahteva GHP i GMP, s posebnim osvrtom na ličnu higijenu radnika. -pravilno održavanje lične higijene, uključujuci upotrebu zaštitne opreme i dekontaminaciju ruku i radnih površina. - kontinuirane edukacije radnika koji rukuju hranom
KORELACIJA IZMEĐU BAKTERIJA – INDIKATORA I VIRUSA U HRANI I VODI
Bakterije koriste kao indikatori virusa moraju posedovati sledece karakteristike : • da prisustvo bakterija bude u korelaciji sa prisustvom crevnih virusa u datom okruženju; • kada je bakterija indikator prisutna u malim koncentacijama ili je nema, ne bi trebalo da bude ni virusa u istom okruženju; • kada je broj indikatora visok, radi se češca detekcija virusa • bakterije indikatori ne bi trebalo da budu patogene, što pojednostavljuje procedure za njihovu identifikaciju i smanjuje rizik slučajnog zaražavanja laboratorijskih radnika.
Tabela 2. Korelacija između prisustva bakterija indikatora i virusa u vodi i školjkama
Bakterija indikator Virus Rezultat Referenca
Svi koliformi, fekalni
koliformi
Enterovirusi (infektivni) Virus je izolovan iz
ostriga i uzoraka vode
gde su gajene, iako je
voda zadovoljavala
uslove standarda za
bakterije indikatore
Goyal i sar. 1979.
Svi koliformi, fekalni
koliformi
Enterovirusi (infektivni) Virusi su izolovani iz
35% uzoraka vode za
uzgajanje ostriga, dok su
ostrige zadovoljavale
standarde
Gerba i sar. 1979.
Svi koliformi, fekalni
koliformi
Enterovirusi (infektivni) Virusi izolovani kod 12%
uzoraka ostriga iz
zatvorenih područja, ali
nisu nadjeni u ostrigama
otvorenih voda
Sobsey i sar., 1980.
Fekalni koliformi Enterovirusi (infektivni) Nivo fekalnih
koliformnih bakterija u
vodi nije odgovarao
nalazu virusa u vodi
Ellender i sar., 1980.
Svi koliformi, fekalni
koliformi
Enterovirusi (infektivni) Virusi su izolovani iz
školjki i sa zatvorenih i
otvorenih područja
Wait i sar., 1983.
Fekalni koliformi Enterovirusi, rotavirusi i
hepatitis A (detektovani
RT-PCR)
Nije pronađena veza
između virusa i bakterija-
indikatora u školjkama
E Guyader i sar.,
1993.,1994.
Fekalni koliformi,
fekalne streptokoke
Enterovirusi, rotavirusi i
hepatitis A (detektovani
RT-PCR)
Virusna kontaminacija
rečnih voda je odgovarala
nalazu bakteriofaga, ali
ne i bakterija indikatora
Baggi i sar. 2001.
Fekalni koliformi Enterovirusi i norovirusi
(detektovani RT-PCR)
Infektivni enterovirusi
nisu detektovani u rečnoj
vodi, koncentracija
koliforma nije odgovarala
virusnom genomu
Skraber i sar. 2004.
Za međunarodno usaglašenu procenu širenja alimentarnih virusnih patogena formirana je saradnja između 12 laboratorija u 9 zemalja u Evropi. Projekat je koordinisan od strane Nacionalnog instituta za javno zdravlje i životnu sredinu u Bilthovenu, Holandija.
Microbiology of food and animal feed
- Horizontal method for determination of hepatitis A virus and norovirus in food using
real-time RT-PCR
ISO/TS 15216-1
PCR - Polymerase Chain Reaction (lančana reakcije polimeraze)
Revolucionarni metod koji je osmislio Kary Mullis (1983.) - 1993. Nobelova nagrada
Polimeraza lančana reakcija (polymerase chain reaction - PCR) - in vitro metod, prajmerom dirigovano umnožavanje kratke specifične sekvence nukleinske kiseline
RT-PCR se koristi za kvalitativno detekciju ekspresiju gena kroz stvaranje komplementarna DNK (cDNK) transkripata iz RNK, nakon toga novosintetisana cDNK amplifikuje metodom tradicionalnog PCR.
RT - PCR (Reverse transcription - PCR)
One Step / Two Step
Real Time PCR
Reakciona smeša za PCR
Real Time PCR reakcija
sadrži :
-DNK polimerazu -dNTP -par prajmera (forward & reverse) -Mg2+, pufer
-PROBA
Real Time PCR je modifkovni PCR koji omogućuje praćenje amplifikacije (akumulacije amplifikata) u „realnom vremenu“, tj. u/kroz svaki ciklus.
Materijal za pregled
DIGESTIVNA ŽLEZDA
Mediteranska dagnja ( M. Galloprovincialis)
2 g
OSLOBAĐANJE VIRUSA IZ TKIVA UZ POMOĆ PROTEINAZE K, KOJA SE UZORKU DODAJE U ODNOSU 1:1
IZOLACIJA RNK VIRUSA Izolacija intaktne RNK iz celijskih linija i tkiva, kao i njena karakterizacija neophodan je korak u izučavanju celijski specifične genske ekspresije, mehanizama koji regulišu gensku ekspresiju, kao i u svim procedurama koje iziskuju pravljenje komplementarne DNK (cDNK).
Eliminisati svaku potencijalnu mogucnost za dejstvo endogenih ili egzogenih RNaza
guanidin izotiocijanat ( GITC )
„NucliSens magnetic extraction kit“
NucliSENS® miniMAG®
1. Pripremimo i obeležimo epruvete
2. Odlijemo supernatant
3. NucliSens Lysis buffer (GITC)
Čuvanje i stabilizacija startnog materijala za izolaciju RNK
RNK u tkivu nije zaštićena nakon izolacije tkiva ili ćelija, sve dok se uzorak ne tretira sa RNK stabilizujućim reagensom (t.zv. RNAlater RNA stabilization reagent). Uzorci se čuvaju uranjanjem u odgovarajuću količinu RNK stabilizujućeg reagensa, ODMAH nakon izolacije startnog materijala. Ovaj postupak sprečava svaku nepoželjnu promenu u genskoj ekspresiji, RNK degradaciju, kao i indukciju novih gena, tokom perioda čuvanja RNK.
Uzorci tretirani RNAlater-om stabilni su: • 1 dan na 37˚C • 7 dana na 18-25˚C • 4 nedelje na 2-8˚C (u frižideru) • Neograničeno dugo na -20˚C ili -70˚C
Fluorescentne probe
1. Interkalirajuce fluorescentne boje koje se nespecifično vezuju za dvolančani DNK molekul - SYBR®Green
2. Fluorescentne probe koje su sekvencno-specificne. Takve fluorescentne probe sadrže oligonukleotid obeležen reporterskim molekulom na 5’-kraju koji emituje fluorescentni signal, i „quencher“, na drugom 3’-kraju, koji prigušuje (suprimira) fluorescentni signal. (*Taq Man probe )
Aparatura za Real Time RT PCR metodu
Osnovni elementi:
1. amplifikacijska kriva 2. treshold 3. Ct vrednost (Cycle threshold)
Ct vrednost definiše broj ciklusa kada amplifikacijska kriva preseče threshold
Amplifikacijska kriva
Što je polazna količina matrice (DNK) veca, to se ranije dostiže Ct. Zbog toga što je moguce pratiti amplifikaciju polazne količine target sekvence u svakom ciklusu, za ovu reakciju se kaže da se odigrava u realnom vremenu.
HVALA VAM NA PAŽNJI
top related