Presentacin de PowerPoint

Canseco JessicaCrdenas Monje MissaelCruz Serrano EdithGonzlez Vzquez Jocelyn NicoleGuzmn Gonzlez Hctor Eduardo

CLONACINVECTORES DE CLONACIN

CLONACION DEL DNA: FUNDAMENTOSQu ES Clonacin?Clonar significa hacer copias idnticas.

La clonacin del DNA implica la separacin de un gen especifico o de un fragmento de DNA de un cromosoma y su unin a una pequea molcula de DNA portador.

La clonacin del DNA de cualquier organismo requiere 5 procesos generales:1.- Cortar el DNA en sitios precisos:Participacin de las endonucleasas de restriccin.2.- Unin covalente de dos fragmentos del DNA: Participacin de la DNA ligasa.

3.- Seleccin de una pequea molcula de DNA capaz de autorreplicarse: Los segmentos del DNA que deben ser clonados deben unirse a plsmidos o a DNA vricos (vectores de clonacin: que es un agente de entrega). As las molculas procedentes de DNA, compuestos de segmentos de DNA unidos covalentemente procedentes de dos o mas fuentes se denominan DNA recombinantes.

4.- Traslado del DNA del tubo de ensayo a una clula husped que proporciona la maquinaria enzimtica necesaria para la replicacin del DNA

5.- seleccin o identificacin de las clulas husped con DNA recombinante. Los mtodos para llevar a cabo todas estas tareas se denomina tecnologa del DNA recombinante tambin llamado ingeniera gentica.

ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIN DE TIPO IICortan DNA en secuencias especficas, generando fragmentos ms pequeos . TIPOS I Y II : Son grandes complejos formados por mltiples subunidades que contienen actividad de endonucleasa y metilasa. I: Cortan al azar III: Cortan el DNA a 25 pb de la secuencia de reconocimiento. Necesitan ATP.II: Cortan el DNA en la secuencia de reconocimiento. No necesita ATP. CORTES EXTREMOS COHESIVOS : Cortes indentados , dejan de dos a cuatro nucletidos desapareados en cada extremo EXTREMOS ROMOS: Cortan los enlaces fosfodiester opuestos, no dejan bases desapareadas Une un vector de clonacin a un fragmento de DNA que ser clonado. DNA LIGASAVECTORES DE CLONACIN MS UTILIZADOS CON E. COLI Plsmidos Bacterifagos Cromosomas bacterianos artificiales Vectores de clonacinMolcula pequea de ADN que puede replicarse de manera autnoma en un husped

9PlsmidosMolculas circulares de ADN de doble cadena que se replican con independencia del cromosoma husped

Son opcionales : La clula puede vivir sin ellos pero proporcionan rasgos tiles.

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Portan genes tiles a la bacteria, por ejemplo: produciendo RESISTENCIA A ANTIBIOTICOS.11Se pueden introducir en las clulas bacterianas en un proceso llamado TRANSFORMACION O POR MEDIO DE LA ELECTROPORACION.

12No todo es malo, son muy tiles para sintetizar protenas.

Son considerados como VECTORES.

13El plsmido PBR322 es un buen ejemplo de vector de clonacin de caractersticas tiles.

14Fago

Qu es un bacterifago?Son virus bacterianos. La mayora de los bacterifagos que se han estudiado infectan a Escherichia coli.

BACTERIFAGO LAMBDAINFECCIN LTICASE REPLICAN HASTA UN NMERO ELEVADO QUE OCASIONA LA LISIS DE LA CLULAESTADO LISOGNICOSE INTEGRAN EN EL GENMA DEL ANFITRIN SIN PRODUCIR MUERTEBACTERIFAGO

BACTERIFAGO LAMBDA

Es un bacterifago atemperado que infecta a Escherichia coli.Tiene una cola flexible que esta implicada en la penetracin del cido nucleico en el hospedador.En el extremo 5de cada una de las bandas hay una cola de cadena sencilla de 12 nucletidos de longitud. Estas terminaciones monocatenarias son complementarias (extremos DNA cohesivos.

El genoma de lamba consiste en una molcula de DNA bicatenario.

Cuando los dos extremos del DNA se encuentran libres en la clula hospedadora, se asocian y el genoma adopta la forma de un crculo bicatenario. Infeccin de LambdaCiclo lticoMecanismo de accin de la proteina Cro

FASE LISOGNICA

Para prevenir la sntesis de protenas tardas (aquellas que conformaran al virin), debe sintetizarse el producto del gen cI, que es la protena represora de lambda.El promotor que puede producir el mRNA del gen cI durante la infeccin se llama PE (promotor del establecimiento de la lisogenia).

Sin embargo, PE tiene que ser activado.

Producto del gen cIIPromotor PEProtena cIIIEstabiliza (protege de las proteasas)activaSe reprimir la sntesis de todas las protenas codificadas por lambda.Se establece el ciclo lisognico

El represor de lambda se une a OL y OR; y dentro de estos operadores, se une al sitio 1 para inactivar a PR y PL. Gracias a esto, las protenas tardas no se sintetizan y no se puede entrar al ciclo ltico.

Mantenimiento del estado lisognico

El promotor PM se activa cuando el represor se une al sitio 1.IntegracinEl represor de lambda slo se produce tras la integracin del DNA de lambda en el cromosma de E. coli.La expresin del gen int, que codifica para la integrasa es necesario para establecer la lisogenia.La integrasa es una topoisomerasa, que cataliza la recombinacin entre el fago y el cromosoma bacteriano.

Durante la replicacin del DNA del hospedador, el DNA de lambda se replica junto con el resto del genoma celular y se transmite a la clulas de la progenie.VECTOR DE CLONACINUn vector de clonacin es una molcula pequea de ADN que puede replicarse de manera autnoma en un husped. Los vectores se utilizan para clonacin porque pueden seguir su desarrollo normal a pesar de que secuencias adicionales de ADN sean incorporadas en su material gentico. LOS VECTORES DEL BACTERIFAGO LAMBDA PERMITEN LA CLONACIN DE FRAGMENTOS DE DNA DE HASTA 23.000 PARES DE BASES.BibliografaMichael T. Madigan. Biologia de los microorganismo. 10 edicin. Pearson.Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2005). Lehninger Principios de Bioqumica. 4 edicin. Ed. Omega.