carrera de especializacion en biotecnologia industrial...
TRANSCRIPT
CARRERA DE ESPECIALIZACION EN
BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL
FCEyN-INTI
Materia de Articulación CEBI_E3
Cultivos Celulares
Docente: Erina Petrera
CEBI_E3_4: Aplicaciones industriales de los cultivos
celulares
ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Viabilidad: alteración de permeabilidad de membrana y/o
perturbación de las vía metabólicas se correlacionan con la
proliferación o supervivencia.
- Supervivencia: retención de la capacidad de división.
- Proliferación: incremento del número celular debido a la
división celular
ENSAYOS DE VIABILIDAD
- Dependen de la integridad de la membrana,
medida por la captación de un colorante para el cual
la célula es normalmente impermeable (azul tripán,
eritrocina).
- Dependen de la liberación de un colorante, que
normalmente es captado y retenido por células
viables (rojo neutro, diacetil-fluoresceína).
ENSAYOS DE MICROTITULACIÓN
Viabilidad: durante el tiempo
de experimentación
Supervivencia: se retira la
droga y se incuba durante
2/3 veces el tiempo de
duplicación celular
ENSAYOS DE PROLIFERACIÓN
- Son útiles pata determinar el efecto de
compuestos sobre la proliferación celular,
con una curva de crecimiento completa
- La droga a analizar debe agregarse luego
de que las células se pegan y a baja
confluencia celular
ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Metabolismo: basados en la microtitulación, miden
respuesta metabólica (enzimas, RNA, DNA).
Luminómetro
Fluorómetro
ENSAYOS DE CITOTOXICIDAD
- Transformación: sobrevida, en un estado alterado.
- Irritabilidad: una respuesta análoga a la inflamación,
alergia, irritación in vivo, difícil de cuantificar in vitro
(citoquinas en cultivos organotípicos).
Inmunohistoquímica ELISA
APLICACIONES INDUSTRIALES
DE LOS CULTIVOS CELULARES
ESCALADO EN SUSPENSIÓN
30-100 rpm
ESCALADO EN SUSPENSIÓN
EN CULTIVO CONTINUO
ESCALADO EN SUSPENSIÓN EN
CULTIVO CONTINUO: FIBRA HUECA
ESCALADO EN MONOCAPA
COMPARACIÓN DE DIFERENTES
METODOS DE CULTIVO
Botellas roller área de superficie 490 cm2/ botella
Microcarriers área de superficie
densidad normal
Superficie área/l
Equivalente en botellas
roller
6000 cm2/ g peso seco
5 g/l
30000 cm2
60 roller
Fibra hueca Tamaño
Superficie área fibra hueca
Equivalente en botellas
roller
40 x 40 x 4,5 cm2
9300 cm2
19 roller
CULTIVOS DE CÉLULAS ANIMALES
EN PROCESOS DE PRODUCCIÓN
- Procesos en los cuales el objetivo es la producción de
una sustancia, generalmente una molécula bioactiva y
también virus, y en los cuales las células cumplen la
función de medio de producción;
- Procesos en los cuales el objetivo es la producción de
las propias células, generalmente organizadas en tejidos
u órganos (desarrollo de la ingeniería de tejidos y cultivo de
stem cells).
1.- Anticuerpos monoclonales
2.- Fármacos naturales
3.- Fármacos recombinantes
4.- Hormonas
5.- Vacunas virales
PRODUCTOS DE CULTIVOS
DE CÉLULAS ANIMALES
Hibridomas Obtención de hibridomas
1.- Anticuerpos monoclonales
2.- Fármacos naturales
3.- Fármacos recombinantes
4.- Hormonas
5.- Vacunas virales
PRODUCTOS DE CULTIVOS
DE CÉLULAS ANIMALES
PRODUCTOS RECOMBINANTES
COMO TERAPÉUTICOS HUMANOS
CUIDADOS
1.- Que no desencadenen respuesta inmune;
2.- Seleccionar el tipo de célula en el cual se va a expresar
el gen;
3.- Monitorear cuáles son las modificaciones post-
transcripcionales y/o post-traduccionales que pueden
condicionar su actividad biológica o su antigenicidad.
Producción de virus
Obtención de stocks de virus para purificación de partículas virales o
subcomponentes:
• Producción de vacunas
Virus vivo
Virus inactivado
Virus recombinante
Subunidades
PRINCIPALES APLICACIONES DEL
USO DE CULTIVOS CELULARES EN
VIROLOGÍA
Cuando el objetivo es la
producción de las
propias células…
CULTIVO DE CÉLULAS TRONCALES
HEMATOPOYÉTICAS O STEM CELLS
STEM CELLS DE EMBRIÓN: las de ratón han sido
usadas in extenso para estudiar diferenciación,
porque desarrollan una variedad de diferentes tipos
celulares (músculo, hueso, nervios).
STEM CELLS MULTIPOTENCIALES DE ADULTO:
se aíslan de médula ósea, hígado, cerebro,
músculo y cordón umbilical.