yersinia pestis

Yersinia pestisBlgo. Carlos A. Fernández Miñope – FernandezC4@gmail.com – Enero, 2014M.V. Nieves Vargas MachucaSegunda Especialidad en Microbiología ClínicaHospital Regional Lambayeque - Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo

Fuente DGE-MINSA

NORMA TÉCNICA DE SALUD PARA LA VIGILANCIA, PREVENCIÓN Y CONTROL DE LA PESTE EN EL PERÚ RM

N° 684-2010/MINSA-NTS N°083 –MINSA/DGSP.V.01

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Mapa de países con presencia conocida de reservorios silvestres de peste (rojo)

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Areas de riesgo 2010 según OPS/OMS

• Alta endemicidad:

• Madagascar + República Democráticadel Congo

• Actividad Regular:

• Mongolia, Kazakhstan, USA, China, Mozambique, Tanzania, Perú, Vietnam

• Paises Emergentes / Reemergencia:

• India, Algeria, Ecuador Blg

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Yersinia pestis

Gram Cocobacilos Gram (-), pleomórficos, aislados o en cadenas cortas.Bipolares con tinción de Wright o Giemsa

Aerobios/anaerobios Anaerobios facultativos

Temperatura de crecimiento La óptima está debajo de 37 ºC (25-29 ºC)

Hemolisis Negativo

Catalasa Positivo

Oxidasa Negativo

Motilidad Negativo

Aerobios/anaerobios Anaerobios facultativos

Ureasa Negativo

Requerimientos Hierro

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Tinción de Gram

Tinción de Giemsao Wright

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Scanning electron microscopy of Hms-positive (A) and Hms-negative (B) Yersinia pestis grown on agar plates at 21 ºC

A, In vivo biofilm dissected from a flea. B, In vitro biofilm produced on a glass surface by Yersinia pestis KIM6+(pGFP)

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Biofilm-like growth of Hms-positive Yersinia pestis in the proventriculus of blocked fleas. A, Digestive tract dissected from an uninfected Xenopsylla cheopis flea, indicating the location of the proventricular valve (PV), which connects the esophagus (E) to the midgut (MG). (B) Scanning electron microscopy of the spines lining the interior of a proventriculus from an uninfected flea, (C)a flea infected with Hms-negative Y. pestis, (D) and a flea blocked with Hms-positive Y. pestis, showing bacteria embedded within an extracellular matrix.

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Factores de virulencia

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Y. pestis defense mechanismsagainst host innate immunity.(a) Defense mechanisms at the

early stage of infection.(b) Defense mechanisms after the

release of Y. pestis frommacrophages.

Componentes del Sistema de Secreción de Tipo III de Y. pestis

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Infección de Glóbulos rojos de mamíferos por Y. pestis. a. GRs humanos control cultivados in vitro; c. Diferentes etapas de daño a los GR humanos, bacteria alrededor del GR, forma poros en sus membranas, invade y luego deja el GR y aparece extracelularmente.

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Infección de Glóbulos rojos de mamíferos por Y. pestis. b GRs humanos control cultivados in vitro; d. Daño al GR humano, formación de poros, localización intracelular de la bacteria, con cadenas de microorganismos fuera del GR.

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Infección de Glóbulos rojos de mamíferos por Y. pestis. e. Destrucción total de los GRs de ratón por una cepa virulenta, mostrando localización intracelular y aparente multiplicación de Y. pestis dentro del GR

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Y. pestis

OxidasaCatalasaSideróforo

Glucosa

Inhibición del crecimiento

H2O2

Regula[ ]

Hemoglobina

Grupo Hem

Fe2+

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Separación

Pérdida de la capacidad de Oxigenación

Síntomas de envenenamientoHipoxia = Cianosis = “Peste Negra”

Carencia G6PDH

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Simplified model of Yersinia species evolution based on present knowledge of genome data.

Patogenia de Peste Bubonica• Aguda y dolorosa de los ganglios linfáticos (bubón)

• Frecuentemente al sitio de picadura por una pulga infectante.

• Localizaciones más frecuentes: inguinal, crural o femoral, axilar y cervical; también puede localizarse en la región post - auricular, poplítea, epitroclear y otros.

• La Yersinia pestis se multiplica en gran medida, causando la necrosis de los tejidos del ganglio, formándose abscesos que en algunos casos se fistulizan y drenan hacia el exterior,

• Los bacilos logran vencer la resistencia de los ganglios llegando a pasar a la sangre (bacteremia) con localizaciones secundarias en otros órganos, tales como el bazo, hígado, pulmonesy meninges (septicemia).

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Peste Septicemica

• Es la invasión del bacilo al torrente sanguíneo en forma masiva (bacteremia).

• Con localización en otros órganos, tales como bazo, hígado, pulmones, meninges. Esta

• forma clínica puede ser:• Peste septicémica secundaria: Cuando se

deriva de la forma bubónica, tiene un mayor compromiso del estado general, toxemia, pequeñas hemorragias de la piel y deshidratación.

• Peste septicémica primaria: Cuando el compromiso de ganglios no es evidente, la Yersinia pestis se multiplica en la sangre, pudiendo identificarse por hemocultivo

Peste Neumónica• El enfermo al toser elimina los bacilos

pestosos incluidos en las gotitas de Flügger, • Clínicamente la peste neumónica se

caracteriza por tener un comienzo brusco con fiebre alta, disnea, tos, taquicardia, cefalea, mialgias intensas, temblores y postración.

• la muerte en un lapso de uno a tres días.• La Peste Neumónica puede ser:• Peste neumónica secundaria: es muy grave y

con alta letalidad. • Puede ser consecuencia de un retraso en el

diagnóstico y/o por inadecuado tratamiento de la peste bubónica o peste septicémica primaria.

• Peste neumónica primaria: Cuando el enfermo con peste neumónica secundaria al toser elimina al bacilo pestoso transmitiéndolo a sus contactos directamente a través de las gotas de secreciones respiratorias, pudiendo producir brotes localizados o epidemias devastadoras. El paciente puede fallecer dentro de 48 horas. B

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DIAGNOSTICO DE PESTE

Muestras biologicas para diagnostico de peste (1)

1- Fase Aguda * :

* bubonica : Aspirado de bubon

• pneumonica : Esputo

• septiceamica: Sangre

• muerte : higado, bazo, pulmon, medula osea y

otros

* Sangre

Cultivo - Immunologia – Tecnicas Moleculares

Pruebas para diagnóstico de peste

1. Pruebas Microbiológicas:

•Cultivo en Agar Sangre, CIN, BHI, Inoculación en ratones

•Susceptibilidad antibiótica

2. Pruebas Microscopia :

•Gram, Wayson (bipolar)

•Inmunofluorescencia Directa –IFD

3. Pruebas inmunológicas :

•ELISA IgG para humano, canes, roedores.

•Prueba rapida inmunocromatografica Ag F1

4. Pruebas moleculares :

•PCR Convencional.

•PCR Tiempo Real

•PFGE y secuenciamiento

DIAGNOSTICO DE PESTE HUMANA

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Diferencia entre Yersinia pestis y Yersiniapseudotuberculosis. 25° C en 24 horas

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Lisis de Yersinia por bacteriofago.

• La Yersinia pestis es sensible a ser lisada por un bacteriofagoespecifico y esta actividad depende de la temperatura. El bacteriofago de Y. pestis, específicamente, lisa su célula huésped a temperatura ambiental (22-25 C) y a 37 C Yersiniapseudotuberculosa, es también lisada por el bacteriofago solo a 37 c

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Y. pestis Antigeno F1

• Glicoproteína Capsular - codificadas por el ADN plasmídico (PFRA)

•Y. pestis especifico

• Abundante (secretada at 37°C), resistente al calor

• Muestras de diferentes tipos (humanos, roedores)

•No influenciada por los contaminantes

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Fallecido sin tratamiento

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Paciente recuperado

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tratamiento

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Punto de corteF1

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F1 Antígeno bubón / esputo F1 Antígeno sangre/ orina

Y. pestis bubo n/ esputo Anti-F1 anticuerpo

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Evolución de Y. pestis y concentración del antígeno F1

recuperado

Inicio enfermedad

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Dipstick para detección

de antígeno F1

- Principio:Inmunocromatografiapartículas de oro coloidal (Flujo vertical)

- Muestras: Bubón, esputo, suero, orina, etc

- Tiempo:15 minutos

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Inmunocoloración Específica Buscando Yersinia pestis

Ensayo de fluorescencia directa (DFA)

Usar como prueba rápida (30 minutos), prueba presuntiva durante el examen inicial

Como ayuda para la identidad de un aislamiento recuperado

Coloración Inmunohistoquímica (IHC)

Usar como examen forense de material biopsiado y preservado como ayuda para la identificación

Inoculación de Ratón

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GRACIAS

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