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Apreciado cliente:

Tiene en sus manos la 4ª Edición del Manual Básico de Microbiología CULTIMED publicado porPanreac Química S.A. Esta nueva edición revisada y aumentada incluye todos los nuevos productosque hemos incorporado desde que se realizó la primera edición en 1996. Se han modificado algunasformulaciones para adaptarlas a las especificadas en distintas Normas Internacionales.

El programa actual incluye los medios de cultivo más empleados en microbiología de alimentos y deaguas, así como algunos para microbiología clínica. La mayoria de ellos están disponibles en distintosformatos, para facilitar el más adecuado a las necesidades específicas del consumidor. Estos incluyeningredientes para la preparación de medios, lo que permite preparar medios con composiciones individualizadas, medios deshidratados para la preparación de placas por parte del usuario, placas preparadas listas para usar, así como tubos y frascos de medio formulado.

Las placas preparadas para análisis de aguas incluyen todos los parámetros definidos en la directivaCE/98/83 para el análisis microbiológico de aguas destinadas a consumo público. Las formulacionesde estos medios son las definidas en las correspondientes normas ISO y destacan especialmente lasplacas preparadas de agar m-CP para la enumeración de Clostridium perfringens, tal y como se indicaen dicha directiva.

En lo relativo al control de higiene, para el control de puntos críticos dentro de sistemas ARCPC, elprograma de placas preparadas CULTIMED ofrece los medios más usados para este fin. Cada productoviene caracterizado por su correspondiente Ficha Técnica. En cada ficha se describen las aplicaciones,historia y fundamento del medio, así como las instrucciones para la preparación y el modo de empleoaconsejado. Cuando se describe una metodología está basada en publicaciones científicas reconocidas.Sin embargo pueden introducirse las modificaciones que el usuario considere oportunas. La composición de los medios está descrita para cada uno de ellos en cantidades aproximadas por litrode medio a preparar.

También se incluyen informaciones prácticas sobre productos auxiliares, tinciones y otros productosrelacionados. Además en el catálogo de reactivos Panreac se pueden encontrar muchos otros productosde aplicación en microbiología como sales de alta pureza par la preparación de medios especificos.

Debido a la gran diversidad de denominaciones, hemos actualizado el capítulo de equivalencias y uncompleto índice alfabético, que facilita al máximo la búsqueda de un determinado producto.

La gama de productos para microbiología bajo la marca Cultimed de Panreac Química, S. A. ha idocreciendo y adaptandose a sus necesidades a lo largo de estos años, gracias a la confianza y comunicación con nuestros clientes, porque durante todo este tiempo hemos mantenido un excelentenivel de calidad, unos precios competitivos y un fácil acceso a los productos a través de la extensa redde distribuidores de Panreac Química S.A.Vamos a seguir creciendo en este campo y para ello contamos con nuestra experiencia y su colaboración. Queremos que CULTIMED satisfaga sus necesidades en el campo del control microbiológico de alimentos y aguas. Háganos saber que necesitay mientras tanto esperamos que utilize este manual en su trabajo diario. Gracias por su confianza.

Noviembre de 2002

SUMARIO

Recomendaciones Generales de Empleo para los Medios de Cultivo Deshidratadosy Preparados

I Medios de Cultivo Deshidratados

II Medios de Cultivo Preparados

III Ingredientes para Medios de Cultivo

IV Aditivos, Reactivos y Productos Auxiliares

V Comparación de Denominaciones

VI Aplicaciones (Determinaciones más Habituales en la Industria Alimentaria y Cosmética)

VII Indice y Programa

VII-I Programa Completo Cultimed según Aplicación

VII-II Programa Completo Cultimed en Orden Alfabético

VII-III Indice Alfabético de Productos

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Preparación de los Medios de CultivoDeshidratadosPor regla general los ingredientes de los medios decultivo se disuelven por agitación y calentando ligera-mente en agua destilada. Los medios que contienenagente gelificante se suelen hervir durante 1 minutopara conseguir su disolución. Aunque en la mayorparte de los medios hay que calentar, hay que evitarsobrecalentamientos innecesarios.

Algunos medios presentan turbidez inevitable o preci-pitados, por ejemplo la Base de Caldo Tetrationato. Aldistribuir el medio debe hacerse de forma uniforme,para que el precipitado quede bien repartido.Posteriormente a la disolución se procede a la esteri-lización del medio. En algunos casos existen compo-nentes lábiles que no pueden añadirse en el medio decultivo deshidratado y que será necesario su esterili-zación por separado y una posterior incorporación deforma aséptica para obtener el medio completo.

El pH de los medios de cultivo se ajusta durante sufabricación a los valores descritos en cada uno deellos. Sin embargo, la calidad del agua que se utilizaen su hidratación, la utilización de medios no recien-tes etc., pueden modificar este parámetro por lo quees aconsejable verificarlo y reajustarlo si fuera nece-sario. En algunos casos se puede ajustar el pH des-pués de la esterilización de forma aséptica y utilizan-do soluciones ácidas (Acido Clorhídrico) o básicas(Sodio Hidróxido) estériles. En los medios sólidos lamedida se hace a 45-50ºC (el agar todavía no ha geli-ficado) mientras que en los líquidos se hace a tempe-ratura ambiente. Los medios ácidos (pH

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Conservación de los medios preparadosLo más recomendable es preparar el medio cuandose va a emplear, aunque en muchos casos por razo-nes obvias una parte del medio preparado se consu-me y el resto se guarda como medio preparado. Eltiempo de vida del medio preparado dependerá de lapropia naturaleza del medio, de la hermeticidad delos recipientes que lo contienen, de la temperaturade conservación y de las condiciones medioambien-tales. Si la hermeticidad es buena y la temperaturabaja, 2-8ºC, la vida del medio puede llegar a ser de 4a 6 semanas. De todas formas la refrigeración favore-ce la deshidratación y en algunos casos, como porejemplo, los medios para anaerobios, la conservaciónes mejor a temperatura ambiente que en frigorífico.

Se deben evitar las condensaciones ya que el depó-sito de gotas de agua podrá ser causa de una altera-ción casi inmediata del medio. Tampoco deben em-plearse medios preparados en los que se observe unefecto de deshidratación.

Conservación de los medios deshidratadosComo regla general y si no se establecen condicionesparticulares los medios deshidratados deben almace-narse en lugar fresco, seco y al abrigo de luz directadel sol.Existen unos medios en concreto, que requieren unalmacenamiento entre 2-8°C, que son:414703 Selenito Verde Brillante, Caldo414680 Marino, Agar413824 Selenito, Base de Caldo414698 Marino, Caldo413809 Selenito y Cistina, Caldo414722 Emulsión Yema de Huevo414723 Emulsión Yema de Huevo-Telurito414724 Potasio Telurito solución 3,5%

En la manipulación de los frascos se debe procurarque las aperturas y cierres sean los menos posibles yque el tiempo durante el cual el frasco permaneceabierto sea el mínimo. De lo contrario el medio se irárehidratando, con lo que comenzará a apelmazarse yendurecerse, ya que son generalmente higroscópicos.Incluso podría llegar a tener lugar un crecimiento bac-teriano en superficie. En estas condiciones debe dese-charse el producto.

Conservación de los medios preparados, listos para su usoLos medios preparados listos para usar tienen untiempo limitado de conservación, que es de variosmeses si las condiciones de almacenamiento y trans-porte son las adecuadas.Se recomienda su almacenamiento por regla generalpor debajo de los 20ºC y protegidos de la luz.Algunos medios deben conservarse entre 2-8ºC,siendo este requisito especificado en la etiqueta delproducto. Los medios de cultivo con Agar no debenguardarse por debajo de 0ºC, ya que se alteraría laestructura del gel. La pérdida de agua puede provocar precipitados ohacer que cristalicen ciertas sustancias del mediode cultivo, así como originar grietas en las placaspreparadas.En los medios de cultivo que deben refundirse y quedeben contener aditivos lábiles, se suministra elmedio basal preparado y según la necesidad sedeben añadir los aditivos de forma estéril.

Refundido de medios sólidosCuando se precisa refundir los medios sólidos, pre-parados y estériles en frascos y tubos, para verterlosen placa, es aconsejable hacerlo en baño maría, enmicroondas o en autoclave a vapor fluente. En ningúncaso debe aplicarse calor directo.Una vez fundidos, deberán dejarse enfriar hasta unos50ºC para añadir los aditivos, si fuera necesario y paradistribuirlos o sembrarlos. Hay que tener en cuentaque los medios refundidos tienen una cierta tenden-cia al oscurecimiento y precipitación, que aumentacuando se mantienen fundidos durante periodos detiempo prolongados y a temperaturas entre 45-65ºCy que ello puede suponer una pérdida de las carac-terísticas nutritivas o selectivas del medio, por lo quees aconsejable, no fundirlos más de una vez y nomantenerlos en el calor largos periodos de tiempo.En este sentido son recomendables los métodos rápi-dos como el que se obtiene con el fundido de mediosen el microondas, donde se debe dosificar la intensi-dad de la radiación y durante tiempos lo más cortosposibles. Las fuertes intensidades de radiación, pue-den provocar refundidos parciales, ebulliciones súbi-tas con eventuales derrames del medio pudiendoalterar las cualidades del mismo.

viii

Destrucción y desinfecciónUna vez realizados los cultivos, el medio debe serautoclavado a 121ºC durante 30 minutos antes de sudesecho definitivo. De igual manera se debe procedercon el material de laboratorio empleado en los culti-vos antes de su lavado y nuevo uso.

Control de CalidadLos ingredientes que forman parte de los medios decultivo presentan ciertas oscilaciones debido a su ori-gen biológico. Las formulaciones descritas para cadamedio son por tanto aproximadas, ya que estas osci-laciones en las propiedades de los ingredientesdeben ser compensadas para obtener medios de cul-tivo constantes. Nuestros laboratorios disponen deuna cepoteca formada por cepas patrón procedentesde ATCC o de CECT para realizar el control micro-biológico de los medios de cultivo y garantizar laconstancia de las características de éstos.

En la ficha de cada medio de cultivo se detalla el con-trol de calidad correspondiente. Básicamente constade dos apartados; uno físico-químico en el que severifica el aspecto, la solubilidad y el pH del medio yotro microbiológico. En éste se realiza un control decrecimiento de las cepas patrón y en algunos casos,la tasa de recuperación.

CaducidadNuestros medios deshidratados tienen una caduci-dad general de 4 años*, a excepción de los enume-rados a continuación, cuya caducidad les indica-mos:413824 Selenito, Base de Caldo 3 años413809 Selenito y Cistina, Caldo 3 años414722 Emulsión Yema de Huevo 6 meses414723 Emulsión Yema de Huevo-Telurito 6 meses414724 Potasio Telurito sol. 3,5% 1 año414703 Selenito Verde Brillante, Caldo 3 años

Nuestros medios preparados tienen un periodo devida de meses, más o menos largo dependiendo desu presentación. Las placas para microbiología deaguas y las placas de contacto tienen por reglageneral 7 meses, a excepción de:425463.0922 m-CP, Agar 45 días424955.0922 y 444955.0922 Tergitol 7, Agar 6 meses434855.0922 Rosa de Bengala y

Cloranfenicol, Agar 4 mesesLos medios utilizados en los análisis de rutina tienen3-4 meses de vida cuando están distribuidos enplacas de 90 mm, cuando se presentan en tubos ofrascos suelen tener 12 meses de vida.

Medios para técnica de filtro de membrana,recomendaciones:La utilización de las técnicas de filtración se hanimpuesto en diversas disciplinas por una serie deventajas que aporta a distintas problemáticas. La fil-tración permite la concentración de grandes volú-menes de líquidos con pequeñas poblaciones demicroorganismos, permite separar a los microorga-nismos del medio en que se encuentran, inclusotransferirlo a otros, sin interrumpir su ciclo de creci-miento.Esencialmente la técnica consiste en filtrar el pro-ducto a través de un filtro de 0,22 micras o 0,45micras, según determinación, ayudado por un sis-tema de vacío. Si el fluido filtrado contenía inhibido-res, se lava la membrana varias veces para asegu-rar su eliminación. La membrana se recupera deforma aséptica y se coloca en el medio de cultivoadecuado según la determinación que se desearealizar.Para la enumeración de colonias, se utiliza unmedio sólido o una almohadilla absorbente impreg-nada de medio líquido. La membrana debe entraren contacto con el medio sin que queden burbujasde aire entre ellos que limitaría el crecimiento de losmicroorganismos. Por regla general los mediosusuales pueden utilizarse en estas técnicas, sinembargo en la microbiología de aguas se han desa-rrollado unos medios y un tamaño de placa, parautilizar en estas técnicas.

* para envases no abiertos y conservados de la manera antes indicada.

Medios de CultivoDeshidratados

I - 1Editado / Edited XI - 2002

FundamentoLa peptona tiene una elevada concentración de Triptófano,el cual es degradado a Indol por un cierto número de micro-organismos entre ellos E. coli. La detección de este produc-to se hace añadiendo el reactivo de KOVACS después de laincubación (ver pág. IV - 8). Este medio es adecuado paradeterminar los organismos Indol-positivos y puede utilizarseen lugar de los Caldos Triptófano. En usos generales sepuede emplear para el cultivo de una gran variedad demicroorganismos, siempre y cuando no presenten exigen-cias particulares.

Fórmula (por litro)Peptona......................................................... 10 gSodio Cloruro ................................................ 5 g

pH final: 7,2 ±0,2

PreparaciónSuspender 15 g en 1 l de agua destilada; agitar hasta disolu-ción total. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleoTratar según los fines a conseguir.

Ref. Descripción Envase

252908 Reactivo de Kovacs DC * 100 ml

* Producto Opcional

Reactivos auxiliares

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: blanco-crema. pH: 7,2 ±0,2

Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCy observados a las 24 horas.

Microorganismos Desarrollo Formación de Indol

Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio +Salmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio —Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio —

BibliografíaCompendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)

Control de calidad

Agua de PeptonaPeptone WaterCód.: 413794 Envase: 500 g

Se emplea como diluyente en muestras alimentarias, aguas y materiales diversos. Para la realización de laprueba del Indol en aquellos microorganismos capaces de producirlo.


FundamentoCon la mezcla de fosfatos el medio se mantiene tampona-do para amortiguar las variaciones de pH que pudieran pro-ducirse tanto por la adición de la muestra como por el pro-pio crecimiento bacteriano en sí. El Sodio Cloruro mantieneel nivel salino necesario para el buen mantenimiento y desa-rrollo de los gérmenes y la peptona aporta los elementosnutritivos básicos para microorganismos que no presentenexigencias particulares.El pre-enriquecimiento con este caldo da mayores creci-mientos principalmente de Enterobacteriáceas patógenas(Salmonella, Shigella), ya que revitaliza aquellas especiesdañadas en determinados procesos industriales. Es carac-terístico el pre-enriquecimiento en muestras de alimentosdonde se debe detectar Salmonella. Su composicióncorresponde a las recomendaciones de la ISO para pro-ductos cárnicos.

Fórmula (por litro)Peptona...................................................... 10,0 gPotasio di-Hidrógeno Fosfato ..................... 1,5 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gdi-Sodio Hidrógeno Fosfato........................ 9,0 g

pH final: 7,0 ±0,2

PreparaciónDisolver 25,5 g en 1 l de agua destilada. Distribuir y esterili-zar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleoProceder según los fines a conseguir. Para el pre-enriqueci-miento de Salmonella incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 ±0,2


Microorganismos Desarrollo

Salmonella enteritidis ATCC 13076 SatisfactorioSalmonella typhi ATCC 19430 SatisfactorioSalmonella typhimurium ATCC 14028 Satisfactorio

BibliografíaMeat and Meat Products-Detection of Salmonellae. ISO 3565. (1975)

Control de calidad

Agua de Peptona TamponadaBuffered Peptone WaterCód.: 413795 Envase: 500 g

Se emplea como diluyente de muestras originales de productos alimenticios como leche y sus derivados,concentrados y productos de origen animal. También se emplea como caldo de enriquecimiento no selecti-vo, especialmente de Enterobacteriáceas patógenas.


HistoriaLas Farmacopeas Europea y Británica aconsejan este dilu-yente para preparar la solución madre de muestras proce-dentes de distintos orígenes. De la misma forma, se acon-seja suplementar este diluyente con diversos agentes neu-tralizantes tales como Tween 80, Lecitina de huevo eHistidina para eliminar la actividad antimicrobiana de distin-tas muestras.

FundamentoEste diluyente difiere del Agua de Peptona Tamponada(cód. 413795) en una menor aportación de base nutritiva. Elagua de peptona tradicional se utiliza además de como eldiluyente más habitual en el análisis de alimentos, en el pre-enriquecimiento de Salmonella. El agua de peptona segúnFarmacopea está descrita para la preparación de la solu-ción madre y de los bancos de dilución.

Fórmula (por litro)Peptona de Caseína ................................. 1,00 gPotasio di-Hidrógeno Fosfato ................... 3,56 gSodio Cloruro ........................................... 4,30 gdi-Sodio Hidrógeno Fosfato...................... 7,23 g

pH final: 7,0 ±0,2

Preparación

Disolver 16,1 g en 1 l de agua destilada. Añadir los agen-tes neutralizantes si se desea. Para obtener el diluyenteneutralizante propuesto en la Farmacopea Europea (*),añadir 30 g/l de Tween 80, 3 g/l de Lecitina de Huevo y1 g/l de Histidina. Ajustar el pH, si fuera necesario, antesde esterilizar. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.(*) Comercializada por Cultimed (495425.0980).

Modo de empleoLa solución esterilizada se utilizará como diluyente otampón de lavado. Este agua una vez preparada será trans-parente y de color claro.


142050 Tween ® 80 (RFE, USP-NF, BP, Ph.Eur.) 1 l; 5 l; 25 lPRS-CODEX *

212312 Tween ® 20 QP * 1 l; 5 l; 25 l

142045 L-Histidina (RFE, USP, BP, Ph. Eur.) 100 g; 1 kgPRS-CODEX *

Lecitina de Huevo *

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: blanco crema a tostado claro. pH: 7,0 ±0,2



Salmonella enteritidis ATCC 13076 SatisfactorioSalmonella typhi ATCC 19430 SatisfactorioSalmonella typhimurium ATCC 14028 SatisfactorioStaphylococcus aureus ATCC 6538 Satisfactorio

BibliografíaPh. Eur. IV (2002)BP (2000)

Control de calidad

Agua de Peptona Tamponada, (BP, Ph. Eur.)Buffered Sodium Chloride-Peptone solution, (BP, Ph. Eur.)Cód.: 414944 Envase: 500 g

Diluyente para la homogeneización de muestras en análisis microbiológicos.


HistoriaLos medios para antibióticos fueron descritos por Groce yRandall; actualmente las formulaciones corresponden a lasrecomendaciones de la FDA y la USP.

FundamentoLos ensayos de antibióticos se pueden realizar: en mediosólido por técnicas de difusión o en medios líquidos pormétodos de dilución. En las técnicas de difusión el antibió-tico se puede suministrar de distintas formas: mediantecilindros, mediante perforaciones o por discos.Las metodologías están descritas por distintos organismosoficiales. De forma general, cuando la determinación se rea-liza en medio sólido, se procede de la siguiente forma:

- El medio preparado y esterilizado se vierte en una placade Petri (aprox. 14 ml); una vez solidificado se añadenunos 4-8 ml de medio inoculados con el microorganismodel que se desea conocer el antibiograma. Una vez soli-dificado el agar con el microorganismo que crecerá deforma confluente, se colocan sobre el medio de cultivo,bien distanciados entre si, las cantidades definidas delantibiótico o antibióticos a ensayar.El antibiótico se coloca en pocillos o perforaciones prac-ticados en el mismo agar o impregnando pequeños cilin-dros o con discos de antibióticos que se encuentrancomercializados.

Incubar durante 18-24 horas a 37°C. Pasado el tiempo deincubación se observan unos halos, alrededor del punto deaplicación del antibiótico, sin crecimiento microbiano.Semiden los diámetros de los halos de inhibición y se inter-pretan los resultados obtenidos. El diámetro obtenido estáen relación con la actividad antimicrobiana del antibióticotestado.Para las determinaciones cuantitativas, se suele recurrir alas diluciones seriadas o medidas turbidimétricas. En estoscasos los cultivos se realizan en medios líquidos.

Antibióticos, MediosAntibiotic Medium

Antibióticos nº 1, MedioAntibiotic Medium nº 1Cód.: 413735 Envase: 500 g






Determinación de la prueba microbiológica de los antibióticos en productos farmacéuticos, piensos, líquidoscorporales y otras muestras de diversos orígenes.


Preparación de los mediosPesar la cantidad total descrita para cada medio en la tabla(Fórmula por litro) y suspenderlo en 1 l de agua destilada,calentar y agitar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto.Los medios líquidos se distribuyen en tubos y después seesterilizan a 121°C durante 15 minutos. Los medios sólidosse esterilizan y después se distribuyen.Advertencia: En estos medios es importante que el pH seael indicado en la fórmula. Verificar el pH y ajustar si fuesenecesario.

Modo de empleoEn el fundamento se han nombrado las distintas técnicas autilizar. A continuación se presenta una tabla orientativa delmedio a utilizar, más óptimo, según el antibiótico que sevaya a ensayar (mediante cilindros, discos o similares).

Fórmula (por litro)

Antibióticos, Medio nº 1 nº 2 nº 3 nº 5 nº 8 nº 11

Extracto de Carne 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g 1,5 g

Extracto de Levadura 3,0 g 3,0 g 1,5 g 3,0 g 3,0 g 3,0 g

D(+)-Glucosa 1,0 g — 1,0 g — — 1,0 g

Peptona de Caseína 4,0 g — — — — 4,0 g

Peptona de Gelatina 6,0 g 6,0 g 5,0 g 6,0 g 6,0 g 6,0 g

Potasio di-Hidrógeno Fostato — — 1,32 g — — —

di-Potasio Hidrógeno Fosfato — — 3,68 g — — —

Sodio Cloruro — — 3,5 g — — —

Agar Bacteriológico 15,0 g 15,0 g — 15,0 g 15,0 g 15,0 g

Total 30,5 25,5 17,5 25,5 25,5 30,5

pH: (±0,2) 6,6 6,6 7,0 7,9 5,7 7,9

Ejemplo del empleo de los medios en algunos antibióticos

Medios

Antibiótico nº 1 nº 2 nº 3 nº 5 nº 8 nº 11

Ampicilina l

Bacitracina l

Canamicina l

Carbomicina l

Cefalotina l l

Cloranfenicol l

Clorotetraciclina l

Eritromicina l

Estreptomicina l l

Gentamicina l

Neomicina l

Oleandomicina l

Oxitetraciclina l

Paramomicina l

Penicilina l l

Tetraciclina l

En la mayoría de estos antibióticos se utiliza el medio nº 3 para el ensayo turbidimétrico.


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total o ligeramente opalescente.Color: beige o crema. pH: ver fórmula.


Antibióticos nº 1, Medio

Microorganismos Desarrollo Halo de inhibición

Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Satisfactorio Cefalotina, Cloranfenicol, PenicilinaMicrococcus luteus ATCC 9341 Satisfactorio Cefalotina, Cloranfenicol, PenicilinaBacillus subtilis ATCC 6633 — —



Staphylococcus aureus ATCC 6538-P SatisfactorioMicrococcus luteus ATCC 10240 SatisfactorioStaphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio


Microorganismos Desarrollo Ensayo de serie de diluciones

Micrococcus luteus ATCC 9341 Bueno —Staphylococcus aureus ATCC 6538-P Bueno Canamicina, TetraciclinaKlebsiella pneumoniae ATCC 10031 Bueno Estreptomicina



Bacillus subtilis BGA Bueno Gentamicina, Estreptomicina


Microorganismos Desarrollo Ensayo de serie de diluciones

Bacillus cereus ATCC 11778 Bueno Tetraciclina, OxitetraciclinaStaphylococcus aureus ATCC 6538 Bueno Clortetraciclina



Micrococcus luteus ATCC 9341 Bueno Ampicilina, EritromicinaStaphylococcus aureus ATCC 6538 Bueno Canamicina, NeomicinaStaphylococcus epidermidis ATCC 12228 Bueno Oleandomicina, Paramomicina

Control de calidad


HistoriaEste medio fue puesto a punto por Baird-Parker en 1962.Medio reconocido por la USP y por la Ph. Eur., además, deotros organismos oficiales. Se ha demostrado que estemedio es el menos inhibidor para los fines propuestos.

FundamentoSe trata de una base a la que se deben añadir Emulsión deYema de Huevo y Potasio Telurito. También se puede aña-dir Sulfametacina para inhibir el crecimiento de Proteus.Por la presencia del Litio Cloruro y el Potasio Telurito se inhi-be el crecimiento de microorganismos no deseados. Por lapresencia del Sodio Piruvato y la Glicina se favorece el cre-cimiento de los Estafilococos. A su vez el Potasio Teluritocombinado con la acción de la yema de huevo permite dife-renciar los Estafilococos. El Staphylococcus aureus dacolonias negras, por la reducción del potasio telurito a telu-ro, rodeadas de un halo de transparencia debido a la acti-vidad lecitinasa. Existe un paralelismo importante entre loscoagulasa-positivos y la reacción descrita con la yema dehuevo y el telurito; es por lo que estas características se uti-lizan como indicativo de esta actividad.Para la demostración directa de S. aureus coagulasa-posi-tivos puede suplementarse el medio con plasma de conejoen lugar de yema de huevo.

Fórmula (por litro)Extracto de Carne ...................................... 5,0 gExtracto de Levadura ................................. 1,0 g

Glicina ........................................................ 12,0 gLitio Cloruro ................................................ 5,0 gPeptona de Caseína ................................... 10,0 gSodio Piruvato ............................................ 10,0 gAgar............................................................ 17,0 g

pH final: 6,8 ±0,2

PreparaciónSuspender 60 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a121ºC durante 15 minutos. Dejar enfriar hasta 45ºC y aña-dir 50 ml de Emulsión de Yema de Huevo-Telurito y, si sedesea 50 mg/l de Sulfametacina. Homogeneizar y distribuiren placas de Petri estériles.

Modo de empleoEl medio de cultivo completo es opaco y debe utilizarse enlos días siguientes a su preparación.Sembrar homogéneamente en la superficie del medio.Incubar a 37ºC durante 24-48 horas.


414723 Emulsión Yema de 50 ml; 100 mlHuevo-Telurito CULTIMED

A19276 Sulfametacina * 25 g; 100 g

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: tostado claro. pH: 6,8 ±0,2

Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCy observados a las 24-48 horas, y añadidos 50 ml de Emulsión de Yema de Huevo-Telurito.

Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia Halos deLecitinasas

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido — —Proteus mirabilis ATCC 25933 Satisfactorio Marrón —Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio Negro +Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Moderado Negro —

BibliografíaJ. App. Bact., 27: 78-82 (1964)J. App. Bact., 25: 12-19 (1962)USP 25 (2002)Ph. Eur. IV (2002)

Control de calidad

Baird-Parker, Base de AgarBaird-Parker Agar BaseCód.: 413744 Envase: 500 g

Se emplea para el aislamiento selectivo de Estafilococos en alimentos, productos farmacéuticos, productoscosméticos y otras muestras biológicas.


Bilis Esculina, AgarBile Esculin AgarCód.: 413835 Envase: 500 g

Se emplea como medio diferencial para Enterococos y se recomienda para su aislamiento e identificaciónpresuntiva.

HistoriaRochaix fue el primero que demostró que la hidrólisis de laesculina por los enterococos era una prueba apta para suidentificación. Más tarde Meyer y Schonfeld demostraronque esta hidrólisis en medio biliar era la mejor prueba dife-rencial para enterococos. La formulación del medio corres-ponde a la dada por Swan.

FundamentoLa presencia de la bilis de buey no inhibe el crecimiento delos enterococos, pero sí el del resto de las bacterias Gram-positivas. Esta característica junto con la capacidad dehidrolizar la esculina son propiedades constantes de losEnterococos. El producto resultante de la hidrólisis de laesculina es la esculetina que forma un complejo con elHierro(III) Citrato de un color pardo oscuro.

Fórmula (por litro)Bilis de Buey .............................................. 40,0 gEsculina ...................................................... 1,0 gExtracto de Carne ...................................... 3,0 gHierro(III) Citrato ......................................... 0,5 gPeptona...................................................... 5,0 gAgar............................................................ 15,0 g

pH final: 6,6 ±0,2

PreparaciónDisolver 64 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición. No sobrecalentar. Esterilizar a 121ºCdurante 15 minutos.

Modo de empleoEl medio se puede emplear en placas o en tubos, en estecaso solidificándolo en plano inclinado.Puede añadirse suero de caballo una vez esterilizada, arazón de un 5% en la concentración final. Para algunosautores esta adición mejora el crecimiento de losEnterococos, para otros no es apreciable. Incubar entre 35ºy 37ºC de 18 a 24 horas.Se acepta que el material sembrado no contieneEnterococos, si no hay oscurecimiento del medio despuésde 3 días de incubación.


Suero de Caballo *

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.Color: tostado. pH: 6,6 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Medio (oscurecido)

Enterococcus faecalis ATCC 11700 Satisfactorio +Enterococcus faecalis ATCC 19433 Satisfactorio +Enterococcus faecium ATCC 8043 Satisfactorio +Streptococcus pyogenes ATCC 12344 Nulo —Streptococcus pneumoniae ATCC 6301 Nulo —Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio + (leve)Escherichia coli ATCC 25922 Leve —

BibliografíaBact. Proceedings M33. (1969)J. Clin. Path., 7: 160 (1954)Clin. Lab. Forum. (1970)

Control de calidad


FundamentoPor la presencia simultánea de violeta cristal y sales bilia-res se asegura en gran parte la inhibición de la floraacompañante. La degradación de la glucosa a ácido sepone de manifiesto por el cambio de color del indicador.La presencia de halo en estas colonias corresponde a unprecipitado biliar.La mayoría de organismos que presentan estas característi-cas son Enterobacterias, sin embargo no es completamen-te específico, por ejemplo, las Aeromonas se comportan deforma similar.

Fórmula (por litro)Mezcla de Sales Biliares ........................ 1,5 gVioleta Cristal.......................................... 0,002 gRojo Neutro ............................................ 0,03 gD(+)-Glucosa .......................................... 10,0 gExtracto de Levadura ............................ 3,0 gPeptona de Gelatina ............................... 7,0 gSodio Cloruro ........................................ 5,0 gAgar ...................................................... 15,0 g

pH final: 7,4 ±0,2

PreparaciónSuspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Dejar enfriar a45ºC y emplear de inmediato. Se puede esterilizar con cui-dado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.

Modo de empleoTransferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con elmedio enfriado a una temperatura entre 45º y 48ºC, añadira cada placa 15 ml del medio líquido. Homogeneizar giran-do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriarhasta solidificación. Añadir a cada placa 10 ml más delmedio líquido y volver a dejar solidificar. Al haber aseguradola anaerobiosis no tendrá lugar el crecimiento de bacteriasGram-negativas no fermentadoras. Incubar a 37ºC durante24 horas. La formación de colonias de color púrpura viole-ta, rodeadas de un halo del mismo color, indica presenciade Enterobacterias.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige rojizo. pH: 7,4 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia

Escherichia coli ATCC 11775 Satisfactorio RojaSalmonella gallinarum NCTC 9240 Satisfactorio RojaShigella flexneri ATCC 29903 Satisfactorio RojaStaphylococcus aureus ATCC 6538 Inhibido —Streptococcus lactis ATCC 19435 Inhibido —

BibliografíaJ. Bact., 84: 381 (1962)J. Appl. Bact., 26: 444-452 (1963)

Control de calidad

Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Glucosa (VRBG), AgarViolet Red Bile Glucose Agar (VRBG)Cód.: 413745 Envase: 500 g

Se emplea para el recuento de Enterobacterias en productos lácteos, cárnicos y otros alimentos.


HistoriaEl primer trabajo original fue de M. H. Mac Crady en 1932para el análisis de leches. Más tarde Bartram y Black loemplearon para el recuento de Coliformes en leche cruda,pasteurizada y certificada. Así mismo Miller y Prickett loemplearon en un caso práctico de recontaminación de laleche. La formulación de este medio corresponde a lasrecomendaciones de la APHA.

FundamentoLa presencia simultánea de violeta cristal y sales biliaresasegura la inhibición del crecimiento de las bacterias Gram-positivas. A su vez la fermentación de la lactosa da lugarpor un lado a la formación de ácido, que hace virar a rojo elindicador, y por otro a la precipitación de las sales biliaresalrededor de las colonias. Las colonias, presentan un colorrojo púrpura y aparecen rodeadas por una franja rojiza.

Fórmula (por litro)Mezcla de Sales Biliares ......................... 1,5 gVioleta Cristal.......................................... 0,002 gRojo Neutro ............................................ 0,03 gLactosa .................................................. 10,0 gExtracto de Levadura ............................. 3,0 gPeptona de Gelatina .............................. 7,0 gSodio Cloruro ........................................ 5,0 gAgar........................................................ 15,0 g

pH final: 7,4 ±0,2

PreparaciónSuspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Se puede esterili-zar con cuidado (30 minutos vapor fluente, por ejemplo).NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE.

Modo de empleoTransferir 1 ml de la muestra a analizar y 1 ml de sus suce-sivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con elmedio enfriado a una temperatura entre 45º y 48ºC, añadira cada placa 15 ml del medio líquido. Homogeneizar giran-do lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriarhasta solidificación. Añadir a cada placa 10 ml más delmedio líquido y volver a dejar solidificar. Incubar a 37ºCdurante 24 horas para el recuento de Coliformes.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige rojizo. pH: 7,4 ±0,2



Escherichia coli ATCC 11775 Bueno RojoSalmonella gallinarum NCTC 9240 Bueno —Shighella flexneri ATCC 29903 Bueno —Staphylococcus aureus ATCC 6538 Inhibido —Streptococcus lactis ATCC 19435 Inhibido —

BibliografíaCompendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. APHA. (1976) Standard Methods for the Examination of Dairy Products. 14th ed. APHA. (1978)

Control de calidad

Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Lactosa (VRBL), AgarViolet Red Bile Lactose Agar (VRBL)Cód.: 413746 Envase: 500 g

Se emplea fundamentalmente como medio selectivo y diferencial para la detección y enumeración deColiformes en la leche y productos lácteos. También se emplea en aguas y otros productos alimentarios.


FundamentoLa Bilis y el Verde Brillante inhiben el crecimiento de la floraGram-positiva. Las bacterias reductoras del tetrationatocomo Proteus y Salmonella crecen de forma óptima,mientras que Coliformes y flora habitual del intestinoqueda inhibida.Puede añadirse Novobiocina a una concentración de0,04 g/l de Caldo para inhibir el crecimiento de Proteus.El carbonato cálcico neutraliza el ácido formado en lareducción del tetrationato.

Fórmula (por litro)Bilis de Buey desecada ............................ 8,0 gPotasio Tetrationato .................................. 20,0 gVerde Brillante........................................... 0,07 gCalcio Carbonato...................................... 20,0 gPeptona de Carne .................................... 8,6 gSodio Cloruro ........................................... 6,4 g

pH final: 7,0 ±0,2

PreparaciónDisolver 63 g en 1 l de agua destilada. Calentar (máximo50°C) y agitar hasta disolución total. Distribuir en tubosestériles repartiendo el precipitado de calcio carbonato. NOESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Los mejores enriqueci-mientos se consiguen después de dejar el Caldo preparadoen reposo 2 ó 3 días a temperatura ambiente.

Modo de empleoSembrar la muestra e incubar a 37ºC durante 24 horas.Pasado el tiempo de incubación sembrar en medio selectivo.


Novobiocina *

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: presenta un precipitado de Calcio Carbonato.Color: crema a lo sumo con tinte verdoso. pH: 7,0 ±0,2


CrecimientoMicroorganismos Concentración del inóculo 6 horas 24 horas

Escherichia coli ATCC 11775 aprox. 99% < 30% < 5%Salmonella typhimurium ATCC 14028 aprox. 1% > 70% > 95%

BibliografíaJ. Clin. Path., 12: 568-571 (1959)Ph. Eur. IV (2002)

Control de calidad

Bilis-Tetrationato-Verde Brillante, CaldoBile Tetrathionate-Brilliant Green BrothCód.: 414654 Envase: 500 g

Se emplea para el enriquecimiento selectivo de Salmonella en leches y productos lácteos, carnes y alimen-tos en general.


HistoriaSe trata de una réplica del medio propuesto por Noble yTonney para la determinación de bacterias Coliformes enaguas. Está concebido como indicador del grado de conta-minación de la muestra.

FundamentoLa presencia conjunta del verde brillante y de la bilis hacenque el medio sea selectivo para bacilos Gram-negativos, loscuales al fermentar la lactosa dan lugar a colonias intensa-mente rojas rodeadas de un halo rosa, que contrastan conel fondo verde azulado del medio.

Fórmula (por litro)Bilis de Buey ....................................... 2,95 mgVerde Brillante ..................................... 29,5 µgErioglaucina......................................... 64,9 mgFucsina Básica .................................... 77,6 mgHierro(III) Cloruro.................................. 29,5 mgLactosa ............................................... 1,9 gPeptona de Gelatina............................ 8,25 gPotasio di-Hidrógeno Fosfato .............. 15,3 mgSodio Sulfito ........................................ 0,205 gAgar .................................................... 10,15 g

pH final: 6,9 ±0,2

PreparaciónSuspender 20,6 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir yesterilizar a 121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleoEl medio preparado es fotosensible por lo que se reco-mienda almacenarlo al abrigo de la luz, y prepararlo pocoantes de su utilización.Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.Color: púrpura claro. pH: 6,9 ±0,2



Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio Rojo intensoSalmonella enteritidis ATCC 13076 Satisfactorio IncoloraStaphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido —Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio Rosa

BibliografíaNoble y Tonney, Journal of American Water Works Association, 27: 108 (1935)

Control de calidad

Bilis-Verde Brillante, AgarBrilliant Green Bile AgarCód.: 413747 Envase: 500 g

Se emplea como medio selectivo y diferencial para determinar la densidad relativa de bacterias Coliformesen agua, aguas residuales y alimentos.


HistoriaLos primeros que consiguieron resultados satisfactoriosfueron Dunham y Schoenlein, que después de ensayar lascantidades y proporciones de los componentes obtuvieronresultados óptimos. Es un medio recomendado por diver-sos organismos oficiales.

FundamentoEl objetivo de este medio es el de poder inhibir el creci-miento de los microorganismos distintos de los del grupode Coliformes, al tiempo que éstos puedan crecer sin res-tricción. Con la presencia de la Bilis de buey y del VerdeBrillante se consigue la inhibición de casi la totalidad de losmicroorganismos Gram-positivos y de los Gram-negativosdistintos de los del grupo de los Coliformes. Se ha de seña-lar que la concentración de Verde Brillante es crítica paraimpedir el crecimiento de gérmenes anaerobios capaces defermentar la lactosa a 44ºC, lo cual, si se produjera, podríafalsear los resultados. Debe confirmarse la identificación porotras pruebas ya que la fermentación de la lactosa con for-mación de gas se interpreta como indicativo de E. coli. Laproducción de gas se evidencia con la campana de Durham.

Fórmula (por litro)Bilis de Buey Deshidratada ..................... 20,0 gVerde Brillante......................................... 13,3 mgLactosa .................................................. 10,0 gPeptona de Gelatina ............................... 10,0 g

pH final: 7,2 ±0,2

PreparaciónDisolver 40 g en 1 l de agua destilada. Distribuir en tubos deensayo con campana Durham en porciones de 10 ml cuan-do la muestra sea de 1 ml o menos. Si la muestra a anali-zar es mayor, se puede preparar un caldo más concentra-do (doble o triple concentrado) y restablecer la concentra-ción al añadir la muestra. En cualquier caso esterilizar a121ºC durante 15 minutos.

Modo de empleoPara los Coliformes totales incubar a 37ºC de 24 a 48 horas.Para los Coliformes fecales incubar a 44ºC de 24 a 48 horas.En la técnica de NMP el título de E. coli, corresponde alvolumen más pequeño de muestra que produce gas a44°C. Debe confirmarse la identificación por otras pruebascomplementarias.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige verdoso. pH: 7,2 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Producción de gas

Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio +Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio +Staphylococcus aureus ATCC 25923 Inhibido —Enterococcus faecalis ATCC 19433 Inhibido —

BibliografíaStandard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)Meat and Meat products-Detection and Enumeration of Presumptive coliform Bacteria and Presumptive Escherichia coli. ISO 3811. (1975)

Control de calidad

Bilis-Verde Brillante 2%, CaldoBrilliant Green Bile 2% BrothCód.: 413748 Envase: 500 g

Se emplea para la investigación y recuento de bacterias Coliformes en aguas, leches, productos alimenticiosy cualquier material de interés sanitario. Recomendado para el enriquecimiento selectivo y enumeración deE. coli, y para la técnica del NMP.


HistoriaEste medio se basa en la formulación original dada porBordet y Gengou a la que se han introducido algunas modi-ficaciones hasta tener la fórmula actual. Su principal aplica-ción ha sido el diagnóstico de la tos ferina. Como se tratade una base se debe añadir sangre desfibrinada.

FundamentoEl medio con glicerina y sangre está indicado para el cre-cimiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertus-sis. Se puede conseguir que el medio sea selectivo si seañaden 0,25 unidades de Penicilina por cada ml. En lasmuestras de secreciones nasofaríngeas hay mucha floraacompañante de Bordetella resistente a la Penicilina, porlo que se recomienda la adición de 40 mg de cefalexinapor litro de medio.

Fórmula (por litro)Infusión de Patata....................................... 4,5 gProteosa Peptona....................................... 10,0 gSodio Cloruro ............................................. 5,5 gAgar............................................................ 16,0 g

pH final: 6,7 ±0,2

PreparaciónSuspender 36 g en 1 l de agua destilada, añadir 10 ml deglicerina y mezclar bien. Calentar y agitar hasta ebullición ydisolución total. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.Dejar enfriar hasta 45ºC y añadir asépticamente 150-200 mlde sangre de caballo desfibrinada y estéril. Mezclar bien sinhacer burbujas y distribuir en placas de Petri estériles. Antesde distribuir puede añadirse el antibiótico.Las placas deben estar más bien llenas de medio y no debensecarse puesto que tendrán incubaciones prolongadas.

Modo de empleoIncubar a 37ºC de 3 a 4 días.Las colonias de Bordetella pertussis son prácticamentetransparentes, poco definidas, brillantes y de diámetroinferior a 1 mm con un estrecho halo de hemólisis tipo:beta. Bordetella parapertussis tiene un crecimiento másrápido. Las colonias son similares y dan una coloraciónverde oscura al medio.Las colonias de cocos Gram-positivos son opacas y másoscuras.Pasados 6 días de incubación sin crecimientos característi-cos puede considerarse que las muestras son negativas.


131339 Glicerina PA-ACS-ISO 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l; 60 l

Sangre de Caballo

Penicilina *

Cefalexina *

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: puede tener un ligero precipitado.Color: beige. pH: 6,7 ±0,2



Bordetella bronchiseptica ATCC 4617 SatisfactorioBordetella pertussis ATCC 8467 SatisfactorioBordetella parapertussis Satisfactorio

BibliografíaJ. Path. Bact., 35: 831-842 (1932)Amm. Inst. Pasteur, 20: 731-741 (1906)

Control de calidad

Bordet Gengou, Base de AgarBordet Gengou Agar BaseCód.: 413750 Envase: 500 g

Se emplea para la identificación y aislamiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertussis, básica-mente en el diagnóstico de la tos ferina.


FundamentoSe trata de un medio muy nutritivo dado el elevado conte-nido de peptonas. El extracto de levadura es una fuente decomplejo vitamínico B. La glucosa aporta la energía nece-saria para el desarrollo de los microorganismos. Como basepermite añadir sangre y otras vitaminas según se desee.Para hacerlo más selectivo se pueden añadir antibióticoscomo la Polimixina B, la Bacitracina y la Cicloheximida,sobre todo si se trata de investigar Brucella, también puedeañadirse Violeta de Metilo. Las concentraciones de estosaditivos con los que se suplementa este medio son:

Bacitracina..................................... 25000 UI/lPolimixina-B................................... 6000 UI/lCicloheximida ................................ 100 mg/lVioleta de Metilo ............................ 1,25 mg/l

Esta base también puede ser usada como: Medio basal para Campylobacter jejuni. Mediante la adiciónde los siguientes antibióticos; por litro de medio.

Vancomicina .................................... 10 mg/lPolimixina-B..................................... 2500 UI/lTrimetoprim...................................... 5 mg/l

además de estos tres productos si la muestra a analizarpuede estar contaminada con Candida albicans añadir:

Cefalotina ............................................. 15 mg/lAmfotericina B ..................................... 2 mg/l

Fórmula (por litro)Extracto de Levadura ................................. 2,0 gD(+)-Glucosa .............................................. 1,0 gPeptona de Carne ...................................... 10,0 gPeptona de Caseína ................................... 10,0 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gSodio Hidrógeno Sulfito .............................. 0,1 gAgar............................................................ 15,0 g

pH final: 7,0 ±0,2

PreparaciónSuspender 43 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a121ºC durante 15 minutos. Suplementar el medio según losobjetivos deseados.

Modo de empleoPara la determinación de Brucella, los cultivos primarios seincubarán 4-5 días en atmósfera al 10% CO2. Si no hay cre-cimiento, la incubación se prolongará hasta 21 días. Para ladeterminación de Campylobacter la inoculación se realizaráen una atmósfera rica en CO2. A 37°C crecen las especiesde Campylobacter más habituales, para seleccionarCampylobacter jejuni, hacer la incubación a 42°C.

Advertencia: Las especies de Brucella son muy infecciosas(vehículo de transporte el aire), por lo que deben ser mani-puladas en cabina de seguridad.


Bacitracina *

374952 Polimixina B Sulfato PB * 1 g

375266 Cicloheximida PB * 1 g; 5 g; 25 g

Vancomicina *

Trimetoprim *

Cefalotina *

Anfotericina B *

252079 Violeta de Metilo DC * 25 g; 100 g

* Producto Opcional


Brucella, Base de AgarBrucella Agar BaseCód.: 413837 Envase: 500 g

Se emplea para el cultivo y aislamiento de Brucella en productos lácteos y muestras biológicas. Añadiendosangre permite el cultivo de gérmenes aerobios y anaerobios con exigencias particulares.


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.Color: beige claro. pH: 7,0 ±0,2

Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCen atmósfera de CO2 y observados a las 24-72 horas.


Brucella abortus ATCC 4315 SatisfactorioBrucella melitensis ATCC 4309 SatisfactorioBrucella suis ATCC 4314 Satisfactorio

BibliografíaJ. Bact., 66: 502-504 (1953)Amer. J. Clin. Path., 27: 482-485 (1957)

Control de calidad


HistoriaEste medio está basado en las formulaciones originalesde Frazier y Rupp y modificado hasta obtener resultadosóptimos.

FundamentoEl medio preparado ha de ser opalescente debido a la pre-sencia de caseína. El procedimiento se fundamenta en quelos microorganismos proteolíticos degradan la proteínaproduciéndose un halo de transparencia alrededor de lascolonias. Si no se produce este halo el resultado de ladeterminación es negativo. Si se desea intensificar la turbi-dez del medio se pueden añadir de 5 a 10 g de leche des-cremada en 1 l de medio.

Fórmula (por litro)Calcio Cloruro........................................... 0,05 gCalcio Hidróxido ....................................... 0,05 gCaseína (Hammarsten).............................. 2,5 gExtracto de Carne .................................... 3,0 gPeptona de Carne .................................... 5,0 gSodio Cloruro ........................................... 5,0 gAgar.......................................................... 13,5 g

pH final: 7,2 ±0,2

PreparaciónSuspender 29 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición. Esterilizar a 121ºC durante 15 minutos.Distribuir en placas de Petri estériles mezclando bien el pre-cipitado que se forma. El medio debe ser opalescente.

Modo de empleoSe puede inocular por extensión en superficie o por vertidoen placas y la incubación puede durar de 2 a 3 días. Parafacilitar el recuento de las colonias, con halo de transparen-cia, se puede cubrir la superficie de la placa con ácido acé-tico entre el 5 y el 10%.


131008 Acido Acético glacial PA-ACS-ISO * 1 l; 2,5 l; 5 l; 25 l;60 l; 200 l

Leche desnatada *

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente.Color: beige claro. pH: 7,2 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Halos de transparencia

Bacillus cereus ATCC 11778 Satisfactorio +Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Satisfactorio +Proteus vulgaris ATCC 13315 Satisfactorio —Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio —

BibliografíaFRAZIER & RUPP., J. Bact., 16: 57-63 (1928)

Control de calidad

Calcio Caseinato, AgarCalcium Caseinate AgarCód.: 413830 Envase: 500 g

Se emplea como medio selectivo para el recuento de microorganismos proteolíticos (degradadores de pro-teínas) en alimentos.


HistoriaSe trata de unos medios prescritos por el Centro Nacionalpara la Alimentación y Nutrición (CeNAN). El medio líquidose utiliza para la detección presuntiva de Enterococos mien-tras, que el medio sólido permite la detección confirmativay aislamiento de estos organismos.

FundamentoLa selectividad de estos medios para los Enterococos es muyelevada e incluso superior a la de otros medios comparables.La canamicina sulfato y la azida sódica inhiben el creci-miento de la flora acompañante, mientras que losEnterococos pueden crecer sin restricción. A su vez estosmicroorganismos hidrolizan la esculina con la producciónde glucosa y esculetina, la cual reacciona con el amoniohierro(III) citrato para dar un complejo de color variable entreel verde y el negro.

Fórmula (por litro) del CaldoCanamicina Sulfato................................... 0,02 gEsculina .................................................... 1,0 gAzida Sódica ............................................ 0,15 gAmonio Hierro(III) Citrato ........................... 0,5 gExtracto de Levadura................................ 5,0 gSodio Cloruro ........................................... 5,0 gdi-Sodio Hidrógeno Citrato ....................... 1,0 gTriptona .................................................... 20,0 g

pH final: 7,0 ±0,2

Fórmula (por litro) del AgarCanamicina Sulfato ................................... 0,02 gEsculina .................................................... 1,0 gAzida Sódica ............................................ 0,15 gAmonio Hierro(III) Citrato ........................... 0,5 gExtracto de Levadura................................ 5,0 gSodio Cloruro ........................................... 5,0 gdi-Sodio Hidrógeno Citrato ....................... 1,0 gTriptona .................................................... 20,0 gAgar.......................................................... 15,0 g

pH final: 7,0 ±0,2

PreparaciónSuspender 33 g de Caldo o 48 g del Agar en 1 l de aguadestilada. El caldo se distribuye en tubos de 9 ml y se este-riliza a 121ºC durante 15 minutos. El agar esterilizado sedistribuye en placas de Petri.

Modo de empleoSe siembra 1 ml de la muestra o de las diluciones en el Caldode cultivo, que se incubará a 37ºC durante 24h. Se conside-rarán positivos aquellos tubos que hayan desarrollado uncolor verde negruzco. De ellos se sembrará una alícuota de0,1 ml, en la superficie de las placas de Agar (CanamicinaEsculina Azida). Estas placas se incubaran a 37ºC durante48 horas con lectura cada 24 horas. Los Enterococos for-man colonias translúcidas rodeadas de un halo negro. Aislarlas colonias y realizar las confirmaciones pertinentes.El Caldo Canamicina Esculina azida permite, además, elrecuento por la técnica de NMP.

Canamicina Esculina Azida (CeNAN), AgarKanamycin Esculin Azide Agar (CeNAN)Cód.: 414676 Envase: 500 g

Canamicina Esculina Azida (CeNAN), CaldoKanamycin Esculin Azide Broth (CeNAN)Cód.: 414695 Envase: 500 g

Se emplea para la detección, aislamiento y confirmación de Enterococos en alimentos, aguas y otras mues-tras biológicas.


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige. pH: 7,0 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Viraje a verde oliva-negro

Enterococcus faecalis ATCC 11700 Bueno +Enterococcus faecium ATCC 8043 Bueno +Staphylococcus aureus ATCC 6538 Moderado —Escherichia coli ATCC 11775 Inhibido —Streptococcus lactis ATCC 19435 Inhibido-ligero + / leve

BibliografíaCeNAN Técnicas para el Examen Microbiológico de Alimentos y Bebidas. Madrid. (1982)

Peligrosidad

R: 22-52 Nocivo por ingestión. Nocivo para los organismos acuáticos.

S: 45 En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico (si es posible, muéstrele la etiqueta).

Control de calidad


HistoriaEste medio se basa en el caldo de Rosenow. Los primerosestudios demostraron que el medio era más eficaz que otroscomo base glucosada en el aislamiento de determinadasbacterias. Si además se le añadía antibiótico el medio sehacía selectivo para el cultivo de levaduras y hongos, sobretodo en muestras altamente contaminadas por bacterias.

FundamentoPor la presencia de peptona, infusión de cerebro de ternerae infusión de corazón de res, se tienen los componentesnecesarios para nutrir microorganismos exigentes. La gluco-sa se emplea para la fermentación y el fosfato comotampón. Por la adición de antibiótico es un medio adecuadopara el estudio de hongos patógenos. Debido a su conteni-do de glucosa es menos indicado para la caracterización dehemólisis, pero puede utilizarse suplementado con sangre.

Fórmula (por litro) de Cerebro Corazón (BHI),Infusión

Infusión de Cerebro deTernera (a partir de 200 g) ............................. 12,5 gInfusión de Corazón deRes (a partir de 250 g) ................................... 5,0 gD(+)-Glucosa .............................................. 2,0 gPeptona de Gelatina ................................... 10,0 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gdi-Sodio Hidrógeno Fosfato........................ 2,5 g

pH final: 7,4 ±0,2

Fórmula (por litro) de Cerebro Corazón (BHI),Agar

Infusión de Cerebro de Ternera (a partir de 200 g) ............................. 12,5 gInfusión de Corazón de Res (a partir de 250 g) ................................... 5,0 gD(+)-Glucosa .............................................. 2,0 gMezcla de Peptonas ................................... 10,0 gdi-Potasio Hidrógeno Fosfato ..................... 2,5 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gAgar............................................................ 15,0 g

pH final: 7,4 ±0,2

PreparaciónSuspender 52 g (Agar) ó 37 g (Infusión) en 1 l de aguadestilada; calentar y agitar hasta ebullición y hervir duran-te 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 121ºC durante 15 minu-tos. Agitar el medio antes de usar. Para preparar un medioselectivo para hongos, el medio esterilizado y fundido sedebe enfriar hasta 50ºC y añadir asépticamente 20.000 UIde penicilina y 40 mg de estreptomicina por litro de medio.Se obtiene un medio más estable añadiendo 0,05 mg decicloheximida y 0,5 mg de cloranfenicol por litro, antes deesterilizar.

Modo de empleoIncubar a 37ºC de 24 a 72 horas.


Sangre *

Estreptomicina *

Gentamicina *

143481 Cloranfenicol (RFE, BP, Ph. Eur.) 25 g; 100 g; 500 gPRS-CODEX *

375266 Cicloheximida PB* 1 g; 5 g; 25 g

* Producto Opcional


Cerebro Corazón (BHI), InfusiónBrain Heart Infusion (BHI)Cód.: 413777 Envase: 500 g

Cerebro Corazón (BHI), AgarBrain Heart Infusion Agar (BHI)Cód.: 413772 Envase: 500 g

Se emplea para el cultivo de bacterias exigentes como Estreptococos, Neumococos, Meningococos y otros.Por la adición de Estreptomicina, Gentamicina o Cloranfenicol resulta un medio selectivo para hongos.


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.Color: beige. pH: 7,4 ±0,2



Neisseria meningitidis ATCC 13090 BuenoStreptococcus pneumoniae ATCC 6303 BuenoStreptococcus pyogenes ATCC 19615 Bueno

BibliografíaJ. Bact., 62: 613 (1951)

Control de calidad


HistoriaMossel concibió este medio para la detección y enumera-ción de Bacillus cereus en todo tipo de alimentos. Ademásdel recuento, este medio permite definir determinadascaracterísticas de este microorganismo: la resistencia a laPolimixina B, la producción de lecitinasa y la no fermenta-ción del Manitol.

FundamentoLa adición de Polimixina-B Sulfato a esta base de agarinhibe el crecimiento de la flora secundaria. B. cereus esmanitol-negativo, lo que permite su distinción de la floraacompañante manitol-positiva, que hace virar el Azul deBromotimol a amarillo. Al tratarse de un microorganismocon actividad lecitinasa se forma un halo de precipitadosblancos alrededor de la colonia, como resultado de ladegradación de la lecitina del huevo.B. cereus en condiciones normales y cuando su número eslimitado no se considera patógeno, sin embargo es capazde producir intoxicación alimentaria al hombre cuando unalimento esta muy contaminado o cuando las condicionesde conservación no son adecuadas. Se utiliza, también,como indicador del mantenimiento de la cadena del frío enlos alimentos.

Fórmula (por litro)Azul de Bromotimol .................................. 0,12 gD(+)-Manita............................................... 10,0 gPeptona Bacteriológica............................. 1,0 gdi-Sodio Hidrógeno Fosfato ...................... 2,5 gSodio Piruvato .......................................... 10 gPotasio di-Hidrógeno fosfato .................... 0,2 gMagnesio Sulfato...................................... 0,1 gCloruro Sódico.......................................... 2,0 g

Agar.......................................................... 14 g

pH final: 7,2 ±0,2

PreparaciónSuspender 40 g en 950 ml de agua destilada. Calentar yagitar hasta disolución total. Distribuir y esterilizar a 121ºCdurante 15 minutos. Enfriar a 50ºC; añadir asépticamente100.000 UI de Polimixina B y 50 ml de emulsión de yemade huevo estéril por litro de medio. Mezclar bien y distribuir.

Modo de empleoLas placas sembradas se incuban a 30ºC de 18 a 24 horas.Pueden existir confusiones con colonias de otros bacilosGram-positivos.Las pruebas confirmativas a realizar son: fermentación deglucosa, la utilización de la gelatina y reducción de nitratos,pruebas positivas para Bacillus cereus.


374952 Polimixina B Sulfato PB 1 g

414722 Emulsión Yema de 50 ml; 100 mlHuevo CULTIMED


Cereus (BCA), Base de Agar SelectivoBacillus Cereus Selective Agar BaseCód.: 414119 Envase: 500 g

Se emplea para el aislamiento y recuento de Bacillus cereus, en todo tipo de alimentos.


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: crema. pH: 7,2 ±0,2

Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCy observados a las 24-40 horas después de añadir Emulsión de Yema de Huevo y Polimixina B Sulfato.

Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia Precipitación

Bacillus cereus ATCC 11778 Aceptable Azul Turquesa +Bacillus subtilis ATCC 6051 Aceptable Amarillo —Proteus mirabilis ATCC 29906 Inhibido —Staphylococcus aureus ATCC 6538 Inhibido —

BibliografíaAppl. Microbiol., 15: 650-653 (1967)J. Bact., 75: 499-509 (1958)

Control de calidad


HistoriaEste medio está formulado de acuerdo con la composiciónoriginal de Chapman. Se trata de un medio similar al deEstafilococos nº 110, empleándose de la misma manera ydiferenciándose de este último en que se ha reducido al5,5% el contenido de sodio cloruro y se ha añadido amoniosulfato, con lo que ya no es necesario impregnar la placacon disolución de esta sal para determinar la licuefacciónde la gelatina por el método de Stone.

FundamentoEl aspecto del medio preparado es blanco y opaco. Lapresencia de sodio cloruro le confiere carácter selectivo.En este medio es posible determinar si hubo fermentaciónde la D(-)-Manita tras gotear una solución de púrpura debromocresol al 0,04% donde crecieron las colonias; si seproduce cambio de color indica presencia de ácido, portanto reacción positiva. A su vez los halos transparentescorresponden a la proteólisis de la gelatina por el enzimagelatinasa. Después de la incubación cualquier coloniaamarilla o anaranjada, rodeada de un halo transparente ymanitol positiva, corresponderá probablemente aStaphylococcus aureus.Para aumentar la selectividad del medio puede añadirseSodio Azida a razón de 65 mg/l.

Fórmula (por litro)Amonio Sulfato ........................................... 75,0 gExtracto de Levadura ................................. 2,0 gGelatina ...................................................... 30,0 gD(-)-Manita.................................................. 10,0 gPeptona...................................................... 10,0 gdi-Potasio Hidrógeno Fosfato ..................... 5,0 gSodio Cloruro ............................................. 55,0 gAgar............................................................ 15,0 g

pH final: 7,0 ±0,2

PreparaciónSuspender 202 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar.Hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar a 121ºCdurante 10 minutos.

Modo de empleoSe dispensa según se desee y se incuba entre 30º y 32ºCdurante 48 horas.Las colonias de Estafilococos patógenos son amarillas,doradas o anaranjadas, fermentan el manitol y dan positivala reacción de Stone.


121546 Púrpura de Bromocresol PA 5 g; 25 g

122712 Sodio Azida PA * 100 g; 250 g; 1 kg

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: opalescente con precipitado.Color: beige claro. pH: 7,0 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Halo

Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido —Staphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio +Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 Satisfactorio +

BibliografíaChapman, Food Res., 13: 100 (1948)Chapman, J. Bact., 63: 147 (1952)

Control de calidad

Chapman-Stone, AgarChapman-Stone AgarCód.: 413831 Envase: 500 g

Se emplea como medio selectivo y diferencial en el aislamiento de Estafilococos en alimentos.


HistoriaLa formulación de este medio corresponde al descrito en laISO 9308 sobre determinación y recuento de coliformes, ymedio presuntivo de E. coli.

FundamentoLa fermentación de la Lactosa se pone de manifiesto por elviraje del Azul de Bromotimol; las colonias lactosa positivastienen un halo amarillo, mientras que las lactosa negativaspresentan un halo azulado. El Sodio Heptadecil Sulfato(Tergitol 7) es inhibidor de la flora acompañante. Este medio puede ser utilizado sin la adición de TTC y per-mitirá la presunción de Coliformes. La adición del TTC per-mite una sospecha precoz de la presencia de E. coli. Esteproducto es reducido por todos los Coliformes, a excepciónde E. coli. Las colonias adquieren un color rojo ladrillo,mientras que la colonia de E. coli es amarilla con o sin cen-tro anaranjado.

Fórmula (por litro)Azul de Bromotimol .................................. 0,05 gExtracto de Levadura................................ 6,0 gExtracto de carne ..................................... 5,0 gPeptona de Carne .................................... 10,0 g

Lactosa 1-hidrato .................................... 20,0 gSodio Heptadecil sulfato ........................... 0,1 gAgar.......................................................... 15,0 g

pH final: 7,2 ±0,2

PreparaciónDisolver 56,2 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-lución y esterilizar a 121 ºC durante 15 minutos. Dejarenfriar el agar hasta 45-60ºC y añadir 3 ml de una soluciónal 1% de 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro esterilizadapor filtración. Mezclar bien y repartir en placas de Petriestériles. No recalentar.

Modo de empleoFiltrar el volumen de agua aconsejado en las normativas ycolocar el filtro en las placas preparadas. Realizar dos filtra-ciones e incubar una a 37 ºC y otra a 44ºC para determinarcoliformes totales y fecales, respectivamente.


374950 2,3,5-Trifenil-2H-Tetrazolio Cloruro PB 10 g; 25 g; 100 g


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige azulado. pH: 7,2 ±0,2

Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCy observados a las 24-48 horas.

Microorganismos Desarrollo Color de la Colonia Halo

Escherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio Amarillo con centro naranja AmarilloCitrobacter sp. Satisfactorio Amarillo con centro naranja AzuladoKlebsiella sp. Satisfactorio Rojo a amarillo Amarillo

Enterobacter aerogenes ATCC 13048 SatisfactorioRojo a amarillo oscuro

Amarillocon centro naranjaEspecies no fermentadoras Satisfactorio Violeta claro Azulado

BibliografíaJ. Bact., 53: 504 (1947)J. Appl. Bact., 25: 20-29 (1962)Orden nº 21936. BOE nº 193. (1983)ISO 9308: 1 (1990)

Control de calidad

Chapman TTC (Tergitol 7), AgarChapman TTC (Tergitol 7) AgarCód.: 414955 Envase: 500 g

Medio recomendado para la determinación del número de Coliformes totales, fecales y presunción de E. colien aguas potables y envasadas por el método de filtro membrana.


FundamentoKoser descubrió que aportando como única fuente de car-bono el ácido cítrico o su sal sódica, Enterobacter aeroge-nes se desarrolla bien mientras que Escherichia coli queda-ba inhibida. De esta manera los tubos que después de laincubación quedan opalescentes indicarán presencia demicroorganismos citrato-positivos. El suministro de nitróge-no se aporta a través del ion amonio.

Fórmula (por litro)Sodio Citrato .............................................. 3,0 gAmonio Sodio Fosfato ................................ 1,5 gMagnesio Sulfato........................................ 0,2 gPotasio di-Hidrógeno Fosfato ..................... 1,0 g

pH final: 6,7 ±0,2

PreparaciónSuspender 5,7 g en 1 l de agua destilada. Agitar hasta diso-lución total. Distribuir en tubos a razón de 6 ml por tubo yesterilizar a 118ºC durante 15 minutos.

Modo de empleoSembrar el medio e incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: blanco. pH: 6,7 ±0,2



Enterobacter aerogenes ATCC 13048 SatisfactorioEnterobacter cloacae ATCC 23355 SatisfactorioEscherichia coli ATCC 25922 Nulo

BibliografíaStandard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 15th ed. APHA. (1981)

Control de calidad

Citrato de Koser, CaldoKoser Citrate MediumCód.: 414692 Envase: 500 g

Se emplea para la diferenciación de organismos Coliformes, básicamente de Escherichia y Enterobacter,basándose en la capacidad de utilizar el citrato.


HistoriaEste medio fue desarrollado por primera vez en forma líqui-da por Koser. No obstante, presentaba el inconveniente deenturbiarse cuando se empleaban inóculos grandes, inclu-so sin producirse crecimiento alguno. Más tarde Simmonsdesarrolló el mismo medio en forma sólida y consiguiósuperar las desventajas anteriores.La formulación de este medio cumple las recomendacionesde la APHA.

FundamentoEste medio se fundamenta en el distinto comportamientode los Coliformes fecales y los Aerógenos en un ambienteque contiene sales inorgánicas de amonio como únicafuente de nitrógeno y citrato como única fuente de carbo-no. En tal situación los primeros muestran su incapacidadde desarrollo, mientras que los segundos lo hacen sin difi-cultad. La presencia de azul de bromotimol hace que elmedio, inicialmente verde, pueda cambiar de color por laproducción de álcali, a un azul oscuro.Para caracterizar Klebsiella es preciso añadir Inosita a razónde 10 g/l antes de esterilizar.

Fórmula (por litro)tri-Sodio Citrato ........................................ 2,0 gAmonio di-Hidrógeno Fosfato ................... 1,0 gAzul de Bromotimol .................................. 0,08 gMagnesio Sulfato ...................................... 0,2 gdi-Potasio Hidrógeno Fosfato ................... 1,0 gSodio Cloruro ........................................... 5,0 gAgar.......................................................... 15,0 g

pH final: 6,9 ±0,2

PreparaciónSuspender 24,2 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitarhasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esteri-lizar a 121ºC durante 15 minutos. Si se distribuye en tubosde ensayo dejar enfriar en posición inclinada, dejando unfondo de 2-3 cm y una superficie inclinada de 4-5 cm.

Modo de empleoEl medio preparado es de color verde, cuando se siembraen los tubos se hace en la columna vertical y por estría enla superficie inclinada.Incubar entre 35º y 37ºC de 18 a 24 horas.


A14459 Inosita * 5 g; 25 g; 100 g

* Producto Opcional


Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: ligeramente opalescente.Color: verde. pH: 6,9 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Viraje a azul

Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Bueno +Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido —Salmonella enteritidis ATCC 13076 Bueno +Salmonella typhimurium ATCC 14028 Bueno +Salmonella typhi ATCC 19430 Bueno —Shigella dysenteriae ATCC 13313 Inhibido —

BibliografíaSIMMONS, J. S. J. Infect. Dis., 39: 209-241 (1926)Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. 2nd ed. APHA. (1984)

Control de calidad

Citrato de Simmons, AgarSimmons Citrate AgarCód.: 413811 Envase: 500 g

Se emplea para la diferenciación e identificación de Enterobacteriáceas y ciertos Hongos, basándose en lautilización del Citrato.


HistoriaSandys fue el primero en trabajar sobre un medio que per-mitiera la observación de colonias al mismo tiempo que seevitara la aglomeración por Proteus. Más tarde, conjunta-mente con Mackey, fueron modificando las formulaciones delos primeros ensayos hasta llegar a la composición actual.

FundamentoEl Azul de Bromotimol cambia de color por la fermentaciónácida de la Lactosa. La Cistina favorece el crecimiento de lasEnterobacteriáceas y el bajo contenido en electrolitos redu-ce la difusión de Proteus. Las peptonas, el extracto de carney la Lactosa constituyen los elementos nutrientes del medio.

Fórmula (por litro)Azul de Bromotimol ................................ 0,02 gL-Cistina ................................................. 0,128 gExtracto de Carne .................................. 3,0 gLactosa .................................................. 10,0 gPeptona de Caseína ............................... 4,0 gPeptona de Gelatina ............................... 4,0 gAgar........................................................ 15,0 g

pH final: 7,3 ±0,2

PreparaciónSuspender 36,1 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a121ºC durante 15 minutos. Homogeneizar y distribuir enplacas de Petri estériles.

Modo de empleoSembrar por estría en la superficie del medio.Incubar a 37ºC de 18 a 24 horas.

Control físico-químicoAspecto: polvo fino. Solubilidad: total.Color: beige verdoso. pH: 7,3 ±0,2


Microorganismos Desarrollo Color del Medio

Enterobacter aerogenes ATCC 13048 Satisfactorio AmarilloProteus vulgaris ATCC 13315 Satisfactorio Azul-Azul verdosoEscherichia coli ATCC 25922 Satisfactorio AmarilloStaphylococcus aureus ATCC 25923 Satisfactorio Amarillo claro o sin cambioEnterococcus faecalis ATCC 19433 Satisfactorio Amarillo claro o sin cambio

BibliografíaApp. Microb., 19: 409

Control de calidad

CLED, MedioCLED MediumCód.: 413753 Envase: 500 g

Se emplea para el recuento, aislamiento e identificación orientativo de gérmenes en orina. También seemplea como medio de transporte para inóculos en inmersión.


FundamentoLa formulación del medio corresponde a Geldreich y cola-boradores. Por la presencia de las sales biliares nº 3 se leconfiere un carácter selectivo para las Enterobacteriáceas,que a su vez se hace selectivo para los Coliformes fecalesal incubar a 44,5ºC. Este medio suplementado con AcidoRosólico hace que las colonias de coliformes fecales apa-rezcan de color azul y las demás de color gris.Al adicionar 15 g de Agar-Agar al Caldo se obtiene el Agarpara coliformes fecales (mFC) utilizado, habitualmente, en latécnica de filtración por membrana. El filtro a través del cualse ha filtrado la muestra, se coloca sobre la superficie delAgar. Pasadas 24 horas de incubación a 44,5°C se cuentanlas colonias de Coliformes.

Fórmula (por litro)Azul de Anilina ............................................ 0,1 gExtracto de Levadura ................................. 3,0 gLactosa ...................................................... 12,5 gProteosa Peptona nº 3 ............................... 5,0 gSales Biliares nº 3 ....................................... 1,5 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gTriptosa....................................................... 10,0 g

pH final: 7,4 ±0,2

PreparaciónSuspender 37,1 g en 1 l de agua destilada. Añadir 10 ml deAcido Rosólico al 1% en una solución de Sodio Hidróxido0,2N, calentar y agitar hasta ebullición. Si deseamos prepa-rar un medio sólido suspender: 15 g de Agar Bacteriológicoen 500 ml de agua y esterilizar a 121°C durante 15 minu-tos, dejar enfriar hasta 45-50°C. Preparar 500 ml de mediodoble concentrado; una vez disuelto mezclar con los 500 mlde Agar. Dejar enfriar y distribuir.En lugar de Agar el medio líquido puede depositarse sobreAlmohadillas absorbentes estériles, que harán de soportepara el filtro.

Modo de empleoSembrar el inóculo deseado en el tubo o en la superficie delmedio si es un agar.Incubar a 37ºC durante 24 horas. Si se desea una totalselectividad de Escherichia coli incubar a 44,5ºC.


121051 Acido Rosólico PA 10 g; 25 g; 50 g

131687 Sodio Hidróxido lentejas 500 g; 1 kg; 5 kg;PA-ACS-ISO 25 kg; 50 kg

402302 Agar Bacteriológico Tipo 500 g; 5 kg; 25 kg; 50 kgEuropeo CULTIMED *

Almohadillas absorbentes *

* Producto Opcional



Control microbiológicoLos siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas patrón, después de incubación a temperatura de 37ºCy observados a las 24 horas, después de haber añadido 10 ml/l de ácido rosólico al 1%.


Escherichia coli ATCC 25922 Bueno AzulSalmonella thyphimurium ATCC 14028 Bueno GrisShigella flexneri ATCC 12022 Bueno GrisEnterococcus faecalis ATCC 19433 Inhibido —

BibliografíaJ. Amer. Water Works Association, 57: 208 (1965)ISO 9308 - 1:1990

Control de calidad

Coliformes Fecales, Base de CaldoFC Broth Base MCód.: 414270 Envase: 500 g

Se emplea para la detección y recuento de organismos Coliformes fecales en aguas. Muy utilizado en latécnica de filtración por membrana.


HistoriaTanto la formulación del medio como sus distintas variacio-nes especializadas fueron descritas por Ellner y colabora-dores. Este medio permite obtener diferentes medios decultivo, óptimos para microorganismos exigentes.

FundamentoLas peptonas aportan la base nutritiva del medio, el almidónse constituye como fuente de energía, el Sodio Cloruromantiene el nivel salino necesario para el buen desarrollo delos gérmenes y la sangre desfibrinada, que se suele añadir,permite la observación de las reacciones hemolíticas. A par-tir de esta base se prepara el agar sangre y el agar choco-late; también puede utilizarse para ensayos de toxicidad deCorynebacterium (Herman y col. 1958), como base para lapreparación de Agar vaginalis (Greenwood y col. 1977),para el aislamiento de Campylobacter (Karmaly y col. 1986),además de otras muchas variantes.

Fórmula (por litro)Almidón de Maíz ......................................... 1,0 gPeptona...................................................... 10,0 gPeptona Biotriptasa .................................... 10,0 gPeptona Músculo Cardíaco ........................ 3,0 gSodio Cloruro ............................................. 5,0 gAgar............................................................ 13,5 g

pH final: 7,3 ±0,2

PreparaciónSuspender 42,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agi-tar hasta ebullición y hervir durante 1 minuto. Distribuir yesterilizar a 121ºC durante 15 minutos. Se enriquece condiversos materiales, según la determinación que se vaya arealizar:

- Agar Sangre ColumbiaA 950 ml de Base de Agar Columbia añadir 50 ml desangre de carnero desfibrinada y estéril.

- Medio selectivo Gardnerella vaginalisA 940 ml de Base de Agar Columbia, añadir 50 ml desuero de caballo o de conejo y 35 mg de Acido Nalidíxico;4 mg de Gentamicina y 2 mg de Amfotericina B disueltoen 4 ml de Etanol.

- Medio COBAA 930 ml de Base de Agar Columbia añadir 50 ml desangre de caballo desfibrinada y estéril. Añadir 10 ml deSolución acuosa (0,1%) de Sulfato de Colistina y 10 mlde Solución acuosa (0,05-0,1%) de Acido Oxolínico.

Modo de empleoUtilizar según los fines a conseguir.


Sangre *

Gentamicina *

Acido Nalidíxico *

Sulfato de Colistina *

Acido Oxolínico *

Amfotericina B

* Producto Opcional


Columbia, Base de AgarColumbia Agar BaseCód.: 413751 Envase: 500 g

Se emplea para el cultivo y aislamiento de microorganismos en general y en particular de aquellos que sonespecialmente exigentes a partir de una amplia variedad de muestras. Permite la adición de sangre, de com-ponentes selectivos o factores de crecimiento.



Control microbiológico del (Columbia, Base de Agar + 5% de sangre de carnero)Los siguientes resultados fueron obtenidos a partir de cepas

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