besiyeri ekim

8/8/2019 besiyeri ekim

1/14

Toplam Mezofil Aerob Bakteri Saym

10 g (mL) gda, 90 mL MRD (Merck 1.12535) ilehomojenize edilir. Gerekli seyreltmeler yaplr. Sv gdalardorudan analize alnabilir. PCA (Merck 1.05463)besiyerine ekim yaplr.

1 mL

Petri kutular amaca gre 28 C ya da 37 C'da 48 saat

inkbasyona braklr.

nkbasyon sonunda besiyerinde oluan tm kolonilersaylr, gdadaki toplam mezofil aerob bakteri says

hesaplanr.

Petri kutular otoklavlandktan sonra ykanr/atlr.

Ek A - 01

335


2/14

Koliform Bakterilerin Saylmas; Kat Besiyeri (ISO 4832)

Petri kutular 30-32 C ya da 35-37 C'da 24 saat inkbasyonabraklr.

o o

1-2 mm apnda krmzms bir presipitat zonu ile evrili koyukrmz koloniler saylr.

Sterilizasyondan sonra petri kutular ykanr/atlr.

10 g (mL) gda, 90 mL MRD (Merck 1.12535) ile homojenizeedilir. Sv gdalar dorudan analize alnabilir.

VRB Agar (Merck 1.01406) besiyerine ekim yaplp, ikinci katVRB ilave edilir.

Ek A - 02

336


3/14

Koliform Bakterilerin Saylmas; EMS Yntemi (ISO 7725)

10 g (mL), gda 90 mL MRD (Merck 1.12535) ile homojenizeedilir. 10 ve kat gdalarda 10 seyreltiler hazrlanr.-2 -3

lerinde Durham tp bulunan LST Broth (Merck 1.10266)besiyerinden; kat gdalarda 10 ; 10 ve 10 , sv gdalardan10 ; 10 ve 10 seyreltilerden olmak zere 3'er tpe 1'er mLekim yaplr.

-1 -2 -3

0 -1 -2

Tpler 35-37 C'da 24 saat inkbasyona braklr.o

Bulanklk ve Durham tplerinde gaz oluumu pozitif olarakdeerlendirilir. EMS tablosu kullanlarak gdadaki koliformgrup bakteri says hesaplanr.

Sterilizasyondan sonra tpler ykanr.

Ek A - 03

337


4/14

100 mL Suda Koliform Bakteri ve E.coli Aranmas

100 mL su rnei steril bir kaba alnr.

zerine 1 poet Readycult Coliforms (Merck 1.01298)ilave edilir.

alkalanp, 35-37 C'da 24 saat inkbasyona braklr.o

Besiyeri renginin yeile dnmesi koliform pozitif olarakdeerlendirilir.

Sterilizasyondan sonra kullanlm malzeme ykanr.

Koliform pozitif olan rnek, lo bir yerde ksa dalga boyluUV lambas (Merck 1.13203) ile incelenir. Bunlardanfloresan ma verenler olarak deerlendirilir.E. coli

Ek A - 04

338


5/14

Membran Filtrasyon Yntemiyle Sularda Koliform Bakteri Aranmas

VAKUM

100 mL su, membran filtrasyon sisteminden geirilir, filtreLactose TTC Agar with Tergitol 7 (Merck 1.07680) zerineyerletirilir.

Filtrenin, bakterilerin tutulmu olduu st ksm Petrikutusuna yerletirmede yine yukarda olmaldr.

Petri kutusu taban zerinde olacak ekilde 30-32 C ya da35-37 C'da 24 saat inkbasyona braklr.

o

o

Sar-portakal renkli koloniler koliform grup bakteri olarakdeerlendirilir ve su rneindeki koliform grup bakterisays hesaplanr.

100 mL Su

Ek A - 05

339


6/14

E. coli Saylmas; Kat Besiyeri

Her ikisi de 35-37 C'da olmak zere Fluorocult VRBAgar 18 saat ve Chromocult Coliform Agar 24 saat

inkbasyona braklr. Chromocult TBX Agar ise 44 C'da18-24 saat inkbe edilir.

o

o

Sterilizasyondan sonra petri kutular ykanr/atlr.

10 g (mL), gda 90 mL MRD (Merck 1.12535) ilehomojenize edilir. Sv gdalar dorudan analizealnabilir.

Fluorocult VRB Agar'a (Merck 1.01406) ya da

Chromocult Coliform Agar'a (Merck 1.10426) ya daChromocult TBX Agar'a (Merck 1.16122) ekim yaplr.VRB Agar ekiminde ikinci kat VRB Agar ilave edilir.

U.V.

Fluorocult VRB Agar'da 1-2 mm apnda krmzms birpresipitat zonu ile evrili koyu krmz ve ksa dalgaboylu UV lamba (Merck 1.13203) ile lo bir yerdefloresan veren koloniler, Chromocult Coliform Agar'da 1-

2 mm apl mavi-meneke koloniler, Chromocult TBXAgar'da mavi-yeil koloniler saylr ve gdadakisays hesaplanr.

E. coli

Ek A - 06

340


7/14

E. coli Saylmas; Hzl EMS Yntemi

Tpler 35-37 C'da 24 saat inkbasyona braklr.o

U.V.U.V. U.V.Bulanklk ve Durham tplerinde gaz oluumu grlenkoliform pozitif tpler lo bir yerde ksa dalga boylu UVlambas (Merck 1.13203) ile incelenir. Bunlardan floresan

ma verenler olarak deerlendirilir (baknz; ekABC). Floresan madan emin olunmazsa tplere 1 mL 1N NaOH eklenip tekrar incelenir. EMS tablosu kullanlarakgdadaki sayshesaplanr.

E. coli

E. coli

Sterilizasyondan sonra tpler ykanr.

10 g (mL), gda 90 mL MRD (Merck 1.12535) ilehomojenize edilir. 10 ve kat gdalarda 10 seyreltilerhazrlanr.

-2 -3

lerinde Durham tp bulunan Fluorocult LST Broth

(Merck 1.12588) besiyerinden; kat gdalarda 10 ; 10ve 10 , sv gdalardan 10 ; 10 ve 10 seyreltilerdenolmak zere 3'er tpe 1'er mL ekim yaplr.

-1 -2

-3 0 -1 -2

Ek A - 07

341


8/14

Singlepath E.coli O157 Test Kiti Uygulama emas

Ek A - 08

342


9/14

Singlepath Verotoxins Test Kiti Uygulama emas

Ek A - 09

343


10/14

Salmonella Aranmas (ISO 6579)

25 g (mL) gda,225 mL TPS (Merck 1.07228) ile homojenize edilir.

Homojenizat 35-37 C'da 16-20 saat inkbasyona braklr.

nkbasyondan sonra Selenit Sistin (Merck 1.07709) ve RVS Broth(Merck 1.07700) selektif zenginletirme besiyerlerine ekim yaplr.Selektif zenginletirmede 10 mL RVS Broth'a n zenginletirmekltrnden 0,1 mL eklenir ve inkbasyon 42-43 C'da 24 saatolarak yaplr. SS Broth kullanmnda ise 100 mL besiyerine 10 mLn zenginletirme kltr ilave edilir ve 37 C'da 24 saatinkbasyona braklr.

o

o

Her 2 selektif zenginletirme kltrnden ayr ayr olmak zereBrilliant Green Fenol Red (BGFRL; Merck 1.10747) Agar ilelaboratuvarn tercihine braklan baka bir selektif kat besiyerine

srme yaplr. Rambach Agar (Merck 1.07500), Xylose LysineDeoxycholate (XLD) Agar (Merck 1.05287) ve zellikle XLT 4 Agar(Merck 1.13919 ve Merck 1.08981) nerilmektedir.

Petri kutular 37 C'da 24 saat inkbasyona braklr.

Tipik koloniler varsa bunlardan 5 adedi ayr ayr olmak zere TripleSugar Iron (TSI) Agar (Merck 1.03915), Urea Broth (Merck1.08483) ve Lysine Iron Agar (Merck 1.11640) besiyerindetanmlanr. iin tipik koloniler; BGFRL Agar'da etrafparlak krmz bir zon ile evrili, pembe krmz renkli, XLD Agar'dabesiyeri ile ayn renkte, yar saydam, bazen siyah merkezli, XLT4Agar'da siyah renkli ve Rambach Agar'da krmz renklidir. SinglepathSalmonella da kullanlabilir (baknz; ek ABC).

Salmonella

almada kullanlan btn malzeme otoklavlandktan sonraykanr/atlr.

Ek A - 10

344


11/14

25 g (mL) gda 225 mL TPS (Merk 1.07228)besiyerine ilave edilir. Gerekirse homojenizasyon

Singlepath Salmonella Test Kiti Uygulama emas

Ek A - 11

345


12/14

Listeria Aranmas (ISO 11290)

25 g (mL) gda, 225 mL 1/2 Fraser Broth (Merck 1.10398 ve Merck1.10399) ile homojenize edilir.

Homojenizat 30 C'da 24 saat inkbe edilir. Gdadaki Listeria'nnhasar grm olduu dnlyorsa selektif katks ilave edilmemiFraser Broth besiyerinde homojenize edilip, 30 C'da 4 saat kendihalinde braklr. Daha sonra selektif katk ilave edilip ayn scaklkta20 saat daha inkbe edilir.

Tam kuvvette Fraser Broth 35-37 C'da 48 saat, PALCAM ve OxfordAgar 35-37 C'da 24 saat inkbe edilir.

Tam kuvvette Fraser Broth besiyerinden 24 ve 48 saatlerde aynbesiyerlerine srme yaplr. 1/2 Fraser Broth besiyerinden yaplmilk Petri kutular deerlendirilir.

Listeria iin tipik koloniler; PALCAM Agar'da 1,5-2 mm apnda, zeytinyeili gri renkli, bazen siyah merkezli ancak her zaman siyah zonlu,Oxford Agar'da ise 2-3 mm apnda, siyahms yeil kahverengi, siyahzonlu, kk merkezlidir. Tipik kolonilere hemoliz, CAMP testi, ramnozve ksiloz testleri yaplr, Singlepath Listeria da kullanlabilir (baknz; ekABC).

Kullanlm tm malzeme otoklavlandktansonra ykanr/atlr.

Bu srenin sonunda 10 mL tam Fraser Broth besiyerine 0,1 mLinokle edilir, paralel olarak PALCAM Agar (Merck 1.11755 veMerck 1.12122) ile Oxford Agar (Merck 1.07004 ve Merck1.07006) besiyerlerine ze ile srme yaplr.

Ek A - 12

346


13/14

Singlepath Listeria Test Kiti Uygulama emas

Ek A - 13

347


14/14

Singlepath Campylobacter Test Kiti Uygulama emas

25 g gda 225 mL ya da 25 mL gda 200 mL Bolton

Broth (Merck 1.00068 ve Merk 1.00069) besiyerineilave edilir. Gerekirse homojenizasyon yaplr.

Ek A - 14

348

besiyeri ekim

Documents