bahan kuliah ivf 2013(1)

5/20/2018 Bahan Kuliah Ivf 2013(1)

1/26

Definisi in vitro fertilisasiIn vitro Fertilisasi (IVF) merupakan teknologireproduksi yang bertujuan membantu prosesreproduksi dengan cara mempertemukan

spermatozoa dengan oosit, sehinggamemungkinkan terjadinya konsepsi diluar tubuhinduk atau dalam didalam tabung yangdilengkapi dengan medium kultur

Kebutuhan embrio untuk Transfer embrio yangterbatas


2/26

Mengapa IVF itu diperlukanKebutuhan embrio untuk Transfer embrio

yang terbatas

Biaya yang terlalu mahal bila produksi

embrio dengan induk donor atausuperovulasi

Sebagai terafi gangguan in fertilitas baikpada jantan maupun betina


3/26

MANFAAT APLIKASI IVF

Teknologi IVF dapat meningkatkan dayareproduksi sapi betina, baik semasa maupunsetelah habis masa produksinya (diafkir).

Teknologi IVF dapat memproduksi embrio dalamjumlah besar dengan biaya yang relatif murah

Teknologi IVF dapat mendorong pengaplikasianteknologi transfer embrio (TE) secara ekstensif

pada perusahaan-perusahaan peternakanmaju/komersial.


4/26

TUJUAN APLIKASI IN VITRO FERTILISASI

PADA TERNAK

UNTUK MENDAPATKAN EMBRIO

DALAM JUMLAH YANG BANYAK,

MURAH DAN SERAGAM

MENDUKUNG APLIKASI TEKNOLOGI

TRANSFER EMBRIO

PADA MANUSIA

MEMBANTU PASANGAN SUAMI ISTRI

YANG TIDAK MEMPUNYAI ANAK

AKIBAT PENYAKIT TERTENTU; INFERTILITAS

TERSUMBATNYA SALURAN TUBA FALLOPII


5/26

Melalui Teknologi IVFdapat dikembangkan berbagaiteknik mikromanipulasi pada embrio seperti ;

teknik cloning atau splittinguntuk memproduksi anak-anaksapi kembar identik

teknik rekayasa genetik, sepertiteknik transfer gen untukmemproduksi sapi transgenikataukhimera

pengembangan penelitian-

penelitian dasar dan terapanlainnya.


6/26

POTENSI TEKNOLOGI FERTILISASI IN

VITRO PADA TERNAK SAPI

untuk meningkatkan produksi daging (sapi

potong)

untuk meningkatkan produktivitas susu padasapi perah.

untuk mengembangkan teknik-teknik

mikromanipulasi pada embrio seperti teknik

cloning/splitting untuk menghasilkan anaksapi kembar identik, dan lainnya.


7/26

SEJARAH PERKEMBANGAN IVF

Sreenan (1970) Salah satu Peneliti I FIV pada Sapipenggunakan yang mengandung enzim

amilase

Iritani dan Niwa

(1977)

Berhasil memperoleh kelahiran anak sapi

pertama dari embrio hasil fertilisasi oosit

yang diperoleh dari RPH

Brackett et al., (1981) Berhasil memperoleh kelahiran anak sapi

pertama dari embrio hasil fertilisasi oosit


Brackett et al., (1983) Berhasil memperoleh kelahiran anak sapi

kembar 2 dari embrio hasil fertilisasi oosit


Lambert et al., (1983) Berhasil memperoleh kelahiran 6 ekor anak

sapi dari embrio hasil fertilisasi oosit yang

diperoleh dari RPH


8/26

TAHAPAN PROSES FERTILISASI IN VITRO

Tahap I : Koleksi Oosit dari Ovarium

Tahap II : Maturasi Oosit in vitro atau

in vitro maturation (IVM)

Tahap III : Pencucian dan Kapasitasi

Spermatozoa

Tahap IV : Fertilisasi in vitro

Tahap V : Kultur Embrio in vitro


9/26

1. KOLEKSI OOSIT DARI OVARIUM

Koleksi atau pengambilan oosit dari ovarium

merupakan hal yang sangat penting dalam

pelaksanaan program FIV.

Oosit untuk IVF dapat diperoleh melalui;

Melalui metode bedah atau laparoscopy

pada hewan hidup

Donor hidup dengan teknik Ovum pick up

(OPU)

Ovarium dari Rumah Potong Hewan


10/26

FAKTOR YANG MEMPENGARUH KUALITAS OOSIT

Umur induk

Siklus birahi

Bangsa (Spesies)

Nutrisi dan Produksi Susu

Status Kebuntingan

Tehnik Koleksi Oosit Aspirasi (Penyedotan)

Diseksi Ovarium

Slicing (Penyayatan) Ovarium

Media Koleksi Oosit PBSD;OWS ;TCM 199 dan

Wittingham

Ukuran Follikel ( 2 6 mm >> 7 mm)

Waktu Koleksi


11/26

UMUR DAN SIKLUS ESTRUS

Induk sapi yang lebih muda (berumur satu sampai

tiga tahun) menghasilkan jumlah blastosis hasil FIV

yang lebih tinggi dibandingkan dengan induk sapi

yang berumur lebih tua

jumlah oosit dengan kualitas baik lebih tinggi padaovaria induk sapi dibandingkan dengan ovaria sapi

dara

Oosit yang diambil dari ovaria sapi pada hari 14

sampai 16 siklus estrus mempunyai potensiperkembangan yang lebih tinggi dari pada oosit

yang diambil pada hari ketujuh sampai kesembilan

atau fase siklus estrus


12/26

Bangsa, Nutrisi dan Variasi Individu

Sapi-sapi bangsa persilangan Charoiais, Limousin

dan Simmental mempunyai jumlah folikel antral

yang lebih rendah dibandingkan dengan sapi-sapi

persilangan Hereford

Perbedaan kandungan protein kasar dalam pakanyang sangat besar dapat mempengaruhi

perkembangan folikel dan perkembangan embrio

taraf selanjutnya

variasi jumlah embrio yang dihasilkan melaluiteknik FIV sebanding dengan variasi jumlah embrio

yang dihasilkan melalui perlakuan-perlakuan

superovulasi pada sapi


13/26

METODE KOLEKSI OOSIT DARI FOLIKEL OVARIUM

Aspirasi (Penyedotan) Pengambilan oosit dari folikel vesikuler yang

berdiameter 2 - 6 mm dengan teknik aspirasi

biasanya menggunakan pipet atau siringe dan

jarum yang sesuai ukuran tertentu ( 18 21 G),

Diseksi Ovarium Pengambilan oosit dari folikel vesikuler dengan

merusak follikel ovarium.

Slicing (Penyayatan) Ovarium Pengambilan oosit dari folikel vesikuler dengan

cara menyayat ovarium dengan scalpel ,


14/26

MEDIA KOLEKSI OOSIT

PBSD (Phosphat Buffer Saline Dubelcus)

TCM 199 (Tissue Culture Medium199) OWS (Oocyte Washing Solution)

Whittingham T6


15/26

KLAS KRITERIA MORFOLOGI

A Oosit dikelilingi oleh multi lapisan kumulus yang kompak,

ooplasma homogen, kompleks oosit-kumulus (KOK) secara

keseluruhan terlihat terang da transparan;

B osit dikelilingi oleh multi lapisan kumulus yang kompak,

ooplasma homogen tetapi dengan penampilan yang kasar,

daerah pinggiran oosit yang lebih gelap dan KOK secara

keseluruhan terlihat lebih gelap dan kurang transparan;

C Oosit dikelilingi oleh sel-sel kumulus yang kurang kompak,

ooplasma tidak beraturan dengan bercak-bercak hitam

dan KOK lebih gelap lagi dari klasifikasi (1) dan (2);

D Sel-sel kumulus yang mengelilingi oosit mengembang, sel-

sel kumulus terpencar-pencar membentuk gumpalan-

gumpalan gelap yang kental, ooplasma tidak teraturmembentuk gumpalan-gumpalan berwarm gelap dan KOK

secara keseluruhan menghitam dan tidak teratur.

KLASIFIKASI KUALITAS OOSIT BELUM MATANG(MATURE)

Sumber : Leibfried dan First (1979)


16/26

2. PEMATANGAN OOSIT IN VITRO(in vitro Maturation/IVM)

Pematangan atau pendewasaan oosit yang

dilakukan diluar tubuh induk atau dalam media

kultur

Pematangan Oosit ditandai dengan perubahan intidisertai dengan perubahan sitoplasma

proses pembelahan inti secara meiosis

fase Germinal Vesicle breakdown (GVBD) GV - Metafase I- Anafase I - Telofase I

Interfase profase II Metafase II

Dr. dr h. Dasru l, M.Si, FKH-Unsy iah 2010


17/26

FAKTOR YANG MEMPENGARUHI

PEMATANGAN OOSIT IN VITRO

Media dan Komposisi media TCM 199 : Hams F-10 dan D-PBS

Suplementasi : Protein ; Serum (BSA, ECS, Serum ovulasi);Glukosa; Hormon (Estrogen, PMSG, LH, FSH )

Kualitas Oosit Oosit kumulus kompleks >> Oosit kumulus sebagian

Lama waktu inkubasi Sapi : 18 24 jam (rataan 22 jam) Kambing : 18 28 jam (rataan 24 jam)

Kerbau : 20 26 jam



18/26

Suplementasi Serum dalam media pematangan

Serum foetus sapi

Serum anak sapi

Serum estrus

Serum pre ovulasi

Suplemetasi Hormon dalam media pematangan

LH dan FSH

PMSG

Estrogen IGF, TGF dan EGF



19/26

A. Pencucian Sperma

Suatu proses pemisahan spermatozoa motil

dengan spermatozoa im-motil, leukosit, bakteri

dan partikel-pertikel yang bersifat toksik

terhadap kehidupan spermatozoa

Tujuan Pencucian Spermatozoa

untuk mendapatkan spermatozoa yang baik

dan motil

meningkatkan daya fertilitas spermatozoa untuk menghilangkan krioprotektan (Bila

memakai semen beku)

3. PENCUCIAN DAN KAPASITASI SPERMATOZOA


20/26

Tehnik Pencucian ;

1. Sentrifugasi media isotonis

2. Sentrifugasi gradien densitas percoll3. Sedimentasi Sephadeks

4. Swim up (renang ke atas)

5. Side migration

6. Glass woll filtration

Media Pencucian Spermatozoa;

- BO (Brackett-Oliphant) + Heparin + Caffein

- Modified Tyrodes (TALP)

- EBSS (Earles Balance Salt Solution)- BWW (Buffer Whashing

- Hank

- dll


21/26

B. Kapasitasi Spermatozoa

Adalah proses perubahan fisiologis dan kimiawi pada

permukaan membran spermatozoa untuk mempertinggikemampuan spermatozoa membuahi sel telur.

Medium untuk Kapasitasi Spermatozoa

- BO (Brackett-Oliphant) + Heparin + Caffein

- Modified Tyrodes (TALP)

- EBSS (Earles Balance Salt Solution)+ Calsium

- Hank


22/26

Perubahan pada Spermatozoa saat kapasitasi

Fluiditas membran plasma spermatozoa

Perubahan lipid dan fosfolipid membran plasma Metabolisme sel SpermatozoaHiperaktivasi sperma

Konsentrasi ion intraselluler

Aktivitas adenilsiklase

Peningkatan fosforilasi protein kinase


23/26

4. FERTILISASI

Proses penggabungan yang kompleks antara

sel gamet jantan (spermatozoa) dengan sel

gamet betina (ovum) sehingga terbentuk

zigot dan dilanjutkan dengan pembelahan

dan perkembangan embrio yang terjadi

diluar tubuh induk betina atau didalam

media in vitro.


24/26

Fusi Spermatozoa dengan Sel telur ( Ovum)

Reaksi akrosom

Penetrasi spermatozoa pada Zona pellusida

Kondensasi kepala spermatozoa dalam sel telur

Pembentukan pronukles jantan dan betina

Penyatuan pronukleus jantan dan betina

(Singami)

Pembentukan Zigot dan

Pembelahan embrio

Tahapan Proses Fertilisasi


25/26

Media Kultur

TCM 199; CR1; SOF; MEM

Supplementasi Serum dalam medium biakan

ECS; OCS;

Suplementasi Ko-kultur sel somatik dalam

medium biakan

Sel Kumulus; Fibroblas dan Cell line

Growth Factor (IGF; TGF dan EGF)

Pengaruh Sistim Inkubasi

FAKTOR-FAKTOR YANG MEMPENGARUHI

KULTUR EMBRIO IN VITRO


26/26

Peralatan untuk IVF

Peralatan Utama (Mayor Equitment) Incubator CO2; Mikroskop; Bilik steril (laminar Air Flow)

Peralatan Penunjang

Meja Penghangat; Penangas air (water bath);

Pengaduk Magnetik; sentrifuge; Refreegerator;Timbangan analitik; Osmometer; pH meter; Fasilitassteril; Heating Block; Peralatan gelas; Pipet; Peralatanaspirasi

Peralatan Operasional Rutin

Persediaan sterilisasi; Vorteks; Pompa vakum; Peralatananalisis semen; deterjen dan peralatan disvosible lainya

bahan kuliah ivf 2013(1)

Documents