Análisis DRI® Metadona Para uso diagnóstico in vitro

10016403 (3 x 18 mL Kit) 0596 (Kits de 100 mL) 0597 (Kits de 500 mL)

IndicacionesEl análisis DRI® Metadona está indicado para la determinación cualitativa y semicuantitativa de metadona en orina humana.

El análisis sólo ofrece un resultado analítico preliminar. Para obtener un resultado analítico confirmado debe emplearse un método químico alternativo más específico. El método de confirmación recomendado es la técnica combinada de cromatografía de gases y espectrometría de masas (GC/MS).1,2 Al valorar resultados analíticos referentes a drogas, y sobre todo cuando se trata de resultados positivos preliminares, deben aplicarse consideraciones clínicas y el criterio profesional.

Resumen y explicación del análisisLa metadona, un opiáceo sintético, se ha utilizado para el tratamiento de la adicción a la heroína. El cumplimiento del tratamiento con metadona es esencial, y puede supervisarse eficazmente determinando el contenido de metadona o de su metabolito en orina.

Tras la ingestión de metadona, ésta se metaboliza rápidamente en el hígado. El metabolito primario de la metadona se forma por N-desmetilación a normetadona. Sin embargo, la normetadona se detecta en muy pocas ocasiones, ya que se deshidrata con rapidez y forma 2-etilideno-1, 5-dimetil-3, 3-difenilpirrolidina, denominada normalmente EDDP.3,4 La desmetilación adicional de EDDP forma 2-etil-5-metil-3, 3-difenil-1-pirrolina (EMDP), que es el metabolito secundario de la metadona.

Para la supervisión del cumplimiento del tratamiento con metadona hay varias técnicas, como la TLC, la GC y los inmunoanálisis.5 La TLC y la GC son métodos6 muy laboriosos que pueden sufrir interferencias. Los inmunoanálisis pueden realizarse fácilmente con un analizador químico clínico automatizado. La determinación de la presencia de metadona en la orina con un inmunoanálisis hará posible la supervisión generalizada del cumplimiento del tratamiento.

El análisis DRI Metadona es un enzimoinmunoanálisis homogéneo que utiliza reactivos líquidos listos para su uso.7 El análisis utiliza anticuerpos específicos que pueden detectar la metadona en la orina. El análisis se basa en la competición entre droga marcada con la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) y la droga de la muestra de orina por una cantidad fija de lugares de unión de anticuerpos específicos. Si la muestra no contiene droga, el anticuerpo específico se une a la droga marcada con G6PDH, lo que inhibe la actividad enzimática. Este fenómeno crea una relación directa entre la concentración urinaria de la droga y la actividad enzimática. La actividad de la enzima G6PDH se determina mediante espectrofotometría a 340 nm, midiendo su capacidad para convertir la nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) en NADH.

ReactivosReactivo de anticuerpo y sustrato: contiene anticuerpos monoclonales antimetadona, glucosa-6-fosfato (G6P) y nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) en tampón Tris con azida sódica como conservante.Reactivo de conjugado enzimático: contiene derivado de metadona marcado con glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) en tampón Tris con azida sódica como conservante.

Material adicional requerido (se vende por separado):

Descripción del kit 1664 Calibrador DRI negativo, 10 mL1388 Calibrador DRI negativo, 25 mL1588 Calibrador DRI multidroga 1, 10 mL1589 Calibrador DRI multidroga 1, 25 mL1591 Calibrador DRI multidroga 2, 10 mL1592 Calibrador DRI multidroga 2, 25 mL1594 Calibrador DRI multidroga 3, 10 mL1595 Calibrador DRI multidroga 3, 25 mL1597 Calibrador DRI multidroga 4, 10 mL1598 Calibrador DRI multidroga 4, 25 mL100200 Conjunto de controles para drogas principales MGC, 3 x 5 mL ciascuno (Alto y Bajo)

Precauciones y advertenciasEsta prueba es para uso diagnóstico in vitro solamente. Los componentes son nocivos si se ingieren.

Los reactivos empleados en los componentes del análisis contienen < 0,09 % azida sódica. Evite el contacto con la piel y las mucosas. En caso de contacto, lave las áreas afectadas con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o de ingestión, consulte inmediatamente a un médico. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las cañerías y formar azidas metálicas que pueden ser explosivas. Al desechar dichos reactivos, aclare siempre con agua abundante para evitar la acumulación de azida. Lave las superficies metálicas expuestas con una solución de hidróxido de sodio al 10%.

No utilice los reactivos después de sus fechas de caducidad.

Preparación y almacenamiento de los reactivosLos reactivos están listos para su uso, por lo que no es necesario prepararlos. Si se almacenan a entre 2 y 8°C, todos los componentes del análisis son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.

Recogida y manipulación de muestrasObtenga muestras de orina en recipientes de plástico o cristal. Se recomienda analizar muestras frescas de orina.

Las pautas indicadas en The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs; Final Guidelines recomiendan que las muestras que no se analicen en los 7 días posteriores a su llegada al laboratorio se conserven en unidades de refrigeración seguras.

Las muestras cuyo pH esté entre 3 y 11 son adecuadas para analizarse con esta prueba.

Debe hacerse todo lo posible para mantener las muestras pipeteadas libres de residuos macroscópicos; se recomienda centrifugar las muestras muy turbias antes de analizarlas. La adulteración de la muestra de orina puede afectar a los resultados de la prueba; si se sospecha que la muestra puede estar adulterada, obtenga otra muestra y envíe ambas al laboratorio para su análisis.

Manipule todas las muestras de orina como si fueran potencialmente infecciosas.

Procedimiento del análisisPara efectuar este análisis pueden utilizarse analizadores capaces de mantener una temperatura constante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir índices enzimáticos a 340 nm y cronometrar la reacción de manera precisa.

Consulte las instrucciones de la aplicación específica de cada analizador para obtener los parámetros químicos antes de efectuar el análisis.

Control de calidad y calibraciónAnálisis cualitativoPara el análisis cualitativo de las muestras, utilice el calibrador de 300 ng/mL como concentración de cut-off. El calibrador DRI 2, que contiene metadona a 300 ng/mL, se utiliza como referencia de cut-off para distinguir las muestras “positivas” de las “negativas”.

Análisis semicuantitativoPara los análisis semicuantitativos, utilice todos los calibradores.

Las prácticas correctas de laboratorio recomiendan emplear muestras de control para asegurar el buen funcionamiento del análisis. Utilice controles cercanos al calibrador de cut-off para validar la calibración. Los resultados del control deben estar dentro del rango establecido. Si los resultados están fuera del rango establecido, los resultados del análisis no son válidos. Todos los requisitos de control de calidad deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales, estatales o federales.

Resultados y valores esperadosResultados cualitativosLas muestras cuyo valor de absorbancia (∆A) presente un cambio igual o mayor al obtenido por el calibrador de cut-off se consideran positivas. Las muestras cuyo valor de absorbancia (∆A) presente un cambio menor al obtenido por el calibrador de cut-off se consideran negativas.

Resultados semicuantitativosPara obtener una estimación aproximada de la concentración total de droga en las muestras, puede trazarse una curva estándar empleando todos los calibradores y marcar sobre dicha curva los valores obtenidos en los análisis de las muestras.

Limitaciones1. Un resultado positivo en este análisis sólo indica la presencia de metadona, y no se

relaciona necesariamente con la magnitud de los efectos fisiológicos y psicológicos.2. Los resultados positivos obtenidos en este análisis deben confirmarse mediante otro

método no inmunológico, tal como GC, GC/MS o TLC.3. La prueba está diseñada para utilizarse solamente con orina humana.4. Es posible que otras sustancias o factores (p. ej., errores técnicos o de procedimiento)

no mencionados en la tabla de especificidad interfieran en la prueba y produzcan resultados falsos.

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2

Características típicas de rendimientoA continuación se muestran los resultados de rendimiento típicos obtenidos con el analizador Hitachi 717.8 I valori ottenuti nei diversi laboratori possono essere differenti da quelli riportati in questa sede.

PrecisiónEl análisis del control negativo, el calibrador de 300 ng/mL y el calibrador de 1000 ng/mL arrojó los siguientes resultados:

Cualitativos:

Intraserial (n=20) Entre Series (n=12)

Calibrador Mean ± SD(mA/min) %CV Mean ± SD

(mA/min) %CV

Negativo 258 ± 1,3 0,5 258 ± 1,3 0,5

300 ng/mL 340 ± 2,4 0,7 340 ± 2,9 0,8

1000 ng/mL 472 ± 2,4 0,5 472 ± 4,6 0,9

Semicuantitativos:

Intraserial (n=20) Entre Series (n=12)

Control Mean ± SD(ng/mL) %CV Mean ± SD

(ng/mL) %CV

Control 1 166 ± 4,5 2,7 166 ± 5,7 3,4

Control 2 403 ± 6,8 1,7 406 ± 7,1 1,7

SensibilidadLa sensibilidad, definida como la concentración más baja que puede diferenciarse del calibrador de orina negativo con una confianza del 95% es de 10 ng/mL.

ExactitudSe analizaron noventa y seis muestras clínicas de orina con un análisis de metadona comercial y con el análisis DRI Metadona. Hubo un acuerdo del 100% entre los dos métodos. Cuarenta y seis muestras fueron positivas y cincuenta negativas según ambos análisis. Además, las cuarenta y seis muestras se confirmaron como positivas mediante el método de GC/MS.

EspecificidadSe comprobó la reactividad cruzada con el análisis de varias sustancias que pueden producir interferencias. Los compuestos enumerados en la tabla 1 produjeron un resultado positivo a la concentración analizada. Los compuestos enumerados en la tabla 2 produjeron un resultado negativo a la concentración analizada.

Tabla 1

Compuesto ConcentracionAnalizadas (ng/mL)

Metadona 300

Metadol 750

Tabla 2

Compuesto ConcentracionAnalizadas (ng/mL)

1- -acetilmetadol (LAAM) 5.000

Ácido acetilsalicílico 1.000.000

Amitriptilina 50.000

Anfetamina 1.000.000

Benzoilecgonina 400.000

Cafeína 100.000

Carbamazepina 20.000

Cocaína 200.000

Codeína 500.000

Dextrometorfano 250.000

Difenhidramina 1.000.000

Efedrina 1.000.000

Fenciclidina 500.000

Fenitoína 40.000

Fenobarbital 1.000.000

Imipramina 50.000

Meperidina 150.000

Metabolito de metadona (EDDP) 10.000

Composto ConcentrazioniAnalizzate (ng/mL)

Metabolito de metadona (EMDP) 10.000

Morfina 200.000

Nortriptilina 50.000

Orfenadrina 1.000.000

Oxazepam 500.000

Paracetamol 1.000.000

Primidona 24.000

Prometazina 100.000

Propoxifeno 250.000

Secobarbital 1.000.000

Teofilina 50.000

Ácido valproico 150.000

Verapamil 1.000.000

Bibliografía1. Urine Testing for Drugs of Abuse. National Institute on Drug Abuse (NIDA) Research

Monograph 73, 1986.2. Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. National Institute

on Drug Abuse. Federal Register Vol. 53, No 69 pp 11970 (1988).3. Pohland A, Boaz HE and HR Sullivan. Synthesis and Identification of Metabolites

Resulting from the Biotransformation of d,l-Methadone in Man and in Rat. J Med Chem 14:194-197 (1971).

4. Baselt RC and LJ Casarett. Urinary Excretion of Methadone in Man. Clin Pharm Therap 13:64-70 (1971).

5. Ferrara SD. Comparison of GLC-EMIT Analysis for the Assay of Methadone and Its Metabolite in Urine. Vet Hum Toxicology 21 (Suppl):169-172 (1979).

6. Roerig DL et al. Radioimmunoassay Compared to Thin-Layer and Gas-Liquid Chromatography for Detecting Methadone in Human Urine. Clin Chem 22: 1915-1918 (1976).

7. Rubenstein KE, Schneider RS, and EF Ullman: Homogeneous Enzyme Immunoassay: a New Immunochemical Technique. Biochem Biophys Res Commun 47:846-851, 1972.

8. Datos archivados en Microgenics, parte de Thermo Fisher Scientific.

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