厚生科学研究費補助金(厚生科学特別研究事業)

分担報告書

Thl/Th2型-ルパーT細胞機能-のシジウムの影響に関する研究

分担研究者　　豊島　聴　　星薬科大学教授

研究要旨　methylgallateよりTh2サイトカン(ILl4)産生抑制に関し､

選択性及び抑制活性の高い化合物を検索するため､ methyl gallate及びその

類縁化合物(game acid､ ethyl ganate､ propyl gauate)についてTh2サイ

トカンであるIL-4の産生に対する影響を検討した｡いずれの化合物も抗

CD3抗体刺激マウス牌リンパ球におけるIL-4の産生を抑制したが､ Thlサ

イトカンであるIFN-†の産生にはあまり影響しなかった｡しかし､gaucacid

はIL-4産生を抑制する濃度で細胞毒性を示したため､毒性を示さない量で

抗アレルギー作用を期待できないと考えられた｡また､ propyl ganateは接

触性皮膚炎などⅣ型アレルギーを誘発することが報告されている｡従って､methyl gauateとethyl ganateが抗アレルギー作用を示す化合物として期

待されたが､ ethyl gallateはmethyl ganateより低濃度でⅠし4産生を抑制

したことから､その有用性が示唆された｡

A.研究目的

昨年度までに､シジウム抽出物より単

離･同定したmethylgdlateは､ I型アレ

ルギー発症に関わるTh2サイトカンである

Ⅰし4の産生を選択的に抑制するとともにⅠ

型アレルギーモデルマウスにおけるIgE産

生を抑制することを報告した｡本年度はmethyl gallate　より､ Th2　サイトカン

(IL-4)産生抑制に関し､選択性及び活性の高い化合物を見出すことを目的に､

methyl gallateの類縁化合物について検討

を加えた｡

B.研究方法

抗　CD3　抗体刺激マウス牌T細胞にmethyl gallateあるいは､その類縁化合物

(gallic acid､ ethyl gallateあるいはpropyl

gallate)を加え､ 2日間培養する｡培養後の上清中に含まれるIFN-† (Thlサイトカ

ン)とIL-4 (Th2サイトカン)を､ ELISA

法により測定した｡

C.研究結果

ethyl ganateとpropyl ganteはlLIg/ml

の濃度で､ IL-4産生を抑制した(図1A)｡

この濃度のethyl gallateは､ IFN-†産生に

影響しなかったが､propyl ganateは弱い産

生抑制作用を示した(図1B)｡ 10Llg/mlの

濃度では､ gallic acid､ methyl gal1ate､ ethyl

gallate､ propyl ganateのどれもが､ IL-4

産生抑制作用を示した(図2A)｡一方､こ

の濃度では､ methyl gauate　と　propyl

gallateが弱いIFN-†産生抑制作用を示した

(図2B)｡ 100トLg/mlの濃度では､ gauic

acid､ methyl ga皿ate､ ethyl ganate､ propyl

ganateのどれもが､強くIL-4産生を抑制した(図3A)｡一方､この濃度ではmethyl

gZ山ateとpropyl ganateに弱いが有意な

IFN-†産生抑制作用が見られた(図3B)｡

なお､ 100LIg/mlの濃度では､ ganc acidに

細胞毒性が見られた｡以上の結果は､花粉症などⅠ型アレルギーの発症に関わるTh2

サイトカインであるIL-4の産生をethyl

ganateが､ methyl ganate及び他のmethyl

gallate類縁化合物よりも選択的に抑制す

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ることを示唆するものであった｡

D.考察

10トIg/mlの濃度では､一昨年報告したよ

うに､ methyl ganateは比較的選択的に

ILl4産生を抑制したが､ ethyl gallateおよ

びpropyl ganateもこの濃度でIL-4産生を

抑制した｡しかし､ 1帽/mlの濃度では､ethyl

gdlateとpropyl gallateは有意に(特に

ethyl ga皿ate) Ⅰし4産生を抑制したが､

methyl gdlateは抑制しなかった｡この濃

度で､ ethyl ganateは､ IFN-†産生に全く影

響せずpropyl gal1ateは､弱い産生抑制を

示すのみであった｡従って､ ethyl gauate

とpropyl gallateはmethyl ganateより選

択性及び活性の高いⅠし4産生抑制物質と

考えられた｡しかし､ propylganateは､接

触性皮膚炎のようなⅣ型アレルギーを誘発

することが知られているので､ propyl

gallateをアレルギー治療-応用することは不可能と考えられ､今後､本研究結果のヒト-の応用はethyl gallateを用いて調べ

るべきと思われた｡

E.結論

花粉症などⅠ型アレルギーの発症に関わる　Th2　サイトカンであるⅠし4の産生を

ethyl ga皿ateが､ methyl ga皿ateよりも低

濃度かつ選択的に抑制することが明らかとなった｡

F.研究発表

1.　論文発表

小菅崇､宍倉弘記､北中進､豊島聴:-ルパーT細胞のサイトカイン産生とアレ

ルギー治療に対するフトモモ科シジウム

からの抽出物の影響(2000)

YAKUGAXU ZASSHI, 120(4), 408-412

2.学会発表

加藤慶､小菅崇､北中進､豊島聴:methyl

gallateおよび類縁物質によるⅠ型アレルギー抑制作用の検討､日本薬学会120年

会(岐阜)､ 2000年3月

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A.培養上溝中の

JL-4のt(pdmL)

B.培養上溝中の

control- control+　GIIIic Nothyr Ethyl Propyl

■Gid f一日At●　■■llJte LJMJte

]FNlTの霊(pg/mL) I 0

0contro卜coTltrOl+　G-llic A-●thyl Ethyl Propyl

JCid f+HJte J+lLJt+　LtllJt4

図･1抗cD3抗体刺激マウス肺細胞より産生されるサイトカインのtに対するMethyJ gaHate､類縁物質(1岬/mL)の影IF

30

20

8.培養上溝中の

IFNrの量b〆mL) 1 0

0

contTO1 - contTOI +　糾ic

Jd叫-i_　　_5>仙j SJ叫.i1.-a

contro卜　control +　G-=c ～+thyJ　【thyJ PropyJ

JCiJ t■lbte lJrl●t+　(+lld●

国.2抗cD3抗体刺激マウス肺細胞より産生されるサイトカインの量に対するMethyJ gallate､類縁観賞(lo仲/mL)の影響

A,培養上溝中の

)L-4の量(pg/mL)

30

20

a.培養上浦中の]FNrの量(pg/mL) 10

0

control - corltrOl ◆　GaHic HethyJ Ethyl Propyl

JCid pllJt●　　E+ll■t●　　f+lfJlt●

図.3抗cD3抗体刺激マウス肝細胞より産生されるサイトカインの量に対するMethyl ga=ate､類縁物葺く1 00岬/mL)の影響

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