Arabidopsis thaliana Arabidopsis thaliana tip120/cand1 tip120/cand1 T-DNS T-DNS

inszerciós mutáns jellemzéseinszerciós mutáns jellemzése

A TIP120 fehérje szerepe a A TIP120 fehérje szerepe a transzkripcióbantranszkripcióban

A fehérjeszintézis fő lépéseiA fehérjeszintézis fő lépései

Fehérje

DNS

RNS

Transzkripció

Transzláció

Az eukarióta gének Az eukarióta gének transzkripciójatranszkripciója

Három fő lépés: Három fő lépés: iniciációiniciáció elongációelongáció terminációtermináció

INICIÁCIÓINICIÁCIÓ

A transzkripció megindításához A transzkripció megindításához szükséges fehérjefaktorok egy szükséges fehérjefaktorok egy komplexet hoznak létre komplexet hoznak létre transzkripciós iniciációs komplex transzkripciós iniciációs komplex

A komplex kapcsolatba lép a gén A komplex kapcsolatba lép a gén promóter régiójával, ezáltal lehetővé promóter régiójával, ezáltal lehetővé teszi az RNS szintézistteszi az RNS szintézist

Hat általános fehérjefaktor vesz részt a Hat általános fehérjefaktor vesz részt a transzkripciós iniciációban: transzkripciós iniciációban:

TFIID TFIID TFIIATFIIA TFIIBTFIIB TFIIETFIIE TFIIFTFIIF TFIIHTFIIH

Transzkripciós iniciációs Transzkripciós iniciációs komplex komplex

TFIID

TATA-box

TFIIA TFIIB

Polimeráz II

TFIIF

A TIP120 fehérjeA TIP120 fehérje

TBP-vel kölcsönható faktorTBP-vel kölcsönható faktor 1230 aminosavból álló polipeptidlánc1230 aminosavból álló polipeptidlánc A polimeráz II és a TFIID TBP A polimeráz II és a TFIID TBP

alegységét köti összealegységét köti össze

TBP

RNS-polimeráz II

TIP120

Arabidopsis tip120 Arabidopsis tip120 géngén

a gén expressziója igen alacsonya gén expressziója igen alacsony elsősorban osztódó szövetekben elsősorban osztódó szövetekben

aktívaktív

A CAND1 fehérje szerepe a A CAND1 fehérje szerepe a fehérjebontásbanfehérjebontásban

Az ubiquitinAz ubiquitin

erősen konzerválterősen konzervált 76 aminosavból áll76 aminosavból áll globurális fehérjegloburális fehérje

Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. Az ubiquitin számos sejtfolyamat,pl. endo-citózis,transzkripció, DNS endo-citózis,transzkripció, DNS hibajavítás előfeltétele.hibajavítás előfeltétele.

ubiquitin

E1 E2

E3

célfehérje

SCF-komplexSCF-komplexNégy alegység:Négy alegység: Skp1Skp1 Cullin/Cdc53Cullin/Cdc53

F-boksz fehérje F-boksz fehérje !! Rbx1/Hrt1/Roc1Rbx1/Hrt1/Roc1

CUL1CUL1

Az SCF-komplex összeszerelődését Az SCF-komplex összeszerelődését szabályozzaszabályozza

Nagy része a TIP120-szal alkot Nagy része a TIP120-szal alkot komplexetkomplexet

TIP120 a fő cullin kötő fehérjeTIP120 a fő cullin kötő fehérje

CAND1CAND1

CCullin-ullin-AAssociated ssociated NNedd8-edd8-DDissociated issociated proteinprotein11

TIP120=CAND1TIP120=CAND1

A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt A TIP120/CAND1 fehérje tehát részt veszvesz

-a transzkripció iniciációjában-a transzkripció iniciációjában

-a fehérjedegradáció szabályozásában-a fehérjedegradáció szabályozásában

Mutáns növények Mutáns növények fenotípusának jellemzésefenotípusának jellemzése

Törpe növésTörpe növés Kisebb virág, kései virágzásKisebb virág, kései virágzás Redukált szaporítóképességRedukált szaporítóképesség Gyökérnövekedés intenzitása a Gyökérnövekedés intenzitása a

normálisnál kisebbnormálisnál kisebb

Columbia vad típusú (col) és törpe (dw) Arabidopsis növények

gyökérhosszának alakulása

0

5

10

15

20

25

30

3 6 9 12 15

eltelt idő (nap)

gyö

kérh

oss

z (m

m)

dw

col

Columbia vad típusú (col) és törpe (dw) Arabidopsis növények

gyökérhosszának alakulása

0

5

10

15

20

25

30

3 6 9 12 15

eltelt idő (nap)

gyö

kérh

oss

z (m

m)

dw

col

A PCR reakció stratégiájaA PCR reakció stratégiája

T-DNSLB21

H911BH911A5’ 3’

PCR reakció várható PCR reakció várható eredményeeredményeT-DNS T-DNS

inszerció inszerció nincsnincs

HeterozigótHeterozigóta mutánsa mutáns

Homozigóta Homozigóta mutánsmutáns

H911A+H911H911A+H911B primerekB primerek

++ ++ __

H911B+LB21 H911B+LB21 primerekprimerek

_ _ ++ ++

H911A+H911B primerekkel végzett reakció eredménye

H911B+LB21 primerekkel végzett reakció eredménye

dw het col

T-DNS T-DNS inszerció inszerció

nincsnincs

HeterozigótHeterozigóta mutánsa mutáns

HomozigótHomozigóta mutánsa mutáns

H911A+H911H911A+H911B primerekB primerek

++ ++ __

H911B+LB21 H911B+LB21 primerekprimerek

_ _ ++ ++

ÖsszefoglalásÖsszefoglalás

Törpenövés, redukált Törpenövés, redukált szaporítóképességszaporítóképesség

T-DNS inszerció T-DNS inszerció tip120/cand1 tip120/cand1 génbengénben Gyökérnövekedés kisebbGyökérnövekedés kisebb Homozigóta inszerció törpe Homozigóta inszerció törpe

fenotípus fenotípus