biotec moderna en salud humana y biodiv animal
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“Biotecnología moderna en la salud humana y en el mejoramiento de la
biodiversidad animal”
Ricardo Fujita, Ph.D.Ricardo Fujita, Ph.D.Centro de Genética y Biología MolecularCentro de Genética y Biología Molecular
Facultad de MedicinaFacultad de MedicinaUniversidad de San Martín de PorresUniversidad de San Martín de Porres
[email protected]@usmp.edu.pe
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Tópicos
• Genética Humana: diferencias, predisposiciones
• Predicción: familia, edad, industria• Cambio: proteínas recombinantes,
terapia génica• Animales: antropomorfización,
derechos
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Los de arriba y los de abajoLos de arriba y los de abajo
• Avances cientAvances científicos y tecnológicos más íficos y tecnológicos más rápidos que nunca en historiarápidos que nunca en historia
• Beneficio de tecnologBeneficio de tecnología principalmente para ía principalmente para poblaciones de papoblaciones de países desarrolladosíses desarrollados
• Brecha tecnológica con países pobres Brecha tecnológica con países pobres demasiado grande para beneficiarnosdemasiado grande para beneficiarnos– económicaeconómica– educativaeducativa– social social – conocimientosconocimientos– Comunicaciones (contenido)Comunicaciones (contenido)
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Algunos avances para el análisis en Genética Molecular
• Biología Molecular: Reconocimiento de estructuras y funcionamiento de la expresión de genes. Identificación de herramientas para analizar y manipular material genético.
• Clonación Molecular: DNA recombinante, da capacidad de identificar y aislar genes. Bancos genómicos, proteínas recombinantes, transgénicos, K.O.
• Transcriptasa Reversa: Permite analizar expresión específica de genes. Tejidos, órganos, estadíos, medio ambiente, etc. Bancos de expresión, cDNAs.
• Amplificación PCR: Análisis de pequeños segmentos de ADN. Diagnóstico, marcadores.
• Secuenciación: Análisis a nivel de una letra (base de DNA: A, T, C, G). Análisis de genes, identificación de mutaciones
• Bioinformática: identificación y comparación de millones de secuencias ente miles de organismos
• Clonación celular: stem cells, animales clonados
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Algunos aspectos de biotecnología y salud
1. An1. Anáálisis y caracterizacilisis y caracterizacióón de material genn de material genéético y su funcitico y su funcióón:n:– Mapeo e identificaciMapeo e identificacióón de genes individualesn de genes individuales– Genoma, conjunto del material genGenoma, conjunto del material genééticotico– Transcriptoma, estudio de la expresiTranscriptoma, estudio de la expresióónn– Proteoma, estudio de la expresiProteoma, estudio de la expresióón y produccin y produccióón de n de
proteproteíínasnas– Metaboloma, expresiMetaboloma, expresióón conjunta y coordinada de genes n conjunta y coordinada de genes
y protey proteíínasnas2. Ingenier2. Ingenieríía Gena Genéética (manipulacitica (manipulacióón genn genéética):tica):
– ProteProteíínas recombinantesnas recombinantes– Terapia gTerapia géénicanica
3. C3. Céélulas Troncales (Stem cells)lulas Troncales (Stem cells)– Regeneración de tejidos– Organogénesis
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Sistema de vigilancia Sistema de vigilancia éticaética• El científico no puede ser Dr. Frankenstein, hacer lo que se El científico no puede ser Dr. Frankenstein, hacer lo que se
ocurre.ocurre.• Declaración de Helsinski (versión vigente 2004)Declaración de Helsinski (versión vigente 2004)• GuGuíaíass Eticas Internacionales para Investigaci Eticas Internacionales para Investigaciónón BiomBiomédédiica que ca que
Involucra a Humanos, del CIOMS y de la OMSInvolucra a Humanos, del CIOMS y de la OMS http://www.who.int/tdr/publications/publications/pdf/ethicssp.pdfhttp://www.who.int/tdr/publications/publications/pdf/ethicssp.pdf• National Institutes of Health Ethics ProgramNational Institutes of Health Ethics Program • ComitComités de ética universidadesés de ética universidades• AsociaciAsociación de comités de ética Perú:ón de comités de ética Perú:http://www.ins.gob.pe/gxpsites/hgxpp001.aspx?http://www.ins.gob.pe/gxpsites/hgxpp001.aspx?
2,13,59,O,S,0,MNU;E;20;5;MNU;,2,13,59,O,S,0,MNU;E;20;5;MNU;,• Conflictos de interés comercialConflictos de interés comercial
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DECLARACIÓN UNIVERSAL SOBRE EL GENOMA DECLARACIÓN UNIVERSAL SOBRE EL GENOMA HUMANO Y LOS DERECHOS HUMANOSHUMANO Y LOS DERECHOS HUMANOS
Declaración aprobada, el 11 de noviembre de1997.Declaración aprobada, el 11 de noviembre de1997. A. LA DIGNIDAD HUMANA Y EL GENOMA
HUMANO
• Artículo 1.El genoma humano es la base de la unidad fundamental de tu los los miembros de la familia humana y del reconocimiento de su dignidad y diversidad intrínsecas. En sentido simbólico, el genoma humano es el patrimonio de la humanidad. ハハ Articulo 2.a) Cada individuo tiene derecho al respeto de su dignidad y derechos, cualesquiera que sean sus características genéticas.b) Esta dignidad impone que no se reduzca a los individuos a sus características genéticas y que se respete su carácter 從 ico y su diversidad. ハハ Articulo 3.El genoma humano, por naturaleza evolutivo, est� sometido a mutaciones. Entra 紡 posibilidades que se expresan de distintos modos en funci 溶 de entorno natural y social de cada persona, que comprende su estado de salud individual, sus condiciones de vida, su alimentación y su educación. ハ Artículo 4.El genoma humano en su estado natural no puede dar lugar a beneficios pecuniarios.
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DECLARACIÓN UNIVERSAL SOBRE EL GENOMA DECLARACIÓN UNIVERSAL SOBRE EL GENOMA HUMANO Y LOS DERECHOS HUMANOSHUMANO Y LOS DERECHOS HUMANOS
Declaración aprobada, el 11 de noviembre de1997.Declaración aprobada, el 11 de noviembre de1997.
• INVESTIGACIONESINVESTIGACIONES
• Artículo 12Artículo 12• a) Toda persona debe tener acceso a los progresos de la a) Toda persona debe tener acceso a los progresos de la
biología, la genética y la medicina en materia de genoma biología, la genética y la medicina en materia de genoma humano, respetándose su dignidad y derechos.humano, respetándose su dignidad y derechos.
• b) La libertad de investigación, que es necesaria para el b) La libertad de investigación, que es necesaria para el progreso del saber, procede de la libertad de pensamiento. Las progreso del saber, procede de la libertad de pensamiento. Las aplicaciones de la investigación sobre el genoma humano, aplicaciones de la investigación sobre el genoma humano, sobre todo en el campo de la biología, la genética y la medicina, sobre todo en el campo de la biología, la genética y la medicina, deben orientarse a aliviar el sufrimiento y mejorar la salud del deben orientarse a aliviar el sufrimiento y mejorar la salud del individuo y de toda la humanidad.individuo y de toda la humanidad.
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• SOLIDARIDAD Y COOPERACISOLIDARIDAD Y COOPERACIÓNÓN• Artículo 19Artículo 19• a) En el marco de la cooperación internacional con los países a) En el marco de la cooperación internacional con los países
en desarrollo, los Estados deberán esforzarse por fomentar en desarrollo, los Estados deberán esforzarse por fomentar medidas destinadas a:medidas destinadas a:– i) i) evaluar los riesgos y ventajasevaluar los riesgos y ventajas de la investigación sobre el de la investigación sobre el
genoma humano y prevenir los abusos;genoma humano y prevenir los abusos;– ii) ii) desarrollar y fortalecer la capacidaddesarrollar y fortalecer la capacidad de los de los países en países en
desarrollodesarrollo para realizar investigaciones sobre biología y para realizar investigaciones sobre biología y genética humanas, tomando en consideración sus genética humanas, tomando en consideración sus problemas específicos;problemas específicos;
– iii) permitir a los iii) permitir a los países en desarrollopaíses en desarrollo sacar provechosacar provecho de los de los resultados de las investigaciones científicas y tecnológicas a resultados de las investigaciones científicas y tecnológicas a fin de que su utilización en pro del progreso económico y fin de que su utilización en pro del progreso económico y social pueda redundar en beneficio de todos;social pueda redundar en beneficio de todos;
– iv) fomentar el iv) fomentar el libre intercambiolibre intercambio de conocimientos e de conocimientos e información científicos en los campos de la biología, la información científicos en los campos de la biología, la genética y la medicina.genética y la medicina.
• b) Las organizaciones internacionales competentes deben b) Las organizaciones internacionales competentes deben apoyar y promover las iniciativas que tomen los Estados con apoyar y promover las iniciativas que tomen los Estados con los fines enumerados más arriba.los fines enumerados más arriba.
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FOMENTO DE LOS PRINCIPIOS DE LA DECLARACIÓN
• Art. 20 Los Estados tomaràn las medidas adecuadas para fomentar los principios establecidos en la Declaración, a través de la educación y otros medios pertinentes, y en particular, entre otras cosas, la investigación y formación en campos interdisciplinarios y el fomento de la educación en materia de bioética, en todos los niveles, particularmente para los responsables de las políticas científicas.
• Art. 21 Los Estados tomarán las medidas adecuadas para fomentar otras formas de investigación, formación y difusión de la información que permitan a la sociedad y a cada uno de sus miembros cobrar mayor conciencia de sus responsabilidades ante las cuestiones fundamentales relacionadas con la defensa de la dignidad humana que puedan plantear la investigación en biología, genética y medicina y las correspondientes aplicaciones. Se deberán comprometer, además, a favorecer al respecto un debate abierto en el plano internacional que garantice la libre expresión de las distintas corrientes de pensamiento socioculturales, religiosas y filosóficas.
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• Diagnostic Confirmation of clinical diagnosisMajority of requests
• PredictiveTesting at risk relatives for presence of familial mutation
• Prenatal diagnosisTesting foetal DNA: CV sample (10-11 wks gestation)Amniocytes (14-16 wks gestation)To date a VERY small part of the service(approx 3-4 reports/year)Preimplantional
• Population ScreeningIdeally offered to all individualsAutosomal recessive disorders are particularly suitable e.g. Cystic fibrosis
Categorías de pruebas diagnóstico
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Ethical Problems
• Sex selection• Generation of unwanted information eg in HD• Discovery of paternity problem eg in CF• Confidentiality issue eg translocation in Down
syndrome• Discovery of genetic predisposition affects job
/ insurance
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1122*33
1122*33
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112233
112233
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112233
112233
Cromosoma 1Cromosoma 2Cromosoma 3....
Mapeo Genético Monogenico(Linkage)
Chequear segregación de una enfermedad (humanos) o un caracter (otros organismos)
Marcadores
....Cromosoma 22
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Diagnóstico gen glaucoma familia AndahuaylasDiagnóstico gen glaucoma familia AndahuaylasGlaucoma primario ángulo abiertoGlaucoma primario ángulo abierto5-7% población5-7% población6 genes6 genesMYOCMYOC Glaucoma juvenil Glaucoma juvenil
Guevara-Fujita, Perez-Grosman, Estrada, Pawar, Vargas, Richards y Fujita (2008). Journal of Glaucoma 17: 67-72.
normal
afectado
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T G A T T G A C T A C A A N C C C C T G G A C A A
nt1440 (aa 480)
Guevara-Fujita, Perez Grossman, Estrada, Vargas, Richards y Fujita (2008). Journal of Glaucoma 17: 67-72.)
Fig.2 Sequence of MYOC exon 3 in a POAG patient of family. N Fig.2 Sequence of MYOC exon 3 in a POAG patient of family. N indicates a double reading (C and G) in nucleotide position 1440 of indicates a double reading (C and G) in nucleotide position 1440 of gen MYOC. Normal sequence 1438-1440 (AAC) corresponds to gen MYOC. Normal sequence 1438-1440 (AAC) corresponds to codon Asn, whereas mutation changes codon to AAG, Lys. This codon Asn, whereas mutation changes codon to AAG, Lys. This transversion yields a MYOC Asn480Lys mutation (charge). transversion yields a MYOC Asn480Lys mutation (charge).
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Amplificación del gen de la Corea de Huntington
Umbral > 36-40
Umbral < 36-40
Expansión (CAG)n - (Glu)n P N N N N
*
*
** *
*
*
***
Hurtado, Acevedo, Guevara, Fujita, IGBM, USMP, Lima, PerúBiancalana, Mandel, LGME, Strasbourg, France
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Analisis Molecular de Huntington - PCR exon 1Familia U - Lima
Guevara M.L. y Fujita R. (IGBM, Jun. 2002)
M10 m25 N 1 2 3 4 5 6 7
umbral 40 repeticiones
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¿De quién se secuenció en Proyecto Genoma Humano?
• Mixtura de varias personas• generado de 10-20 muestras de donantes anónimos de
diferentes grupos étnicos (caucásicos > afroamericanos> asiáticos). Hispanos
• Sudamericanos (nativos y mestizos) sub-representados
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Etnias estudiadas en PGH
Poblaciones sudamericanas no representadas en estudios del genoma humano
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CayapasCayapas
LambayequeLambayeque
ColoradosColorados(Cóngoma y Chiguilpe)(Cóngoma y Chiguilpe)
LoretoLoreto
JunínJunínUcayaliUcayali
AyacuchoAyacucho
Lago Titicaca (Taquile,Lago Titicaca (Taquile,Amantaní, Los Uros yAmantaní, Los Uros yAnapia)Anapia)
MapuchesMapuches
Distribución de MBL (defensa contra patógenos) Distribución de MBL (defensa contra patógenos) deficiente en Sudaméricadeficiente en Sudamérica
0102030405060708090
Cayap
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Poblaciones
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Cayapas Cóngoma Chiguilpe Loreto Ucayali San José Junín
Ayacucho Taquile Amantaní Los Uros Anapia Chiriguanos Mapuches
ChiriguanosChiriguanos2424 2727 3636 2727 2222
41412222
3535
8080 8080
3535
5858
4242 4646
Human Genome MeetingHuman Genome MeetingKyoto, April 2005Kyoto, April 2005
Sandoval, Madsen, Sandoval, Madsen, Velazquez, Descailleaux, Velazquez, Descailleaux, Ñique, Di Stefano, Ñique, Di Stefano, Garred, FujitaGarred, Fujita
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Problemas potenciales para Genographic
• Mala información:– Venta de sangre– Venta de células
• Politización (Bolivia, Ecuador, Brasil) National Geographic transnacional imperialista
• Motivos tradicionales/religiosos
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Proteínas Recombinantes Proteínas Recombinantes Proteínas humanas para reemplazo (en pacientes con Proteínas humanas para reemplazo (en pacientes con deficiencias) obtenidas en mayor cantidad, purificadas, a partir deficiencias) obtenidas en mayor cantidad, purificadas, a partir de bacterias, plantas o animales transgénicosde bacterias, plantas o animales transgénicos
Mercado de miles de millones US Dollars
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Vacunas comestibles• Protección contra la hepatitis B
(antígeno de superficie HBsAg), el cólera, la diarrea (E. coli, toxina LT-B, CT-B), HIV (gp120), herpes
• Plantas: papa, plátano, tomate, tabaco, otras frutas
• Evaluaciones en laboratorio en estado avanzado. En papa, hasta 0.3% de ab solubles de LT-B en papas hervidas (Tacket et al, 1998)
• Actualmente, fase de prueba en voluntarios
http://home.cwru.edu/~eay3/ESR/vaccine2big.htm
http://www.sciam.com/2000/0900issue/0900langridge.html
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Terapia génica
• Modificar o activar la expresión de un gen endógeno mediante la introducción de una versión modificada in vitro
• Ataca causa primaria vs. síntomas
• Especificidad en celula o tejido blanco• Localizado vs. sistémico
• Rangos de duración más largos
• Varias estrategias dependiendo de enfermedad
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Estrategia de reemplazo de gen mutante
Introducción de gen normal en celulas mutantes
Incorporación de gen por crossing over
Celulas con función normal
Cuando el gen mutante es nocivo, ejm. enfermedades dominantes
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Ashanti da Silva
• Deficiencia de ADA (adenosina deaminasa)• Ciclo de salvamento de purinas, importante
en linfocitos T, SCID (severe combined immunodeficiency).
• Gen clonado, pequeño• Celulas blanco (MO) accesible y cultivables• Enfermedad recesiva, niveles normales
10-5000 % del promedio.
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Sobrevivientes de SCID
Cynthia (1991) y Ashanti (1990)
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Protocolos presentados / aprobados
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Tipos celulares en terapia génica
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Jesse Gelsinger
• Ornitina transcarbamilasa (OTC)• Protocolo aprobado en 1995• Adenovirus• Muere de shock anafiláctico Oct 99!!!!
![Page 32: Biotec moderna en salud humana y biodiv animal](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022052601/5595775f1a28abc8198b46a5/html5/thumbnails/32.jpg)
Preocupación en terapia genica
• Somatica vs. Germinales (integracion al azar, modificacion a varias generaciones, fertilizacion in vitro).
• Enfermedades letales/cambios cosméticos• Calibracion de virus (adenovirus/AVhelper)• Tratamientos alternativos• Terapia génica ≈ transplante?• Organogénesis/clonación• Que enfermedades tratar?
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La Promesa de las células madre (Stem cells)Búsqueda de fármacos y tests de toxicidad
Estudios del control de genes y desarrollo
Células cultivadas troncales multiplicadas
Tejidos células para terapia
médula ósea neuronas músculos páncreas
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Células madre• Célula madre: se reproduce y da lugar a diferentes tipos
celulares in vitro• Diferencia con células embrionarias: provienen del mismo
paciente (evita rechazo).• Corrientemente usado en linfomas y leucemias con células de
médula ósea o cordón umbilical.• Para reemplazar células anormales degenerativas (Alzheimer,
Parkinson, diabetes), proliferativas (tumores, cáncer), accidentes (tetraplégicos) o intoxicaciones.
• Organogénesis: formación de órgano o parte de función a partir de células madre.
• Todavía en experimentación en mayoría de países. China turismo médico en células madre.
• Perú: INCOR infartos OK, compañías? (a probar)
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Terapia génica
• Modificar o activar la expresión de un gen endógeno mediante la introducción de una versión modificada in vitro
• Ataca causa primaria vs. síntomas
• Especificidad en celula o tejido blanco• Localizado vs. sistémico
• Rangos de duración más largos
• Varias estrategias dependiendo de enfermedad
![Page 36: Biotec moderna en salud humana y biodiv animal](https://reader034.vdocuments.pub/reader034/viewer/2022052601/5595775f1a28abc8198b46a5/html5/thumbnails/36.jpg)
Derechos animales
• Salud humana vs. Animal• Modelos naturales y creados• Crueldad excesiva e inútil• Activismo
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Proyecto Genoma Alpaca:Proyecto Genoma Alpaca:Generación y Localización de Generación y Localización de
Marcadores Genéticos Asociados a Marcadores Genéticos Asociados a Calidad de Fibra e Inmunidad para el Calidad de Fibra e Inmunidad para el
Mejoramiento de Alpacas usando Mejoramiento de Alpacas usando Bancos Genómicos y de ExpresiónBancos Genómicos y de Expresión
INCAGROINCAGRO
Institución Responsable: Centro de Genética y Biología Institución Responsable: Centro de Genética y Biología Molecular, Facultad de Medicina, U. San Martín de PorresMolecular, Facultad de Medicina, U. San Martín de Porres
Instituciones Colaboradoras:Instituciones Colaboradoras:• Sociedad Peruana de Criadores de Alpacas y Llamas (SPAR) Sociedad Peruana de Criadores de Alpacas y Llamas (SPAR) • Centre National de SequenCentre National de Sequenççage de France (Genoscope)age de France (Genoscope)• Equine and Bovine Genome Center, Animal Sciences, Texas Equine and Bovine Genome Center, Animal Sciences, Texas A&M University, USA.A&M University, USA.
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En el estudio se propuso…En el estudio se propuso…
1.1. Bancos GenBancos Genómicos. ómicos. Primer banco de genoma BACs Primer banco de genoma BACs de camélidos (sudamericanos, africanos o asiáticos) de camélidos (sudamericanos, africanos o asiáticos) del mundo. Bancos de fagos.del mundo. Bancos de fagos.
2.2. Generación de marcadores genéticos en camélidos. Generación de marcadores genéticos en camélidos. Hasta ahora menos de 100; necesarios más de Hasta ahora menos de 100; necesarios más de 500-1000.500-1000.
3.3. Identificación de genes y marcadores asociados a Identificación de genes y marcadores asociados a fibra e infecciones (candidatos para mejoramiento). fibra e infecciones (candidatos para mejoramiento).
4.4. Primer mapa genético y cromosómico de alpacas (y Primer mapa genético y cromosómico de alpacas (y camélidos). camélidos).
5.5. Estudio multinacional de genómica de una especie Estudio multinacional de genómica de una especie bandera liderado desde Perúbandera liderado desde Perú
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Proyecto de Interés Nacional (PIN)PCM FINCyT-BID
Evaluación de la Biodiversidad Genética de 4 Recursos Marinos (Anchoveta, merluza, pota, concha
de abanico) • Institución Responsable: Centro de Genética y Biología Molecular - Facultad de Medicina-U San Martín de Porres•Instituciones colaboradoras: • Laboratorio de Artes de Pesca- Fac. Biología - U Nacional de San Marcos• Instituto del Mar del Perú (IMARPE)• University of South Caroline• Universidad Federal de Minas Gerais• Universidad Autónoma de México
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Problemas de Aduana
• Importación de BACs (SENASA)• Importación de vectores fagos
(DIGEMID)• Importación de insumos (primers,
enzimas, etc.)• Autoridades no preparadas
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Conclusiones
• Avances muy rápidos en CyT• Capacidad de leer (predecir) y
modificar la información genética• Sociedad no preparada: muy
fantasiosa, muy asustada• Incrementar la información veraz• Comités de ética y bioseguridad