1

BBL Taxo Differentiation Discs for Haemophilus Species BBL Taxo Differentiation Discs V (V differenciáló lemezek), BBL Taxo Differentiation Discs X (X differenciáló lemezek), BBL Taxo Differentiation Discs VX (VX differenciáló lemezek)

L000156 2005/05 Magyar

HASZNÁLATI JAVASLAT A BBL Taxo Differentiation Discs a Haemophilus fajok előzetes megkülönböztetésére szolgál aszerint, hogy igénylik-e az X faktort vagy a V faktort vagy mindkettőt.

ÖSSZEGZÉS ÉS MAGYARÁZAT A Haemophilus fajok az emberek és sok állatfaj normál légúti flórájához tartoznak. A Haemophilus influenzae opportunista másodlagos fertőzést okozhat, általában vírusfertőzést követően. Ez a mikroorganizmus számos betegséget okozhat a krónikus légúti fertőzésektől a meningitisig. A Haemophilus parainfluenzae ritkán okoz kóros folyamatot. Tenyészetben a két baktérium morfológiája és telepei hasonlóak, ezért nehéz a megkülönböztetésük. E fajok megkülönböztetésére a növekedési faktorok iránti különböző igényeik használhatók. Davis1 és Thjotta és Avery2 felismerte, hogy a H. influenzae két növekedési faktort igényelt, az egyik a vérből származik, ezt X faktornak nevezték, a másik faktort pedig V faktornak. Megállapították, hogy az X faktor a protoporfirin. Ennek a faktornak a forrásaként a hemint használják. Lwoff és Lwoff3 a V faktort sütőélesztőből készítette. A V faktor a nikotin-adenin-dinukleotid (NAD). A növekedéshez elengedhetetlen feltételek segítenek a fajok elkülönítésében és azonosításában. A csokoládé agar, a lóvéres agar és a nyúlvéres agar is tartalmazza mindkét növekedési faktort, és lehetővé teszi a legtöbb Haemophilus faj növekedését. A BBL Haemoglobin biztosítja az X faktort, míg a B, C vagy VX kiegészítő biztosítja a V faktort. A tápközegben 5%-os koncentrációban alkalmazott BBL Fildes Enrichment is tartalmazza mind az X, mind a V faktort. A Haemophilus fajok elkülönítésére a Staphylococcus szatelita módszer is használható. A S. aureus biztosítja a V faktort, és ha juhvér agarra kikenik, a kikent Staphylococcus csík körül elősegíti a Haemophilusok növekedését. Ez a módszer is használható a fajok azonosítására és megkülönböztetésére. Parker és Heoprich4 készített az X és a V faktorokat tartalmazó korongokat, és ezeket használtak a H. Infuenzae nek, amely igényli az X és a V faktorokat, a H. parainfluenzae től történő elkülönítésére; utóbbi csak az V faktort igényli a növekedéshez. A tenyészeteket inokulálták agyfőzet agar, triptikáz szója agar vagy tápanyagokat tartalmazó agar táptalajon. Russell5 X és V faktorral impregnált lemezek segítségével azonosította a Haemophilus nemzetségbe tartozó fajokat, annak az alapján, hogy igénylik ezeket a faktorokat, és közölte az eljárás alkalmasságát.

AZ ELJÁRÁS MŰKÖDÉSI ELVE A Haemophilus fajok különböznek a V és az X növekedési faktorral szembeni igényük szerint. Ez a módszer alkalmas a fajok elkülönítése és megkülönböztetésére. A mikroorganizmusok fajának meghatározására meg kell figyelni a növekedés jelenlétét vagy hiányát a V, az X és a VX faktorokkal impregnált lemezek körül és/vagy között.

REAGANSEK A BBL Taxo Differentiation Discs V, X és VX papírkorongokból a felsorolt anyagokkal vannak impregnálva, és a megfelelő kód van rájuk nyomtatva.

Korong kódja Korong tartalma Korong mérete

V NAD 6 mm

X Hemin 6 mm

Figyelmeztetés: In vitro diagnosztizáláshoz. Tartsa be a fertőző anyagok kezelésére vonatkozó laboratóriumi eljárásokat. Tárolási útmutató: A BBL Taxo Differentiation Discs V, X és VX korongokat 2–8°C-on tárolja. VX NAD és hemin 6 mm

A szavatossági idő az előírásoknak megfelelően tárolt, bontatlan csomagolású termékre vonatkozik. A termék minőségének romlása: Ne használja fel a terméket, ha annak eredete nem azonosítható, vagy minősége nem megfelelő.

MINTÁK GYŰJTÉSE ÉS ELŐKÉSZÍTÉSE 1. A Haemophilus fajok izolálására szolgáló minták nyerhetők a torokból, az orrgaratból, a kötőhártyáról, a vérből és a

cerebrospinalis folyadékból. 2. Az elsődleges mintát a differenciálásra csokoládé agarra történő inokulálással kell előkészíteni. Másik lehetőség a

véres agar használata Staphylococcus keresztszélesztésével. 3. A tápanyagokkal dúsított tápközegből származó tenyészeteket 1:100 arányban hígítani kell Tryptic Soy Broth

táplevessel, megelőzendő a növekedési faktoroknak a tápközegből történő átvitelét. 4. A mikroorganizmusokat egyenletesen ossza el Heart Infusion Agar (szívfőzet agar) vagy Tryptic Soy Agar (triptikáz

szója agar) teljes felületén. A Haemophilus fajok elkülönítésére csak tiszta tenyészeteket használjon.

A jelmagyarázat a használati utasítás végén található.

2

ELJÁRÁS Szállított anyagok: BBL Taxo Differentiation Discs V, X vagy VX. Szükséges, de nem szállított anyagok: Csipesz, CO2 inkubátor (35 ± 2°C), vattapálcák, inokuláló kacs, Bunsen-égő vagy égetőkemence, minőségellenőrzési mikroorganizmusok, Tryptic Soy Agar (triptikáz szója agar) vagy Heart Infusion Agar (szívfőzet agar) és Tryptic Soy Broth (triptikáz szója tápleves).

A teszt kivitelezése: 1. Aszeptikus módszerrel helyezze a kívánt korongokat az inokulált agarra a következő módszerek egyikével. Óvatosan

nyomja meg a korongokat. Kétkorongos módszer: Helyezze a BBL Taxo Differentiation Discs V és X korongokat egymástól körülbelül 3–5 mm

távolságra (1. ábra). Háromkorongos módszer: Helyezze BBL Taxo Differentiation Discs V, X és VX korongokat egyenlő oldalú háromszög

alakban úgy, hogy a korongok között legalább 30–35 mm távolság legyen (2. ábra).

1. ábra 2. ábra

2. Inkubálja a lemezeket 35 ± 2°C hőmérsékleten 5–10%-os CO2-atmoszférában 18–24 óráig. 3. Figyelje meg a növekedés mintázatát a korongok körül és/vagy között.

Felhasználói minőségellenőrzés: Jellemzők – BBL Taxo Differentiation Discs V – Kerek, fehér, 6 mm átmérőjű papírkorong, amelynek mindkét oldalára a „V” betű van nyomtatva. BBL Taxo Differentiation Discs X – Kerek, barna, 6 mm átmérőjű papírkorong, amelynek mindkét oldalára a „X” betű van nyomtatva. BBL Taxo Differentiation Discs VX – Kerek, világosbarna, 6 mm átmérőjű papírkorong, amelynek mindkét oldalára a „VX” betűk vannak nyomtatva.

Szaporodás serkentése Mikroorganizmus ATCC

V X VX Haemophilus influenzae biocsoport aegyptius 11116 – – +

Haemophilus parahaemolyticus 10014 + – + Haemophilus parainfluenzae 7901 + – +

Tenyészet reakciója – V, X, VX: Inokuláljon BBL Heart Infusion Agar lemezeket a tesztorganizmusok körülbelül 0,5 McFarland standardnyi hígításával. Helyezzen BBL Taxo Differentiation Discs V, BBL Taxo Differentiation Discs X és BBL Taxo Differentiation Discs VX korongokat a lemezek felszínére „A teszt kivitelezése” szakaszban leírtaknak megfelelően. Inkubálja a lemezeket CO2-tartalmú atmoszférában 35 ± 2°C-on 18–24 óráig. A minőségellenőrzési vizsgálatokat a helyi, állami és/vagy szövetségi szabályozásoknak és akkreditációs követelményeknek megfelelően, illetve a laboratórium standard minőségellenőrzési módszereivel összhangban kell elvégezni. A megfelelő minőségellenőrzési kívánalmakat a felhasználó az erre vonatkozó NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards) irányelvekben és CLIA (Clinical Laboratory Improvement Act) előírásokban találhatja.

EREDMÉNYEK Kétkorongos módszer: Csak egy korong körüli növekedés arra utal, hogy csak az a faktor szükséges a mikroorganizmus növekedéséhez. A két korong közötti növekedés azt jelenti, hogy mind a V, mind az X faktor szükséges a növekedéshez. Háromkorongos módszer: A V és a VX, illetve az X és VX korongok körüli növekedés azt jelzi, hogy csak a V, illetve csak az X faktorok szükségesek a növekedéshez. Csak a VX korong körüli növekedés arra utal, hogy mindkét faktor szükséges a mikroorganizmus növekedéséhez. A Haemophilius faj azonosítható a lent felsorolt növekedésifaktor-igény szerint.

A táblázatban felsorolttól eltérő eredmények a következő körülmények egyikének vagy mindkettőnek a fennállására utalhatnak: 1. A tápanyaggal dúsított tenyészetek nem megfelelő hígítása. A túl nagy mértékben hígított inokulum lehetséges, hogy

nem növekszik. A túl kis mértékben hígított inokulátum tartalmazhat elegendő mennyiségű növekedési faktort ahhoz, hogy lehetővé tegye a szaporodást az egész lemezen vagy a nem megfelelő egy vagy több lemez körüli területen.

V X

V

X VX

3

2. Kevert tenyészetek növekedést okozhatnak a korongok körül.

Szaporodási igény Haemophilus faj X V

Haemophilus aphrophilus – – Haemophilus ducreyi + – Haemophilus haemolyticus + + Haemophilus influenzae + + Haemophilus influenzae biocsoport aegyptius + + Haemophilus parahaemolyticus – + Haemophilus parainfluenzae – + Haemophilus paraphrophilus – + Haemophilus segnis – +

A BBL Taxo Differentiation Discs korongok segítségével a Haemophilius faj csak előzetesen azonosítható. Az előzetes azonosítás megerősítéséhez a hemolízis és a hemolízistől különböző jellemzők meghatározása is szükségessé válhat. A faj azonosításához végezhető biokémiai és szerológiai vizsgálat is. A Haemophilus fajok további azonosítása kérdésében tanulmányozza át a megfelelő szakirodalmat.6,7

AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI A Haemophilus fajok megkülönböztetése a fenti módszerrel annyiban előzetes, hogy a növekedésifaktor-igény azonosításán alapul. Ebben azonban hasonlóság áll fenn bizonyos fajok között. A teljes azonosításhoz további biokémiai és/vagy szerológiai tesztek elvégzése is szükséges.

TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK Parker és Hoeprich vizsgálatában 255 nasopharyngealis és 1317 garatkenetet tanulmányoztak a Haemophilushoz hasonló fajok jelenléte szempontjából az X és a V faktort tartalmazó korongok segítségével. A nasopharyngealis kenetekből 59-ben azonosítottak H. influenzaet (csak a X és V korongok között volt növekedés) és 12-ben azonosítottak H. parainfluenzaet (csak a V korong körül volt növekedés). Az 1317 garatkenetből 129-ben azonosítottak H. influenzaet és 302-ben H. parainfluenzaet.4

KISZERELÉSEK Kat. Sz. Leírás 231727 BBL Taxo Differentiation Discs V, 50 korongos kazetta. 231728 BBL Taxo Differentiation Discs V, 10 x 50 korong. 231729 BBL Taxo Differentiation Discs X, 50 korongos kazetta. 231730 BBL Taxo Differentiation Discs X, 10 x 50 korong. 231731 BBL Taxo Differentiation Discs VX, 50 korongos kazetta. 231732 BBL Taxo Differentiation Discs VX, 10 x 50 korong.

IRODALOMJEGYZÉK 1. Davis, J.D. 1917. Food accessory factors (vitamins) in bacterial culture with especial reference to hemophilic bacilli. J.

Infect. Dis. 21: 392-403. 2. Thjotta, T., and O.T. Avery. 1921. Studies on bacterial nutrition. II. Growth accessory substances in the cultivation of

hemophilic bacilli. J. Exper. Med. 34: 97-114. 3. Lwoff, A., and M. Lwoff. 1937. Studies on codehydrogenases. I. Nature of growth factor “V”. Proc. Roy. Soc. London. Ser.

B. 122: 352-359. 4. Parker, R.H., and P.D. Hoeprich. 1962. Disk method for rapid identification of Haemophilus species. Am. J. Clin. Pathol.

37: 319-327. 5. Russell, J.P. 1965. The identification of gram-negative pleomorphic bacilli. Am. J. Clin. Pathol. 44: 88-93. 6. Campos, J.M. 1995. Haemophilus, p. 556-566. In P.R. Murray, E.J. Baron, M. A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken

(ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 1998. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc., St.

Louis.

4