yeimy lizeth betancur gÓmez
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CUANTIFICACIÓN DE TIOLES LIBRES Y SUPEROXIDO
DISMUTASA (SOD) EN EXTRACTOS METANOLICOS DE
LAS PLANTAS PERTENECIENTES A LAS FAMILIAS
ASTERACEAE, EUPHORBIACEAE Y PIPERACEAE
Grupo de Biotecnología - Productos Naturales
Universidad Tecnológica de Pereira
YEIMY LIZETH BETANCUR GÓMEZ
1
TABLA DE CONTENIDO
• MARCO TEÓRICO
• JUSTIFICACIÓN
• OBJETIVOS
• METODOLOGÍA
• RESULTADOS Y DISCUSIÓN
• CONCLUCIONES
• RECOMENDACIONES
• BIBLIOGRAFÍA
• AGRADECIMIENTOS
2
1. MARCO TEÓRICO
3
COMPUESTOS ANTIOXIDANTES
Moléculas capaces deneutralizar la acción nocivade los radicales libres
Prevención
Intercepción
Reparación
4
5
Mn-SODGSH GPx
CAT
Cu-Zn SODGPxGSH
2H2O2 2H2O + O2
COMPUESTOS ANTIOXIDANTES
Sistema de defensa antioxidanteEnzimático
CATGPx
SOD 2H2O2 + O22O2●-+ 2H+
H2O2 + 2GSH H2O + GSSG
6
SOD: Superóxido dismutasa.CAT: CatalasaGPx: Glutationa peroxidasa
COMPUESTOS ANTIOXIDANTES
7
Sistema de defensa antioxidante
No Enzimático
Endógenos
Exógenos
Fitocompuestos
O
OH
OH
OH OH
O
N
H
NH
N
H
N
H
O
O
O
OH NHNH
O
NH2
O SH
O
OH
O
Ácido úrico
Glutationa
Ácido ascórbico
COMPUESTOS ANTIOXIDANTES
Antraquinonas
Fenoles
Betalainas
Cumarinas
Lignanos
Carotenoides
8
Esteroides
O
O
R1
R2
R3R6
R8
NH
O
OH O
OH
N+
R3
R2
R1
O O
CH3 CH3
CH3
CH3 CH3
CH3CH3 CH3
CH3 CH3
R1
R2R3
OH
R
R
OH
RADICALES LIBRESRadicales centrados en el Oxígeno (ROS)
Radicales centrados en el Nitrógeno (RNS)
Radicales centrados en el Carbono(RCS)
Radiaciones ionizantes
Radiación UV ContaminaciónBiológicas
Respiración mitocondrial
Oxidación peroximal de ácidos grasos
9
ESPECIES REACTIVAS DE OXÍGENO (ROS)
O2●- Radical Superóxido
H2O2 Peróxido de hidrógeno
●OH Radical hidroxilo
10
PUFA: Ácidos grasos poliinsaturadosRCS: Especies reactivas de carbono
O2 O
2. -
1/2O2.
hv
+ e -
H +
+ e -
H +
H2O
2
+ e -
H +
+ e -
H +.OH
+ e -
H +OH
2
RCS
PUFA
INTERACCIÓN ROS Y BIOMOLECULAS
Lípidos ADN Proteínas
• Oxidación demembranascelulares
• Modificación de bases nitrogenadas
• Modificación de laestructura terciaria
• Derivados α-hidroxilados
11
TIOLES COMO AGENTES ANTIOXIDANTES
R – SHTioles
Buenos nucleófilos
Buenos nucleófilos
Importancia biológica
Enlace S-H más débil
12
TIOLES CON IMPORTANCIA BIOLÓGICA
CH3NH
O
SH
H
OH
O
N- acetil-L- Cisteina
NH
S
OH
O
Tiazolodina-4- ácido carboxilico
• Previenen formación
de carcinogénesis
• Previenen desarrollo
de tumores
• Acción antioxidante
frente al radical O2●-
, H2O2
• La destoxificación de
drogas
• Sirve de cofactor en
reacciones enzimáticas
• Evita propagación de
carcinogenesis
13
Glutationa
OH NHNH
O
NH2
O SH
O
OH
O
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTE in vitro
Depende del antioxidante y del medio de reacción
Estudia de la capacidad de una molécula para secuestrar un radical libre.
• Transferencia de un átomo de hidrógeno
• Transferencia de electrones
• Secuencial perdida de protón y transferencia de electrón
14
Tabla via de reacción y metodo
ENSAYOS PARA EVALUAR ACTIVIDAD
ANTIOXIDANTEENSAYO VIA
1,1 Difenil-2-picril-hidrazilo (DPPH)
Basado en la transferencia de electrones (ET)
Ácido 2,2’ azino-bis-3 etilbenzotiazolin-6-sulfonico (ABTS)
Poder reductor antioxidante del hierro (FRAP)
NN- dimetil-p fenilendiamina (DMPD)
Capacidad de reducción antioxidante del cobre (CuPRAC)
Capacidad de absorción del radical oxígeno(ORAC)
Basado en la trasferencia de átomos de hidrógeno (HAT)
Parámetro antioxidante de captura de radicales (TRAP)
Inhibición de la oxidación del ácido linoleico
Inhibición de la oxidación de lípidos de baja densidad (LDL)
15
Fitocompuestos
16
Actividades Biológicas
Actividad Antioxidante
AsteraceaeEuphorbiaceae
Piperaceae
ASTERACEAE
1700 géneros y 24000-30000 especies
Montanoa sp
Baccharis
Aspilia (Tiilesia Baccata)
ATINAS, L., GUTIÉRREZ, D. G., GROSSI, M. A., & CRISCI, J. V. (2007). Panorama de la familia Asteraceae en la Republica de Argentina.
17
EUPHORBIACEAE
317 géneros y cerca de 8100 especies
• 78 Géneros• 390
Especies
COLOMBIA
Hyeronnima macrocarpa
(UTP42)
Crotón Magdalenensis
Maya , C., & Agudelo, C. (2009). Estudio Taxonomico de la Familia Euphorbiaceae en el Quindio
18
PIPERACEAE
10 géneros y 3600 especies
Piperomia acuminata
Piper Eriopodon
Piper umbellatum
http://exa.unne.edu.ar/biologia/diversidadv/documentos/ANGIOSPERMAS/Angiospermas%20Basales%20y%20Clado%20Magnolides/Clado%20Magnolides/Piperales/Piperaceae.pdf
19
2. JUSTIFICACIÓN
20
JUSTIFICACIÓN
Estrés oxidativo
Enfermedades cardiovasculares
17 millones de muertes
Diabetes1.3 millones de
muertes
Cáncer14.1 millones de casos nuevos de cáncer y 8.2
millones muertes
O2
2012
ROS>Sistema antioxidante
21
JUSTIFICACIÓN
AntraquinonaCumarina
Flavonoides
• Tumorigénicos• Carcinogénicos
22
SHR
Tioles
O
O
O
R1
R2
R3R6
R8
O O
OHCH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
CH3
Butilhidroxitolueno (BHT)
O
CH3
CH3
CH3
CH3
OH
Butilhidroxianisol (BHA)
O RO
OH
Parabenos
JUSTIFICACIÓN
AsteraceaeEuphorbiaceae
Piperaceae
Tioles
Miméticos de SOD
23
ÁNALISIS CIENSIOMETRICO
24
Cuantificación de tioles en extractos de plantas
3. OBJETIVOS
25
OBJETIVO GENERAL
Cuantificar tioles libres y moléculas enequivalentes de SOD mediante la implementaciónde curvas de calibración con Glutationa (GSH) ySuperóxido Dismutasa (SOD).
26
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Determinar la concentración de tioles libres presentes en losextractos metanólicos de las familias en estudio implementandométodos colorimétrico.
• Evaluar la concentración de moléculas capaces de dismutar elradical Superóxido, en equivalentes de SOD presente en losextractos en estudio, que obtuvieron una concentración detioles libres considerable, mediante la implementación detécnicas fotométricas
• Determinar la capacidad captadora de radicales libres (%AA)mediante el método de DPPH• en los extractos metanólicos delas especies que presenten mayor concentración de tioles.
27
4. METODOLOGÍA
28
MATERIAL VEGETAL
Francisco Javier
Roldan
Parque Regional Natural Ucumarí
Parque Natural Regional Barbas-Bremen
29
MATERIAL VEGETAL
• Se evaluaran 32 especies pertenecientes a lasfamilias Asteraceae, Euphorbiaceae y Piperaceae
30
MATERIAL VEGETAL
FAMILIA ESPECIE FJR UTP
Asteraceae
Mikania bonistenae 3965 124
Mikania lloensis 3977 136
Aspilia (Tilesia baccata) 3974 133
Pentacalya urbanii 3963 122
Vernonia 3976 135
Citroniella 3968 127
Clibadium pentaneaen 3966 125
Baccharis 3972 131
Mikania leiostachya benth 3175 22
Quinqueneruis spp 3750 81
Montanoa sp 3749 80
Citronella acuminata 4049 195
31
MATERIAL VEGETAL
Familia Especie FJR #UTP
Euphorbiaceae
Hyeronima 3971 130
Alchornea grandis 3982 140
Alchornea calophylla 3969 128
Acalypha diversifolia 3967 126
Croton magdalenensis Mull. Arg. 3736 70
Alchornea glandulosa poepp 3742 75
Sapium stylare Mull. Arg. 3160 7
Hyeronima antioquiensis 3905 85
Acalypha paltyphylla 3910 90
Alchormea grandiflora Mull. Arg. 3727 63
Acalypha macrostachya 3738 72
Hyeronnima macrocarpa Mull. Arg 3196 42
32
MATERIAL VEGETAL
Familia Especie FJR #UTP
Piperaceae
Piper crassinervium 4021 167
Piper pesaresanum 3996 148
Piper umbellatum 4012 163
Piperomia acuminata 4002 154
Piper eriopodon 4007 158
Piper glanduligerum 4026 172
Piper calceolarium 4048 194
Piper Daniel-gonzalezii 4051 197
33
OBTENCIÓN DE LOS EXTRACTOS
VEGETALES
Parte aérea 50°C x 72 h
Metanol >DCM>Hexano
Polaridad
34
Rotulados y almacenados a 4°C
METODOLOGÍA
35
Blanco fotométrico
Blanco de la muestra
Estrategia de evaluación fotométrica para los ensayos In vitro
CUANTIFICACIÓN IN VITRO DE TIOLES
LIBRES POR EL ENSAYO DE ELLMAN
412 nm
36
N+ O
-O
S
S
O
OHN
+O
-
O
O
OH
S-
R1
N+ O
-O
S
S
R1
S-
O
O-
NOH
OH
S-
R2
S
S
R1
R2
S-
O
O-
NOH
OH
+ + 2
Ácido 5-5' Ditiobis 2-Nitrobenzoico (DTNB)
2-nitro-5-tiobenzoato (TNB)
TNB
37
CUANTIFICACIÓN IN VITRO DE TIOLES
LIBRES POR EL ENSAYO DE ELLMAN
Espectrofotómetro Microplacas
MULTISKAN GO THERMO SCIENTIFIC
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑀𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐹
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜
𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
CUANTIFICACIÓN DE TIOLES CON DTNB
GSH (µL)Buffer de
Na2HPO4 (µL)SSA (µL)
Concentración final
nmol/µLnmol/µL*125µL
(nmol)
0 380 120 0 04 376 120 0.02 2.58 372 120 0.04 5.016 364 120 0.08 10.032 348 120 0.16 20.064 316 120 0.32 40.0128 252 120 0.64 80.0160 220 120 0.8 100.0
Muestra: Tomar 95 µL de extracto + 30µL de buffer de
Na2HPO4 0,5M
Estándar: Preparar los patrones para curva y tomar
125 µL
Adicionar en la celda correspondiente
Adicionar 125 µL DTNB a 10nM
Agitar e incubar 15 min a temperatura
ambiente
Leer Absorbancia a 412 nm
38
CUANTIFICACIÓN DE LA SUPERÓXIDO
DISMUTASA
529 nm
39
p-Sulfobenceno-azo--naftilamina(Rosa)
HNO2 + H2O + HCl
Cloruro de hidroxilamina
Ácido nitroso
NH2
SO3H
+ HNO2
N
SO3H
NH
H2O
NH2
+
N
SO3H
N
NH2
+ H2O
Ácido sulfanilíco Ácido sulfanilíco diazotonizado
-Naftilamina
N
NH
O
O
NH
N N
NH
O
O
NH
N
OH + H2O + O2
°-
Xantina
Xantina oxidasa
Radical Superóxido
H2N OH HCl +O2•-
CUANTIFICACIÓN DE SUPERÓXIDO
DISMUTASA
Espectrofotómetro MicroplacasMULTISKAN GO THERMO
SCIENTIFIC
40
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑀𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐹
−𝐿𝑜𝑔 (𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛) =𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 + 𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜
𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 10−
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎+𝐼𝑛𝑡𝑒𝑟𝑐𝑒𝑝𝑡𝑜𝑃𝑒𝑛𝑑𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒
CUANTIFICACIÓN CON SOD
Patrón Buffer de fosfatos
(µL)
Agua (µL)
Xantina (µL)
Cloruro de hidroxilami
na (µL)
SOD D2 (µL)
Xantina oxidasa
(µL)1 150 45 15 15 0 752 150 40 15 15 4.5 753 150 36 15 15 9.0 754 150 27 15 15 18.0 755 150 18 15 15 27.0 756 150 9 15 15 36.0 75
Preparación de la muestra150 µL Buffer KH2PO4 , pH 7,85 µL de extracto40 µL de agua des ionizada15 µL de Xantina15 µL Hidroxilamina hidroclorada 1mM75 µL Xantina Oxidasa 0,2mg Prot /mL
Estándares
Preparar los patrones para la curva de
calibración usando SOD
Dejar reaccionar durante 20 minutos a temperatura ambiente y
en lugar oscuro. Detener la reacción en baño de hielo
Adicionar 100 µL de Ácido sulfanílico
19 mM y α-Naftilamina 7 mM
(Antes que las muestras)
Adicionar 100µL de muestra
Incubar 20 min a temperatura ambiente
Medir absorbancia a 529 nm
41
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR EL
ENSAYO CON DPPH∙
AH A●
517 nm
Morado Amarillo
1,1-Difenil-2-picril-hidrazilo (DPPH)
1,1-Difenil-2- picril-hidrazilo (DPPH H)
42
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE POR EL
ENSAYO CON DPPH∙
Adicionar en la celda correspondiente 25 µL de la
muestra
Adicionar en la celda 100 µL de solución (20mg/L)
de DPPH∙
Incubar por 30 min en lugar oscuro y a temperatura
ambiente
Leer absorbancia a 517 nm
Calcular %AA
Control+: Hidroquinona1000 ppmControl - : 25µL MeOH +100 µL solución DPPH
43
%𝐴𝐴 =𝐴𝑏𝑠𝐶𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐴𝑏𝑠𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙∗ 100
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
44
CURVA DE CALIBRACIÓN PARA TIOLESEstándar
Concentración STD
(nmol de GSH)Absorción(ABS)
1 0 0,4702
2 2,5 0,5311
3 5 0,6155
4 10 0,7276
5 20 1,1148
6 40 1,7507
7 80 3,0483
8 100 3,5851
45
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑀𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐹
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 =𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 0.4586
0.0317
CUANTIFICACIÓN DE TIOLES EN LOS
EXTRACTOS
Piperomia acuminata
Piper eriopodon
Piper umbellatum
>89 nmol GSH/mg
Montanoa
Baccharis
Aspillia(tilesia
baccata)
Mikania llinensis
>90nmol GSH/mg
Croton
magdalenensis
101.8117
nmolGSH/mg
46
CURVA DE CALIBRACIÓN PARA SOD
y = 0,1991x - 0,1585R² = 0,9989
0,00000
0,02000
0,04000
0,06000
0,08000
0,10000
0,12000
0,14000
0,16000
0,18000
0,20000
0,000000,20000 0,40000 0,60000 0,80000 1,00000 1,20000 1,40000 1,60000 1,80000 2,00000
AB
SOR
BA
NC
IA
-LOGARITMO DE LA CONCENTRACIÓN
StdConcentración
(Units SOD)-log[ ] ABS
2 0,0187 1,7277 0,1858
3 0,0374 1,4267 0,1235
4 0,0749 1,1256 0,0698
5 0,1123 0,9495 0,0295
6 0,1497 0,8247 0,0048
47
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝐴𝑏𝑠𝑀𝑒𝑧𝑐𝑙𝑎 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝑀 − 𝐴𝑏𝑠𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 𝐹
−𝐿𝑜𝑔 (𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛) =𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 + 0.1585
0.1991
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 = 10−
𝐴𝑏𝑠𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎+0.15850.1991
CUANTIFICACIÓN DE SOD EN LOS
EXTRACTOSMikania bonistenae
3,3045 Units SOD/mg
Lepidaploa lehamannii
1,06885 Units SOD/mg
Hyeronnima macrocarpa
1,4952 Units SOD/mg
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
42 70 72 80 81 124 131 133 135 136 148 154 158 163 167 172 194
Co
nc
en
tra
ció
n d
e S
OD
(U
nit
/mL)
Extractos #UTP
48
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Po
rce
nta
je d
e c
ap
ac
ida
d a
nti
ox
ida
nte
Extractos # UTP
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE DE LOS
EXTRACTOSHyeronnimia
macrocarpa
95,9016%
Aspilia (tliesia
baccata)
95,9062%
Piper umbellatum
98,5895%
49
Control + : Hidroquinona a 1000 ppm
CORRELACIÓN %AA Y CONCENTRACIÓN
TIOLES
50
Spearman r 0.08824
CONFRONTACIÓN CONCENTRACIÓN
TIOLES Y EQUIVALENTES SOD
51
Spearman r -0.3848
OBJETIVO METODOLOGIA RESULTADO
Determinar la concentración de tiol
es libres presentes en los extractos
metanólicos de las familias en
estudio, con la implementación del
método colorimétrico.
Método colorimétrico usando
DTNB para la formación del
cromógeno TNB con máximo de
Absorbancia a 412 nm
Croton Magdalenensis, Euphorbiaceae 101.8117
nmolGSH/mg
Montanoa sp, Asteraceae
94.4106 noml GSH/mg
Baccharis, Asteraceae
98.4106 nmol GHS/mg
Aspillia(Tilesia Baccata), Asteraceae
92.3361 nmol GSH/mg
Mikania Llinensis, Asteraceae
97.2336 nmol GSH/mg
Piperomia acuminata , Piperaceae
89.7539 nmol GSH/mg
Piper eriopodon, Piperaceae
89.4622 nmol GSH/mg
Piper umbellatum, Piperaceae
89.5906 nmol/mg
Evaluar la concentración moléculas
en equivalentes de Superóxido
Dismutasa presente en los extracto
s en estudio.
Método fotométrico, generación de
radical superoxiodo el cual oxida la
hidroxilamina a nitrito y formación
de un complejo rosa con máximo
de absorción a 529 nm.
Hyeronnima macrocarpa, Euphorbiaceae
1,4952 Units SOD/mg
Mikania Bonistenae , Asteraceae
3,3045 Units SOD/mg
Lepidaploa Lehamannii , Asteraceae
1,06885 Units SOD/mg
52
OBJETIVO METODOLOGÍA RESULTADO
Determinar la capacidad
captadora de radicales libres
(%AA) mediante el método de
DPPH•.
Método de competencia, captura del
radical por la acción de compuestos con
naturaleza antioxidante.
Coloración amarilla con máximo de
absorbancia a 517nm.
Hyeronnimia macrocarpa ,
Euphorbiaceae 95,9016%
Aspilia (Tilesia baccata), Asteraceae
95,9062%
Piper umbellatum, Piperaceae
98,5895%
53
6. CONCLUSIONES
54
CONCLUSIONES• Las familias Asteraceae y Piperaceae se destacaron por su alta concentraión
de tioles, por su parte, para la familia Euphorbiaceae se destaca la especieCroton magdalenensis (UTP 70) que presento la concentración más alta detodas las especies que fueron estudiadas, con una concentración de101,8117 nmol/mg de extracto.
• Los extractos estudiados obtivieron baja concentración de moléculas enequivalentes SOD, pero se destacan las especies Hyeronnima macrocarpa(UTP 42, Euphorbiaceae) con una concentración de 1.4952 equivalentesSOD/ mg, Mikania Bonistenae (UTP 124) y Vernonia sp (UTP 135) de lafamilia Asteraceae con una concentración de enzima de 3,3045 y 1,0685equivalentes SOD/ mg, estás moléculas se asumen como miméticos de laSOD.
55
CONCLUSIONES
• Los extractos estudiados exhiben un buen perfil de actividad antioxidante,con valores superiores al 90%, por la técnica de DPPH• , valores que nopueden atribuidos únicamente a la acción de los compuestos tipo tiol,debido a que se trabajo con los extractos crudos.
56
7. RECOMENDACIONES
57
RECOMENDACIONES
• Realizar pruebas de cromatografía de capa delgada (TLC) parala identificar la presencia de tioles y caracterización de estosen los extractos metanólicos de las especies estudiadas en esteproyecto, a una concentración de 1000 ppm, mediante latécnica de cromatografía líquida de alta resolución HPLC.
58
8. BIBLIOGRAFÍA
59
BIBLIOGRAFÍA• Antioxidant activity of natural plant sources in dairy dessert (Sandesh)
under thermal treatment. Chakraborty, Runu, Raychaudhuri, Utpal yBandyopadhyay, Mahuya. 2008, Swiss Society of Food Science andTechnology, págs. 816-825.
• Plant in vitro culture for the production of antioxidants--a review.Matkowski, Adam. 2008, Biotechnology advances, págs. 548-60.
• Free Radicals and Antioxidants in Human Health:Current Status andFuture Prospects. Devasagayam, TPA, y otros, y otros. 2004, págs. 794-804.
• Superoxide Dismutase Multigene Family: A Comparison Of the CuZn-SOD(SOD1), Mn-SOD (SOD2) And EC-SOD (SOD3) Gene Structures, EvolutonAnd Expression. Zelko, Igorn, Mariani, Thomas J y Folz, Rodney J. 2002,Free Radical Biology & Medicine, págs. 337-349.
• Radicales libres y su papel en las enfermedades crónico-degenerativas.Maldonado Savedra , Octavio, y otros, y otros. 2010.
• Classical catalase: ancient and modern. Nicholls, Peter. 2012, Archives ofbiochemistry and biophysics, págs. 95-101.
60
BIBLIOGRAFÍA
• GLUTATIONA E ENZIMAS RELACIONADAS: PAPEL BIOLÓGICO EIMPORTÂNCIA EM PROCESSOS PATOLÓGICOS. Fátima, Ângelo, Huber,Paula C y Almeida, Wanda P. 2008, págs. 1170-1179.
• 14. Superoxide Dismutase (SOD),a Power ful Antioxidant,. Menvielle-Bourg, F .Joanny. 2005, Phytothérapie, págs. 1-4.
• Determination of glutatione, cysteine and N-acetilcysteine in rabbit eye tissuesusing HPLC and post-column derivatization with 5-5’-Dithiobis(2- nitobenzicacid). Nozal, M J, y otros, y otros. 1997, Journal of Chromatography, págs. 347-353.
• Antioxidants and human diseases. Rajendran, Peramaiyan, y otros, y otros.2014, Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry, págs. 332-347.
• Panorama de la familia Asteraceae (= Compositae) en la Republica deArgentina. KATINAS, LILIANA, y otros, y otros. 2007, págs. 113 - 129.
• García Barriga, Hernando. Flora Medicinal De Colombia, BotanicaMedica Tomo II. 1992.
61
BIBLIOGRAFÍA• FACENA.(UNNE). Guía de Consultas Diversidad Vegetal. FACENA (UNNE)
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AGRADECIMIENTOS
• Al profesor Oscar Marino Mosquera y JaimeNiño Osorio por su acompañamiento y guía parala realización de este proyecto.
• A la familia GB-PN, por su paciencia y amistadincondicional durante todo el desarrollo de estetrabajo.
• A mis padres por su apoyo, paciencia y esfuerzodurante el trascurso de mi carreara que ahora seve reflejado con la culminación de este proyecto.
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DPPH
• Ensayo rápido.
• No requiere de muchos reactivos
• El más evaluado a nivel mundial
• El radical implementado es estable, esta molécula no se dimeriza debido a la deslocalización de un electrón desapareado sobre la molécula completa
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PRINCIPALES TIOLES EN LAS PLANTAS
• Cisteina• Cistina• Tiocisteina• Cistationina• Homocisteina• Glutationa• Glutationa bisulfito• Glutamilcisteina• Homoglutationa• Hidroximetilglutationa• Cisteinamina• Metanotiol.
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