candida albicans real-tm - peramed.comperamed.com/peramed/docs/f1-100frt-tf1-100frt_tr.pdfcandida...

12
Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013 IVD Sadece in Vitro Diagnostic Kullanım için Candida albicans Real-TM El Kitabı Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti Candida albicans REF F1-100FRT REF TF1-100FRT 100

Upload: others

Post on 03-Sep-2019

4 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

IVD Sadece in Vitro Diagnostic Kullanım için

Candida albicans Real-TM

El Kitabı

Kalitatif Tespiti için Real Time PCR kiti Candida albicans

REF F1-100FRT

REF TF1-100FRT

100

Page 2: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

ADI

Candida albicans Real-TM

GİRİŞ

Candida albicans bir diploid mantardır, bu maya ve ipliksi hücreler gibi her ikisi ve insanlarda fırsatçı

oral ve genital enfeksiyonların bir nedensel ajanı olarak yetişir. C. albicans tarafından da dahil

olmak üzere sistemik mantar enfeksiyonları (fungemias) immün sistemi baskılanmış hastalarda

morbidite ve mortalitenin önemli nedenleri olarak ortaya çıkmıştır (örneğin AIDS, kanser

kemoterapisi, organ veya kemik iliği transplantasyonu). Buna ek olarak, C. albicans tarafından

hastane kökenli enfeksiyonlar önemli sağlık sorunları nedeni haline gelmiştir.

KULLANIM AMACI

Candida albicans Real-TM kiti, ürogenital swablar,idrar, prostat sıvısı ve diğer biyolojik

malzemelerde Candida albicans 'in kalitatif tespiti için bir testtir.

TAHLİL PRENSİBİ

Candida albicans Real-TM kiti, iki ana proses esasına dayanmaktadır: Örneklerden DNA

izolasyonu ve Real Time Amplifikasyon. Candida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden

ekstrakte edilir ve Internal (iç) kontrol ve Candida albicans DNA için spesifik floresan reporter boya

probları kullanılarak tespit edilir. Internal (iç) Kontrol, olası inhibasyon reaksiyonunu tanılamak için

ve her biri tek tek işlenen numuneler için bir amplifikasyon kontrolü olarak hizmet vermektedir. IC,

Candida albicans DNA'dan farklı bir kanalda tespit edilir.

Page 3: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

SAĞLANAN MALZEMELER

Modül No.1: Real Time PCR kit (F1-100FRT) Part N° 2 – “Candida albicans Real-TM”: Real Time Amplifikasyon

PCR-mix-1-FL, 1,2 ml;

PCR-mix-2-FRT, 2 x 0,35 ml;

TaqF Polymerase, 2 x 0,03 ml;

Pos C+, 0,2 ml;

Negative Control C-, 1,2 ml;*

Internal Control IC, 1,0 ml;**

DNA-buffer, 0,5 ml;

110 test için reaktifler içerir

Modül No.2: Complete Real Time PCR test with DNA purification kit (TF1-100FRT) Part N° 1 – “DNA-sorb-A”: Numune Hazırlama

Lysis Solution, 2 x 15 ml;

Sorbent, 2 x 1,0 ml;

Washing Solution, 2 x 50 ml;

DNA-eluent, 2 x 5 ml;

Transport medium , 15 ml.

100 test için reaktifler içerir

Part N° 2 – “Candida albicans Real-TM”: Real Time Amplifikasyon

PCR-mix-1-FL, 1,2 ml;

PCR-mix-2-FRT, 2 x 0,35 ml;

TaqF Polymerase, 2 x 0,03 ml;

Pos C+, 0,2 ml;

Negative Control C-, 1,2 ml;*

Internal Control IC, 1,0 ml;**

DNA-buffer, 0,5 ml;

110 test için reaktifler içerir

*izolasyon prosedürü esnasında Ekstraksiyon Negatif Kontrolü olarak kullanılmalıdır. **10 µl Internal Kontrol DNA izolasyonu esnasında doğrudan numune/lysis karışımına eklenir ( DNA-Sorb-A REF K-1-1/A protokolüne bakınız).

REF K-1-1 protokol).

Page 4: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

SAĞLANMAYAN GEREKLİ MALZEMELERr

Alan 1 : Numune Hazırlama

DNA ekstraksiyon kiti (Modül No.

1) Biyolojik kabin

"eppendorf" tip tüpler için masaüstü mikrosantrifüj

Kuru hava

bloğu, Vorteks

mikser,

Pipetler

1,5 ml'lik polipropilen steril tüpler,

Biyolojik tehlikeli atıklar için atık

kabı, buzdolabı,

Dondurucu

Alan 2: Real Time Amplifikasyon

Real Time Thermal cycler

Reaksiyon Tüpleri

Çalışma İstasyonu

Pipetler (ayarlanabilir)

Filtreli steril pipet uçları

1,5/2,0 ml tüpler için rotorlu masaüstü santrifüj

Vorteks mikser

Dondurucu, buzdolabı

MUHAFAZA KOŞULLARI

Candida albicans Real-TM 2-8 ° C'de saklanmalıdır. TaqF Polymerase saklanmalıdır

Kiti 16°C. DNA-sorb-A 2-8°C de saklanmalıdır. Part N° 3 – “MTB Real-TM” -8°C'de muhafaza

edilmelidir. Kit , 2-8°C de nakliye edilebilir ancak alındıklarında hemen 2-8°C de ve -16°C de

saklanmalıdır.

STABİLİTE

Candida albicans Real-TM, etiketinde belirtilen son kullanım tarihine kadar stabildir. Ürün etiketinde

basılı kontrol tarihine kadar performansını koruyacaktır . Işık, ısı veya neme maruz kalma kitin bazı

bileşenlerinin raf ömrünü etkileyebilir, bunlardan kaçınılmalıdır. Hassasiyet azalabileceğinden,

reaktiflerin tekrarlanan çözülme ve dondurma işlemlerinden kaçınılmalıdır.

KALİTE KONTROL

Her lot , tutarlı ürün kalitesini sağlamak için; Sacace ISO 13485-Sertifikalı Kalite Yönetim

Sistemine uygun olarak, önceden belirlenmiş özelliklere karşı test edilmektedir.

Page 5: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

UYARILAR VE ÖNLEMLER

In Vitro Diagnostic Medikal Cihaz

Sadece In Vitro Diagnostic Kullanım için

Kullanıcı her zaman aşağıdakilere dikkat etmelidir:

Lysis Solution ,guanidine thiocyanate* içerir. Guanidin tiyosiyanat solunduğunda veya

yutulduğunda veya deri ile temas halinde zararlıdır. Asit ile temasında toksik gaz oluşturur.

(Xn; R: 20/21/22-36/37/38; S: 36/37/39).

Aeresol bariyerli steril pipet ucuları kullanın ve her prosedür için yeni pipet ucu kulanın.

Ekstrakte pozitif malzemeleri (numuneler, controller ve amplikonlar) diğer reaktiflerden uzak

tutun/mufaza edin ve bunları reaksiyon karışımına ayrı bir alanda ekleyin.

Bütün bileşenleri tahilile başlamadan önce oda sıcaklığında iyice çözün.

Bileşenler çözündüğünde karıştırın ve kısa bir süre santrifüjleyin.

Reaktif ve örnekler ile çalışırken , atılabilir eldiven, laboratuvar önlüğü ve göz koruyucu kullanın.

İşlem sonrası ellerinizi iyice yıkayın.

Laboratuar çalışma alanlarında, sigara içmeyin, herhangi bir şey yemeyin- içmeyin, kozmetik

uygulamayın veya kontakt lenslere elle dokunmayın. Son kullanım tarihlerinden sonra kitleri

kullanmayın.

Tüm numuneleri ve kullanılmayan reaktifleri ,yerel yönetim kurallarına uygun olarak imha edin.

.

Örnekler potansiyel enfeksiyöz olabilir , işlemleri uygun biyogüvenlik uygulamaları ile bir güvenlik

kabini içerisinde gerçekleştirin.

Dökülen/ saçılan tüm numune veya reaktifleri temizleyin ve %0.5 lik sodyum hipoklorit veya

diğer uygun dezenfektanlarla dezenfekte edin.

Numune veya reaktiflerin deri, göz veya mukoza zarları ile temasından kaçının. Deri, göz veya

mukoza zarları ile temas olması halinde, hemen su ile yıkayın ve acilen tıbbi yardım alın.

Malzeme Güvenlik Bilgi Formları (MSDS) istek üzerine verilebilir.

Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır.

.

Laboratuvar süreci tek yönlü olmalı; Ekstraksiyon Alanında başlamalı ve sonra Amplifikasyon ve Tespit

alanlarına gidilmeli/ yönlenmelidir. Örnekleri, ekipmanları ve reaktifleri önceki adımın yapıldığı

bölgeye/alana geri döndürmeyin.

Bu kitteki bazı bileşenler koruyucu olarak sodyum azid içerir. Reaktif transferi için metal

tüp kullanmayın.

* Sadece Modül No.2

Page 6: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

ÜRÜN KULLANIM SINIRLARI

Tüm reaktifler sadece in vitro diagnostic kullanılabilir. Bu ürünün kullanımı, DNA amplifikasyonu

(UNI EN ISO 18113-2:2012).teknikleri konusunda eğitimli personel ile sınırlı olmalıdır. Kullanım

kılavuzu ile sıkı uyum optimum PCR sonuçları için gereklidir. Kutu ve tüm bileşenlerin etiketleri

üzerinde yazılı olan son kullanım tarihlerine dikkat edilmelidir. Son kullanım tarihlerinden sonra

kitleri kullanmayın.

NUMUNE TOPLAMA, MUHAFAZA VE TAŞIMA Candida albicans

Real-TM , aşağıdakilerden ekstrakte DNA analizi yapabilir:

selvikal, uteral swablar: Swabı nükleaz içermeyen 1,5 ml'lik tüpe yerleştirin ve 0,2 ml Transport

medium ekleyin. Swabları medium içimde 15-20 sn. çalkalayın.

idrar sedimenti: 10-20 ml ilk idrar steril kap içerisine alınır. 3000 x g 'de 30 dk. santrifüjleyin,

200 µl solüsyon bırakarak süpernatantı dikkatlice ayırın. Sedimenti resüspanse edin.

Süspansiyonu DNA ekstraksiyon için kullanın.

Prosesin, numuneler alındıktan hemen sonra gerçekleştirilmesi önerilir. Numuneler 24 saatten

fazla olmamak koşulu ile 2–8 °C ‘de muhafaza edilir ya da–20/80°C dondurulur. Klinik

örneklerin taşınması, etiyolojik ajanların taşınmasına yönelik ülke , federal , eyalet ya da yerel

yönetmeliklere, uymak zorundadır.

DNA İZOLASYON

Herhangi bir ticari RNA / DNA izolasyon kiti, burada belirtilen IVD-CE "NUMUNE TOPLAMA,

MUHAFAZA VE TAŞIMA" paragrafındaki örnek türleri için valide ise, kullanılabilir.

Sacace Biotechnologies aşağıdaki kitleri kullanmanızı önerir:

DNA-Sorb-A (Sacace, REF K-1-1/A);

Lütfen, DNA ekstraksiyonunu, üreticinin talimatlarına uygun olarak gerçekleştirin. 10

Internal (iç) Kontrol 'ü DNA izolasyon prosedürü esnasında doğrudan numune/lysis

karışımına ekleyin. (Not: Sacace Internal Control tüm ürogenital enfeksiyon Real Time

kitleri için aynıdır.)

Page 7: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

NUMUNE VE RAKTİF HAZIRLAMA (modül no.2 ile sağlanan reaktifler)

1. Lysis Solution ve Washing Solution (+2-8°C de muhafaza edildikleri için) buz kristalleri yok

olana kadar 60–65°C' ye kadar ısıtılmalıdır. Prepare required quantity of 1.5 ml polypropylene

tubes including one tube for Negative Control of Extraction.

2. Her tüpe 10 µl Internal Control ve 300 µl Lysis Solüsyon ekleyin.

3. Uygun tüpe 100 µl numunelerden ekleyin.

4. Kontrolleri aşağıdaki gibi hazırlayın :

Cneg etiketli tüpe 100 µl of C– (amplifikasyon kiti ile sağlanan Neg Kontrol) ekleyin.

Cneg.

5. Bütün tüpleri vorteksleyin ve 5 dk. 65°C'de inkübe edin. 5-7 sn. santrifüjleyin. Eğer numune

tamamen çözünmezse, tüpün maksimum (12000-16000 g.) hızda 5 dk. yeniden

santrifüjlenmesi önerilir. Süpernatantı DNA ektraksiyon için, yeni bir tüpe aktarın.

6. Sorbenti kuvvetlice vorteksleyin ve her tüpe 20 µl ekleyin.

7. 5-7 sn. vorteksleyin ve bütün tüpleri, oda sıcaklığında 3 dk. inkübe edin. Bu adımı tekrarlayın.

8. Bütün tüpleri 30 sn. 5000 g'de santrifüjleyin ve tıkaçlı aerosol bariyer uçlu mikropipet

kullanarak, her tüpten pelleti dağıtmadan, süpernatantı dikkatlice ayırın ve kaldırın. Tüpler

arasında pipet uçlarını değiştirin.

9. Her tüpe 500 µl Washing Solution ekleyin. Çok kuvvetli vorteksleyin ve 30 sn 10000 g'de

santrfifüjleyin. Her bir tüpten süpernatantı ayırın ve kaldırın.

10. 9. adımı tekrarlayın ve bütün tüpleri kapakları açık halde 65°C'de 5-10 dk. inkübe edin.

11. Pıhtıyı, 100 µl DNA-eluent ile resüspanse edin. 65°C 'de 5 dk. inkübe edin ve periyodik olarak

vorteksleyin.

12. Tüpleri, 12000 g'de 1 dk. inkübe edin.

13. Süpernatant, amplifikasyon için hazır DNA içerir. Eğer amplifikasyon ekstraksiyon ile aynı gün

gerçekleştirilmezse, işlenmiş numuneler 5 günden fazla olmamak koşulu ile 2-8°C'de

muhafaza edilebilir veya –20°/-80°C'de dondurulabilir.

PROTOKOL

1. Numuneler(N) ve kontroller (N+2) için reaksiyon tüplerini, gereken sayıda hazırlayın.

2. Her numune için yeni bir steril tüpte 10*(N+1) µl PCR-mix-1, 5,0*(N+1) µl PCR Buffer Flu,

0,5*(N+1) µl TaqF DNA Polymerase ve 0,5*(N+1) µl UDG- Enzyme hazırlayın.

Vorteksleyin ve 2-3 saniye santrifüjleyin.

3. Her tüpe 15 µl Reaction Mix ve uygun tüpe 10 µl ekstrakte DNA örneği ekleyin.

tube. Pipetleme ile karıştırın.

4. Her panel için 2 kontrol hazırlayın:

● Amplifikasyon Negatif Kontrol ile etiketli tüpe, 10 µl DNA-buffer ekleyin;

● Amplifikasyon Pozitif Kontrol etiketli tüpe, 10 µl of Positive Control C+ ekleyin;

5. Tüpleri thermalcycler'a yerleştirin.

Page 8: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

Rotor-tipi Cihazlar1

Plate- veya modüler tipi Cihazlar2

Adım Sıcaklık

°С

Süre

Tekrarlar Sıcaklık

°С

Süre

Tekrarlar

1 95 15 dk. 1 95 15 dk. 1

2

95 5 sn.

5

95 5 sn.

5 60 20

sn. 60 20

sn. 72 15 sn.

72 15 sn.

3

95 5 sn.

40

95 5 sn.

40

60 20 sn.

floresan sinyal tespiti

60

30 sn.

floresan sinyal tespiti 72 15

sn. 72 15

sn.

Amplifikasyon

1. Enstrümanınızda aşağıdaki gibi bir sıcaklık profili oluşturun:

1 Örneğin; Rotor-Gene™ 3000/6000/Q (Corbett Research, Qiagen)

örneğin,SaCycler-96™ (Sacace), CFX/iQ5™ (BioRad); Mx3005P™ (Agilent), ABI® 7300/7500/StepOne Real Time PCR (Applied Biosystems), SmartCycler® (Cepheid), LineGeneK® (Bioer)

Floresan, 2.Cycling evresinde (60 °C) , FAM/Green ve JOE/Yellow/Hex/Cy3 floresan kanallarda tespit edilir.

JOE/Yellow/HEX/Cy3 floresan kanal.

Candida albicans Candida albicans FAM (Yeşil) kanalı, JOE (Sarı)/HEX/Cy3 kanalında IC DNA üzerinde tespit edilir.

JOE/Yellow/HEX/Cy3 kanalda tespit edilir.

ENSTRÜMAN AYARLARI Rotor-tip enstrümanlar

Kanal Calibrate/Gain Optimisation…

Eşik Çizgisi Diğer Ayarlar/

Outlier Removal

Slope Correct

FAM/Green

5 FI ila 10 FI

0,1

%5

Kapalı

JOE/Yellow

4 FI ila 8 FI

0,1

%5

Kapalı

Plate -tip enstrümanlar

Eşik çizgisi, yalnız pozitif örneklerin sinyal birikiminin sigmoid eğrilerini geçmeli ve taban çizgisini

geçmemelidir; aksi takdirde eşik çizgi seviyesi yükseltilmelidir. Eşik çizgisini , floresan eğrilerinin

linear ve negatif numunelerin eğrilerinin geçmediği yerde ayarlayın.

Cycle eşik çizgisi sınır değeri, Ct

Numune

Florofor için kanal

Ct sınır değeri

Rotor-tip enstrümanlar

Plate-tip enstrümanla

r

C+ FAM/Green 33 36

JOE/Yellow/HEX/Cy3 30 33

Klinik numuneler, C- JOE/Yellow/HEX/Cy3 30 33

Page 9: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

Kontrol

Kontrol Evresi

Ct kanal Fam

Ct kanal Joe

Yorumlama

NCE

DNA izolasyon

NEG

POS

Geçerli sonuç

NCA

Amplifikasyon

NEG

NEG

Geçerli sonuç

C+

Amplifikasyon

POS

POS

Geçerli sonuç

VERİ ANALİZLERİ Floresan sinyal yoğunluğu iki kanalda tespit edilir:

Candida albicans DNA amplifikasyon ürününün siyali,

FAM/Green kanalda tespit edilir.

Internal Control amplifikasyon ürününden gelen sinyal, JOE/Yellow/HEX/Cy3 kanalında tespit edilir.

JOE/Yellow/HEX/Cy3 kanal.

Sonuçların Yorumlanması

Sonuçlar, eşik çizgisi ile floresan eğrinin geçişi (veya geçmeyişi) ile, enstrüman yazılımı

vasıtası ile yorumlanır.

Yorumlama Prensibi

Candida albicans DNA, FAM kanalda Ct değeri var ise, numune içinde tespit edilir. Floresan eğrisi,

üstel floresan artış alanında eşik çizgisini geçmelidir.

Ct değeri JOE kanalda 33'ten daha küçükken, Ct değeri FAM kanalda yoksa (floresan eğrisi eşik çizgisini

geçmiyor), numunede Candida albicans DNA tespit edilmez.

JOE kanaldaki CT değeri, belirtilen sınır değerden (Ct>33) daha büyük veya yok iken,

numunenin Ct değeri FAM kanalda yoksa, sonuç geçersizdir.

. Bu gibi numuneleriin PCR analizinin tekrar edilmesi gereklidir.

Eğer, sadece Ekstraksiyon Kontrol (Tablo 2) doğruysa ve bunun yanı sıra sonuçlar amplifikasyon Pozitif ve Negatif kontroller için elde edilmişse , analiz sonuçları güvenilir kabul edilir.

Tablo 2. Kontrol Sonuçları

Page 10: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

KALİTE KONTROL PROSEDÜRÜ

Internal Kontrol (IC) tanımlanmış miktarı,her bir numunenin ekstraksiyon prosesini kontrol etmek

ve olası inhibasyon reaksiyonunu tanımlamak için , her numune ve kontrolün numune hazırlama

prosedürünün başlangıcından itibaren işleme konulur.

Ekstraksiyon Negatif Kontrol (NCE), aplifikasyon negatif kontrol (NCA), pozitif amplifikasyon

kontrol (C+) , numune hazırlama, amplifikasyon ve tespit adımlarının doğru gerçekleştirilip

geçekleştirilmediğini doğrulamak için her çalışmada gereklidir.

Eğer kontroller beklenilen aralıkların dışındaysa ( Kontrol Sonuçları tablosuna bakınız), bu

çalışmadaki numuneler ve kontroller , numune hazırlama adımından itibaren yeniden işlenmelidir.

SPESİFİKASYON

LAR Hassasiyet

Candida albicans Real-TM PCR kitinin analitik hassasiyeti, aşağıdaki tabloda belirtilmiştir.

Klinik malzeme DNA ekstraksiyon kiti Analitik hassasiyet, GE/ml*

Swablar:

DNA-sorb-A 5 x 102

* Belirtilen transport mediumda yer alan klinik numunenin 1 ml başına mikroorganizmanın Genom eşdeğerleri (GE).

Özgünlük

Candida albicans Real-TM PCR kitinin analitik özgünlüğü, sıkı reaksiyon koşullarıyla birlikte

spesifik primerler ve probların seçimiyle sağlanır Primerler ve problar, sekans karşılaştırma

analizi ile gen bankalarında yayınlanan tüm sekanslara mümkün olan homolojiler açısından

kontrol edilmiştir. İnsan DNA'sının yanı sıra aşağıdaki mikroorganizmaların DNA panelinin de ,

inceleme esnasında nonspesifik tepkileri yok idi: Gardnerella vaginalis, Lactobacillus spp.,

Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae,

Candida albicans, Neisseria gonorrhoeae, Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum,

Mycoplasma genitalium, Neisseria flava, Neisseria subflava, Neisseria sicca, Neisseria mucosa,

Chlamydia trachomatis, Mycoplasma hominis, Treponema pallidum, Toxoplasma gondii, HSV tip1

ve 2, CMV, ve HPV.

Page 11: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

SORUN GİDERME

1. Ekstraksiyon Negatif Kontrol için, zayıf ya da olmayan IC (Joe/Hex/Cy3 kanal) sinyali.

PCR inhibe edilmiştir.

Önerilen DNA ekstraksiyon metodunu kullandığınızdan ve üreticinin

talimatlarını izlediğinizden emin olun.

Bütün tüpleri ekstrakte DNA pipetlemeden önce, 2 dk. maksimum (12000-

16000 g) hızda yeniden santrifüjleyin ve süpernatantı dikkatlice alın. Pelleti

dağıtmayın, sorbent reaksiyonu inhibe eder.

Reaktif muhafaza koşulları talimatlara uygun değil.

Muhafaza koşullarını kontrol edin.

Yanlış DNA ekstraksiyonu

DNA ekstraksiyon aşamasndan başlamak üzere analizi tekrarlayın.

PCR koşulları talimatlara uygun değil.

Protokolde belirtilen IC tespit floresan kanalını seçin ve PCR koşullarını

kontrol edin.

IC, reaktif pipetleme esnasında numuneye eklenmemiş.

DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında dikkatli olun.

2. Zayıf ya da olmayan Pozitif Kontrol sinyali.

PCR koşulları talimatlara uygun değil.

Manuelde belirtilen floresan kanalını seçin ve aplifikasyon prosedürünü

kontrol edin.

3. Ekstaksiyon Negatif Kontrolü ile Fam (Green) sinyal.

DNA ekstraksiyon prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir.

Bütün yüzeyleri ve enstrümanları sodyum hipoklorid ve etanol ile

dekontamine edin.

Ekstraksiyon prosedürü esnasında sadece filtreli pipet uçları kullanın.

Tüpler arasında pipet uçlarını değiştirin.

Yeni reaktif setleriyle DNA ekstraksiyonunu tekrarlayın.

4. PCR Negatif Kontrol (DNA-buffer) ile herhangi bir sinyal yok.

PCR hazırlama prosedürü esnasında kontaminasyon. Tüm sonuçlar geçersizdir.

Bütün yüzeyleri ve cihazları sodyum hipoklorid ve etanol veya özel DNA dekontaminasyon reaktifleri ile dekontamine edin.

and ethanol or special DNA decontamination reagents.

Pozitif Kontrolü en son pipetleyin.

Yeni reaktif setleriyle PCR hazırlamayı tekrarlayın.

Page 12: Candida albicans Real-TM - peramed.comperamed.com/peramed/docs/F1-100FRT-TF1-100FRT_TR.pdfCandida albicans DNA, Real Time amplifiye örneklerden ekstrakte edilir ve Internal (iç)

Sacace™ Candida albicans Real-TM VER. 21.03.2013

KULLANILAN SEMBOLLERİN ANLAMLARI

Liste Numarası Dikkat!

Lot Numarası <n> testleri için

yeterlilik içerir

in Vitro Diagnostic Kullanım için

Kullanım Versiyon

Saklama NCA Negatif kontrol Amplifikasyon

Üretici NCE Ekstraksiyon Negatif

Kontrol Ekstraksiyon

Kullanım için talimatlara bakınız C+

Pozitif Kontrol Amplifikasyon

Son Kullanım Tarihi IC Internal (iç) kontrol

* SaCycler™ Sacace Biotechnologiestescilli markasıdır. * CFX™ and iQ5™Bio-Rad Laboratories tescilli markasıdır. * Rotor-Gene™ Qiagen tescilli markasıdır. * MX3005P® Agilent Technologies tescilli markasıdır. * ABI® Applied Biosystems tescilli markasıdır. * LineGeneK® Bioer tescilli markasıdır.

* SmartCycler® Cepheid tescilli markasıdır.

Sacace Biotechnologies Srl via Scalabrini, 44 – 22100 – Como – Italy Tel +390314892927 Fax +390314892926 mail: [email protected] web: mail: [email protected] web: www.sacace.com