“caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

FFCLRP - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENTOMOLOGIA

“Caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares de operárias, rainhas

virgens e rainhas fisogástricas de Melipona marginata Lepeletier, 1836.”

(Hymenoptera, Apinae, Meliponini)

Maria Juliana Ferreira Caliman

Dissertação apresentada à Faculdade de Filosofia,

Ciências e Letras de Ribeirão Preto-USP, como

parte das exigências para obtenção do título de

Mestre em Ciências - Área: Entomologia.

RIBEIRÃO PRETO / SP

2008

UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO

FFCLRP - DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM ENTOMOLOGIA

“Caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares de operárias, rainhas

virgens e rainhas fisogástricas de Melipona marginata Lepeletier, 1836.”

(Hymenoptera, Apinae, Meliponini)

Maria Juliana Ferreira Caliman

Orientador: Prof. Dr. Ronaldo Zucchi

Dissertação apresentada à Faculdade de Filosofia,

Ciências e Letras de Ribeirão Preto-USP, como

parte das exigências para obtenção do título de

Mestre em Ciências - Área: Entomologia.

RIBEIRÃO PRETO / SP

2008

FICHA CATALOGRÁFICA

Ferreira-Caliman, Maria Juliana Caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares de operárias, rainhas virgens e rainhas fisogástricas de Melipona marginata Lepeletier, 1836. (Hymenoptera, Apinae, Meliponini) Ribeirão Preto, 2008. Dissertação de Mestrado, apresentada à Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto – USP, Área de concentração: Entomologia. Orientador: Zucchi, Ronaldo 1. Insetos sociais. 2. Hidrocarbonetos cuticulares. 3. Meliponíneos. 4. Cromatografia gasosa-espectrometria de massa.

Agradeço,

Ao Prof Dr Ronaldo Zucchi pela oportunidade, paciência, orientação e amizade.

Ao Sr. Sidnei Mateus, mestre e doutor em entomologia, especialista em laboratório

de insetos, informalmente meu co‐orientador e principalmente meu grande amigo, pela

ajuda incondicional durante a realização deste trabalho.

À amiga Izabel Cristina Casanova Turatti, técnica do laboratório de química

orgânica da Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto, pela realização das

amostras químicas.

Ao amigo Prof. Dr. Fabio dos Santos Nascimento pela orientação durante a

montagem do projeto e pelo incentivo durante a realização do mesmo.

À CNPq pelo auxilio financeiro.

Aos meus filhos, Letícia e Pedro, e ao meu esposo, Wellington, pelo carinho e pela

paciência incondicionais durante a realização deste trabalho.

Aos meus pais, Sônia e Assis, e à minha irmã, Silvia, que sempre estiveram comigo

apesar da distância física que nos separa.

À senhora Neuza Caliman por me ajudar sempre que necessário.

À Gisele, amiga de todas as horas e ouvinte paciente, que sempre me confortou e

me deu ânimo para continuar mesmo nas horas mais difíceis.

À Patrícia, amiga que conquistei durante esse último ano e que desejo manter

eternamente.

Ao grande amigo Leo, sempre presente e dedicado.

Ao colega de trabalho Túlio pelo auxílio durante a realização dessa dissertação e

pela ajuda na correção da mesma.

À amiga Cidinha pela amizade e por cuidar sempre com carinho de nosso ambiente

de trabalho.

A todos os colegas de laboratório: Cristiano, Michael Hncir, Denise, Plésio, Victor,

Rafael, Ayrton, Elinton, Carolina, Janaina, Elynor, Marco, Cyro, Yara e em especial às

amigas Giovanna e Juliana Alonso.

Thatʹs What It Takes (George Harrison)

And now it begins to shine And you found the eyes to see Each little drop at dawn of every day Your smile, it comes back to me And whatever you may say Donʹt let it stop, never fade away As we got to get out in this world together, doesnʹt matter if we start to make some changes. If thatʹs what it takes Then Iʹve got to be strong Donʹt want to be wrong If thatʹs what it takes The closer I get Into that open door Iʹve got to be sure If thatʹs what it takes And now that itʹs shining through And you can see all this world Donʹt let it stop, never fade away If we got to be in this life forever, Then weʹd better be taking all the chances, If thatʹs what it takes …

Ao senhor Cícero Caliman, exemplo de bondade e alegria,

dedico.

Índice

Resumo.................................................................................................................................................1

Abstract................................................................................................................................................2

Introdução............................................................................................................................................3

Objetivos..............................................................................................................................................7

Material e Métodos............................................................................................................................8

Espécie e Colônias...............................................................................................................................8

Extração de hidrocarbonetos cuticulares de operárias..................................................................8

Extração de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens.......................................................9

Extração de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas fisogástricas..............................................9

Análise das amostras........................................................................................................................10

Análises do desenvolvimento ovariano de rainhas virgens.......................................................11

Análise dos resultados.....................................................................................................................11

Resultados.........................................................................................................................................13

Caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares de operárias.....................................13

Influência da origem da população sobre o perfil de

hidrocarbonetos cuticulares de operárias. .........................................................................22

Composição cuticular de rainhas virgens.....................................................................................23

Composição cuticular de rainhas fisogástricas.............................................................................29

Discussão e Conclusões..................................................................................................................37

Bibliografia.......................................................................................................................................42

Apêndice............................................................................................................................................48

1

Resumo

Os feromônios desempenham um papel chave em muitos aspectos da vida dos

insetos e os membros de uma colônia utilizam uma grande variedade de compostos

químicos durante a sua existência. Os hidrocarbonetos cuticulares são importantes para os

insetos sociais porque possibilitam o reconhecimento de coespecificos, companheiras de

ninho, ou mesmo indivíduos de diferentes castas. O presente estudo teve como objetivos

principais a caracterização das variações do perfil químico de operárias e de rainhas da

abelha sem ferrão Melipona marginata, relacionando‐as com a idade e o comportamento

apresentados pelos indivíduos. Para a identificação dos compostos cuticulares utilizou‐se

cromatografia gasosa associada à espectrometria de massa. A composição de

hidrocarbonetos da cutícula dos indivíduos da espécie consistiu em alcanos, alcenos,

alcadienos e alcanos ramificados, e variou de 21 até 33 átomos de carbono. Esses compostos

variaram quantitativamente e qualitativamente entre e dentro das castas, de acordo com a

idade dos indivíduos (exceto rainha fisogástrica). Os perfis cuticulares de operárias e

rainhas virgens foram caracterizados principalmente por alcanos e alcenos, enquanto o de

rainhas fisogástricas foi caracterizado por alcanos, alcenos, alcadienos e metil alcanos. O

fator que mais influenciou o perfil cuticular das rainhas fisogástricas foi a ausência de

postura. Além disso, observou‐se a existência de variações da composição química cuticular

de acordo com a origem da população, ou seja, colônias provenientes de uma mesma região

tiveram indivíduos com perfil de hidrocarbonetos semelhantes.

2

Abstract

Pheromones play a key role in many aspects of the life of insects. Members of social

insect colonies employ a large variety of chemical signals during their life. Among these,

cuticular hydrocarbons are of primary importance for social insects since they allow the

recognition of conspecifics, nestmates, or even members of different castes. The aims of the

present work were (1) to characterize the variation of the chemical profile among workers,

virgin queens, and physogastric queens of the stingless bee Melipona marginata, and (2) to

investigate the dependence of the chemical profiles on the age and the behaviour of the

studied individuals. The cuticular compounds were identified using gas chromatography

coupled to mass spectrometry (GC‐MS). The cuticular hydrocarbon profile of M. marginata

was composed of alkanes, alkenes, alkadienes and branched alkanes, varying from 21 to 33

carbons atoms. These compounds varied quantitatively and qualitatively within the

investigated castes according to age of the respective individuals (except for the

physogastric queens). The cuticular profiles of workers and virgin queens were

characterized mainly by alkanes and alkenes, whereas the profiles of the physogastric

queens were characterized by alkanes, alkenes, alkadienes and methil alkanes. The factor

that predominantly influenced the cuticular profile of the physogastric queens was the

absence/presence of oviposition. In addition to observed the variations within a colony, the

cuticular chemical profile of M. marginata differed between different populations, that is,

colonies originating from same region had individuals with similar hydrocarbon profiles,

whereas those from different regions had not.

3

1‐INTRODUÇÃO

Aspectos Gerais do grupo Melipona.

Os Meliponini correspondem ao grupo de abelhas sociais que não apresentam

ferrão e encontram‐se amplamente distribuídos pelos trópicos e subtrópicos (Sakagami

1982). Entre esses insetos, a organização social avançada é evidenciada por uma

complexidade de comportamentos que proporcionam às colônias uma unidade social

coerente (e.g. processo de aprovisionamento e oviposição – POP; revisado em Zucchi et al.

1999).

As eussociedades de insetos são constituídas tipicamente por duas castas, sendo a

rainha especializada em realizar a postura de ovos, e as operárias responsáveis pelas tarefas

de manutenção do ninho (Michener 1974). Na maioria das espécies de abelha sem ferrão

ocorre desenvolvimento dos ovários de operárias mesmo na presença da rainha (Sakagami

et al. 1963), e esses ovos frequentemente são utilizados na alimentação da rainha fisogástrica

(Sakagami & Zucchi 1963). Além disso, em algumas espécies de Melipona, ocorre a produção

de machos pelas operárias durante certas fases de desenvolvimento da colônia (revisado

por Velthuis et al 2005).

As diferentes tarefas entre as operárias não estão rigidamente estabelecidas, mas

freqüentemente ocorre uma tendência para a execução de atividades em certas idades (Wille

1983). Simões & Bego (1979) e Mateus et al. (2007) verificaram que as atividades

desempenhadas por operárias de Scaptotrigona postica e Melipona marginata,

respectivamente, modificam‐se de acordo com a idade dos indivíduos, havendo uma

sequência de atividades desempenhadas pelas operárias.

Dentre os Meliponini, as Melipona são caracterizadas pela ausência de células reais,

ou seja, rainhas e operárias emergem de células de mesmo tamanho e forma (Sakagami

1982). Assim, a determinação de castas é realizada através de uma somatória de fatores

genéticos e alimentares (Kerr 1950, Kerr & Nielsen 1966) e a produção de rainhas virgens

pode chegar a 25% das fêmeas produzidas em colônias com boas condições de alimento

(Kerr 1948). Embora essa proporção varie de acordo com a condição colonial, ocorre uma

constante produção de rainhas virgens, fato que assegura a substituição da rainha em casos

de orfandade (Michener 1974, Sakagami 1982, Engels & Imperatriz‐Fonseca 1990).

4

Entretanto, a produção excessiva de rainhas virgens pelas Melipona é o método mais

dispendioso entre as abelhas eussociais (Michener 1974). Segundo Wenseleers & Ratnieks

(2004) a expectativa de vida desses indivíduos é muito baixa, sendo quase todas mortas

pelas operárias, com exceção dos casos de substituição da rainha fisogástrica ou de

produção de enxame (Sakagami 1982). Certos comportamentos podem propiciar a

sobrevida de rainhas virgens de algumas espécies, como andar rapidamente pela colônia e

esconder‐se entre os potes e frestas da caixa, ambos observados em M. marginata por

Kleinert & Imperatriz‐Fonseca (1994).

Aspectos Ecológicos e Comportamentais dos Hidrocarbonetos cuticulares em Insetos Sociais.

A comunicação recíproca de natureza cooperativa é um critério essencial para a

manutenção da integridade das sociedades de insetos (Wilson 1971). Para tanto, são

utilizados mecanismos que envolvem compostos químicos denominados feromônios e

receptores olfativos amplamente distribuídos pelos apêndices, especialmente nas antenas

(Atkins 1980).

Estudos mostram que as respostas comportamentais dos insetos estão intimamente

relacionadas às variações quantitativas e qualitativas dos feromônios no meio em que vivem

(revisado por Howard & Blomquist 2005). No caso dos insetos sociais, grande parte dos

estímulos químicos e conseqüentes respostas comportamentais ocorrem dentro da própria

colônia, entre companheiras de ninho.

Comportamentos que requerem dispersão rápida dos sinais químicos, como os de

alarme, podem envolver feromônios constituídos por moléculas pequenas e que são

altamente voláteis. Entretanto, os insetos sociais desenvolveram vários outros mecanismos

de comunicação nos quais estão envolvidos compostos não voláteis como muitos

hidrocarbonetos (revisado por Howard & Blomquist 2005).

A cutícula dos insetos é revestida por hidrocarbonetos que oferecem uma barreira

de proteção contra a desidratação (Lockey 1988). Durante o processo evolutivo, esses

compostos foram sendo cada vez mais empregados para a comunicação, principalmente,

entre os insetos sociais (Le Conte & Hefetz 2008). Howard & Blomquist (2005) consideram

essa atuação secundaria dos hidrocarbonetos uma das razões da diversidade de compostos

5

cuticulares encontrados entre os grupos e as conseqüentes combinações altamente

específicas.

Os hidrocarbonetos cuticulares atuam como feromônios moduladores e

desencadeadores de comportamentos. Segundo Wilson (1963), feromônios desencadeadores

são aqueles que provocam mudanças imediatas e reversíveis no comportamento de outro

organismo e moduladores são aqueles envolvidos em processos comportamentais a longo

prazo. A ocorrência desses compostos mostra‐se característica entre os grupos de insetos

(espécie ou colônia), podendo variar dentro deste de acordo com a idade, casta ou sexo dos

indivíduos (Blonquist et al. 1998, Monnin & Peters 1999, Sledge et al. 2001)

Estudos recentes mostram que os hidrocarbonetos presentes na cutícula de formigas

Ponerine atuam em processos comportamentais como sinais de fertilidade e dominância (Le

Conte & Hefetz 2008). Esses compostos agiriam como feromônios moduladores do

comportamento, ou seja, sua produção durante a atividade ovariana de rainhas ou operárias

férteis provocaria a inibição do desenvolvimento ovariano de outras operárias (revisado por

Monnin 2006). Testes sobre a influência da presença da rainha no desenvolvimento

ovariano de formigas mostram que a inibição só ocorre quando as operárias estão muito

próximas da rainha, ou seja, por meio de feromônios de contato como, por exemplo, os

hidrocarbonetos cuticulares (Liebig et al. 2000).

Esse efeito modulador também foi observado em Bombus terrestris por Lopez‐

Vaamonde et al. (2007). Os autores demonstraram que feromônios não voláteis inibem tanto

o comportamento de postura de operárias quanto o desenvolvimento de outras rainhas em

colônias da espécie. Entretanto, em muitas espécies de insetos sociais as operárias são

capazes de modificar a razão sexual produzindo sua própria prole de machos (Velthuis et al.

2002, Tóth et al. 2002, Koedam et al. 2005, Ratnieks et al. 2006).

Os hidrocarbonetos agem como feromônios desencadeadores em processos de

reconhecimento de companheiras de ninho e de distinção de indivíduos intrusos (Breed

1983, Singer et al. 1998, Blomquist et al. 1998, Nunes 2008). Além disso, também são

atribuídas a eles funções relacionadas à identificação dos indivíduos dentro da colônia, ou

seja, a qual casta pertence, quais são os indivíduos geneticamente relacionados, qual a sua

função na colônia e outras respostas comportamentais (Breed & Bennett 1987, Jungnickel et

al. 2004).

6

Segundo Breed et al. (1995, 2004), os recém emergidos apresentam um perfil

químico cuticular que será influenciado ao longo do tempo pelo contato destes com material

do ninho onde se encontram. Abdalla et al. (2003) e Nunes et al. (2008) mostram que

operárias de Melipona bicolor e Schwarziana quadripuntacta, respectivamente, apresentam

variações na composição de hidrocarbonetos de acordo com a idade dos indivíduos.

Gamboa et al. (1986) classificam os odores de reconhecimento presentes na

superfície corporal de insetos sociais, de acordo com a sua origem, em “ambientais” e

“hereditários”. Os ambientais seriam aqueles adquiridos pelos indivíduos a partir das

condições ambientais como alimento e material levado para o ninho, e os hereditários

estariam relacionados a fatores genéticos e fatores maternais não genéticos

(extracromossomais). Deste modo, o perfil químico cuticular dos indivíduos de colônias sob

condições idênticas pode convergir sob influência do meio ambiente comum, ou

permanecerem diferenciados quando os odores endógenos (hereditários) prevalecerem

sobre os primeiros. Sabe‐se que os perfis de hidrocarbonetos cuticulares das abelhas

melíferas são, em grande parte, geneticamente determinados, atuando assim como pistas de

reconhecimento entre subfamílias (Arnold et al. 2000).

Os hidrocarbonetos cuticulares também fornecem pistas do status reprodutivo das

rainhas em insetos sociais. Operárias de formigas são capazes de distinguir a produtividade

e a idade das rainhas através de seus perfis de hidrocarbonetos (Hannonen et al. 2002).

Dietemann et al. (2003) mostram que os hidrocarbonetos cuticulares também atuam no

reconhecimento de operárias de formigas com atividade de postura. Sugere‐se ainda que

haja uma correlação entre atividade ovariana e perfil de hidrocarbonetos cuticulares e que

esse perfil seria utilizado por operárias para discriminarem fêmeas férteis de não férteis

(Monnin et al. 1998, Peeters et al. 1999, Liebig et al. 2000, Cuvillier‐Hot et al. 2001, Sledge et al.

2001).

Um dos fatores que influenciam a aceitação da rainha por uma colônia são os

compostos que ela emite para comunicar sua presença (Breed 1981, Breed & Stiller 1992).

Rainhas produzem e emitem numerosos compostos de glândulas e regiões de seus corpos

que as operárias utilizam apara identificá‐la como rainha (Velthuis 1970). Acredita‐se que o

grau de fertilidade possa variar entre as rainhas virgens de Melipona e que isso influenciaria

no processo de escolha daquela acompanhará o enxame (Koedam et al. 1995a). Durante os

ataques de operárias às rainhas virgens dessas abelhas o abdômen parece ser a parte mais

7

suscetível aos ataques (Silva 1972, Bego 1989). Cruz‐Landim (1967) e Mota (1988) mostraram

que o abdômen dessas abelhas concentra um grande número de glândulas tegumentares.

Os conhecimentos sobre as características dos hidrocarbonetos cuticulares em

meliponíneos vêm crescendo nos últimos anos graças às descobertas de novas técnicas de

extração e análise químicas. A cromatografia gasosa associada à espectrometria de massa

(CG‐MS) tem sido amplamente utilizada e, juntamente com o estudo do comportamento,

vem fornecendo subsídios para o entendimento dos aspectos sociobiológicos desses insetos.

OBJETIVOS

O trabalho realizado teve por finalidade:

A) Caracterizar os perfis de hidrocarbonetos cuticulares de operárias de

Melipona marginata em três diferentes idades e verificar como o perfil

químico cuticular varia entre populações de diferentes localidades;

B) Caracterizar os perfis químicos cuticulares de rainhas virgens de diferentes

idades, além de caracterizar o perfil quando estas estão envolvidas em dois

diferentes comportamentos: sofrendo agressão por parte das operárias e

agrupando‐se em um refúgio comum;

C) Avaliar como o perfil químico de rainhas fisogástricas dessa espécie se

apresenta em relação à idade e à atividade de postura.

8

2‐MATERIAL E MÉTODOS

2.1 Espécie e colônias.

A espécie Melipona marginata encontra‐se distribuída por todos os estados das

regiões sudeste e sul, além do estado da Bahia (Silveira et al 2002). Possui nome popular de

manduri, manduri menor, minduri, gurupu do miúdo ou taipeira (Nogueira‐Neto 1970).

Para a caracterização do perfil químico cuticular de operárias e rainhas foram

utilizadas quatro colônias provenientes de Cunha‐SP (colônias 1, 2, 4 e 5) e duas colônias

provenientes de Itanhaém‐SP (colônias 3 e 6), mantidas no Laboratório de Ecologia e

Evolução da FFCLRP‐USP em caixas de madeira com tampa de vidro e um tubo plástico

transparente que possibilitou a conexão da colônia com o exterior do laboratório. As

colônias foram alimentadas quando necessário com solução açucarada a 50% e, nos

períodos de baixa temperatura, foram aquecidas em estufa à 28ºC.

2.2 Extração de hidrocarbonetos cuticulares de operárias.

Foi caracterizado o perfil de hidrocarbonetos de operárias de duas colônias

provenientes de Cunha (Colônias 1 e 2) e uma colônia proveniente de Itanhaém (Colônia 3).

A coleta dos indivíduos ocorreu sob as mesmas condições, durante o mesmo período, para

que não houvesse influência no perfil relacionada às variações ambientais. Além disso, as

colônias utilizadas já se encontravam instaladas no laboratório há mais de três meses,

minimizando a possibilidade de influência de materiais coletados no local de origem.

Para a amostragem de indivíduos com idade intermediária e idade avançada foram

coletadas operárias com postura de ovo trófico e atividade no campo, respectivamente.

Estima‐se, para a espécie, que a idade de operárias ovipositando (ovo trófico) seja de 9 a 10

dias de vida (Mateus et al. 2007). Para a coleta de operárias recém‐emergidas, foram

separados favos de cada colônia e mantidos em incubadora BOD modelo MA 415 à 28ºC.

Durante o estudo, algumas colônias passaram por orfandade, tendo sido observada

neste período a postura por operárias. Na colônia 1 esse comportamento iniciou‐se 7 dias

após a morte da rainha, sendo coletadas 10 operárias no momento seguinte à postura.

A extração dos compostos ocorreu por meio de banhos em solvente apolar hexano

(500μl) por um minuto.

9

A caracterização dos grupos amostrais fará referência à atividade que os indivíduos

desempenhavam no momento da coleta, exceto para operárias recém emergidas. As

operárias com postura de ovos tróficos (idade intermediária) serão caracterizadas como

operárias com atividade no favo de cria e aquelas com postura na ausência da rainha como

operárias poedeiras. As operárias mais velhas serão chamadas de campeiras.

2.3 Extração de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens.

Para a caracterização do perfil cuticular de rainhas virgens foram utilizadas três

colônias de M. marginata. Foram coletadas rainhas virgens recém emergidas (N=10 para

uma colônia) e com 2 dias de idade (N=20 para a colônia 1 e N=15 para as colônias 2 e 3). Os

favos de cria foram previamente retirados e mantidos em incubadora BOD modelo MA 415

à 28ºC e à medida que operárias e machos emergiam eram devolvidos para as colônias de

origem. As rainhas virgens receberam marcação com tinta plástica (cuidadosamente

retirada no momento da extração dos compostos) e mantidas juntamente com o favo até o

terceiro dia de vida quando foram coletadas e congeladas para análise dos compostos

cuticulares.

Além da caracterização do perfil de acordo com a idade caracterizou‐se o perfil de

rainhas virgens envolvidas em dois diferentes comportamentos. Foram coletadas 7 rainhas

virgens agrupadas em um refúgio comum (entre o cerúmen depositado no vidro da caixa

de observação) e outras 10 no momento em que eram agredidas pelas operárias. As rainhas

desse último grupo apresentavam abdômen inflado, característica de rainhas virgens desta

e de outras espécies de Melipona durante a execução (Imperatriz‐Fonseca e Zucchi 1995, van

Veen et al. 1999).

Os compostos cuticulares foram extraídos por meio de banhos em solvente apolar

hexano (500 μl) por 1 minuto.

2.4 Extração de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas fisogástricas.

Todas as amostras do perfil químico de rainhas fisogástricas foram obtidas através

da técnica não‐destrutiva de micro‐extração em fase sólida (SPME), de modo que elas

permanecem ativas no ninho após a coleta das amostras. A extração de hidrocarbonetos

10

ocorreu por meio do contato e leve fricção de fibra de polidimetilsiloxano SUPELCO (30 μm

bounded) por cerca de 10 segundos no abdômen dessas rainhas.

Foram coletadas amostras de rainhas com produtividade considerada com

freqüência normal para essas colônias, além daquelas que, em alguns períodos do ano

permaneceram sem ovipositar. Em determinada fase de desenvolvimento das colônias 5 e 6,

as rainhas não eram vistas sob o favo de cria, sugerindo inclusive que as colônias estivessem

órfãs. Entretanto, eventualmente passou‐se a observá‐las caminhando sob os potes de

alimento e invólucro do favo de cria. Nesse período não houve construção de células pelas

operárias. Foram coletadas amostras da composição de hidrocarbonetos cuticulares dessas

rainhas durante esse período. A rainha da colônia 5 também foi analisada após a retomada

da atividade de postura (54 dias), sendo que a rainha da colônia 6 morreu 35 dias após

reiniciar essa atividade. Uma vez que as 2 rainhas já haviam sido analisadas quando

ovipositavam normalmente, puderam‐se comparar as mudanças no perfil químico durante

as diferentes situações de postura.

Para análise da variação do perfil de hidrocarbonetos cuticulares das rainhas

fisogástricas em relação à idade realizou‐se a amostragem dos compostos cuticulares no 6º,

32º e 65º dia após o início da atividade de postura de uma rainha.

As rainhas das 6 colônias foram analisadas, sendo que para três colônias obtiveram‐

se amostras de rainhas sucessoras (Colônia 1, Colônia 2 e Colônia 5).

As análises realizadas com o método SPME possibilitam, além da manutenção do

indivíduo na colônia, a coleta gradual de amostras. Entretanto, apenas uma pequena fração

da cutícula desse indivíduo é amostrada, diferente do que obtem‐se com técnicas que

utilizam solventes. Deste modo, duas rainhas foram analisadas por meio de banhos em

hexano (500 μl) por 1 minuto a fim de se comparar os resultados obtidos pelas duas

diferentes técnicas, além de utilizar esse perfil para comparar a composição de

hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens e rainhas fisogástricas.

2.5 Análise das amostras.

As amostras diluídas em hexano e as fibras de polidimetilsiloxano foram levadas

para análise no Laboratório de Produtos Naturais da Faculdade de Ciências Farmacêuticas

de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, local onde se encontra instalado um sistema

11

de Cromatografia Gasosa acoplado à Espectrometria de Massas SHIMADZU, modelo

GCMS‐QP2010, equipado com coluna DB‐5MS 30m e hélio como gás carreador à 1 ml/min,

utilizando o método ionização eletrônica (EI).

O protocolo de temperatura usado foi: 150oC‐ 280oC a uma taxa de 3oC/min

(mantido 15 minutos). Análises são feitas em modo splitless.

2.6 Análises do desenvolvimento ovariano de rainhas virgens.

Após a obtenção dos compostos cuticulares, as rainhas virgens foram dissecadas

para a caracterização do desenvolvimento ovariano. Foi utilizada Lupa LEICA modelo DFC

500 acoplada a um microcomputador contendo um programa de captura de imagem IM50

Versão 4.0 (Leica Microsystens Imaging Solutions Ltd). Não foram avaliados os diferentes

graus de desenvolvimento dos ovários, sendo classificado como presente a partir do estágio

inicial de desenvolvimento.

2.7 Análise dos resultados.

Os dados obtidos foram analisados com o auxílio do programa GCMSsolutions for

Windows (Shimadzu Corporation). Os cromatogramas apresentaram vários picos

cromatográficos em diferentes posições devido aos diferentes tempos de retenção (TR) de

cada soluto na coluna cromatográfica. Cada pico cromatográfico, por sua vez, contém todas

as informações obtidas pelo espectrômetro de massa. A quantificação foi realizada com base

nas áreas de pico obtidas pelos cromatogramas (Singer & Espelie 1992).

Após detectar possíveis contaminantes da amostra, como ftalato (composto

proveniente do plástico) as concentrações relativas foram ajustadas. Substâncias presentes

em menos de quatro indivíduos foram representadas como traços nas tabelas de

concentrações relativas.

Utilizou‐se análise estatística multivariada para comparar os grupos experimentais.

Análise dos principais componentes (PCA) foi usada para definição dos principais picos de

compostos a serem comparados. Posteriormente, análise discriminante stepwise foi utilizada

para se contrastar o perfil químico dos grupos experimentais. Substâncias ausentes na maior

parte dos indivíduos de um grupo foram excluídas das analises estatísticas. Os compostos

12

apontados pela análise dos componentes principais como responsáveis por menos de 5% de

contribuição para os dois primeiros fatores dessa análise não foram utilizados na análise

discriminante, sendo as porcentagens dos compostos utilizados reajustadas para 100%. Para

se evitar erros na composição dos dados amostrais (Aitchison 1986), a área de cada pico

apontado pelo cromatograma foi transformado de acordo com a seguinte fórmula:

Z = ln [ Ap / g (Ap) ]

onde, Ap é a área do pico, g (Ap) é a média geométrica do pico em cada grupo de

operárias e Z é a área transformada do pico.

Todas as os testes estatísticos dessa dissertação foram feitos com auxílio do pacote

Statistica for Windows 7.0 (Statsoft, inc).

13

3‐RESULTADOS

3.1 Caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares de operárias em

relação à idade.

Os resultados mostram que as operárias das três colônias analisadas possuem

composição cuticular semelhante quanto à diversidade de hidrocarbonetos. Os

hidrocarbonetos variaram entre o C22 e o C31, sendo os mais representativos os alcanos,

seguidos de alcenos e, em menor freqüência, alcadienos.

Observa‐se que alguns compostos estão presentes somente em uma ou duas faixas

etárias das operárias. As recém emergidas foram caracterizadas pela presença do

heneicosano e ausência dos alcadienos (ZZ‐nonacosadieno e ZZ‐hentriacontadieno). As

operárias do favo, de modo geral, apresentaram a maior variedade de compostos. As

operárias campeiras caracterizam‐se principalmente pela ausência do octacosano.

Tricosano e pentacosano foram os compostos que aumentaram a concentração

relativa durante a idade das operárias nas três colônias analisadas.

Colônia 1

As operárias da colônia 1 apresentaram um total de 23 hidrocarbonetos, sendo a

maioria alcenos e alcanos (tabela 1). Aqueles com maior representatividade durante toda a

fase de vida das operárias foram: tricosano, pentacosano, Z‐heptacoseno (Tempo de

Retenção 33,295), heptacosano e Z‐nonacoseno (TR 38,016).

Foram analisados 4 grupos de operárias desta colônia, entretanto, as operárias com

postura de ovo na ausência da rainha (operárias poedeiras) não foram coletadas sob as

mesmas condições que os outros 3 grupos. Assim, estas não foram utilizadas para efeito de

análise da ocorrência dos compostos na cutícula das operárias ao longo do tempo. O perfil

de hidrocarbonetos dessas operárias apresentou‐se bem diferenciado daquele caracterizado

para operárias ovipositando na presença da rainha, com variação em quase todos os

compostos.

Entre os 3 grupos restantes o Z‐pentacoseno (TR 28,453) aumentou sua

concentração relativa enquanto outros compostos foram perdidos gradativamente com a

idade da operária, como o Z‐heptacoseno (TR 33,295) e Z‐hentriaconteno (TR 42,350).

O Fator 1 da Análise dos Componentes Principais (PCA) descreveu 52,60% da

variação encontrada. A soma dos dois primeiros fatores (Fator 1 + Fator 2) descreveu

14

83,33% e dos três primeiros (Fator 1 + Fator 2 + Fator 3) descreveu 96,13% dessa variação. A

análise discriminante stepwise dos compostos analisados separou significativamente os

grupos de operárias dessa colônia (Modelo Global: Wilk’s Lambda= 0,00016; F21,66= 63,933;

p < 0,001). Os compostos responsáveis pela separação entre os grupos foram: tricosano,

tetracosano, Z‐pentacoseno (TR 28,253), Z‐pentacoseno (TR 28,453), pentacosano, Z‐

heptacoseno (TR 33,295), heptacosano e Z‐nonacoseno (TR 38,016).

Tabela 1: Valores médios e desvio padrão da concentração relativa dos hidrocarbonetos cuticulares de operárias recém emergidas (ORE), com atividade no favo de cria (OF), operária ovipositando na ausência da rainha (OP) e com atividades no campo (OC) de Melipona marginata COLÔNIA 1 (Cunha-SP). Tempo de Retenção

Hidrocarboneto ORE (n=10)

OF (n=10)

OP (n=10)

OC (n=10)

18,200 Heneicosano 1,05 ± 0,333 ‐ ‐ ‐

23,708 Tricosano 17,40 ± 4,41 14,13 ± 6,48 8,46 ± 12,449 23,40 ± 2,56

26,385 Tetracosano 0,40 ± 0,10 0,54 ± 0,16 ‐ 0,88 ± 0,083

28,253 Z‐Pentacoseno ‐ 1,22 ± 0,73 1,14 ± 1,573 1,03 ± 0,23

28,453 Z‐Pentacoseno 1,56 ± 0,59 2,90 ± 0,68 ‐ 5,01 ± 1,04

28,975 Pentacosano 14,09 ± 1,11 25,46 ± 3,86 22,33 ± 8,947 26,73 ± 3,28

31,497 Hexacosano 0,45 ± 0,14 0,47 ± 0,10 2,16 ± 1,376 ‐

33,163 Z‐Heptacoseno 0,71 ± 0,10 ‐ 3,77 ± 1,530 ‐

33,295 Z‐Heptacoseno 29,29 ± 5,28 7,28 ± 2,09 1,82 ± 0,619 6,53 ± 1,33

33,477 Z‐Heptacoseno 0,56 ± 0,55 2,17 ± 1,01 0,46 ± 0,400 2,37 ± 0,47

33,935 Heptacosano 9,16 ± 1,59 11,43 ± 3,08 17,1 ± 7,086 7,90 ± 0,85

36,423 Octacosano 0,55 ± 0,18 0,74 ± 0,54 6,41 ± 3,727 ‐

37,838 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 4,75 ± 2,04 6,06 ± 3,510 ‐

37,909 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 5,70 ± 1,76 4,79 ± 1,889 4,28 ± 0,96

38,016 Z‐Nonacoseno 17,06 ± 1,36 0,72 ± 0,26 8,06 ± 4,276 4,23 ± 0,81

38,192 Z‐Nonacoseno ‐ 0,95 ± 0,38 1,70 ± 1,021 0,66 ± 0,16

38,589 Nonacosano 1,09 ± 0,31 5,00 ± 1,41 5,41 ± 2,522 3,68 ± 1,04

41,977 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,55 ± 0,14 0,61 ± 0,530 0,68 ± 0,19

42,122 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 8,53 ± 2,57 8,58 ± 3,135 6,57 ± 1,40

42,350 Z‐Hentriaconteno 4,56 ± 0,63 1,14 ± 0,34 3,71 ± 2,022 ‐

42,442 Z‐Hentriaconteno ‐ 0,80 ± 0,18 ‐ ‐

42,962 Z‐Hentriaconteno ‐ 2,40 ± 0,69 2,16 ± 1,138 ‐

43,177 Hentriacontano ‐ ‐ 3,40 ± 0,750 1,43 ± 0,34

A classificação da matriz apontou um total de 100% de correta alocação das

operárias dentro do grupo previsto. A tabela 2 e a figura 1 ilustram os resultados da

análise discriminante e canônica, respectivamente, para todas as combinações entre

diferentes idades.

15

Tabela 2: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares de operárias da colônia 1. ORe-operária recém emergida, OF-operária do favo, OC-operária campeira, OP-operária poedeira (na ausência da rainha)

Combinações Distância de Mahalanobis

F 7,23 P

ORe x OF 788,82 378,52 < 0,001 ORe x OC 855,14 430,61 < 0,001 ORe x OP 582,85 226,31 < 0,001 OF x OC 13,92 7,47 < 0,001 OF x OP 178,05 72,62 < 0,001 OC x OP 278,35 118,26 < 0,001

Raiz 1 vs. Raiz 2

-15 -10 -5 0 5 10 15 20 25

Raiz 1

-14

-12

-10

-8

-6

-4

-2

0

2

4

6

8

Rai

z 2

ORe OF OC OP

Figura 1: Gráfico do resultado da análise canônica realizada com os compostos químicos cuticulares de operárias de M. marginata, Colônia 1. ORe- Operária Recém-emergida, OF- Operária do Favo (com postura de ovo trófico), OC- Operária Campeira, OP- Operária poedeira (produzindo machos na ausência da rainha).

Colônia 2

As operárias da colônia 2 apresentaram um total de 25 hidrocarbonetos (tabela 3).

Aqueles com maior representatividade durante toda a fase de vida das operárias foram:

tricosano, pentacosano, heptacosano e Z‐hentriaconteno (TR 42,350).

16

Tabela 3: Valores médios e desvio padrão da concentração relativa dos hidrocarbonetos cuticulares de operárias recém emergidas (ORE), com atividade no favo de cria (OF) e com atividades de campo (OC) de Melipona marginata COLÔNIA 2 (Cunha-SP). Tempo de Retenção

Hidrocarboneto ORE (n=10)

OF (n=10)

OC (n=10)

18,200 Heneicosano 0,97 ± 0,28 ‐ ‐

23,142 Z‐Tricosene ‐ 1,64 ± 0,99 2,88 ± 0,45

23,708 Tricosano 13,33 ± 2,47 13,31 ± 8,99 18,94 ± 1,52

26,385 Tetracosano 0,37 ± 0,06 ‐ 0,95 ± 0,07

28,253 Z‐Pentacoseno 1,31 ± 0,33 0,81 ± 0,28 1,70 ± 0,33

28,453 Z‐Pentacoseno 1,19 ± 0,26 4,52 ± 2,07 7,04 ± 0,51

28,975 Pentacosano 14,40 ± 1,49 20,51 ± 6,70 25,87 ± 1,72

31,497 Hexacosano 0,37 ± 0,06 0,39 ± 0,08 0,34 ± 0,06

33,163 Z‐Heptacoseno 0,68 ± 0,09 0,89 ± 0,80 1,02 ± 0,54

33,295 Z‐Heptacoseno 29,17 ± 2,13 0,75 ± 0,55 0,79 ± 0,18

33,477 Z‐Heptacoseno 0,69 ± 0,09 3,28 ± 0,71 3,83 ± 0,44

33,935 Heptacosano 8,38 ± 1,55 7,65 ± 3,52 5,47 ± 0,67

36,423 Octacosano 0,63 ± 0,17 0,61 ± 0,44 ‐

37,838 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,85 ± 0,64 0,75 ± 0,47

37,909 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,88 ± 0,56 0,96 ± 0,31

38,016 Z‐Nonacoseno 16,93 ± 1,28 0,70 ± 0,71 0,61 ± 0,56

38,192 Z‐Nonacoseno 0,64 ± 0,08 9,40 ± 3,07 13,30 ± 1,99

38,589 Nonacosano 1,61 ± 0,35 2,62 ± 1,48 1,93 ± 0,60

41,977 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 1,08 ± 0,46 1,00 ± 0,19


42,350 Z‐Hentriaconteno 8,16 ± 0,93 3,12 ± 2,00 2,59 ± 0,70

42,442 Z‐Hentriaconteno ‐ 1,61 ± 1,21 ‐

42,647 Z‐Hentriaconteno ‐ 0,88 ± 0,46 0,62 ± 0,28

42,962 Z‐Hentriaconteno ‐ 3,17 ± 1,39 4,37 ± 0,41

43,177 Hentriacontano 0,57 ± 0,15 2,26 ± 0,89 1,64 ± 0,37

Assim como entre as operárias da colônia 1, os compostos Z‐pentacoseno (TR

33,477) e Z‐nonacoseno (TR 38,192) aumentaram as concentrações relativas enquanto outros

compostos foram sendo perdidos gradativamente com a idade: Z‐heptacoseno (TR 33,295),

heptacosano, Z‐nonacoseno (TR 38,016) e Z‐hentriaconteno (TR 42,350). O grupo das

operárias recém emergidas foi aquele que apresentou menor variedade de hidrocarbonetos

em relação àquelas com idade mais avançada.


variação encontrada. A soma dos dois primeiros fatores (Fator 1 + Fator 2) descreveu 86,80%

17

e dos três primeiros (Fator 1 + Fator 2 + Fator 3) descreveu 97,90% dessa variação. A análise

discriminante stepwise dos compostos analisados separou significativamente os grupos de

operárias dessa colônia (Modelo Global: Wilk’s Lambda= 0,00052; F10,42= 180,56; p < 0,001).

Os compostos responsáveis pela separação entre os grupos foram: tricosano, pentacoseno

(TR 28,453), pentacosano, Z‐heptacoseno (TR 33,295), heptacosano, Z‐nonacoseno (TR 38,016

e TR 38,192), nonacosano e Z‐hentriaconteno (TR 42,962).

A figura 2 ilustra os resultados da análise canônica entre os grupos. A tabela 4

mostra o resultado da análise discriminante para todas as combinações possíveis entre os

grupos analisados. A classificação da matriz apontou um total de 100% de correta alocação

dos indivíduos.

Raiz 1 vs. Raiz 2

-15 -10 -5 0 5 10 15 20

Raiz 1

-6

-4

-2

0

2

4

6

8

10

Rai

z 2

ORe OFOC

Figura 2: Gráfico do resultado da análise canônica realizada com os compostos químicos cuticulares de operárias de M. marginata, Colônia 2. ORe- Operária Recém-emergida, OF- Operária com atividade no favo de cria, OC- Operária Campeira.

18

Tabela 4: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares de operárias da colônia 2. ORe-operária recém emergida, OF-operária com atividade no favo de cria OC-operária campeira


F 5,21 P

ORe x OF 544,68 406,69 < 0,001 ORe x OC 601,84 505,55 < 0,001 OF x OC 71,49 53,37 < 0,001

Colônia 3

As operárias dessa colônia apresentaram menor variedade de hidrocarbonetos em

relação às colônias 1 e 2, totalizando 19 compostos (tabela 5). Aqueles com maior

representatividade durante toda a fase de vida das operarias foram: tricosano, pentacosano,

Z‐heptacoseno (TR 33,295), heptacosano e Z‐nonacoseno (TR 38,192).

Os compostos que foram sendo perdidos gradativamente com a idade da operária

foram: Z‐heptacoseno (TR 33,295), octacosano, Z‐nonacoseno (TR 38,192) e Z‐hentriaconteno

(TR 42,442).






Os compostos responsáveis pela separação entre os grupos foram: tricosano,

pentacoseno, pentacosano, Z‐heptacoseno (TR 33,500), Z‐nonacoseno (TR 38,069).

A classificação da matriz apontou que todos os grupos são significativamente

separados entre si, sendo 100% de correta alocação dos indivíduos.

A tabela 6 mostra o resultado da análise discriminante para todas as combinações

entre os grupos analisados. A Figura 3 mostra o resultado da analise canônica entre as

operárias da colônia 3.

19

Tabela 5: Valores médios e desvio padrão da concentração relativa dos hidrocarbonetos cuticulares de operárias recém emergidas (ORE), com atividade no favo de cria (OF) e com atividades de campo (OC) de Melipona marginata COLÔNIA 3 (Itanhaém-SP). Tempo de

Retenção

Hidrocarboneto ORE

(n=10)

OF

(n=10)

OC

(n=10)

18,200 Heneicosano 0,83 ± 0,41 ‐ ‐

23,708 Tricosano 12,20 ± 2,20 7,26 ± 1,89 13,45 ± 2,33

26,385 Tetracosano 0,34 ± 0,05 0,48 ± 0,11 0,87 ± 0,06

28,253 Z‐Pentacoseno 1,09 ± 0,42 2,10 ± 0,62 1,94 ± 0,29

28,975 Pentacosano 12,22 ± 1,46 17,38 ± 2,53 27,88 ± 1,26

31,497 Hexacosano 0,47 ± 0,12 0,55 ± 0,10 0,85 ± 0,12

33,163 Z‐Heptacoseno 0,33 ± 0,11 1,89 ± 0,28 1,17 ± 0,27

33,295 Z‐Heptacoseno 32,56 ± 3,74 12,06 ± 1,78 10,37 ± 1,30

33,477 Z‐Heptacoseno ‐ ‐ 0,23 ± 0,03

33,935 Heptacosano 11,74 ± 4,26 10,41 ± 1,38 15,46 ± 2,21

36,423 Octacosano 0,78 ± 0,46 0,44 ± 0,09 ‐

38,016 Z‐Nonacoseno 0,52 ± 0,12 9,08 ± 2,25 4,59 ± 0,91

38,192 Z‐Nonacoseno 19,53 ± 2,13 8,44 ± 2,18 5,50 ± 0,57

38,589 Nonacosano 1,73 ± 1,01 1,73 ± 0,34 2,56 ± 0,60





43,177 Hentriacontano 0,42 ± 0,215 0,82 ± 0,326 0,39 ± 0,124

Tabela 6: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares de operárias da colônia 3. ORe-operária recém emergida OF-operária com atividade no favo de cria OC-operária campeira


F 5,21 P


20

Raiz 1 vs. Raiz 2

-15 -10 -5 0 5 10 15 20

Raiz 1

-5

-4

-3

-2

-1

0

1

2

3

4

5

Rai

z 2

ORe OF OC

Figura 3: Gráfico do resultado da análise canônica realizada com os compostos químicos cuticulares de operárias de M. marginata, Colônia 3. ORe- Operária Recém-emergida, OF- Operária com atividade no favo de cria, OC- Operária Campeira. Caracterização geral das operárias em relação à atividade desempenhada no

momento da coleta.

A partir dos dados obtidos para cada colônia individualmente realizou‐se a análise

estatística para verificar a semelhança entre os indivíduos, independente de sua colônia de

origem. Os resultados mostram que as operárias estão separadas significativamente em

grupos de acordo com a idade (e conseqüente atividade). A análise dos componentes

principais (PCA) descreveu 48,09% (Fator 1), 71,30% (Fator 1 + Fator 2) e 83,20% (Fator 1 +

Fator 2 + Fator 3).

A análise discriminante stepwise dos compostos separou os grupos de operárias

recém emergidas, com atividade no favo de cria e coma atividade no campo (Modelo

Global: Wilk’s Lambda= 0,00361; F14,154= 171,95; p < 0,001), sendo os compostos responsáveis

pela separação: tricosano, pentacoseno (TR 28,253), pentacosano, Z‐heptacoseno (TR

33,477), Z‐nonacoseno (TR 38,016) e o hentriaconteno (TR 42,350).

21

As análises estatísticas mostram que, mesmo pertencendo a três diferentes colônias,

as operárias apresentam‐se caracterizadas pela atividade que desempenham, sendo 100%;

95,60% e 90% de correta alocação para recém emergidas, operárias com atividade no favo e

campeiras, respectivamente. O valor esperado para uma distribuição ao acaso é de 33,33%.

A tabela 7 e a figura 4 ilustram os resultados das análises discriminante e canônica

obtidos, respectivamente.

Raiz 1 vs. Raiz 2

-12 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8

Raiz 1

-5

-4

-3

-2

-1

0

1

2

3

4

5

6

Rai

z 2

ORe OF OC

Figura 4: Resultado da análise canônica realizada com os compostos químicos cuticulares de operárias de três colônias de M. marginata. ORe- Operária Recém-emergida, OF- Operária com atividade no favo de cria, OC- Operária Campeira.

22

Tabela 7: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares das operárias de três colônias de M. marginata. ORe-operária recém emergida OF- operaria com atividade no favo de cria OC- operária do campo


F 7,77 P


3.2 Influência da origem da população sobre o perfil de hidrocarbonetos

cuticulares de operárias.

Todos os grupos amostrais de operárias foram comparados entre si para a

verificação da influência da origem da população sobre o perfil de hidrocarbonetos

cuticulares. Os resultados mostram que os perfis das operárias das colônias 1 e 2

provenientes de Cunha‐SP são mais próximos entre si do que em relação à colônia 3,

originaria de Itanhaém‐SP (tabela 8), sendo bem evidente entre as operárias recém

emergidas e do campo. A tabela 9 mostra a classificação da matriz e a figura 5 ilustra o

resultado da análise canônica. A análise dos componentes principais (PCA) descreveu

53,44% (Fator 1), 72,82% (Fator 1 + Fator 2) e 84,98% (Fator 1 + Fator 2 + Fator 3).

Tabela 8 :Distâncias de Mahalanobis entre as colônias 1, 2 e 3. ORe-operária recém emergida, OF-operaria com atividadede no favo de cria, OC-operária campeira

Grupos Distâncias de Mahalanobis

F 8,70 p

ORe1 x ORe 2 16,814 9,55 < 0,001 ORe 1 x ORe 3 101,135 54,43 < 0,001 ORe 2 x ORe 3 130,164 70,06 < 0,001 OF 1 x OF 2 187,863 96,06 < 0,001 OF 1 x OF 3 194,080 99,24 < 0,001 OF 2 x OF 3 177,638 90,83 < 0,001 OC 1 x OC 2 20,516 11,65 < 0,001 OC 1 x OC 3 210,622 119,67 < 0,001 OC 2 x OC 3 191,575 108,85 < 0,001

Tabela 9: Classificação da matriz das operárias de acordo com atividade e colônia de origem. Valor esperado para distribuição ao acaso=11,12%. Grupo Amostral ORe

col 1 ORe col 2

ORe col 3

OF col 1

OF col 2

OF col 3

OC col 1

OC col 2

OC col 3

Porcentagem de correta alocação

100% 100% 100% 88,9% 100% 87,50 100% 100% 100%

23

Scatterplot (Spreadsheet10 10v*86c)

Var2

Var3

ORe col 1OF col 1OC col 1ORe col 2OF col 2OC col 2ORe col 3OF col 3OC col 3-14 -12 -10 -8 -6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 14 16

-8

-6

-4

-2

0

2

4

6

8

10

Figura 5: Gráfico do resultado da análise canônica entre operárias das 3 colônias de M.marginata.

ORe-recém emergida, OF-operária do favo, OC-operária campeira, Col- colônia.

3.2. Composição cuticular de rainhas virgens

A análise dos compostos cuticulares de rainhas virgens mostrou que, assim como

ocorre em operárias, existe uma modificação no perfil de hidrocarbonetos em relação à

idade dos indivíduos. Os hidrocarbonetos encontrados apresentaram de 23 a 33 átomos de

carbonos e cada grupo de rainha foi caracterizado por apresentar formas diferentes destes

compostos (tabela 10).

As recém emergidas foram caracterizadas pela baixa presença de alcadienos

(somente traços) e pela pouca diversidade dos alcenos, sendo os alcanos: tricosano,

pentacosano, heptacosano, nonacosano e hentriacontano, e três alcenos Z‐heptacoseno (TR

32.962), Z‐nonacoseno (TR 37.532) e Z‐hentriaconteno (TR 41.840) os compostos com maior

concentração relativa.

24

As rainhas virgens com 2 dias de idade apresentaram maior diversidade de

compostos em relação àquela encontrada em recém emergidas. Estão presentes na cutícula

desses indivíduos principalmente alcanos seguidos por alcenos, sendo que não foram

encontrados hidrocarbonetos metilados e somente um alcadieno, este último em

concentrações muito baixas em duas das três colônias. Os hidrocarbonetos com maior

representatividade nesses grupos foram: Tricosano, Pentacosano, Heptacosano,

Nonacosano, Z‐Heptacoseno (TR 32.962), Z‐Nonacoseno (TR 37.532) e Z‐Hentriaconteno

(TR 41.840).

A composição de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens coletadas em um

refúgio comum mostra que estas apresentam perfis semelhantes aquele encontrado em

rainhas com dois dias de vida, exceto pela alta concentração de Z‐nonacoseno (TR 32.761) e

Z‐heptacoseno (TR 33.159).

As rainhas coletadas no momento em que eram agredidas pelas operárias

apresentaram maior diversidade de hidrocarbonetos em relação àquelas recém emergidas e

com 2 dias de vida. Além dos alcanos e alcenos, foram encontrados alcanos metilados e

alcadienos, além de uma maior variedade de alcenos. Os compostos mais representativos

foram os mesmos encontrados nas recém emergidas e com dois dias, além do Z‐

heptacoseno (TR 32.827), Z‐nonacoseno (TR 37.437 e TR 37.470), Z‐hentriaconteno (TR

42.010) e Z‐hentriaconteno (TR 42.020). Esse grupo foi bem caracterizado pela presença de

alcenos e alcadienos de cadeia longa (C29, C31 e C33) e por alcanos metilados (C27 e C29).

As análises estatísticas revelaram que os grupos de rainhas virgens com 2 dias estão

significativamente separados por colônias, sendo 95%, 61,54% e 100% de correta alocação

dos indivíduos nas colônias 1, 2 e 3, respectivamente. O esperado em uma distribuição ao

acaso para três grupos é de 33,3%. Os compostos responsáveis por essa separação foram:

tricosano, pentacosano, Z‐heptacoseno (TR 32.962), heptacosano, nonacosano e Z‐

hentriacontene (TR 41.840).






25

Tabela 10: Valores médios e desvio padrão da concentração relativa dos hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens de Melipona marginata. Re-recém emergida.

TR Hidrocarboneto Re Col 1 (N=10)

2 dias Col 1 (N=20)

2 dias Col 2 (N=15)

2 dias Col 3 (N=15)

Refugiadas Col 2 (N=7)

Agredidas Col 1 (N=14)

18.237 Heneicosano 0,63 ± 0,294 0,72 ± 0,368 1,37 ± 0,228 0,56 ± 0,191 0,61 ± 0,466 ‐

22.633 Z‐Tricoseno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,18 ± 0,099

22.834 Z‐Tricoseno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,17 ± 0,183

23.426 Tricosano 8,93 ± 2,774 6,96 ± 3,40 12,53 ± 8,44 11,1 ± 2,506 6,37 ± 3,713 3,96 ± 2,267

26.100 Tetracosano ‐ 0,36 ± 0,223 0,10 ± 0,193 0,31 ± 0,078 ‐ 0,17 ± 0,067

27.811 Z‐Pentacoseno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,27 ± 0,182

27.943 Z‐Pentacoseno 0,87 ± 0,402 0,47 ± 0,226 1,60 ± 2,358 1,00 ± 0,425 0,72 ± 0,53 0,61 ± 0,323

28.150 Z‐Pentacoseno 1,47 ± 0,426 1,06 ± 0,391 ‐ 0,83 ± 0,486 1,17 ± 0,578 0,78 ± 0,926

28.693 Pentacosano 10,9 ± 2,247 8,94 ± 2,246 12,5 ± 2,20 13,36 ± 2,17 9,74 ± 2,74 10,7 ± 4,504

29.266 ? ‐ ‐ ‐ 0,31 ± 0,195 ‐ 0,10 ± 0,031

30.812 Hexacosano 0,56 ± 0,277 0,42 ± 0,166 0,35 ± 0,101 0,27 ± 0,086 1,39 ± 0,81 ‐

31.174 ? ‐ ‐ 0,43 ± 0,107 0,38 ± 0,212 ‐ 0,36 ± 0,198

32.417 ZZ‐Heptacosadieno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,46 ± 0,08 0,48 ± 0,115

32.587 ZZ‐Heptacosadieno ‐ traços ‐ ‐ ‐ 0,24 ± 0,2

32.827 Z‐Heptacoseno ‐ 1,13 ± 2,365 0,58 ± 0,258 0,49 ± 0,141 ‐ 5,02 ± 3,691

32.900 Z‐Heptacoseno ‐ ‐ ‐ 0,66 ± 0,318 ‐ ‐

32.962 Z‐Heptacoseno 29,25 ± 0,22 23,4 ± 8,184 33,04 ± 9,22 35,61± 6,01 18,86 ± 16,1 11,1 ± 7,379

33.159 Z‐Heptacoseno 1,10 ± 0,824 1,11 ± 0,432 0,59 ± 0,244 0,47 ± 0,200 10,58 ± 12,5 0,92 ± 1,079

33.636 Heptacosano 10,76 ± 3,44 13,11 ± 5,84 11,26 ± 7,02 10,53 ± 4,28 13,4 ± 5,75 16,47 ± 3,96

34.364 Metil Heptacosano ‐ 1,37 ± 1,105 ‐ ‐ ‐ 0,24 ± 0,199

34.756 Metil Heptacosano ‐ traços ‐ ‐ ‐ 0,19 ± 0,129

35.674 Octacosano 0,63 ± 0,149 1,03 ± 0,792 0,53 ± 0,192 0,50 ± 0,215 1,51 ± 0,826 0,25 ± 0,141

36.875 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,61 ± 0,366 ‐ ‐ ‐ 0,77 ± 0,53

37.035 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,57 ± 0,301 ‐ ‐ traços 0,55 ± 0,215

37.184 ZZ‐Nonacosadieno ‐ traços 0,34 ± 0,091 ‐ traços 0,51 ± 0,342

37.437 Z‐Nonacoseno 0,93 ± 0,409 traços traços 0,77 ± 0,114 traços 3,49 ± 2,22

37.470 Z‐Nonacoseno ‐ traços 0,48 ± 0,125 0,78 ± 0,205 traços 5,81 ± 3,694

37.532 Z‐Nonacoseno 19,2 ± 2,27 16,63 ± 4,24 15,6 ± 3,491 16,45 ± 2,61 15,5 ± 7,525 10,32 ± 7,67

37.761 Z‐Nonacoseno 1,06 ± 0,423 1,59 ± 0,952 0,95 ± 0,795 ‐ 9,22 ± 7,56 2,34 ± 2,38

37.859 Z‐Nonacoseno ‐ traços 1,06 ± 0,459 ‐ 1,43 ± 0,08 2,04 ± 2,23

38.251 Nonacosano 4,93 ± 3,613 6,25 ± 3,824 4,81 ± 4,503 1,66 ± 1,307 6,94 ± 4,67 7,89 ± 9,027

38.901 Metil Nonacosano ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,30 ± 0,197

41.275 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 4,395 ± 5,36 ‐ ‐ traços 0,69 ± 0,437

41.499 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ traços ‐ ‐ ‐ 1,10 ± 0,609

41.508 ZZ‐Hentriacontadieno traços traços traços ‐ ‐ 0,61 ± 0,396

41.570 ZZ‐Hentriacontadieno traços traços 1,09 ± 0,306 0,91 ± 1,316 ‐ 0,41 ± 0,493

41.840 Z‐Hentriaconteno 8,25 ± 1,355 8,47 ± 3,064 5,88±1,815 4,42 ± 1,318 traços 6,94 ± 3,913

26

TR Hidrocarboneto Re Col 1 (N=10)

2 dias Col 1 (N=20)

2 dias Col 2 (N=15)

2 dias Col 3 (N=15)

Refugiadas Col 2 (N=7)

Agredidas Col 1 (N=14)

42.010 Z‐Hentriaconteno traços 2,15 ± 2,048 0,19 ± 0,272 ‐ traços 3,44 ± 2,05

42.020 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ 3,61 ± 5,15 4,49 ± 2,047

42.166 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ 7,51 ± 1,89 1,07 ± 0,445

42.256 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ traços 1,11 ± 0,974

42.592 Hentriacontano 4,61 ± 1,875 2,95 ± 2,586 3,62±1,539 0,72 ± 0,720 4,17 ± 1,97 1,76 ± 1,813

43.568 ? ‐ 1,36 ± 1,275 ‐ ‐ ‐ 1,43 ± 4,082

43.935 ? ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,26 ± 0,295

45.714 ZZ‐Tritriacontadieno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,4 ± 0,312

45.858 ZZ‐Tritriacontadieno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,26 ± 0,183

46.342 Z‐Tritriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 1,47 ± 1,47

46.601 ? ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,43 ± 0,317

47.317 ? ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,31 ± 0,18

A figura 5 e a tabela 11 ilustram os resultados das análises discriminante e

canônica realizada entre rainhas virgens com 2 dias de idade.

Raiz 1 vs. Raiz 2

-10 -5 0 5 10 15

Raiz 1

-10

-8

-6

-4

-2

0

2

4

Rai

z 2

col 1 col 2 col 3

Figura 5: Resultado da análise canônica entre rainhas virgens com dois dias de idade, de 3 colônias diferentes, a partir dos hidrocarbonetos presentes na cutícula. Colônia 1 (N=20) e 2 (N=15), proveniente de Cunha-SP; Colônia 3 (N=15), proveniente de Itanhaém- SP.

27

Tabela 11: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares de rainhas virgens com dois dias de idade de 3 colônias.


F 5,29 P

Col 1 x Col 2 3,69754 4,780 < 0,001 Col 1 x Col 3 67,07308 46,663 < 0,001 Col 2 x Col 3 68,99964 42,802 < 0,001

Ainda, a análise discriminante stepwise dos compostos analisados separou

significativamente as rainhas virgens de uma mesma colônia de acordo com os 3 grupos

amostrais formados (Modelo Global: Wilk’s Lambda= 0,07779; F14,50= 9,2339; p < 0,001). Os

testes apontam valores de 100%, 92,31% e 88,89% de correta alocação dos indivíduos nos

grupos de rainhas virgens recém emergidas, com dois dias e agredidas, respectivamente.

Os compostos responsáveis por essa separação foram: tricosano, Z‐heptacoseno (TR

32.962), heptacoseno (TR 33.159), hentriacontano.


variação encontrada. A soma dos dois primeiros fatores (Fator 1 + Fator 2) descreveu

54,51% e dos três primeiros (Fator 1 + Fator 2 + Fator 3) descreveu 70,52% dessa variação. A

tabela 12 e a figura 6 ilustram os resultados da análise canônica para todas as combinações

entre diferentes idades das rainhas.

Tabela 12: Resultado da análise discriminante aplicada para os compostos químicos cuticulares de rainhas de diferentes idades.


F 7,25 P

RV re x RV 2 dias 60,86749 21,03715 < 0,001 RV re x RV agred 22,07219 8,32215 < 0,001

RV 2 dias x RV agred 14,53920 12,06017 < 0,001

Apesar das semelhanças entre a presença de compostos e das altas freqüências de

correta alocação encontradas para os grupos de rainhas virgens foram encontrados perfis

cuticulares com concentrações relativas muito diversas. Deste modo, o perfil individual das

rainhas virgens foi descrito nas tabelas 18, 19 e 20 (Apêndice).

28

Raiz 1 vs. Raiz 2

-6 -4 -2 0 2 4

Raiz 1

-2,5

-2,0

-1,5

-1,0

-0,5

0,0

0,5

1,0

1,5

2,0

2,5

3,0

3,5

4,0

Rai

z 2

RV recém emergidas RV agredidas RV com 2 dias

Figura 6: Resultado da análise canônica de 3 grupos de rainhas virgens de uma colônia de M. marginata (recém emergidas N=10, com dois dias de idade N=20 e agredidas N=14), a partir dos hidrocarbonetos presentes na cutícula.

Caracterização do padrão de desenvolvimento ovariano das rainhas virgens

quimicamente analisadas.

O resultado da caracterização do desenvolvimento ovariano das rainhas virgens

mostra não haver correlação entre a atratividade que resulta em comportamento agressivo

por parte das operárias. No grupo onde se observou essa atratividade a porcentagem de

indivíduos com desenvolvimento ovariano presente foi menor que aquele encontrado

naquelas com 2 dias (colônia 2), entretanto, não foi observado nenhum comportamento

agressivo por parte das operárias no último grupo. A tabela 13 mostra porcentagens de

rainhas virgens com ovário desenvolvido.

29

Tabela 13: Resultado da caracterização do padrão de desenvolvimento ovariano das rainhas virgens. Desenvolvimento

do ovário Recém

Emergidas 2 dias Col 1

2 dias Col 2

2 dias Col 3

Agrupadas em refugio

Agredidas

Ausente 10 20 2 14 7 11 Presente ‐ ‐ 13 ‐ ‐ 3 Total 10 20 15 14 7 14

3.3 Composição cuticular de rainhas fisogástricas.

Amostras em fibra de polidimetilsiloxano.

O resultado das análises da cutícula de rainhas fisogástricas revelou a presença de

uma grande variedade de hidrocarbonetos em relação ao que foi observado em rainhas

virgens (exceto rainhas virgens agredidas) e operárias da espécie. Estão presentes nesse

grupo compostos contendo de 25 até 33 carbonos, sob a forma de alcanos, alcenos,

alcadienos e alcanos ramificados (metil e dimetil alcanos).

Uma rainha fisogástrica foi analisada em três diferentes idades, sendo produzidos

três cromatogramas apresentados na figura 7 (Apêndice). Os picos foram identificados e

estão relacionados na tabela 13. Os perfis obtidos foram semelhantes entre as três idades

analisadas, exceto pela presença de alguns compostos na primeira análise, realizada no 6º

dia após o inicio da atividade de postura: tricosano, pentacoseno, octacoseno, octacosano, o

composto não identificado com tempo de retenção igual a 37,017 e o 9‐metil nonacoseno.

Todos esses compostos não foram encontrados nas rainhas fisogástricas com idades

desconhecidas analisadas e, quando presentes apresentaram baixas concentrações relativas

(tabela 14). O tricosano e o pentacoseno puderam ser observados no grupo de rainhas

virgens e em todos os grupos de operárias, e sua perda provavelmente não está relacionada

com a idade, mas com a fisogastria.

As nove rainhas com postura analisadas apresentaram concentrações relativas

variáveis para a grande maioria dos compostos, principalmente aqueles com as maiores

concentrações. As diferenças existentes entre as colônias referentes à origem da população,

como pôde ser observado para operárias e rainhas virgens, não favoreceram a análise

estatística das rainhas fisogástricas. Deste modo, os dados obtidos individualmente estão

expostos na tabela 15. Os resultados mostram que existe grande semelhança entre as rainhas

30

sucessoras de uma mesma colônia (colônias 1, 2 e 5), principalmente, quanto à ausência de

compostos.

Tabela 14: Concentrações dos hidrocarbonetos encontrados no abdômen de uma rainha fisogástrica após 6, 32 e 65 do início da postura. Dp-Desvio padrão Tempo de Retenção Hidrocarboneto 6 dias 32 dias 65 dias

1 23,665 Tricosano 2,80 ‐ -

2 28,212 Z‐Pentacoseno 0,62 0,20 -

3 29,013 Pentacosano 4,60 4,25 7,04 4 29,842 11,13‐Dimetil pentacosano 1,03 1,18 1,25 5 30,242 5‐Metil pentacosano 1,26 1,58 1,55 6 31,123 ? 1,27 1,37 1,05 7 33,309 Z‐Heptacoseno 1,06 1,36 1,66 8 33,961 Heptacosano 4,53 4,34 8,68 9 34,716 11‐Metil heptacosano

13‐Metil heptacosano 2,30 3,16 3,22

10 34,792 9‐Metil heptacosano 1,12 1,29 1,41 11 35,110 5‐Metil‐heptacosano 0,56 0,72 0,56 12 35,855 3,13‐Dimetil heptacosano

3,11‐Dimetil heptacosano 3,9‐ Dimetil heptacosano 3,7‐Dimetil heptacosano 5,13‐Dimetil heptacosano

4,33 4,82 4,33

13 36,041 Z‐Octacoseno 0,13 0,16 -

14 36,418 Octacosano 0,39 0,22 -

15 37,017 ? 0,15 0,23 -

16 37,243 ZZ‐Nonacosadieno 0,33 0,42 0,35 17 37,363 ZZ‐Nonacosadieno 1,89 2,32 2,29 18 37,529 ZZ‐Nonacosadieno 5,80 7,14 7,61 19 37,808 Z‐Nonacoseno 1,15 1,42 1,48 20 38,033 Z‐Nonacoseno 11,25 12,35 11,74 21 38,593 Nonacosano 0,59 0,46 0,94 22 39,263 11‐Metil nonacosano

13‐Metil nonacosano 15‐Metil nonacosano

6,34 6,78 6,62

23 39,477 9‐Metil nonacosano 0,18 0,17 ‐ 24 39,811 9,13‐Dimetil nonacosano

11,15‐Dimetil nonacosano 13,17‐Dimetil nonacosano

1,08 0,85 0,54

25 40,269 ? 0,32 0,36 ‐ 26 41,430 3‐Metil nonacosano 0,67 0,56 0,33 27 41,744 ZZ‐Hentriacontadieno 5,22 5,60 5,17 28 41,863 ZZ‐Hentriacontadieno 8,33 8,48 8,26 29 42,012 ZZ‐Hentriacontadieno 2,65 2,68 2,20 30 42,215 Z‐Hentriaconteno 5,89 5,66 5,00 31 42,457 Z‐Hentriaconteno 11,61 9,90 9,19 32 43,542 13‐Metil‐hentriacontano

15‐Metil‐hentriacontano 9,25 8,78 7,54

33 44,068 13,17‐Dimetil hentriacontano 1,01 0,93 ‐

31

Os compostos com concentrações relativas mais representativas encontrados em

rainhas com postura foram: pentacosano, heptacosano, ZZ‐nonacosadieno ‐ TR 37,603

(exceto Rainha 4), Z‐nonacoseno ‐ TR 38,089 (exceto Rainha 1), as três diferentes formas do

ZZ‐hentriacontadieno, as três formas do Z‐hentriaconteno, e a somatória dos compostos

dimetil‐heptacosano, metil‐nonacosano e metil‐hentriacontano, cujas concentrações

encontradas apresentaram um pico cromatográfico único.

Duas das rainhas puderam ser analisadas em condições de ausência de postura,

fato observado simultaneamente em quase todas as colônias de M. marginata do laboratório.

As rainhas diminuíram gradativamente a freqüência de oviposição, e células construídas e

aprovisionadas eram desfeitas pelas operárias até o momento de ausência total de postura.

As rainhas eram alimentadas normalmente, entretanto deixaram de permanecer próximas à

região do favo e passaram a caminhar por toda a colônia, inclusive sob potes de alimento.

Todas as rainhas retomaram a atividade de postura após períodos que variaram de 26 a 59

dias. O perfil químico da rainha da colônia 5 pôde ser refeito após o reinício da postura. A

colônia 6 ficou órfã após 68 dias do reinício, não sendo possível a análise dessa rainha.

As concentrações apresentadas por essas rainhas antes e durante esse período foram

significativas, segundo teste de análise de variância entre os compostos, sendo p<0,05 e

p<0,001 para as rainhas das colônias 5 e 6, respectivamente. Os cromatogramas da rainha da

colônia 5 foram reproduzidos na figura 8 (Apêndice).

Os compostos que aumentaram suas concentrações relativas na ausência da postura

foram: nonacosadieno (TR 37,603) e Z‐hentriaconteno (TR 42,525). Aqueles que diminuíram

foram: heptacosano, os dimetil‐heptacosano (tempo de retenção único), ZZ‐nonacosadieno

(TR 37,411), ZZ‐hentriacontadieno (TR 41,838) e Z‐hentriaconteno (tempo de retenção

42,291). A maioria dos compostos manteve a concentração relativa e alguns compostos se

comportaram de maneira diferenciada em cada rainha de acordo com sua condição de

postura.

32

Tabela 15: Concentração relativa individual (%) dos hidrocarbonetos cuticulares encontrados no abdômen de rainhas fisogástricas de 6 colônias de Melipona marginata com atividade normal de postura. Col- colônia, RF- rainha fisogástrica RF* referem-se às rainhas sucessoras das colônias 1, 2 e 5. Dp- desvio padrão TR Hidrocarboneto RF

Col 1 RF* Col 1

RF Col 2

RF* Col 2

RF Col 3

RF Col 4

RF Col 5

RF* Col 5

RF Col 6

Média e d.p.

29,066 Pentacosano 3,71 6,45 9,31 5,18 3,95 7,51 6,89 7,04 4,66 5,96 ± 1,931 29,875 11,13 Dimetil pentacosano ‐ 0,95 1,78 1,10 1,00 0,46 1,55 1,25 1,30 1,16 ± 0,431 30,273 5 Metil pentacosano 1,13 1,35 2,32 1,09 1,08 1,25 1,32 1,55 1,68 1,40 ± 0,418 31,157 ? ‐ 0,51 0,46 1,15 1,63 ‐ 0,98 1,05 2,02 1,12 ± 0,614 33,200 Z‐Heptacoseno 0,86 0,18 ‐ 0,14 0,73 0,24 ‐ ‐ 0,54 0,45 ± 0,306 33,346 Z‐Heptacoseno 0,85 1,77 1,17 1,03 1,06 2,34 1,65 1,66 1,26 1,39± 0,495 34,017 Heptacosano 6,25 10,88 8,77 6,38 2,57 10,68 5,37 8,68 5,71 7,08 ± 2,843 34,761 11‐Metil heptacosano

13‐Metil heptacosano 2,06 1,25 ‐ 3,06 ‐ ‐ 2,94 3,22 3,15 2,49 ± 0,820

34,842 9‐Metil heptacosano 0,47 0,50 3,29 1,14 ‐ 3,01 1,29 1,41 1,55 1,61 ± 1,127 34,940 7‐Metil heptacosano ‐ ‐ 1,86 ‐ ‐ 0,13 ‐ ‐ ‐ 0,99 ± 1,225 35,145 5‐Metil heptacosano 1,51 1,16 1,26 0,94 0,70 1,64 0,87 0,56 0,81 1,11 ± 0,340 35,918 3,13‐Dimetil lheptacosano

3,11‐Dimetil heptacosano 3,9‐Dimetil heptacosano 3,7‐Dimetil heptacosano 5,13‐Dimetil heptacosano

4,33 4,56 2,89 6,03 4,41 4,44 6,78 4,33 5,23 4,83 ± 1,182

36,460 ? ‐ ‐ ‐ 0,86 0,40 ‐ ‐ ‐ 0,78 0,68 ± 0,246 37,275 ZZ‐Nonacosadieno ‐ ‐ ‐ 0,60 ‐ ‐ 0,61 0,35 0,72 0,64 ± 0,066 37,411 ZZ‐Nonacosadieno 0,49 0,30 2,10 2,10 0,31 0,29 2,24 2,29 6,15 1,75 ± 1,991 37,603 ZZ‐Nonacosadieno 2,99 2,77 6,49 4,91 2,67 0,78 6,09 7,61 1,85 3,57 ± 2,043 37,842 Z‐Nonacoseno 1,07 1,48 1,73 1,52 1,28 1,29 3,22 1,48 1,58 1,64 ± 0,669 38,089 Z‐Nonacoseno 1,37 6,11 7,66 5,10 4,12 5,41 4,19 11,74 7,81 5,22 ± 2,092 38,175 Z‐Nonacoseno 10,73 10,78 0,94 0,47 0,65 ‐ 0,36 ‐ ‐ 3,99 ± 5,245 38,300 Z‐Nonacoseno 6,14 2,95 0,55 ‐ 8,28 0,41 ‐ ‐ ‐ 3,67 ± 3,473 38,650 Nonacosano 1,27 ‐ 0,79 0,51 0,61 1,29 ‐ 0,94 0,85 0,89 ± 0,328

33

TR Hidrocarboneto RF Col 1

RF* Col 1

RF Col 2

RF* Col 2

RF Col 3

RF Col 4

RF Col 5

RF* Col 5

RF Col 6

Média e d.p.

39,316 11‐Metil nonacosano 13‐Metil nonacosano 15‐Metil nonacosano

9,15 4,34 6,39 5,07 3,94 4,18 4,54 6,62 7,79 5,67 ± 1,918

39,400 9 Metil‐nonacosano 0,20 0,16 ‐ 0,20 0,13 0,49 ‐ ‐ 2,00 0,53 ± 0,734 39,858 9,13 Dimetil‐nonacosano

11,15 Dimetil‐nonacosano 13,17 Dimetil‐nonacosano

‐ ‐ 1,25 0,34 0,29 0,27 0,54 0,71 0,57 ± 0,42

40,142 ? ‐ ‐ ‐ ‐ 0,20 0,37 ‐ ‐ 0,72 0,43 ± 0,262 40,367 3 Metil‐nonacosano 1,37 1,96 ‐ 0,15 0,65 2,25 ‐ 0,33 0,59 1,16 ± 0,83 41,838 ZZ‐Hentriacontadieno 1,93 1,12 6,85 12,38 3,07 3,97 12,85 5,17 6,73 6,11 ± 4,5 41,983 ZZ‐Hentriacontadieno 8,98 5,76 7,75 11,71 12,25 12,40 12,59 8,26 7,03 9,81 ± 2,755 42,096 ZZ‐Hentriacontadieno 4,97 3,96 2,00 2,65 7,25 6,21 2,82 2,20 2,20 4,01 ± 1,96 42,291 Z‐Hentriaconteno 1,86 3,43 7,36 8,96 5,27 4,06 8,47 5,00 6,65 5,76 ± 2,527 42,525 Z Hentriaconteno 16,73 13,49 7,20 5,03 15,05 15,68 5,28 9,19 6,88 10,7 ± 5,018 42,667 Z Hentriaconteno 1,47 2,54 ‐ ‐ 2,27 ‐ ‐ ‐ ‐ 2,09 ± 0,556 43,615 13 Metil‐hentriacontano

15 Metil‐hentriacontano 7,65 8,80 9,09 7,69 12,14 8,03 6,82 7,54 9,38 8,70 ± 1,63

44,108 13, 17 Dimetil‐hentriacontano 0,46 0,50 ‐ 1,61 1,98 0,92 ‐ ‐ 1,67 1,19 ± 0,65

34

Tabela 16: Concentrações dos hidrocarbonetos encontrados no abdômen de duas rainhas fisogástricas (colônias 5 e 6) durante a presença e ausência de atividade de postura. RCP- rainha com postura, RSP- rainha sem postura, RCP- rainha após a retomada da postura TR Hidrocarboneto RCP

Colônia 5 RSP

Colônia 5 RCP*

Colônia 5 RCP

Colônia 6 RSP

Colônia 6 1 29,066 Pentacosano 6,89 4,89 5,04 4,66 4,30

2 29,875 11,13 Dimetil pentacosano 1,55 1,10 1,09 1,30 1,20

3 30,273 5 Metil pentacosano 1,32 1,34 1,68 1,68 1,60

4 31,157 ? 0,98 1,35 0,28 2,02 1,39

5 33,200 Z‐Heptacoseno ‐ 0,23 0,77 0,54 0,14

6 33,346 Z‐Heptacoseno 1,65 1,13 1,47 1,26 1,38

7 33,400 Z‐Heptacoseno ‐ ‐ 1,05 ‐ ‐

8 34,017 Heptacosano 5,37 4,82 4,36 5,71 4,40

9 34,761 11‐Metil heptacosano 13‐Metil heptacosano

2,94 2,44 1,31 3,15 3,20

10 34,842 9‐Metil heptacosano 1,29 1,19 0,90 1,55 1,31

11 35,145 5‐Metil heptacosano 0,87 0,59 1,20 0,81 0,73

12 35,918 3,13‐Dimetil lheptacosano 3,11‐Dimetil heptacosano 3,9‐Dimetil heptacosano 3,7‐Dimetil heptacosano 5,13‐Dimetil heptacosano

6,78 4,60 3,19 5,23 4,88

13 36,460 ? ‐ 0,42 0,17 0,78 0,22

14 37,275 ZZ‐Nonacosadieno 0,61 ‐ 0,44 0,72 0,42

15 37,411 ZZ‐Nonacosadieno 2,24 0,35 2,37 6,15 2,35

16 37,603 ZZ‐Nonacosadieno 6,09 6,17 1,64 1,85 7,23

17 37,842 Z‐Nonacoseno 3,22 1,23 2,83 1,58 1,43

18 38,089 Z‐Nonacoseno 4,19 11,96 0,69 7,81 12,51

19 38,175 Z‐Nonacoseno 0,36 ‐ 1,02 ‐ ‐

20 38,300 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ 8,72 ‐ ‐

21 38,420 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ 0,67

22 38,650 Nonacosano ‐ 0,63 0,72 0,85 0,47

23 39,316 11‐Metil nonacosano 13‐Metil nonacosano 15‐Metil nonacosano

4,54 6,74 4,89 7,79 6,87

24 39,400 9 Metil‐nonacosano ‐ 0,29 0,22 2,00 0,17

25 39,858 9,13 Dimetil‐nonacosano 11,15 Dimetil‐nonacosano 13,17 Dimetil‐nonacosano

0,27 1,15 0,41 0,71 0,86

26 40,142 ? ‐ 0,34 1,05 0,72 ‐

27 40,367 3 Metil‐nonacosano ‐ 0,28 1,48 0,59 0,36

28 41,838 ZZ‐Hentriacontadieno 12,85 5,55 9,93 6,73 5,67



31 42,291 Z‐Hentriaconteno 8,47 6,28 11,84 6,65 5,73

32 42,525 Z Hentriaconteno 5,28 12,34 2,21 6,88 10,02

33 42,667 Z Hentriaconteno ‐ ‐ 1,09 ‐ ‐

34 43,000 ? traços traços 0,28 ‐ ‐

35 43,215 ? traços traços traços ‐ ‐

36 43,615 13 Metil‐hentriacontano 15 Metil‐hentriacontano

6,82 9,84 12,96 9,38 8,89

37 44,108 13, 17 Dimetil‐hentriacontano ‐ 1,07 1,20 1,67 0,95

35

Amostras em hexano

Os compostos cuticulares encontrados em rainhas fisogástricas foram os mesmos

tanto com o uso de fibra de fibra de polidimetilsiloxano, quanto com o solvente apolar

hexano. Os resultados mostram, entretanto, que as concentrações variam de acordo com a

técnica utilizada, sendo o alcano e os alcenos do C23 (tricosano e tricoseno) somente

encontrados na amostra em hexano. Alguns compostos apresentaram concentrações

relativas maiores na amostra em hexano como o pentacosano e o heptacosano (Rainha 2).

Outros apresentaram concentrações menores quando extraídas com solvente como os

alcanos ramificados (mono e metil alcanos). Os alcenos e alcadienos comportaram‐se de

maneira variada de acordo com a técnica utilizada (tabela 17).

Tabela 17: Concentrações relativas de hidrocarbonetos cuticulares de 2 rainhas (R1 e R2) analisadas com fibra de polidimetilsiloxano e posteriormente com solvente hexano. TR Hidrocarboneto R1 fibra R1 hexano R2 fibra R2 hexano

23,048 Tricoseno ‐ 1,44 ‐ ‐ 23,275 Tricoseno ‐ 1,35 ‐ ‐ 23,665 Tricosano ‐ 0,18 ‐ 0,29 29,066 Pentacosano 5,04 27,04 6,45 15,33 29,875 11,13 Dimetil pentacosano 1,09 0,82 0,95 0,08 30,273 5 Metil pentacosano 1,68 1,41 1,35 0,90 31,157 ? 0,28 0,63 0,51 ‐ 33,200 Z‐Heptacoseno 0,77 0,38 0,18 ‐ 33,346 Z‐Heptacoseno 1,47 1,12 1,77 ‐ 34,017 Heptacosano 1,05 0,91 10,88 25,46 34,761 11‐Metil heptacosano

13‐Metil heptacosano 4,36 0,61 1,25 1,35

34,842 9‐Metil heptacosano 1,31 1,08 0,50 0,87

34,94 7‐Metil heptacosano 0,90 0,46 ‐ ‐

35,145 5‐Metil heptacosano 1,2 1,62 1,16 0,61 35,918 3,13‐Dimetil lheptacosano

3,11‐Dimetil heptacosano 3,9‐Dimetil heptacosano 3,7‐Dimetil heptacosano 5,13‐Dimetil heptacosano

3,19 1,94 4,56 1,45

36,460 ? 0,17 0,56 ‐ 0,34 37,275 ZZ‐Nonacosadieno 0,44 1,10 ‐ ‐

37,411 ZZ‐Nonacosadieno 2,37 1,22 0,30 0,50

37,603 ZZ‐Nonacosadieno 1,64 0,98 2,77 1,71

37,842 Z‐Nonacoseno 2,83 1,32 1,48 4,19

38,089 Z‐Nonacoseno 0,69 0,83 6,11 2,10

38,175 Z‐Nonacoseno 1,02 ‐ 10,78 4,01

38,300 Z‐Nonacoseno 8,72 7,43 2,95 0,78

38,420 Z‐Nonacoseno 0,67 ‐ ‐ ‐

38,650 Nonacosano 0,72 7,71 ‐ 3,62

36

TR Hidrocarboneto R1 fibra R1 hexano R2 fibra R2 hexano

39,316 11‐Metil nonacosano 13‐Metil nonacosano 15‐Metil nonacosano

4,89 3,12 4,34 3,25

39,400 9 Metil‐nonacosano 0,22 0,17 0,16 0,16

39,858 9,13 Dimetil‐nonacosano 11,15 Dimetil‐nonacosano 13,17 Dimetil‐nonacosano

0,41 ‐ ‐ ‐

40,142 ? 1,05 0,45 ‐ 0,25

40,367 3 Metil‐nonacosano 1,48 0,64 1,96 0,74

41,838 ZZ‐Hentriacontadieno 9,93 4,40 1,12 6,18



42,291 Z‐Hentriaconteno 11,84 7,34 3,43 6,04

42,525 Z Hentriaconteno 2,21 1,71 13,49 5,09

42,667 Z Hentriaconteno 1,09 6,09 2,54 1,71

43,000 ? 0,28 ‐ ‐ ‐

43,215 ? traços ‐ ‐ ‐

43,615 13 Metil‐hentriacontano 15 Metil‐hentriacontano

12,21 6,91 8,80 4,98

44,108 13,17 Dimetil‐hentriacontano 1,20 ‐ 0,50 0,34

37

4‐DISCUSSÃO E CONCLUSÕES

Os resultados obtidos mostram que a cutícula de operárias, rainhas virgens e

rainhas da espécie Melipona marginata é constituída por hidrocarbonetos de cadeia variando

entre C21 e C33, geralmente apresentando número ímpar de átomos de carbono. Foram

caracterizados alcanos, alcenos, alcadienos, metil e dimetil alcanos, sendo os compostos

mais freqüentes aqueles com número ímpar de carbonos. As análises químicas não foram

restritivas aos hidrocarbonetos, entretanto outros compostos como ésteres e álcoois

encontrados em operárias de outras espécies de meliponíneos (Frieseomelitta varia e

Lestrimelitta limao ‐Nunes et al 2008) não foram observados.

Entre as três colônias analisadas houve semelhanças quanto à composição cuticular

de operárias. Foram encontrados hidrocarbonetos variando entre 21 e 31 carbonos. O perfil

químico foi caracterizado principalmente por alcanos, alcenos e alcadienos, sendo que em

nenhuma das idades analisadas observou‐se a presença de alcanos ramificados, como

observado por Abdalla et al. (2003) em operárias da espécie Melipona bicolor.

As análises discriminantes mostram que as operárias recém emergidas são, quanto à

composição cuticular, aquelas que mais se distanciam dos outros grupos, havendo muito

mais semelhanças entre operárias com atividade no favo de cria e operárias campeiras

(tabelas 2, 4 e 6). Esses resultados estão de acordo com o proposto por Breed et al. (1995,

2004) da existência de um perfil cuticular que é fortemente influenciado pelo meio,

principalmente pela cera. Entretanto, o perfil cuticular das operárias recém emergidas

apresentou uma diversidade de hidrocarbonetos tão rica quanto o das operárias do favo e

campeiras, e a maioria das modificações nesse perfil ocorreram, portanto, nas concentrações

relativas desses compostos. Operárias da espécie Frieseomelitta varia apresentam somente

quatro alcanos em concentrações significantes na ocasião da emergência enquanto as mais

velhas possuem cerca de 40 compostos entre hidrocarbonetos (alcanos saturados e

insaturados, alcenos, um alcino e alcadienos), e alguns álcoois e ácidos Nunes (2008).

Todos os resultados observados mostram que o perfil de hidrocarbonetos de

operárias varia de acordo com a atividade que elas desempenham na colônia (figura 4) e,

como em abelhas sociais as atividades no ninho estão fortemente relacionadas com a idade

podemos relacionar cada atividade desempenhada a uma faixa etária. Observa‐se que

alguns compostos estão presentes somente em um ou dois grupos de operárias, o que

38

sugere que o contato com compostos como cera, feromônios de rainha e alimento possam

estar atuando diferentemente de acordo com a proximidade dos indivíduos com estes.

As operárias apresentaram variação em relação à origem das colônias. As colônias 1

e 2 apresentaram‐se, segundo o perfil de hidrocarbonetos cuticulares, mais próximas entre

si do que em relação à colônia 3, exceto para o grupo de operárias do favo. Um dos motivos

que pode ter promovido a divergência entre os perfis de hidrocarbonetos de operárias do

favo pode ser a maior exposição desses indivíduos aos compostos da colônia. Os indivíduos

se desenvolvem dentro de células fechadas, sem contato com o meio externo até a

emergência. Já as campeiras são mais susceptíveis a perdas de compostos por volatilização

quando forrageiam, além de estarem em contato com os mesmos recursos.

O fato de operárias das colônias 1 e 2 (Cunha‐SP) serem muito próximas e ambas

divergirem da colônia 3 (Itanhaém‐SP) quanto a composição de hidrocarbonetos cuticulares

pode ser explicado pela influência de ‘odores hereditários’. Apesar dos indivíduos terem

sido coletados tempos depois da chegada das colônias no laboratório, ou seja, os fatores

ambientais atuantes eram idênticos, não houve convergência do perfil químico dos

indivíduos.

As operárias coletadas durante a postura de ovos que originaram machos (colônia

1) apresentaram um perfil de hidrocarbonetos muito diferenciado em relação aquelas com

postura de ovo trófico da mesma colônia. A ausência da rainha pode ter sido o fator

causador dessa diferença, sendo que os compostos desta são constantemente espalhados

pela colônia pela movimentação ativa das operárias (Seeley, 1979). Outro fator ser a

ocorrência de uma diferenciação na fisiologia dessas operárias, uma vez que compostos

encontrados em suas cutículas não foram encontrados em rainhas fisogástricas, como o

hexacosano, o octacosano e o hentriacontano. Além disso, compostos como os encontrados

na cutícula de rainhas como Z‐heptacoseno, heptacosano, ZZ‐nonacosadieno e Z‐

nonacoseno tiveram suas concentrações aumentadas consideravelmente, indicando que não

foram adquiridos por contato com a rainha (tabela 1).

Entre os insetos sociais, os compostos de rainha são considerados, direta ou

indiretamente, os responsáveis pela dominância reprodutiva desses indivíduos (revisado

por Keller e Nonacs, 1993) e promoverem a inibição da reprodução de operárias. A ausência

desses compostos poderia iniciar um comportamento de ‘disputa’ pela reprodução, fato que

foi observado durante a coleta dessas operárias. As possíveis modificações fisiológicas

39

decorrentes desse comportamento associadas à ausência de compostos da rainha agregados

à cutícula podem explicar o perfil químico encontrado nessas operárias.

Os resultados obtidos entre as rainhas virgens mostram que, assim como em

operárias, as recém emergidas têm seus perfis cuticulares modificados ao longo dos dias. As

rainhas com dois dias de vida apresentaram perfis muito semelhantes aos das recém

emergidas provavelmente porque a produção de compostos atrativos deva iniciar‐se após

esse período. Durante esse estudo verificou‐se que, em colônias órfãs de Melipona marginata,

rainhas virgens permaneciam no ninho até 7 dias após a emergência (foram marcadas 10

rainhas recém emergidas e 3 delas foram vistas até o 8º dia).

Os resultados também comprovam que as rainhas virgens das colônias 1 e 2, assim

como as operárias recém emergidas e campeiras dessas colônias, possuem perfil de

hidrocarbonetos cuticulares muito semelhantes entre si, e ambas consideravelmente

distantes entre as rainhas virgens da colônia 3 (figura 5).

As rainhas virgens agredidas foram aquelas que apresentaram mais picos

cromatográficos em relação aos outros grupos de rainhas, inclusive às rainhas fisogástricas.

Segundo Koedam et al. (1995b) os feromônios produzidos nas glândulas abdominais seriam

liberados durante no momento em que essas rainhas inflam seus abdomens, sendo que este

comportamento desempenharia um importante papel na aceitação pelas operárias.

O perfil químico das rainhas virgens agredidas parece corresponder ao pico de

atratividade desses indivíduos, embora não se tenha verificado quais fatores dão início a

esse comportamento (a idade ou mesmo a agressão de operárias). As rainhas virgens que

foram coletadas no refúgio não apresentaram perfil semelhante ao das agredidas, sugerindo

que essa possa ser somente uma forma de evitar o contato com operárias. Não se sabe ainda

como as operárias se comportam diante da variedade de perfis cuticulares encontrados

entre as rainhas virgens (tabelas 18, 19, 20, 21, 22 e 23 – Apêndice), entretanto, fica evidente

a presença de certos compostos (principalmente alcenos e alcadienos com 29, 31 e 33 átomos

de carbono) somente nas rainhas que foram coletadas no momento em eram agredidas pelas

operárias (tabela 10).

A caracterização do desenvolvimento ovariano das rainhas virgens mostrou não

haver relação deste com a atratividade das rainhas agredidas. É provável que a retirada do

favo da colônia tenha influenciado nesse desenvolvimento por conseqüente diminuição dos

40

compostos da rainha, mas esse fato foi observado somente em uma das três colônias

analisadas.

Embora as operárias estejam susceptíveis a aquisição de compostos provenientes do

meio, a rainha fisogástrica analisada não apresentou modificação do perfil, ao menos até o

segundo mês após o início da postura. A ausência de variação do perfil de hidrocarboneto

em relação à idade da rainha fisogástrica observada pode ser em decorrência da

metodologia empregada para essa análise. Somente amostras dos compostos abdominais da

rainha foram coletadas, e por ser o abdômen local de grande secreção glandular em rainhas

fisogástricas (Mota 1988) certamente outros compostos não foram adsorvidos pela fibra, ou

foram em pequenas concentrações. Alguns compostos (tricosano, Z‐pentacoseno,

octacosano) presentes em rainhas virgens foram encontrados na rainha com 6 dias após o

início da postura, indicando a transição do perfil para rainha fisogástrica (tabela 14). Esses

compostos não foram encontrados em nenhuma outra rainha fisogástrica.

Os compostos mais representativos quanto à variedade de suas formas foram os

alcenos e alcadienos, compostos também encontrados em outras rainhas de abelhas sem

ferrão como Melipona bicolor (Abdala et al 2003) e Frieseomelitta varia (Nunes 2008). Também

estão presentes alcanos como pentacosano e heptacosano, mas a ocorrência alcanos

ramificados (metil e dimetil alcanos) foi característica do grupo.

Entre as rainhas observaram‐se diferenças no perfil de acordo com as condições de

postura das mesmas (tabela 16). Os fatores que promoveram essa ausência de postura não

foram identificados claramente (as colônias não apresentaram déficit de alimento e

populacional) e as operárias não excluíram nenhuma dessas rainhas mesmo no período de

ausência total de postura, apesar da emergência de várias rainhas virgens.

A fertilidade da rainha é um fator de extrema importância para a manutenção do

equilíbrio dinâmico da colônia em vespas e formigas (revisado por Howard 2004). Estudos

relativos à produtividade da rainha e mudanças no perfil em vespas e formigas

demonstram que rainhas indicam a queda da produtividade através dos compostos

cuticulares e são substituídas por novas rainhas (Peeters et al 1999, Cuvillier‐Hot et al 2004).

Entretanto, os resultados obtidos demonstram que as operárias da espécie M. marginata são

influenciadas pelo status da rainha bem mais do que sua produtividade.

41

Os perfis de rainhas obtidos com as duas diferentes técnicas de extração (SPME e

solvente) foram muito semelhantes quanto à presença dos compostos, mas as concentrações

encontradas variaram de acordo com a técnica.

Através dos resultados apresentados podemos concluir a importância dos

hidrocarbonetos cuticulares nos processos de reconhecimento entre castas e atividades nos

insetos sociais. As várias hipóteses apresentadas nessa discussão sugerem a necessidade de

mais estudos a respeito da atuação dos hidrocarbonetos como mediadores ou indicadores

de comportamento entre o grupo.

42

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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cuticular hydrocarbon composition of Melipona bicolor Lepeletier, 1836

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48

APÊNDICE

49

Figura 7: Cromatogramas sobrepostos de uma rainha fisogástrica de M. marginata em diferentes idades. Linha preta-6 dias após o início da postura, linha rosa-32 dias após o início da postura e linha azul-65 dias após o início da postura. Os números correspondem aos hidrocarbonetos identificados na tabela 14.

Figura 8: Três cromatogramas sobrepostos de uma rainha fisogástrica (Colônia 5) de M. marginata em diferentes condições de postura. Linha preta-com postura; linha rosa-sem postura; linha azul- após a retomada da postura. Os números correspondem aos hidrocarbonetos identificados na tabela 16.

50

Tabela 18: Perfil de hidrocarbonetos de rainhas virgens recém emergidas, colônia 1. TR Hidrocarbonetos RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10

18,237 Heneicosano 0,77 ‐ 0,60 ‐ ‐ 0,33 0,16 0,93 0,71 0,94

23,426 Tricosano 11,04 4,21 5,68 11,60 9,19 10,66 7,01 11,51 6,83 11,59

27,943 Z‐Pentacoseno 0,69 ‐ 1,15 1,35 0,40 1,32 0,79 0,43 1,25 0,43

28,150 Z‐Pentacoseno 1,64 0,98 1,02 2,13 ‐ ‐ ‐ 1,51 ‐ 1,52

28,693 Pentacosano 11,85 7,74 8,18 11,47 12,70 13,44 8,91 12,92 8,73 13,00

30,812 Hexacosano ‐ ‐ 0,41 ‐ 0,63 0,43 1,09 0,41 0,38 ‐

32,962 Z‐Heptacoseno 36,27 21,49 27,85 39,45 19,37 30,13 30,53 31,37 24,47 31,58

33,159 Z‐Heptacoseno ‐ 0,80 0,58 ‐ ‐ 2,82 0,25 1,13 0,99 1,14

33,634 Heptacosano 7,54 13,52 9,54 9,96 18,64 10,57 11,79 7,37 11,28 7,42

35,674 Octacosano ‐ 0,38 0,63 ‐ 0,51 0,49 0,78 0,75 0,72 0,75

37,437 Z‐Nonacoseno ‐ 0,66 1,59 0,89 1,41 0,73 ‐ 0,60 ‐ 0,60

37,532 Z‐Nonacoseno 21,27 19,26 20,58 14,54 19,09 16,18 21,81 20,03 18,63 20,26

37,761 Z‐Nonacoseno ‐ 1,50 0,77 ‐ 0,40 ‐ 1,35 1,00 1,36

38,251 Nonacosano 1,16 11,12 7,19 2,73 5,90 2,71 5,57 1,49 9,81 1,50

41,508 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,1 ‐ ‐ 0,1 ‐ 0,08 ‐ ‐ ‐

41,570 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,12 0,1 ‐

41,840 Z‐Hentriaconteno 7,75 10,81 9,40 5,89 7,81 7,11 8,84 7,86 9,10 7,91

42,010 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ 0,10 ‐ ‐ ‐ ‐ 0,09 ‐ ‐

42,592 Hentriacontano ‐ 7,49 4,71 ‐ 3,92 3,11 2,46 ‐ 6,00 ‐

51

Tabela 19: Perfil de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens de M. marginata com 2 dias de vida (colônia 1). TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10 RV 11 RV 12 RV 13 RV 14 RV 15 RV 16 RV 17 RV 18 RV 19 RV 20

18,208 Heneicosano 0,71 ‐ 1,07 ‐ 0,67 0,15 0,11 0,72 0,93 0,33 0,62 ‐ 0,71 1,52 0,64 ‐ 0,61 0,59 0,9 1,26

23,696 Tricosano 6,83 3,09 10,87 2,89 8,92 3,14 1,88 11,68 11,51 5,8 5,13 2,79 7,61 7,28 7,73 3,58 8,65 6,19 11,93 11,73

26,350 Tetracosano ‐ 0,24 ‐ ‐ 0,16 ‐ ‐ 0,25 0,23 0,27 0,38 0,2 0,35 1,04 0,28 0,38 0,43 0,27 0,57 ‐

28,096 Z‐Pentacoseno ‐ 0,45 0,86 0,29 0,59 0,34 0,19 0,76 0,43 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,3

28,430 Z‐Pentacoseno 1,25 0,65 2,02 ‐ 1,36 0,64 0,45 1,5 1,51 0,87 1,15 0,79 1,21 1,18 1,08 0,73 0,67 0,86 1,33 0,82

28,947 Pentacosano 8,73 10,84 11,78 8,27 11,51 6,69 3,65 10,53 12,92 9,35 6,93 7,67 7,87 8,02 9,29 6,69 7,64 8,68 9,63 12,17

31,452 Hexacosano ‐ 0,61 ‐ 0,65 0,31 0,53 0,47 0,68 ‐ 0,36 0,26 0,66 ‐ 0,25 0,26 0,31 0,33 0,27 0,22 0,5

32,539 ZZ‐Heptacosadieno ‐ 0,21 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

33,117 Z‐Heptacoseno 0,38 9,64 0,29 3,93 0,33 0,36 0,24 0,75 ‐ 0,34 0,25 0,9 0,24 0,31 ‐ 0,54 0,15 0,18 0,33 ‐

33,250 Z‐Heptacoseno 24,47 13,85 32,5 15,25 31,55 15,42 7,57 32,45 31,37 24,36 25,98 13,56 31,98 20,87 25,07 15,72 25,29 24,64 38,23 17,61

33,442 Z‐Heptacoseno 0,99 0,65 1,56 0,66 1,54 0,57 0,48 1,64 1,13 0,92 1,43 1,79 1,48 1,09 1,76 1,01 0,64 1,04 1,27 0,53

33,895 Heptacosano 11,28 19,79 8,24 26,58 8,97 16,82 25,95 9,98 7,37 11,92 8,67 16,94 7,24 11,93 9,46 16,86 11,75 11,41 6,11 14,93

34,630 Me C27 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 2,71 0,18 ‐ ‐ 0,67 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 1,66 0,43 ‐ 2,57

34,837 Me C27 ‐ 0,22 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

35,633 Octacosano ‐ 0,39 0,52 0,56 0,79 2,65 0,27 0,78 0,75 1,07 0,72 0,45 0,85 1,48 0,83 0,41 2,82 0,88 0,72 2,64

36,372 ZZ‐Nonacosadieno 0,72 0,15 ‐ 0,34 ‐ 0,95 0,77 0,86 0,6 0,16 ‐ ‐ ‐ 1,26 ‐ 0,12 0,75 0,32 ‐ 0,98

36,360 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,17 0,59 0,39 0,45 0,76 0,25 ‐ ‐ 0,45 0,42 0,39 0,38 1,45 0,76 0,42 0,67 0,6 0,52 0,96

37,157 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,91 ‐ 0,56 ‐ 0,64 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37,299 Z‐Nonacoseno ‐ 1,65 ‐ 0,66 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37,451 Z‐Nonacoseno ‐ 0,87 ‐ 0,80 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37,734 Z‐Nonacoseno 18,73 12,81 16,19 20,71 17,89 10,61 7,59 15,00 20,13 19,86 19,96 14,75 22,59 15,19 22,53 16,93 12,65 21,08 16,89 10,53

37,953 Z‐Nonacoseno 1,00 0,98 ‐ 0,9 0,93 0,78 1,01 1,58 1,11 1,81 3,9 1,85 3,87 1,65 1,95 0,67 1,55 1,56 ‐

38,134 Z‐Nonacoseno ‐ 4,95 ‐ 3,02 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

38,529 Nonacosano 9,81 3,63 3,63 8,2 3,24 10,98 16,98 3,22 1,68 6,96 6,65 8,52 2,84 8,14 4,78 10,41 4,25 4,67 1,56 4,82

41,560 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,81 ‐ 0,57 ‐ 10,10 14,90 0,50 2,02 0,62 0,78 0,42 11,64 1,41 ‐ 8,96

41,691 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,83 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

41,792 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,15 ‐ ‐ ‐ ‐ 0,35 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

42,128 Z‐Hentriaconteno 9,10 4,42 7,13 3,54 8,75 6,54 5,7 6,44 7,86 9,24 11,83 14,84 10,67 7,92 10,25 13,88 5,56 12,21 7,65 5,96

42,367 Z‐Hentriaconteno ‐ 6,97 ‐ 1,39 ‐ 0,76 0,8 ‐ ‐ ‐ 0,93 2,55 ‐ 1,79 ‐ 1,99 ‐ ‐ ‐ ‐

42,873 Hentriacontano 6,00 0,76 1,77 0,27 1,69 5,34 5,61 0,61 ‐ 2,92 5,38 8,95 1,6 2,43 1,96 6,9 0,42 2,03 0,58 0,85

43,455 ? ‐ 0,29 ‐ 0,47 0,38 2,37 4,83 0,64 ‐ 1,02 0,89 0,35 0,53 2,98 0,89 0,75 2,74 0,69 ‐ 1,89

52

Tabela 20: Perfil de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens de M. marginata com 2 dias de vida (colônia 2). TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10 RV 11 RV 12 RV 13 RV 14 RV 15

18.237 Heneicosano 1,14 ‐ ‐ 1,19 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 1,50 1,17 1,52 1,68

23.633 Tricosano 14,20 3,54 4,91 17,83 6,16 15,13 6,37 9,37 8,10 5,60 5,48 23,04 13,45 33,04 21,66

24.834 Tetracosano 0,39 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

27.943 Z‐Pentacoseno 1,71 0,47 0,28 2,18 9,19 ‐ 0,49 0,51 ‐ 0,50 0,48 1,59 0,71 1,49 1,20

28.693 Pentacosano 10,38 11,40 9,59 12,08 ‐ 14,56 9,14 12,12 11,00 11,40 12,71 14,53 14,59 15,85 15,62

30.812 Hexacosano 0,38 ‐ ‐ 0,44 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,24 ‐ ‐ ‐

31.174 ? ‐ 0,56 0,40 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,50 ‐ ‐ ‐ ‐ 0,30

32.827 Z‐Heptacoseno 0,68 0,90 0,83 0,69 ‐ ‐ 0,41 ‐ ‐ 0,30 0,27 ‐ ‐ ‐ ‐

32.962 Z‐Heptacoseno 46,42 15,54 20,89 41,76 37,53 40,08 33,04 36,91 33,81 22,20 21,75 37,77 41,93 27,94 38,00

33.159 Z‐Heptacoseno 0,55 1,02 0,49 0,47 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,40 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

33.636 Heptacosano 4,11 22,64 21,07 4,20 10,35 6,11 11,69 9,24 14,28 21,90 20,51 5,13 6,14 5,89 5,68

35.674 Octacosano 0,75 0,25 ‐ 0,62 0,71 ‐ ‐ 0,69 0,32 0,40 ‐ ‐ 0,50 ‐ ‐

37.184 ZZ‐Nonacosadieno 0,24 0,40 0,44 0,36 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,20 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37.437 Z‐Nonacoseno ‐ 0,57 0,39 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37.470 Z‐Nonacoseno ‐ 0,42 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37.532 Z‐Nonacoseno 14,17 13,24 14,61 12,81 22,33 18,04 19,38 21,33 17,84 14,40 14,3 11,89 16,39 10,84 12,34

37.761 Z‐Nonacoseno ‐ 1,49 1,33 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,04 ‐ ‐ ‐ ‐

37.859 Z‐Nonacoseno ‐ 1,67 1,07 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 1,00 0,56 ‐ ‐ ‐ ‐

38.251 Nonacosano 0,53 10,69 10,92 0,53 4,25 9,01 2,68 6,16 8,80 11,42 0,46 0,66 0,66 0,60

41.508 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 0,57 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

41.657 Z‐Hentriaconteno ‐ 1,38 1,14 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,80 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

41.840 Z‐Hentriaconteno 4,36 7,82 7,36 4,85 7,52 6,09 7,54 7,14 7,03 7,40 7,00 3,85 4,45 2,76 2,92

42.010 Z‐Hentriaconteno ‐ 0,38 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

42.592 Hentriacontano ‐ 5,07 4,27 ‐ 1,96 ‐ 2,93 ‐ 1,46 4,20 5,49 ‐ ‐ ‐ ‐

53

Tabela 21: Perfil de hidrocarbonetos cuticulares de rainhas virgens de M. marginata com 2 dias de vida (colônia 3). TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10 RV 11 RV 12 RV 13 RV 14 RV 15

18.237 Heneicosano

0,56 0,59 0,12 0,59 0,74 0,27 0,78 0,51 0,57 0,34 0,83 0,62 0,59 0,71 0,58

23.426 Tricosano

11,09 14,78 8,00 10,38 11,39 6,81 10,52 9,10 13,84 8,27 11,18 9,73 12,37 14,90 13,94

26.100 Tetracosano

0,24 0,44 0,24 ‐ ‐ ‐ ‐ 0,28 0,28 0,19 0,36 0,26 0,32 0,43 0,28

27.943 Z‐Pentacoseno

1,00 1,85 0,69 1,08 1,75 0,42 0,38 0,77 0,88 0,77 1,00 1,28 1,44 0,91 0,89

28.150 Z‐Pentacoseno

0,38 0,31 0,12 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,96 1,07 1,42 1,08 ‐

28.693 Pentacosano

13,36 15,74 12,05 13,27 15,72 15,02 17,05 14,80 12,40 9,24 13,00 10,27 11,32 14,75 12,49

29.266 ?

0,24 0,25 ‐ 0,30 0,14 0,11 0,24 0,44 0,29 0,20 0,85 0,36 0,21 ‐ ‐

30.812 Hexacosano

0,12 0,24 ‐ 0,40 ‐ ‐ ‐ 0,23 ‐ ‐ ‐ 0,20 0,22 ‐ 0,29

31.174 ?

0,32 0,71 0,23 ‐ 0,83 0,27 0,14 0,32 0,18 ‐ 0,30 0,58 0,43 0,33 0,18

32.827 Z‐Heptacoseno

0,49 0,59 0,63 0,57 0,54 0,64 0,66 0,70 0,43 0,45 0,40 0,23 0,29 0,33 0,43


0,66 0,86 0,80 0,88 0,64 1,63 0,56 0,57 0,33 0,46 0,50 0,50 0,70 0,47 0,33


35,61 39,77 31,03 38,66 45,29 30,91 28,58 38,48 31,03 26,52 34,09 47,51 39,85 35,59 31,26


0,47 0,51 0,33 0,59 0,40 0,36 0,30 0,37 0,28 0,20 0,70 0,80 0,81 0,70 0,28

33.636 Heptacosano

10,53 7,10 16,54 9,56 5,88 14,11 16,13 11,25 12,88 16,79 8,50 4,50 4,90 6,25 12,97

35.674 Octacosano

0,43 0,37 0,30 0,82 0,39 0,55 0,21 0,32 0,60 0,72 0,72 0,76 0,20 ‐ ‐

37.437 Z‐Nonacoseno

0,60 0,65 0,79 ‐ 0,70 0,93 0,78 0,89 0,85 0,87 ‐ ‐ 0,73 0,66 0,61


0,78 0,89 0,60 1,01 0,52 0,46 0,69 0,64 0,49 0,82 1,00 0,99 0,95 1,07 0,86


16,44 11,42 19,34 17,57 11,84 20,65 17,53 16,26 15,99 20,49 16,66 14,90 16,31 15,25 16,11

38.251 Nonacosano

1,42 0,64 0,21 ‐ ‐ 1,15 1,50 1,03 2,98 4,84 2,32 0,60 0,69 0,97 3,00

41. 657 Z‐Hentriaconteno

0,45 ‐ 4,03 1,06 0,45 0,36 0,12 0,17 0,18 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

41.840 Z‐Hentriaconteno

4,42 2,28 3,91 3,28 2,50 5,21 3,85 2,86 4,45 6,56 5,93 4,84 6,06 5,61 4,49

42.592 Hentriacontano

0,41 ‐ ‐ ‐ ‐ 0,13 0,19 0,16 1,01 2,36 0,71 ‐ 0,19 ‐ 1,01

54

Tabela 22: Perfil de hidrocarbonetos de rainhas virgens coletadas em um refúgio, colônia 2. TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7

18.240 Heneicosano ‐ 0,58 ‐ 1,09 ‐ 0,16 ‐

23.759 Tricosano 11,6 5,49 4,2 11,01 1,92 6,86 3,49

28.167 Z‐Pentacoseno 1,35 1,11 ‐ 0,77 0,26 0,12 ‐

28.297 Z‐Pentacoseno 2,13 0,99 1,26 1,68 0,42 0,98 0,74

29.035 Pentacosano 11,47 7,91 7,65 11,75 14,12 8,72 6,58

29.594 Hexacosano ‐ 1,51 ‐ ‐ 0,96 0,62 2,46

31.533 ZZ‐Heptacosadieno ‐ 0,4 ‐ ‐ 0,48 0,39 0,56

33.198 Z‐Heptacoseno 39,45 26,93 21,55 35,35 6,86 1,07 0,79

33.331 Z‐Heptacoseno ‐ 0,56 0,78 ‐ 5,45 29,87 16,23

33.991 Heptacosano 9,96 9,33 13,55 7,78 17,26 11,53 24,36

36.407 Octacosano 0,89 1,54 0,95 ‐ 2,67 ‐ ‐

37.241 ZZ‐Nonacosadieno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,82 ‐ ‐

37.401 ZZ‐Nonacosadieno ‐ ‐ ‐ ‐ 1,2 ‐ ‐

37.536 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,53 ‐ 0,47

37.817 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ ‐ ‐ 2,27 ‐ 0,45

37.914 Z‐Nonacoseno 14,54 21,03 18,87 21,55 9,11 21,51 1,96

38.047 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ ‐ ‐ 3,87 ‐ 14,56

38.131 Z‐Nonacoseno ‐ 1,34 1,47 ‐ 1,48 ‐ ‐

38.615 Nonacosano 2,73 7,25 11,01 1,32 5,6 5,85 14,79

41.643 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,99 ‐ ‐

41.787 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ 1,72 ‐ ‐

41.883 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,7 ‐ ‐

42.235 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ 0,78 ‐ 11,32 0,97 1,35

42.396 Z‐Hentriaconteno 5,89 9.09 10,59 7,69 5,68 8,65 6,56

42.546 Z‐Hentriaconteno ‐ 9,39 ‐ ‐ 1,8 ‐ 0,97

42.963 Hentriacontano ‐ 4,65 7,34 ‐ 2,51 2,69 3,68

55

Tabela 23: Perfil de hidrocarbonetos de rainhas virgens coletadas durante o ataque de operárias, colônia 1. TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10 RV 11 RV 12 RV 13 RV 14

22.633 Z‐Tricoseno ‐ 0,11 ‐ ‐ ‐ 0,06 0,20 ‐ ‐ ‐ 0,31 0,21 ‐ ‐

22.834 Z‐Tricoseno 0,15 0,65 0,04 0,09 ‐ 0,07 0,11 ‐ 0,05 ‐ 0,19 0,29 ‐ 0,07

23.426 Tricosano 1,60 5,38 3,86 4,92 4,38 3,50 5,55 2,93 2,57 2,19 10,21 4,78 1,56 2,02

26.100 Tetracosano ‐ 0,27 0,21 0,17 0,28 0,15 0,12 0,14 0,13 0,11 0,29 0,16 0,08 0,10

27.811 Z‐Pentacoseno ‐ 0,42 0,49 0,07 0,51 0,12 0,10 ‐ 0,41 0,47 0,00 0,15 0,21 0,25

27.943 Z‐Pentacoseno ‐ 1,27 0,98 0,43 0,96 0,36 0,46 0,27 0,60 0,57 0,91 0,52 0,29 0,26

28.150 Z‐Pentacoseno 0,19 3,57 0,06 0,57 0,09 0,43 0,69 0,84 ‐ 0,09 1,26 1,18 0,48 0,63

28.693 Pentacosano 2,64 14,99 15,24 7,56 20,00 8,14 7,35 10,22 15,32 10,83 12,87 9,04 7,45 8,30

29.266 ? ‐ 0,12 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,11 0,08 0,14 ‐ ‐ 0,06 ‐

31.174 ? 0,30 0,38 0,52 0,50 0,49 0,60 0,52 0,49 0,06 0,08 0,22 ‐ 0,08 ‐

32.417 ZZ‐Heptacosadieno ‐ 0,27 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,48 0,52 0,41 0,46 0,55 0,64

32.587 ZZ‐Heptacosadieno ‐ 0,59 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 0,13 0,22 ‐ ‐ 0,09 0,19

32.827 Z‐Heptacoseno ‐ 2,79 8,02 1,98 8,01 3,69 1,67 1,64 8,73 11,56 0,15 1,59 7,19 8,22

32.962 Z‐Heptacoseno 6,18 2,41 6,37 18,48 4,06 12,17 15,46 8,31 6,44 7,54 28,85 20,81 10,35 8,01

33.159 Z‐Heptacoseno 0,22 3,47 0,04 0,57 0,03 0,39 0,54 2,13 0,14 0,07 2,70 0,97 0,68 0,86

33.636 Heptacosano 14,53 12,56 16,42 16,77 12,96 21,56 19,80 19,77 14,35 17,42 10,12 13,75 19,17 21,47

34.364 Metil Heptacosano 0,06 ‐ 0,10 ‐ 0,07 0,25 0,38 ‐ 0,14 0,09 ‐ 0,71 0,33 0,24

34.756 Metil Heptacosano 0,17 ‐ 0,06 ‐ ‐ 0,18 0,24 ‐ 0,10 0,06 0,45 0,35 0,17 0,07

35.674 Octacosano 0,36 0,15 ‐ 0,62 0,13 0,33 0,32 0,18 0,12 0,15 ‐ 0,18 0,23 0,24

36.875 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,11 1,01 0,50 ‐ 0,86 0,48 0,18 0,77 0,79 ‐ ‐ 0,97 1,99

37.035 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 0,57 0,52 0,49 0,67 0,63 0,43 0,66 0,18 0,42 ‐ 0,27 0,86 0,91

37.184 ZZ‐Nonacosadieno ‐ 1,02 0,31 0,41 0,14 ‐ ‐ 0,67 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ ‐

37.437 Z‐Nonacoseno ‐ ‐ 5,41 1,29 4,84 1,49 1,69 0,67 6,94 5,01 ‐ 1,18 5,01 4,87

37.470 Z‐Nonacoseno 4,30 1,22 8,63 ‐ 7,35 3,06 ‐ 1,73 10,81 9,76 0,70 ‐ 8,72 7,63

37.532 Z‐Nonacoseno 0,19 2,40 5,57 23,18 3,26 12,61 21,69 7,96 4,85 5,45 15,49 22,03 11,26 8,59

37.761 Z‐Nonacoseno 9,02 1,12 1,63 ‐‐ 1,01 2,35 ‐ 1,37 1,57 1,91 ‐ ‐ 1,84 1,60

37.859 Z‐Nonacoseno 0,21 6,24 ‐ 0,12 ‐ ‐ 0,17 5,21 ‐ ‐ 1,07 2,00 1,35 1,95

38.251 Nonacosano 38,26 6,56 5,59 8,48 2,59 8,82 9,39 7,17 3,47 3,64 2,59 4,72 4,78 4,36

38.901 Metil Nonacosano ‐ ‐ 0,11 0,49 0,10 0,32 0,43 0,21 0,12 0,10 0,57 0,66 0,22 0,22

41.275 ZZ‐Hentriacontadieno 0,10 0,23 0,78 0,60 0,79 0,92 0,52 0,17 0,76 1,04 ‐ 0,22 1,17 1,58

56

TR Hidrocarboneto RV 1 RV 2 RV 3 RV 4 RV 5 RV 6 RV 7 RV 8 RV 9 RV 10 RV 11 RV 12 RV 13 RV 14

41.499 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 2,62 1,27 0,67 1,39 0,75 ‐ 0,48 1,00 1,49 ‐ 0,46 0,96 0,99

41.508 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ ‐ ‐ ‐ 0,21 0,74 0,83 1,26 0,07 ‐ ‐ ‐ 0,54 0,62

41.570 ZZ‐Hentriacontadieno ‐ 1,55 0,01 ‐ ‐ 0,19 0,13 0,87 ‐ 0,08 ‐ 0,27 0,26 0,31

41.840 Z‐Hentriaconteno ‐ 6,92 9,94 2,71 13,06 5,51 2,35 5,67 13,24 10,01 ‐ 1,61 6,63 5,68

42.010 Z‐Hentriaconteno ‐ 4,65 ‐ ‐ 1,29 2,27 6,67 3,99 ‐ 1,76 ‐ ‐ ‐ ‐

42.020 Z‐Hentriaconteno ‐ ‐ 2,78 6,66 1,71 4,78 ‐ 5,06 2,63 2,03 6,80 7,83 4,76 4,35

42.166 Z‐Hentriaconteno ‐ 1,21 ‐ ‐ ‐ ‐ ‐ 1,43 ‐ 0,57 ‐ ‐ ‐ ‐

42.256 Z‐Hentriaconteno 2,09 2,86 ‐ 0,05 ‐ ‐ 0,31 1,40 ‐ ‐ ‐ 0,79 0,30 1,09

42.592 Hentriacontano 1,34 6,44 1,35 0,73 1,75 1,46 0,59 4,87 1,01 0,81 2,97 0,38 0,54 0,39

43.568 ? 14,99 0,07 0,07 0,57 0,18 0,35 0,49 0,25 0,15 0,15 ‐ 0,85 0,19 0,28

43.935 ? 0,98 0,13 0,12 ‐ 0,30 ‐ ‐ ‐ 0,13 0,10 ‐ 0,14 ‐ 0,19

45.714 ZZ‐Tritriacontadieno ‐ 0,31 0,25 ‐ 0,99 0,14 ‐ ‐ 0,21 0,47 ‐ ‐ ‐ ‐

45.858 ZZ‐Tritriacontadieno ‐ 0,33 0,31 ‐ 0,61 0,03 ‐ 0,14 0,20 0,19 ‐ ‐ ‐ ‐

46.342 Z‐Tritriaconteno 0,89 3,11 1,69 0,07 5,24 0,62 ‐ 1,31 1,80 1,79 ‐ 0,25 0,438 0,46

46.601 ? 1,23 0,54 0,23 0,24 0,41 0,09 0,32 ‐ 0,18 0,29 0,84 0,67 0,240 0,37

47.317 ? ‐ 0,39 ‐ ‐ 0,11 ‐ ‐ 0,23 ‐ ‐ ‐ 0,52 ‐ ‐

“caracterização do perfil de hidrocarbonetos cuticulares

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