assistance médicale à la procréation · - l’innovation : réutilisation du tissu ovarien...

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L’INNOVATION TECHNOLOGIQUE EN MILIEU HOSPITALIER

Assistance Médicale à la Procréation

Pr Christophe ROUX

Centre d’AMP – CHRU Besançon

Service de Biologique et Médecine de la Reproduction, Cryobiologie

• CIC de Biothérapies 1431

• INSERM - UMR 1098 (Interaction Hôte Greffon et Ingénierie Cellulaire et Génique)

6ème JOURNÉE DE L’INNOVATION - CHRU JEAN MINJOZ à BESANÇON – 13 AVRIL 2017

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- Le Centre d’Assistance Médicale à la Procréation du CHRU

- L’innovation : Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé

Qualification non délétère des ovocytes

http://wchub/images/in

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Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation Loi n° 2011- 814 du 7 juillet 2011 relative à la bioéthique


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Unité clinique

Service de Gynécologie Obstétrique et

Médecine de la Reproduction (pôle Mère-Femme)

- UF 6650 d’AMP-Clinique

- Dr P. Lagré

- Dr A. Berdin

(sages femmes, infirmière, ASH)

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Service d’Urologie et Andrologie (pôle investigation et innovation chirurgicales)

- Pr H. Bittard

- Dr G. Guichard

Unité biologique

Service de Biologie et Médecine de la

Reproduction Cryobiologie (pôle Biologie médicale et anatomie

pathologique)

- UF 5158 AMP-Biologique

- UF 5143 Cryobiologie – CECOS

- UF 5168 Conservation de tissus germinaux

- Pr C. Roux

- Dr C. Amiot

- Dr A. Bailly

- Dr O. Blagosklonov

(techniciens de laboratoire, ingénieur biomédical)

Responsable du Centre d’AMP : Pr C. ROUX

Coordinateur du Centre d’AMP : Dr P. LAGRE

(Services hospitaliers CHRU & réseau de soins : correspondants gynécologues du centre d’AMP)


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- Préparation de sperme en vue d'assistance médicale à la procréation

- Fécondation in vitro sans micromanipulation (FIV)

- Fécondation in vitro avec micromanipulation (ICSI)

- Congélation des gamètes

- Congélation des tissus germinaux

- Congélation des zygotes et des embryons

- (Maturation in vitro des ovocytes)

Le centre d’Assistance Médicale à la Procréation

Arrêté du 18 juin 2012 fixant la liste des procédés biologiques utilisés en assistance médicale à la procréation

Activités en intraconjugal ou avec tiers donneur :

(don de sperme, don d’ovocyte, accueil d’embryon)

- des produits biologiques :

gamètes, embryons, tissus

- des milieux spécifiques :

préparation, culture, congélation

- des contenants :

tubes, boites, paillettes,

micropipettes, cathéters

- des environnements :

hottes, incubateurs, laboratoire

(classe A <-> D)


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- Test de migration survie (migration ascendante, centrifugation en gradient de

densité)

- Préparation de spermatozoïdes prélevés chirurgicalement (MESA –TESE)

- Techniques de préparations particulières : cryptozoospermie, recherche dans

les urines, préparation en contexte viral (VIH, VHC, VHB)




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- Centrifugation en gradient de densité :

- Migration ascendante :

avant après

sperme

spermatozoïdes

1 sperme + milieu 2 culot 3 migration

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- Fécondation in vitro sans micromanipulation (FIV)




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- Fécondation in vitro avec micromanipulation (ICSI)




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- Congélation des gamètes

- Congélation des tissus germinaux

- Congélation des zygotes et des embryons

congélation lente ou vitrification

plateau de cryobiologie

cryobanques


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ABM Tentatives Grossesses % Gr naissances % naissance enfants % enfants

Inséminations 52731 6586 12,49 5344 10,13 5839 11,07

FIV 20425 4856 23,77 3869 18,94 4404 21,56

ICSI 39349 9800 24,91 7931 20,16 9069 23,05

TEC 24536 5673 23,12 4199 17,11 4524 18,44

CHRU Tentatives Grossesses % Gr naissances % naissance enfants % enfants

Inséminations 282 53 18,79 50 17,73 59 20,92

FIV 214 71 33,18 56 26,17 70 32,71

ICSI 284 105 36,97 90 31,69 106 37,32

TEC 146 90 61,64 40 27,40 44 30,14

Résultats Bilan 2015 Agence de la biomédecine (ABM) et CHRU Besançon


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Réutilisation du tissu ovarien cryoconservé

1. Autogreffe de cortex ovarien autoconservé

- Première naissance 2009 en France – pathologie non cancéreuse et

allogreffe de moelle osseuse (Roux et al. 2010 Fertil Steril)

- Protocole de recherche clinique (DATOR) 17 CHU (Dr C. Amiot)

2. Développement de technique de détection de la Maladie

Résiduelle ovarienne

- Qualification carcinologique : leucémies aiguës

- Qualification fonctionnelle des greffons

3. Alternative à la greffe : Obtention de follicules ovariens isolés

- Qualification fonctionnelle des follicules isolés

- Technique de purification de follicules ovariens isolés (leucémies aiguës)

- Technique de réutilisation de ces follicules


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2. Développement de technique de détection de la Maladie

Résiduelle ovarienne (leucémies aiguës)

Amiot et al., Hum Reprod, 2013

Zver et al., Haematologica, 2014

Zver et al., JARG, 2015


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Dissociation mécanique et enzymatique

avec collagénase GMP NB6 (Good

Manufacturing Process) (Coger ®)

+ purification

moyenne de 210 follicules par 100 mg de cortex

Viabilité folliculaire= 93,4%

Mouloungui et al., ISPF Shanghai 2015

Mouloungui et al., GRECOT Paris 2016


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Réutilisation des follicules ovariens isolés :

- Injection intra-ovarienne (au niveau de l’ovaire restant)

- Création d’un ovaire artificiel :

Colle à base de fibrinogène et de thrombine humains EVICEL®,


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1. Observation et analyse d’images

- Observation statique et dynamique (« time lapse »)

- Analyse d’image (texture…)

2. Analyse de spectres

- Modification de la lumière blanche d’illumination

3. Caractéristiques mécaniques

- Mesure de microforces et nanoforces

4. Système intégré « station multimodale » pour le laboratoire de

fécondation in vitro


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Vg MI MII

Roux et al., Hum Reprod & Hum Reprod update 1995

1. Observation et analyse d’image


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1. Observation et analyse d’image

Wacogne et al. Laser Phys Lett 2013

Transformation de Karhunen-loeve

Canaux TKL Base


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1. Analyse de spectres (de transmission)

Vidberg et al. Sensors and Actuators B 2011

Wacogne et al. Laser Phys Lett 2013

500 µm

140 µm


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3. Caractéristiques mécaniques

Abadie et al., Sensors and Actuators B, 2014

Mesure de microforces

et de nanoforces

essais de divers capteurs :

- déformation de micropoutrelles

en SU-8

- …

- capteurs magnétiques


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Intégration des dispositifs de caractéristiques des ovocytes

à une station de micromanipulation d’ICSI dans le laboratoire du

centre d’AMP

- analyse multimodale à la recherche de facteurs prédictifs de

grossesse et de naissance

Wacogne et al., Laser Phys Lett 2013


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– AMIOT Clotilde

– BERDIN Aurélie

– FRONTCZAK Sophie

– MOULOUNGUI Elodie

– PRETALLI Jean Baptiste

– ROUX Christophe

– ZVER Tristan

…

– ABADIE Joël

– GANA Racha

– PIAT Emmanuel

– PIERALLI Christian

– WACOGNE Bruno

…

http://www.e-cancer.fr/

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