Aproximación al Estudio

Diagnóstico Genético

PARTE 1

Autores

Dr. Esteban A. San Martín L.

CERPO

Centro de Referencia Perinatal Oriente

Facultad de Medicina, Universidad de Chile

Temario

• INTRODUCCIÓN

• CARIOGRAMA

• FISH

• MLPA

• ARRAY CGH

• SECUENCIACIÓN

• CONSEJO GENÉTICO

Propósito de la Genética Clínica

• Dar atención de salud integral (promoción,

prevención, diagnóstico, asesoramiento y manejo que

contemple tanto la supervisión de salud como el

seguimiento) a los pacientes de cualquier grupo etario

y familias con sospecha, riesgo o diagnóstico

establecido de una enfermedad con componente

genético y/o anomalías congénitas, en el nivel

secundario y terciario.

Clasificación de enfermedades

geneticas

Cromosómicas

- Numéricas (triploidía, monosomía, trisomía )

- estructurales (traslocaciones, inversiones,anillos, deleciones, duplicaciones )

Monogénicas

- Autosómicas:dominantes recesivas

- Ligadas al X: D Y R

Multifactoriales

Mitocondriales y otras de herencia no clásica

Incidencia de alteraciones

cromosomicas constitutionales

• 6 por 1.000 nacimientos

• Alteraciones de cromosomas sexuales:

2/1.000

• Trisomia 21: 1,5/1.000; otras alteraciones

autosomicas desbalanceadas: 0,5/ 1.000

• Alteraciones cromosomicas balanceadas con

un fenotipo normal 2/1.000

Alteraciones cromosómicas

Perdida reproductiva

• Entre 1.000 embarazos conocidos:

150 abortaran espontaneamente:

100 tendran una constitucion cromosomica

anormal :

– 20 sindrome de Turner,

– 20 trisomia 16 y

20 triploidias

• Los humanos tendrian la tasa mas alta de

gametos anormales (solo una de cada 2

concepciones llegaria a termino).

Abortos espontáneos

• 50-60 % anomalía cromosómica

Mortinatos

• 10-20 anomalía congénita • 6 % anomalía cromosómica

Recién nacidos

• 3% al menos una anomalía congénita • ~1 % anomalía cromosómica

Modificado de Thompson & Thompson 2007

Impacto de las enfermedades genéticas y anomalías congénitas

1950 1960 1970 1980 1990 2010 0

10

20

30

40 RESPIRATORIAS

GASTROINTESTINALES

DESNUTRICIÓN

ANOMALÍAS CONGÉNITAS

Ta

sa

s p

or

10

00

Na

cid

os V

ivo

s

Años

MINSAL, DEIS: 7,41 por 1000 RNV 2010

Mortalidad Infantil en Chile Grupos de Causas Seleccionadas

Edad Materna

Viabilidad de alteraciones

cromosomicas

• Trisomia 13 0 - 5%

• Trisomia 18 0 - 5%

• Trisomia 21 0 - 20%

• Monosomia X 0 - 2%

(Emery, 1995)

TÉCNICAS DE ESTUDIO EN

CITOGENÉTICA

Cariotipo

FISH

• Cariotipo espectral (SKY) / M-FISH

• Array CGH

Caso Clínico

• RN: E.A.C.B.

• F. Nac. : 20 – 04 – 2016

• Sexo: Femenino

• Edad gestacional al parto: 36 sem

• Parto: Cesárea de Urgencia

• Edad Madre: 29

• Edad Padre: 29

Caso Clínico

• Embarazo controlado

• Exámenes control prenatal normales. VDRL y

VIH (-)

• Eco 12 semanas:

– LCF (+)

– TN: 9.9 mm.

– Hueso nasal presente.

– Higroma quístico.

• Se ofrece Cariograma en L.A.

Caso Clínico

• Eco CERPO 36+5: – Gestación única, RCIU, OHA

– Tetralogía de Fallot

– Hipoplasia del hueso nasal

– Imagen de doble burbuja

– Quiste renal izquierdo

– Doppler fetal alterado

• Ecocardiografía prenatal informa: – Tetralogía de Fallot con Obs. DSVD tipo Fallot

– Cayado aórtico Derecho amplio

Caso Clínico

• Se indica cesárea por Doppler fetal alterado

• E.G. : 36 sem

• P.N. : 1705 grs

• T.N. : 40 cms

• C.C. : 30 cms

• APGAR: 3 – 5 – 7

Caso Clínico

• Al nacer no se logra pasar sonda por fosas nasales, por

bradicardia y esfuerzo irregular se intuba y traslada a

UCIN. Atresia de Coanas.

• Ecocardio: DSVD tipo Fallot, Fo amplio, DAP 2 mm.

• Hiperbilirrubienamia: fototerapia por 3 días.

• Hipertrigliceridemia: manejo farmacológico.

• Eco abdominal con quiste cortical renal simple.

Función renal y diuresis normal.

Caso Clínico

• Diagnósticos:

1. RNPT 36 sem PEG severo

2. DSVD tipo Fallot, FO amplio

3. Alteración cromosómica en estudio

4. Atresia de Coanas

5. Quiste renal izquierdo simple

6. Hiperbilirrubinemia tratada

7. Hipertrigliceridemia

Cariotipo

• El cariotipo es la constitucion cromosomica de un

individuo y es un estudio de rutina en genetica

medica.

• Los cariotipos se pueden informar presentando

todos los pares cromosomicos ordenados de

acuerdo a su tamano.

• De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales

se senala por separado para indicar el sexo del

individuo.

Indicaciones de cariotipo

• Durante el embarazo

• Tejidos: celulas de liquido amniotico

obtenidas por amniocentesis, vellosidades

coriales, linfocitos obtenidos por

cordocentesis.

• Indicaciones:

– Edad materna avanzada

– Embarazo anterior con una constitucion

cromosomica aberrante

– Mortinato previo con una constitucion

cromosomica alterada

Indicaciones de cariotipo

• Durante el embarazo

– Reordenamiento cromosomico balanceado o

no en uno de los padres

– Test de tamizaje en suero materno anormal

– Ultrasonido fetal anormal

Indicaciones de cariotipo

• Durante el periodo perinatal: mortinato

• Cariotipo en fibroblastos (cordon

umbilical, pulmon, musculo) si la etiologia

es desconocida o si se sospecha una

enfermedad cromosomica (por ejemplo en

sindromes dismorficos y/o con anomalias

viscerales); esta indicado un completo

examen anatomopatologico.

Cariotipo

• Puede ser realizado en linfocitos perifericos,

celulas tumorales (medula osea), fibroblastos,

gametos, amniocitos o trofoblasto segun

indicaciones.

• Es capaz de informar alteraciones sobre 5-10 MB

• Es inespecífico

• Bajo costo en comparación a tecnologías más

recientes

Muestras para diagnostico

citogenetico

• Vellosidades coriales (trofoblasto): Frasco esteril con tapa rosca.

Agregar suero fisiologico y heparina de sodio. Con embrion vivo

en frasco con medio de cultivo del laboratorio.

• Liquido amniotico, liquido del higroma quistico, orina fetal,

derrames pleural, pericardico o peritoneal : Tubo esteril con tapa

rosca sin aditivos.

• Sangre de cordon o venosa y medula osea: Jeringa o tubo con

heparina de sodio.

• Piel, ganglios, tumores : Frasco esteril con tapa rosca. Agregar

suero fisiologico y heparina de sodio.

• Mortinato: liquido amniotico, sangre, trofoblasto, piel y tendon.

Todas las muestras pueden guardarse a 4°C.

Cariotipo

• Un mitogeno (PHA) estimula el crecimiento celular (linfocitos), las

mitosis son bloqueadas en metafase por un toxico del huso

(colchicina), una solucion hipotonica dispersa los cromosomas y

las tecnicas de bandeo revelan el numero de bandas sucesivas en

cada cromosoma.

Cariotipo

Cariotipo

• vvvv

Cariotipo

Cariotipo

• vvvv

Cariograma del caso clínico

Cariograma paciente

?

Cariotipo Progenitor

• 46,XY,t(6;13)(p21.2;q34)

Cariograma Progenitor

• 46,XY,t(6;13)(p21.2;q34)

Segregación Cromosómica

• Adyacente

1 (centrómeros

distintos)

• Adyacente 2 (centrómeros del mismo cromosoma)

Segregación Cromosómica

NORMAL BALANCEADO DELECIÓN 6p DUPLICACIÓN 6p

Cariograma paciente

• 46,XY,der(13)t(6;13)(p21.2;q34)pat

ANOMALIAS ESTRUCTURALES

• Pueden ser:

– Balanceados: redistribución no produce

pérdida ni aumento de material

cromosómico.

– Desbalanceado: redistribución causa

pérdida o aumento de material

cromosómico

• 1- Deleción: - terminal

• - intersticial

• 2- Duplicación:- directa o en tandem

• - invertida o en espejo

• 3- Inversión:- pericéntrica cuando incluye el centrómero

• - paracéntrica cuando ocurre dentro de un brazo cromosómico

• 4- Isocromosoma: puede ser del brazo p o q

• 5- Cromosoma en anillo: se pierden los telómeros y se forma un aro o anillo

ANOMALIAS ESTRUCTURALES

• Anomalías Numéricas – Poliploidías

– Aneuploidías autosómicas

– Aneuploidías de los cromosomas sexuales

• Anomalías Estructurales – Translocaciones

– Deleciones y Microdeleciones

– Duplicaciones, cromosomas en anillos, inversiones, isocromosomas

ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS

ANOMALÍAS NUMÉRICAS

• Euploide: célula con número de cromosomas

múltiplo de 23. (eu: bueno ploid:

conjunto)

ANOMALÍAS NUMÉRICAS

• Euploide: célula con número de cromosomas

múltiplo de 23. (eu: bueno ploid:

conjunto)

Poliploide: presencia de un set completo de

cromosomas adicionales en una célula.

ANOMALÍAS NUMÉRICAS

• Euploide: célula con número de cromosomas

múltiplo de 23. (eu: bueno ploid:

conjunto)

Poliploide: presencia de un set completo de

cromosomas adicionales en una célula.

ANOMALÍAS NUMÉRICAS

• Euploide: célula con número de cromosomas

múltiplo de 23. (eu: bueno ploid:

conjunto)

Poliploide: presencia de un set completo de

cromosomas adicionales en una célula.

POLIPLOIDÍAS

• Triploidía: – 69 cromosomas

– La gran mayoría se abortan en forma espontánea

Fecundación de un óvulo por dos espermios (dispermia)

Fusión de un ovocito con un corpúsculo polar y la posterior fecundación por el espermatozoide

Falla meiótica en la formación del espermatozoide o del ovocito

• Tetraploidía: 92 cromosomas

Anomalías Numéricas

ANOMALÍAS NUMÉRICAS

• Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo

de 23. (eu: bueno ploid: conjunto)

Poliploide

• Aneuploide: célula que no presenta un número de

cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o ganancia

de cromosoma(s)

– Aneuploidía autosómica

– Aneuploidía de los cromosomas sexuales

ANEUPLOIDÍAS

• Las células no presentan un número de

cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o

ganancia de cromosoma(s) autosómico(s).

• Monosomía

• Trisomía

Anomalías Numéricas

Aneuploidías autosómicas

• Las células no presentan un número de

cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o

ganancia de cromosoma(s) autosómico(s).

• Monosomía

• Trisomía

Anomalías Numéricas

Aneuploidías autosómicas

• Las células no presentan un número de

cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o

ganancia de cromosoma(s) autosómico(s).

• Monosomía

• Trisomía

Anomalías Numéricas

Aneuploidías autosómicas

• La causa más frecuente es la ausencia de

disyunción.

Anomalías Numéricas

Aneuploidías autosómicas

Trisomía 21

• 47,XX,+21

• 1 en 700-1.000 RN vivos

• RM e Hipotonía

• Características faciales

• Piel de la nuca redundante

• Surco palmar único

• Clinodactilia

• Cardiopatía congénita

• Alteraciones Gastrointestinales

Anomalías Numéricas

Limitaciones del analisis

citogenetico

• No pueden descartarse:

– Mosaicismo de bajo nivel

– Reordenamientos muy pequenos

– Enfermedades geneticas que no son

discernibles con metodos citogeneticos

Reunión CERPO

FIN PARTE 1