brucelosis humana diagnóstico serológico y...
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Buenos Aires, 27 al 31 de mayo de 2008
Nidia E. Lucero Nidia E. Lucero
Servicio de BrucelosisServicio de BrucelosisINEI-ANLIS Carlos G Malbran
II Curso Avanzado II Curso Avanzado WHO Global WHO Global SalmonellaSalmonella Surveillance (WHOSurveillance (WHO--GSS)GSS)
1er Taller WHO1er Taller WHO--GSS / PulseNetGSS / PulseNet
Brucelosis Humana Diagnstico Serolgico
y Bacteriolgico
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GGnero nero BrucellaBrucellaEspecies
terrestresbiovar
Patogenicidad
para el Hombre
Husped
preferido
B. melitensis 1 AltaCabras y
Ovejas
2
3
B. abortus 1 Moderada Bovinos
2
3
4
5
6
9
B. suis 1 Alta Cerdos
2 SD Cerdos
3 Alta Cerdos
4 Moderada Renos
5 Alta Roedores
B. ovis SD Ovinos
B. canis Baja Perros
B. neotomae SD Ratas
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Especies marinasEspecies marinasEspecies marinasEspecies marinas
B. pinnipediae
B. cetaceae
1994
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Reservoriosalvaje
Reservoriodomstico
Leche y derivados
Contactoindirecto
Contactodirecto
Ingestin
Va inhalatoria
Va digestivaHumano
Cadena Epidemiolgica
Fuente: Medicina laboral: normas preventivas, MS
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ClasificaciClasificacin de Cason de Caso
Sospechoso (CL+Epi)
Probable (+ Lab Tamiz)
Confirmado (+ Lab confirma)
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Diagnstico de Laboratorio
Ensayos Directos
Probar la presencia del MO
Estudios bacteriolgicos
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Aislamiento de cepas de Aislamiento de cepas de BrucellaBrucella
SangreLisis
Hemocultivo
Mdula LCR
AbscesosBiopsias
Lquido articularLquido prosttico
Medio cultivo slido
Medio cultivo lquido
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Aislamiento de cepas
MEDIO DE CULTIVO LQUIDO
MONOFSICO BIFSICO SISTEMA AUTOMATIZADO
Hemo Brucella (Britania, Bs.As. Argentina )
bio Mrieux,Marcy ltoile,
France
BactecBactAlert
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Probabilidad de AislamientoProbabilidad de Aislamiento
Fiebre alta 86%
Fiebre moderada 75%
Sin fiebre 28%
Es mayor si la muestra se toma al comienzo de los sntomas
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Cocobacilos gram negativos Crecimiento lento (48h)Colonias no hemolticasColonias no pigmentadas
Trabajar en Cabina Seguridad Biolgica
Satlite Pos Satlite Neg
Oxidasa-Catalasa Pos
Oxidasa-Catalasa Neg
Considerar Francisella
Considerar Haemophilus
Enviar al Lab de Referencia
UreaNeg
UreaPos
Considerar otro gram Neg
Flujograma gnero Brucella vs otros gram negativos
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Gnero Brucella
Bioterrorismo
Grupo B
Grupo de riesgo 3
Manual bioseguridad, OMS, 2005
http://emergency.cdc.gov/firsthours/es/bioterrorism.asp
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TipificaciTipificacin del gn del gnero nero BrucellaBrucella
Sensibilidad a los antibiticos
Morfologa de la colonia
Produccin de SH2
Urea (Bauer)
Sueros monoespecficos anti A, M, R
Crecimiento en presencia de bacteriostticos
Crecimiento en medio con alcohol polihidroxilado
Fagotipia
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Cepas de Brucella aisladas de Humanos ( 402)Argentina 1994-2007
Lucero et al., 2007
B. melitensis
40%
B. abortus
20%
B. canis
1%
B. suis
39%
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Especies y biovars de Brucella aisladas de
humanos (Argentina-1994-2007)
0
20
40
60
80
100
120
140
B.a
bort
us1
B. a
bort
us2
B. a
bort
usC
19
B. m
elite
nsis
1
B. m
elite
nsis
1a
B. m
elite
nsis
3B
. sui
s1
B. s
uis
1aB
. can
is
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Diagnstico de Laboratorio
Ensayos Indirectos
Respuesta Inmune
Determinar la presencia de anticuerpos
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GGnero Brucellanero BrucellaEspecies patEspecies patgenas para el hombregenas para el hombre
B.abortus
B.melitensis
B.suis
B. pinnipediae
B.cetaceae
B.canis
Morfologa lisa Morfologa rugosa
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MMtodos todos SerolSerolgicosgicosTamizTamiz
HUDDLESON (PAT) VC 11% HUDDLESON (PAT) VC 11% pHpH 6.7+/6.7+/--0.30.3
ROSA DE BENGALA (RB) VC 8% pH 3.65+/-0.5
Aglutinacin Antgeno tamponado (BPA)VC 11% pH 3.65+/-0.02
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AglutinaciAglutinacin con antn con antgeno geno tamponadotamponado (BPA)(BPA)
n Negativos Positivos
Pacientes con cultivo positivo 57 0 57
Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 307 306 1
Pacientes con evidencia clnica y positivos a RB y FC 142 0 142
506
Sensibilidad: 100%Especificidad: 99.67%
Antgeno: Suspensin de B.abortus 1119-3
Lucero & Bolpe, 1998
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MMtodos todos SerolSerolgicosgicosConfirmatorios clConfirmatorios clsicossicos
WRIGHT (TAT) VC 4.5% WRIGHT (TAT) VC 4.5% pHpH 6.7+/6.7+/--0.30.3
2 MERCAPTO2 MERCAPTO--ETANOL (2ME)ETANOL (2ME)
FIJACIFIJACIN DE COMPLEMENTO (CF) N DE COMPLEMENTO (CF) 50% Hem50% Hemlisis, lisis, GlobulosGlobulos Rojos (GR) 2.8% Rojos (GR) 2.8%
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Pruebas de uniPruebas de unin primarian primariaELISA de competiciELISA de competicin (CELISA)n (CELISA)
Sensibilidad: 98.3%Especificidad: 99.7%
Antgeno: S-LPS de B.abortus 1119-3MAb: especfico epitope porcin O-PS del S-LPS
n Negativos Positivos
Pacientes positivos (51 con cultivo y 65 serologa clsica) 116 2 114
Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 341 340 1
457CUTOFF >28% I
Lucero et al., 1999
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Sensibilidad: 96.1%Especificidad: 97.9%
CUT-OFF >72mP
Antgeno: FITC conjugado con una porcin de la cadena O-PS del S-LPS de B.abortus 1119-3
n Negativos Positivos
Pacientes con cultivo positivo 76 3 73
Poblacin asintomtica negativa a RB y FC 340 333 7
416
Lucero et al., 2003
Pruebas de uniPruebas de unin primarian primaria
Tcnica de polarizacin de la fluorescencia (FPA)
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Prueba TamizPrueba Tamiz
MicroaglutinaciMicroaglutinacinn en portaobjeto (RSAT)en portaobjeto (RSAT)
Brucelosis canina
VC 7% pH 8.6 +/-0.1Carmichael & Joubert, 1987
Prueba confirmatoria Prueba confirmatoria
ELISA INDIRECTA (IELISA)
Lucero et al., 2005
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IELISAIELISASensibilidad-Especificidad: 100%Cutoff: %P>27
Antgeno: B.canis M-
n Negativos Positivos
Casos positivos 17 0 17
Casos sospechosos 35 17 18
Casos asintomticos 110 110 0
Casos c/otros diagnsticos 9 9 0
Casos positivos a S-Brucella sp. 8 0 7
179
Lucero et al., 2005
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DIAGNOSTICO SEROLOGICODIAGNOSTICO SEROLOGICODE BRUCELOSIS HUMANADE BRUCELOSIS HUMANA
SCREENING CONFIRMATORIAS
CLASICAS PRUEBAS DE UNION
PRIMARIA SCREENING
UNION PRIMARIA
PAT RB BPA TAT 2ME CF CELISA FPA RSAT IELISA
ANTIGENOS DE BRUCELLA EN FASE LISA ANTIGENOS EN FASE RUGOSA
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Caso BPA TAT* CF* CELISA Especie/biovar
%I
1 Pos 1600 320 77 B. abortus 1
2 Pos 400 80 67 B. abortus 1
3 Pos 1600 40 65 B. abortus 2
4 Pos 800 40 52 B.melitensis 1
5 Pos 800 320 74 B.melitensis 1
6 Pos 6400 640 69 B. suis 1
7 Pos 400 640 83 B. suis 1
8 Pos 400 160 93 B. suis 1
Pacientes con aislamiento de S-Brucella sp.
Casos clnicos
* Recproca del ttulo
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Suero Fecha* PAT BPA RB TAT CF CELISA RSAT** IELISA
Humano 2 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 32 87
3 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 16 73
8 Neg Neg Neg Neg Neg Neg 2 36
Perro 1 3 Neg Neg 4 53
8 Neg Neg Pos+/- 23
Perro 2 3 Neg Neg Pos+/- 22
8 Neg Neg Neg 15
Cepa aislada Cepa aislada B. B. caniscanis
*Meses despus de la admisin
** Recproca del ttulo
Caso clnico
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Nidia E. LuceroNidia E. LuceroSandra M. AyalaSandra M. Ayala
Gabriela I. EscobarGabriela I. EscobarGustavo LGustavo Lpezpez
DeborahDeborah B. B. HasanHasanSERVICIO DE BRUCELOSISSERVICIO DE BRUCELOSIS
INEIINEI--ANLIS DR. C. G. MALBRANANLIS DR. C. G. MALBRAN
[email protected]@elsitio.net