bojenje po gramu · 2020. 4. 9. · metoda po gramu je bojenje kojim se razvrstavaju bakterije na...
TRANSCRIPT
Bojenje po Gramu
Metoda po Gramu je bojenje kojim se razvrstavaju bakterije na Gram(+) i Gram(- )na osnovu osobenosti ćelijskog zida.• Gram-pozitivne bakterije imaju ćelijski zid koga čine debeli (višeslojni)
sloj peptidoglikani (50-90 %). Peptoglikani zadržavaju boju (kristalviolet) unutar ćelije i nakon ispiranja alkoholom.
• Gram-negativne bakterije imaju tanji sloj peptidogilkana (10 %), te se kristalviolet ispire alkoholom. Gram-negativne bakterije imaju i dodatnu spoljnu membranu koja sadrži lipide.
Postoje neki mikroorganizmi koji se drugačije ponašaju po Gramu:• Gram-neosetljive bakterije su vrste bakterija koje se ne mogu obojiti
postupkom bojanja po Gramu (spirohete).• Gram-varijabilne bakterije su vrste bakterija koje u različitim uslovima
rasta mogu pokazati osobine i gram-pozitivnih i gram-negativnih bakterija.
1844. god Hans Kristian Gram
film
Bojenje po Gram-u
Omogućava razlikovanje:
- Gram-pozitivnih bakterija (plavo-ljubičasto obojene)
- Gram-negativnih bakterija (crveno obojene)
* razlika u bojenju je posledica razlika u građi ćelijskog zida
Ćelijski zid Gram pozitivnih bakterija
Ćelijski zid Gram negativnih bakterija
Princip bojenja po Gramu
• Gram+ bakterije ne omogućavaju prodor alkoholu u ćelijski zid pa ostaju plavo ljubičaste
• Gram- bakterije propuštaju alkohol koji oboji gencijana violet a zatim zadržavaju karbol-fuksin i vide se kao crvene
Bojenje po Gram-u
Gram pozitivnebakterije
Gram negativnebakterije
Genciana violet
Rastvor joda
Alkohol (etanol)
Voda
Karbol fuksin / safranin
Voda
GRAM
Faze bojenja po Gramu
• Bojenje kristal violet-om• Stabilizacija boje jodom• Dekolorizacija actonom i alkoholom• Kontra-bojenje safraninom
Postupak bojenja po Gramu
- Fiksacija preparata
- Gencijana violet 3 min
- Lugolov rastvor 2min
- 96% alkohol pa dest voda
- Karbofuksin 30sek
- Ispere vodom i osuši
PRIPREMA PREPARATA
Fikiranje preparata
– zaustavljanje enzimatske aktivnosti bakterija, ubijanje ćelija i lepljenje ćelija za pločicu.
Razmaz bakterija se fiksira brzim prenošenjem pločice kroz plamen nekoliko puta (toplotna fiksacija).
Trajni preparati- kanada balzam + pokrovno staklo
Sterilan rad obezbeđuje odsustvo svih drugih mikroorganizama osim ispitivanog
Staphylococcus spp.,S. aureus
Streptococcus spp., S. PneumoniaeB group streptococcus
Micrococcus spp.
Gram-pozitivne koke
Gram pozitivni bacili
Debeli : Clostridium spp., C. Perfringens,C. septicum C. tetanomorph
TaListeriaTanki
Razgranati: Actinomycetes i Nocardia, A. israelii
Gram-negativne koke
Diplococci: Neiseria spp.N. meningitidis
: Acinetobacter spp., mogu biti Gram-positivniCoccobacilli ili Gram-negativni, često Gram-variabilni
Gram-negativni bacili
Coccobacilli: Haemophilus spp., H. influenzae
Zakrivljeni: Vibrio spp.; Campylobactor spp., V. Cholerae, C. jejuni
Tanki: Enterobacteriaceae, E. Coli
Bojenje po Gram-u