CANDİDA İLE UYARILMIŞ VAJİNAL VE BUKKAL EPİTEL HÜCRELERİNİN SİTOKİN

ÜRETİMİ

Emine Yeşilyurt, Sevgi Özyeğen Aslan, Ayşe Kalkancı, Işıl Fidan,

Semra Kuştimur

Gazi Üniversitesi Tıp Fakültesi Tıbbi Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, ANKARA

#

Giriş

• Oral ve vulvovaginal kandidoz ⇨ immün sistemi baskılanmış hastalar + immün sistemi sağlıklı olan kişilerde de önemli

• Tıbbi girişimlerin artışı • Organ transplantasyonu• Antibiyotik kullanımı• AIDS

Mantar infeksiyonları

#

Candida

• Normal flora• Yuvarlak, oval, ökaryot, dimorfik• pH 4-7, 24-42 °C, 24-48 sa., SDA agar• Germ tüp testi, Gram (+)

#

Fungal İnf. Savunma

Konağa ait faktörler Mantara ait faktörler

Bağışıklık

Doğal

Hücresel/Humoral

Yapışma (Aderans)

Morfolojik Değişim

Fenotipik Değişim

Toksinler ve Enzimler

Biyofilm Oluşumu

Fiziki bariyerler

Mononükleer Hücreler

Nötrofiller

Lenfositler

T lenfosit

B lenfosit

IL-2, IL-4, IL-5

IFN-γ, TNF-α

IL-10, IL-4, TGF-β

#

Sitokin

• İmmun ve inflamatuvar

reaksiyonların

mediatörleri

• Salgısal, düşük molekül

ağırlıklı glikoproteinler

• Biyolojik olayların

düzenlenmesi

Sitokin geni

uyarı

Gen aktivasyonu

sinyal

Biyolojik etki

Sitokin üreten hücre

Sitokin

Reseptör

Hedef hücre

#

Sitokinler

Proinflamatuvar sitokinler

Antiinflamatuvar sitokinler

IL-2

IL-12

IFN-γ

TNF-α

IL-4

IL-10

TGF-β

IL-13

#

• Candida infeksiyonlarına karşı lokal immün yanıt önemli

• Epitelyal hücreler

sitokin ve kemokin üretimi

+

antimikrobiyal etkileri

=

mukozal immün yanıtta etkin + doğal ve kazanılmış immun sistemin düzenlenmesi

#

Enfeksiyon

#

• Candida albicans (C. albicans) ve C. glabrata ile

uyarılmış vajinal ve bukkal epitel hücreleri arasında

sitokin salınımında görülen farklılıkların belirlenmesi

Amaç

#

Neler yaptık???

C. albicans

C. glabrata0,24,48 sa

inkübasyon

#

Sitokin ekspresyonu ???

Gerçek zamanlı PCR ELISA

Proinflamatuvar

• IFN-γ

• IL-6

• IL-17

• IL-23

Antiinflamatuvar

• IL-10

• TGF-β

#

RNA ekstraksiyonu

cDNA dönüşümü

Gerçek zamanlı PCR

RNA ölçümü

???

#

cDNA Çoğaltılması İçin Yapılan PCR Sıcaklık Döngüleri

Döngü Sayısı

Sıcaklık Süre

1X 95 °C 1 dakika

45X 95 °CPrimer için bağlanma sıcaklığı*72 °C

30 saniye45 saniye60 saniye

1X 72 °C 5 dakika

#

• Analiz

Primer dizileriIL-6 F-AGGAGCTGAGGAAAGAGATGTG

R-TGTTTTCTTCGTCACTCCTGAA

IL-10 F-TTCTTTCAATCGAAGGATCAGC

R-CTCATTCATGGCTTTGTAGACG

IL-17 F-CTCAGACTACCTCAACCGTTCR-GTGCCTCCCAGATCACAGAAG

IL-23 F-CATGGGGCTATCAGGGAGTA

R-AATAATGTGCCCCGTATCCA

IFN-γ F-CAC GCC GCG TCT TGG TCTR-TCT AGG CTT TCA ATG AGT

TGF-β F-GCCCTGGACACCAACTATTR-AGGCTCCAAATGTAGGGG

#

• Çalışmamızın sonucunda:

• Candida ile uyarılmış vajinal ve bukkal epitel

hücrelerinde mikroorganizma ile uyarılmamış epitel

hücrelerine göre, proinflamatuvar sitokinlerden

IL-6, IFN-γ yanıtı

ELISA

#

• Antiinflamatuvar sitokinlerden TGF-β düzeyleri ⇨

Candida ile uyarılmış epitel hücrelerinde

• Antiinflamatuvar sitokinlerden IL-10 yanıtı ⇨

değişiklik

• IL-17, IL-23 sitokin ekspresyonunda artış

#

#

#

#

Diğerleri ???

• Pivarcsi ve ark. ⇨ çeşitli mikrobiyal komponentlerin (LPS, peptidoglikan, Candida,

zimosan) vaginal epitel hücreleri üzerinde proinflamatuvar sitokin, kemokin ve antimikrobiyal peptit seviyelerini ⇧

Pivarcsi A. Microbial compounds induce the expression of pro-inflammatory cytokines, chemokines and human b-

defensin-2 in vaginal epithelial cells. Microbes and Infection 7 (2005) 1117–1127.

#Schaller M. Candida albicans-Secreted Aspartic Proteinases Modify the Epithelial Cytokine Response in an In Vitro Model of Vaginal Candidiasis. INFECTION AND IMMUNITY, May 2005, p. 2758–2765 Vol. 73, No. 5

• Schaller ve ark. ⇨ C. albicans’ın insan vajinal

epitel hücreleri

üzerindeki gen

ifadelenmesi ⇨

proinflamatuvar sitokin

seviyeleri ⇧ ⇨ genler

arası farklılık ⌀

#

• Steele ve ark. ⇨ C. albicans’ a ait oral/ vaginal mukozal epitel yanıtı ???

• IL-12, IFN-γ, IL-10, TGF-β, MCP-1, IL-8 oldukça az

• IL-6 ⌀

• Heterojenik dağılım, proinflamatuvar sitokinler dominant

TNF-ɑ IL-1ɑ

Chad Steele and Paul L. Fidel, Jr. Cytokine and Chemokine Production by Human Oral and Vaginal Epithelial Cells in Response to Candida albicans. INFECTION AND IMMUNITY 2002, Vol. 70, No. 2, p. 577–583

#

• Villar ve ark. ⇨ Candida enfeksiyonu proinflamatuvar sitokin seviyesini ⇧ ⇨ mayanın mukozal yüzeylerde kolonizasyonu üzerinde oldukça etkili

C. C. Villar. Invasive Phenotype of Candida albicans Affects the Host Proinflammatory Response to Infection. INFECTION AND IMMUNITY, Aug. 2005, p. 4588–4595 Vol. 73, No. 8

#

• Fahey ve ark. ⇨ kadın genital sisteminde patojenik mikroorganizmalara karşı savunmada immun hücrelerin aktivasyonu ???

• Artan kemokin ve sitokin oranları sayesinde epitel hücreleri ⇨ koruyucu

Secretion of cytokines and chemokines by polarized human epithelial cells from the female reproductive tract. J.V.Fahey, T.M Schaefer, J.Y.Channon and C.R.Wira. Human Reproduction Vol.20, No.6 pp. 1439–1446, 2005

#

Sonuç olarak

• Vajinal ve bukkal epitel hücrelerinde Candidainfeksiyonuna yanıt olarak özellikle proinflamatuvar sitokin yanıtında artış olduğu

• Ancak, iki epitel hücre grubu arasında sitokin cevabı açısından bir fark bulunmadığı görülmüştür…

#

Teşekkür ederim…