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要求使用单残留方法的欧盟农药残留参比实验室（EURL-SRM）CVUA Stuttgart, Schaflandstr. 3/2, DE-70736 Fellbach, Germany 网址：www.eurl-pesticides.eu，电子邮箱：[email protected]
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欧洲委员会 欧盟农药残留参比实验室
单残留方法
结合甲醇同步提取采用 LC-MS/MS 对植物性食物中多种高极性农药进行快速分析的方法（QuPPe 方法）
- 8.1 版（2015 年 3 月，文件记录，见第 58 页） 作者：M. Anastassiades；D. I. Kolberg；E. Eichhorn；A. Benkenstein；S. Lukačević；D. Mack；C. Wildgrube；I. Sigalov；
D. Dörk；A. Barth
注：从 V7 到 V8 的变更以黄色突出显示，从 V8 到 V8.1 的变更以蓝绿色突出显示。
目录
1 范围和简述 22 仪器和耗材 23 化学品 44 免责声明 65 程序 75.1 样品制备 75.2 提取 / 离心 / 过滤 75.3 空白提取物 95.4 回收实验 95.5 校准标准品的制备 95.6 LC-MS/MS 测量 125.6.1 实用信息：CVUA Stuttgart 目前常用的方法 135.6.2 方法 1.1 “Glyphosate & Co. AS 11” 145.6.3 方法 1.2 “Glyphosate & Co. AS 11-HC” 175.6.4 方法 1.3 “Glyphosate & Co. Hypercarb” 205.6.5 方法 1.4 “PerChloPhos” 285.6.6 方法 2 “Fosetyl and Maleic Hydrazide” 295.6.7 方法 3 “Amitrole & Co.” 315.6.8 方法 4.1 “Quats & Co. Obelisc R” 335.6.9 方法 4.2 “Quats & Co. BEH-Amide” 355.6.10 方法 5 “Quats & Co. MonoChrom MS” 375.6.11 方法 6 “Streptomycin and Kasugamycin 385.6.12 方法 7 “Morpholine, Diethanolamine and Triethanolamine 395.6.13 方法 8 “TDMs 405.7 校准和计算 416 性能数据 457 参考文献 46
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1. 范围和简述
本文叙述了诸如水果（包括干果）、蔬菜、谷物及其加工产品以及蜂蜜等植物性食物中存留的极性农药残留物
的分析，这些残留物无法通过 QuEChERS 方法进行检测。
残留物在经过加水调节并加入酸化甲醇后从测试部分中提取出来。混合物经过离心、过滤并采用 LC-MS/MS 直接进行分析。这一方法可针对不同农药组合为 LC-MS/MS 同时分析提供多种选择。在多数情况下，定量检测在目标分析物的同位素标记类似物的帮助下实行，这些类似物即为内部标准品（ILIS）。到目前为止，这些内部标准品可在程序的开始阶段直接添加到测试部分中，以补偿能够对回收率产生影响的任何要素，如样品
制备过程中的容积偏差、分析物损失以及测量过程中的基体效应。
2. 仪器和耗材
2.1. 强大的样品处理设备
例如 Stephan UM 5 或 Retsch Grindomix GM 300。
2.2. 50mL 离心管（带螺旋盖）
例如：a) 50mL 可重用 Teflon® 离心管（带螺旋盖）（如美国 Nalgene/Rochester；Oakridge，货号 3114-0050）或 b) 50 mL 一次性离心管（如德国 Sarstedt/Nümbrecht，114x28 mm，PP，货号 62.548.004）。
2.3. 自动移液管
适用于处理容积为 10 至 100 μL、200 至 1000 μL 以及 1 至 10 mL 的液体。
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2.4. 10 mL 溶剂分配器
适用于酸化甲醇 (3.6)。
2.5. 离心机
适用于程序（2.2）中采用的离心管，其转速可达到 2500 rpm 以上。
2.6. 针头式过滤器
例如：纤维素混合酯过滤器 0.45 µm 孔径，聚酯过滤器，0.45 µm 孔径（均购自德国 Macherey-Nagel, Düren）。
注：
- 上述聚酯过滤器中可检测到大量的高氯酸盐和氯酸盐。纤维素混合酯过滤器对这两种化合物均较为合适。在该适用性测试中，将考虑最坏的情况，即提取物堵塞过滤器而导致大体积（如 200 µL）无法通过，而仅小体积（如 200 µL）通过过滤器实现洗脱。这类堵塞情况通常可在过滤诸如工业碾磨谷物、鸭梨和菠萝等商品时遇到。此外，需要特别注意的是，如果过滤器用于过滤以某一检测浓度进行稀释后的提取物，那么在计算样品浓度时应以相应的倍数将其增加回来。
2.7. 注射器
例如 2 或 5 mL 一次性聚丙烯注射器，适用于上述第 2.6 条所述的过滤器。
2.8. 自动样品瓶
适用于 LC 自动进样器
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快、链霉素和草甘膦），则使用塑料瓶 1。
2.9. 容量瓶（带塞子）
适用于制备储备溶液和工作溶液。如 20 mL、25 mL、50 mL、100 mL 玻璃烧瓶。
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快、链霉素和草甘膦），则使用塑料烧瓶。
2.10. LC-MS/MS 仪器
配备 ESI 离子源和合适的色谱柱，详见第 5.6.2 至 5.6.12 章。
1 需使用塑料容器的化合物清单可能并未列全（此备注适用于整篇文档）。当溶液的含水量较低且酸度较低时，这种与玻
璃表面的相互作用表现得更为明显。
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3. 化学品
除非另有说明，请使用公认的分析级试剂。采取一切可能的预防措施防止对水、溶剂、吸附剂、无机盐等造
成污染。
3.1. 水（去离子）
3.2. 甲醇（HPLC 质量）
3.3. 乙腈（HPLC 质量）
3.4. 甲酸（浓缩；>95%）
3.5. 乙酸（浓缩；>98%）
3.6. 酸化甲醇
使用移液管吸取 10 mL 甲酸（3.4），将其滴入 1000 mL 容量瓶中，再注入甲醇，补充剩余容积（3.2）。
3.7. 一水合柠檬酸（分析纯）
3.8. 二甲胺
例如 Fluka 40%（货号 38940）
3.9. 甲酸铵（分析纯）
3.10. 无水柠檬酸三铵（分析纯）
3.11. 氢氧化钠（分析纯）
3.12. 十水四硼酸钠（分析纯）
3.13. 干冰
可使用工业级干冰，应定期检查，确保不含相应浓度的农药。
3.14. 农药标准品
已知纯度。
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3.15. 农药储备溶液
如水溶性溶液（如水（3.1）、甲醇（3.2）、酸化甲醇（3.6）、乙腈（3.3）或其混合物）中 1 mg/mL 的农药标准溶液（3.14）。请参见表 15，了解典型采购标准品与分析物之间的换算系数；参见表 16，了解用于制备储备溶液所建议使用的溶剂。
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快、链霉素和草甘膦），请使用塑料烧瓶和塞子。
请记住，部分标准品作为盐或水合物出售。有关部分典型的换算系数，请参见表 15。
3.16. 农药工作溶液/混合物
根据需要使用水溶性溶剂稀释一种或多种农药的储备溶液（3.15）制备的适当浓度溶液，以在回收实验（5.4）中加入样品或制备校准标准品（5.5）。请参见附件中的表 16，查看相关建议。
3.17. 内部标准品（ISs）
有关示例，请参见表 17。
3.18. IS 储备溶液
如水溶性溶液（甲醇、乙腈、水或其混合物）中 1 mg/mL 的 ISs 溶液（3.17）。请参见附件中的表 16，了解有关溶剂的建议。
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快、链霉素和草甘膦），请使用塑料烧瓶和塞子。
请记住，部分标准品作为盐或水合物出售。有关部分典型的换算系数，请参见表 15。
注：
- 一般来说，只要最终提取出来的 ILIS 的浓度可足够产生良好的测量信号且不会受到共洗脱基质组分的干扰，那么 ILIS 溶液的绝对浓度并不重要，重要的是，ILIS 标准品中天然分析物的含量（不论其是作为采购标准品的杂质出现还是在实验室储备 ILIS 溶液或样品制备过程中产生）需达到足够低的浓度，以排除假阳性结果的产生或避免对定量产生重大影响。为进行定量，最重要的是提取前添加至样品中的 ILIS 的绝对量（或添加至样品提取物中的单独等份量）与添加至校准标准液中的 ILIS 绝对量之间的比值应为用于计算中的值。
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3.19. 提取前用于样品加标的 IS 工作溶液 I（IS-WS I）
使用水溶性溶剂稀释一种或多种 IS 储备溶液（3.18）制备的适当浓度溶液。有关溶剂的建议，请参见表 16；有关浓度的建议，请参见表 18。
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快和草甘膦以及双氢链霉素的 ILIS），请使用塑料烧瓶和塞子。在存在水（尤其是较高 pH 值）的环境下，膦酸 18O3 将逐渐转化为 18O216O1、18O16O2 以及最终的 16O3（天然）膦酸。EURLs 提供的 16O3 膦酸标准溶液应最好在乙腈中稀释，这样可确保其稳定性更加持久。
3.20. 制备校准标准品的 IS 工作溶液 II（IS-WS II）
使用水溶性溶剂稀释 IS-WS-I（3.19）制备的适当浓度溶液。有关溶剂的建议，请参见表 16；有关浓度的建议，请参见表 18。
如果存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快和草甘膦以及双氢链霉素 ILIS），请使用塑料烧瓶和塞子。另请参阅次备注 3。短期使用（如最多一个月）时，膦酸 ILIS 可在酸化甲醇（3.6）中稀释。
3.21. LC-MS/MS 流动相
详情请见第 5.6.2 至 5.6.13 章。
4. 免责声明
本方法引用了一些适用于所述程序的市售产品和仪器的商品名。所提供的信息旨在为使用该方法的用户提供
便利，并不能构成 EURL 对所命名产品的认可。本方法的应用可能涉及危险物品、危险操作和危险设备。因此，在使用本方法前，用户有责任创建适当的安全与健康惯例。程序中所用的任何耗材和化学药剂均应定期
执行检查（如试剂空白测试），确保待测分析物的相应浓度。
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5. 程序
5.1. 样品制备
为从实验室样品中获得具有代表性的测试部分，需要按各相应规定和指南进行。对于水果和蔬菜，最好采用
低温研磨法（如使用干冰），以尽量减少降解，缩小粒径，提高均匀性和农残可及性。
注：
- 对于干货（如谷物、豆类），小粒径提高了封闭在种子内部的农残的可及性。因此，最好进行细磨（如粒径 ＜500µm）。颗粒越大，达到定量提取率所需的提取时间越长。
- 对于干果制品和类似商品（含水量＜30%），建议采用以下程序：将 850 g 冷水加入 500 g 冻干果中，使用强力搅拌机（2.1）将混合物搅拌均匀，如果可能，加入干冰，防止或减缓任何化学反应和酶促反应（3.13）。13.5 g 匀浆相当于 5 g 样品。
5.2. 提取 / 离心 / 过滤
5.2.1. 称取样品匀浆（5.1）中具有代表性的部分（ma），将其注入 50 mL 离心管（2.2）。对于新鲜果蔬及果汁，取 10 g±0.1 g 的均质样品。对于干果、干菜、干蘑菇，根据 5.1，取 5 g ± 0.05 g 或 13.5 g ± 0.1 g 再水化均质材料（相当于 5 g 样品）。对于谷类、干豆类和蜂蜜，也要取 5 g ± 0.05 g 匀浆。
注：
- 对于提取较多的商品（如香料或发酵制品）或因吸水能力极强而不能充分提取的商品，可能需要少量样品。
5.2.2. 根据表 19 中的指示加水，达到总含量约 10 g（3.1）。
注：
- 若采用再水化商品（错误!未找到信息引用源），则无需进一步的水量调整。
- 若不使用 ISs 或在提取物等分后加入 ISs，则须将水量调整到 10g。如在等分前已加入适量 ISs，则水量调整可有可无，对于含水量 ≥80% 的商品，可忽略此步骤（见表 19）。
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5.2.3. 加入 10 mL 酸化甲醇（3.6）和 50 µL 含同位素标记类似物的一种或多种待测分析物的 IS-WS I（3.19）（所添加 IS 的质量 = mIS 样品）。
注：
- 考虑到样品的天然含水量和 5.2.2 中加入的水，由此产生的提取量总计约 20 mL（如果采用 10 g 样品进行提取，则相当于约 0.5 g/mL 样品）。若未使用 ISs，最终目标应使液相总体积尽可能接近 20 mL。请注意，表 19 中的水量调整为近似调整，当甲醇与水混合时，其体积浓缩约 2.5%。在任何情况下，水量调整都将有助于使与 20 mL体积偏离相关的偏差减少到可接受水平。
- 为进行筛选，假设 1 mL 提取物正好相当于 0.5 g 样品，则 IS 还可添加到样品提取物等份中（如 1 mL，见 5.2.8）。这样便可大大减少每份样品中所添加的 IS 的量（例如，如果加入到 1 mL 提取物中，则减少 20 倍）。在此步骤中加入的 IS 将补偿基质效应，包括保留时间漂移。然而，定量结果应被视为暂定结果。为使结果更加精确，应采用步骤 5.2.3 中加入的 IS 对样品进行重新分析。
5.2.4. 封闭管，使用机械摇动器用力摇动。生鲜产品摇动 5-15 分钟，干货摇动 15-30 分钟。手摇时摇动 1 分钟。对于干燥品，手摇 1 分钟后，应浸泡 15-30 分钟，随后再使劲手摇 1 分钟。
注：
- 对于干燥品（如谷物、豆类），就提取性而言，粒径起到重要的作用。如果相当一部分颗粒超过 500 µm，则摇动或浸泡时间可能延长。
5.2.5. 对于百草枯和敌草快，摇动 1 分钟后，要在 80℃ 水浴中热处理 15 分钟，然后再摇 1 分钟，待样品冷却至室温后进行离心。
注：
- 室温下利用含 1% 甲酸的甲醇进行 1 分钟提取很适合百草枯和敌草快筛选。实验显示，针对小麦和土豆中所产生的敌草快和百草枯残留，80℃ 时使用相同的提取溶剂提取 15 分钟可提供定量提取率。在对含有所产生的敌草快残留的扁豆进行的实验中，须使用更强的提取溶剂（甲醇/盐酸水溶液 0.1 M（1:1）），使用与上述相同的体积、提取温度和提取时间2。
5.2.6. 离心（如以 4000 rpm 持续离心 5 分钟）。
5.2.7. 使用针头式过滤器（2.6）过滤一等份提取物（如 3 mL），将其放入可密封贮存容器中。
注：
2 Kolberg DI, Mack D, Anastassiades M, Hetmanski MT, Fussell RJ, Meijer T, Mol HG. Anal Bioanal Chem. 404(8):2465-74 (2012); Development and independent laboratory validation of a simple method for the determination of paraquat and diquat in potato, cereals and pulses.
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- 某些类别商品（如精细研磨谷物、梨、菠萝）的提取物会造成过滤困难。为避免这种情况，将（5.2.4）或（5.2.5）的提取管放入冷藏箱、离心机和过滤器中数小时。
5.2.8. 根据需要，将过滤提取物的一等份或多等份（如每等份 1 mL）转移到自动进样瓶（2.8）中
5.2.7 和 5.2.8 注释：
- 如果存在或可能存在易于与玻璃表面相互作用的农药（如百草枯、敌草快和草甘膦以及双氢链霉素的 ILISs），则使用塑料贮存容器/样品瓶。
5.3. 空白提取物
按照 5.2 所述，使用合适的空白商品（不含待测分析物的可检测残留物）进行样品制备，忽略 ISs 的添加。
5.4. 回收实验
称取适当比例（见 5.2.1）的空白商品匀浆，倒入 50 mL 离心管（2.2），添加合适的农药工作溶液（3.16 和表 16）。
在加入水或溶剂前，直接添加进基质中。使用少量农药工作溶液（如 50-300 µL），避免稀释过强。严格按照 5.2 所述进行样品制备。
5.5. 制备校准标准品
5.5.1. 溶剂校准标准品
表 1 为制备溶剂校准标准品的典型移液方案。5.7.1 显示了当使用 IS 时，样品中农药质量分数 WR 的计算。
注：若采用溶剂校准，则定量用 ILISs 必不可少，因为 IS 可补偿基质相关的所有信号抑制/增强。
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5.5.2. 基质匹配型校准标准品
将合适等份的空白提取物（5.3）转移到自动进样瓶，按照表 1 所示继续操作。5.7.1.1 和 5.7.2.1 分别为使用和不使用 ILIS 时，使用基质匹配校准标准品对样品中农药的质量分数 WR 进行的计算。
表1：制备校准标准品的典型移液方案
校准标准品
溶剂型（5.5.1） 基质匹配型（5.5.2）
使用 IS4 不使用 IS5 使用 IS4
校准浓度 µg 农药/mL 或 µg 农药/“IS-部分”1
0.056 0.1 0.25 0.05 0.1 0.25 0.05 0.1 0.25
空白提取物（5.3） - - - 900 μL 900 μL 900 μL 850 μL 850 μL 850 μL
水（3.1）和酸化甲醇（3.6）1:1（v/v）混合
900 μL 850 μL 900 μL 50 μL - 50 μL 50 μL - 50 μL
农药工
作溶液
（3.16）2
1 μg/mL 50 μL 100 μL - 50 μL 100 μL - 50 μL 100 μL -
5 μg/mL - - 50 μL - - 50 μL - - 50 μL
IS-WS II（3.20）1,3 50 μL 50 μL 50 μL - - - 50 μL 50 μL 50 μL
总体积 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL 1000 μL
1一个 IS 部分相当于 50 µL IS-WS II 中包含的 IS 质量（在特定示例中，添加到每份校准标准品中）。
2 农药工作溶液的浓度应足够高，以避免空白提取物的过度稀释，防止基质效应偏差的产生。
3对于 1 mL 校准标准品，建议将 IS-WS I（3.19）稀释 20 倍，制备 IS-WS II（3.20）。制备校准标准品时可采用与 5.2.3 相同的体积和移液方案。
4当采用 IL-ISs 时，基质匹配和体积调整可有可无，因为 IS 可补偿任何基质相关的信号抑制/增强。这里也可采用溶剂校准。重要的是，a）农药和 IS 在相应校准标准品中的质量比和 b）加入样品（5.2.3）中的 IS 质量与加入校准标准品（5.5.1 和 5.5.2）中的 IS 质量比已知且有记录。为方便起见，在所有校准浓度中，后者的质量比应保持恒定（例如在制备 1 mL 校准标准品时，质量比为 20:1）。
5若没有/不使用 ILISs，则通过基质匹配的标准品 表 1）或通过标准品添加法（5.5.3）进行的基质匹配对于补偿测量中的基质效应尤为重要。在这两种情况下，样品提取物的总体积假定恰好为 20 mL，转化为 0.5 g/mL 样品当量。
6当使用 10 g 测试部分时，校准浓度 0.05 相当于 0.1 mg 农药 /kg 样品，或当使用 5 g 测试部分时，校准浓度 0.05 相当于 0.2 mg/kg 样品。
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5.5.3. 标准品添加方法
在没有合适的 ISs 可用时，标准品添加方法是用于补偿基质诱导的增强或抑制现象的有效方法。由于这一程序涉及到线性外推法，在整个相关浓度范围内，农药浓度和检测信号须显示呈线性关系。该程序还要求掌握
样品中的近似（估计）残留量（wR（近似））。近似残留量可通过初步分析得到。
制备 4 等份最终提取物，将分析物添加进其中 3 份中，添加量逐渐增加。在选择待添加的量时，应确保保持在线性范围内。应避免使添加水平过于接近预期的分析物水平，防止测量误差对斜率（用于计算分析物浓
度）产生太大影响。如果浓度超出线性范围，则指示用提取溶剂稀释全部 4 种提取物。
制备一份分析物工作溶液（3.16），其浓度应确保 50 或 100 µL 溶液中含最少的待添加分析物。
示例 A：样品瓶 1）无添加；样品瓶 2）0.5 x wR（近似），样品瓶 3）1 x wR（近似），样品瓶 4）1.5 x wR（近似），
示例 B：样品瓶 1）无添加；样品瓶 2）1 x wR（近似），样品瓶 3）2 x wR（近似），样品瓶 4）3 x wR（近似）。
通过加入相应溶剂量调整所有样品瓶内的体积。
表 2 为根据示例 B 给出的示例。5.7.2.2 显示了对样品中农药质量分数 WR 的计算。
表 2：标准品添加方法的典型移液方案（针对含 0.5 g/mL 样品当量和 0.5 mg/kg 估计残留量（wR（近似））= 0.25 µg/1000 µl 的样品提取物）
添加 样品瓶 1 样品瓶 2 样品瓶 3 样品瓶 4
样品提取物的体积 1000 µL
（= 0.5 g 样品）
1000 µL
（= 0.5 g 样品）
1000 µL
（= 0.5 g 样品）
1000 µL
（= 0.5 g 样品）
IS 无 无 无 无
农药工作溶液的添加体积（含5 µg/mL）（3.16）
- 50 µL 100 µL 150 µL
添加进每个样品瓶中的农药的质量
（m农药校准混合物） 0.25 µg 0.5 µg 0.75 µg
溶剂体积 150 µL 100 µL 50 µL -
最终体积 1150 µL 1150 µL 1150 µL 1150 µL
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5.6. LC-MS/MS 测定
可采用任何合适的 LC-MS/MS 条件。下面给出了一些典型的仪器测量条件。表 3 给出了本文件所建议的 LC-MS/MS 条件的概述：
表 3：本文件中建议用于 QuPPe 方法的各种方法的概述及范围：
M 1.1 M 1.2 M 1.3 M 1.4 M 2 M 3 M 4.1 M 4.2 M 5 M 6 M 7 M8ESI 模式 阴性 阴性 阴性 阴性 阴性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性 分离原理 阴离子交
换 阴离子
交换 碳 碳 HILIC HILIC HILIC HILIC HILIC HILIC HILIC 碳
色谱柱类型 AS 11 AS 11-HC HypercarbHypercarbObelisc-RObelisc-RObelisc-RBEH-Amide PFP Obelisc-R Trinity
P1 Hypercarb
阴性模式 乙烯利 NT NT NT NT NT NT NT - NT HEPA NT NT NT NT NT NT NT - NT草铵膦 NT NT NT NT NT NT NT - NT N-乙酰基-草铵膦 NT NT NT NT NT NT NT - NT MPPA NT NT NT NT NT NT NT - NT草甘膦 NT NT NT NT NT NT NT - NT AMPA NT NT NT NT NT NT NT - NT膦酸 () （） NT NT NT NT NT NT - NT N-乙酰基-氨甲基膦酸
NT NT NT NT NT NT NT NT - NT
乙膦酸-Al - NT NT NT NT NT NT * NT 马来酰肼 - - NT NT NT NT NT NT * NT 高氯酸盐 NT - NT NT NT NT NT * NT 氯酸盐 NT - NT NT NT NT NT NT * NT 双丙氨膦 NT NT NT NT NT NT NT NT NT - NT 三聚氰酸 NT NT NT NT NT NT NT NT NT * NT
阳性模式 杀草强 NT NT - NT NT - NT NT NT NT ETU NT NT NT NT - NT NT NTPTU NT NT NT NT - NT NT NT灭蝇胺 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 三钠 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 丁酰肼 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 矮壮素 NT NT NT NT NT NT NT 助壮素 NT NT NT NT NT NT NT 野燕枯 NT NT - NT NT NT NT NT 霜霉威 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 三聚氰胺 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 敌草快 NT NT - NT NT NT NT NT NT NT 百草枯 NT NT - NT NT NT NT NT NT NT N，N-二甲肼 NT NT - NT NT NT NT NT NT NT 沙蚕毒素 NT NT NT NT NT NT NT NT NT 链霉素 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 春雷霉素 NT NT NT NT NT NT NT NT NT NT 吗啉 NT NT NT NT NT NT （） （） NT NT NT 二乙醇胺 NT NT NT NT NT NT （） （） NT NT NT 三羟乙基胺 NT NT NT NT NT NT （） （） NT NT NT 1，2，4-三唑 NT NT NT NT NT NT （） - NT NT NT 三唑-丙氨酸 NT NT NT NT NT NT （） - NT NT NT 三唑-醋酸 NT NT NT NT NT NT （） - NT NT NT 三唑-乳酸 NT NT NT NT NT NT NT - NT NT NT NT = 未在相应章节所示条件下测试，（）= 可能，但是由于基质效应或分离不足或灵敏度有限或缺乏用于正确识别的信息，效果受到影响，“-“ 在所述条件下对分析进行了测试，但分析效果较差。 *使用梯度（5 分钟内 98% B -> 60% B，保持 2 分钟）
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单残留方法
5.6.1. 实用信息：CVUA Stuttgart 目前常用的方法
方法 物质的特殊说明 LC-MS/MS 注解
M1.3 "Glyphosate & Co. Hyper-carb” （见 5.6.3）
草甘膦 AMPA N-乙酰-AMPA 乙烯利 HEPA 草铵膦 N-乙酰-草铵膦 MPPA 乙膦酸-Al 膦酸（第一次筛选） 马来酰肼 高氯酸盐（第一次筛选） 氯酸盐（第一次筛选） 三聚氰酸 双丙氨膦
Agilent 1200 ABSciex
QTRAP 5500
除双丙氨膦和 N-乙酰-AMPA 乙烯利外，通过溶剂校准和 ILISs 进行评价
M1.4 "PerChloPhos” （见 5.6.5）
高氯酸盐（定量） 氯酸盐（定量） 膦酸（定量）
Agilent 1200 ABSciex
QTRAP 5500
如果按 1.3 筛选呈阳性，则采用此方法
1:5 稀释 通过溶剂校准和 ILISs 进行评价
M4.1 “Quats & Co. Obelisc R” （见5.6.8）
百草枯（针对特定商品） 敌草快（针对特定商品）
Waters Acquity UPLC I-Class ABSciex
QTRAP 5500
通过基于基质的校准和 ILISs 进行评价
M6 "Streptomycin, Kasugamycin” （见 5.6.10）
链霉素 春雷霉素
Agilent 1200 ABSciex
QTRAP 5500
对所选商品的季节性分析 通过溶剂校准进行评价（使用双氢链
霉素作为链霉素的 IS）
M4.2 "Quats & Co. Amide” （见 5.6.8）
杀草强 ETU 矮壮素 助壮素 丁酰肼 PTU 灭蝇胺 三甲基锍 沙蚕毒素 野燕枯 三聚氰胺 霜霉威 吗啉（第一次筛选） 二乙醇胺（第一次筛选） 三乙醇胺（第一次筛选）
Waters Acquity UPLC I-Class ABSciex
QTRAP 5500
通过基质校准和 ILISs 进行评价（野燕枯除外）
M7 "Morpholine, Diethanola-mine, Triethanolamine” （见 5.6.11）
吗啉（定量） 二乙醇胺（定量） 三乙醇胺（定量）
Waters Acquity UPLC I-Class ABSciex
QTRAP 5500
如果按 4.2 筛选呈阳性，则采用此方法
通过溶剂校准和 ILISs 进行评价
M8 "TDMs" （见5.6.12）
1，2，4-三唑 三唑-丙氨酸 三唑-醋酸 三唑-乳酸
Waters Acquity UPLC I-Class ABSciex
SelexION Q-Trap® 5500
采用此法来采集食品中 TDM 浓度的数据
通过溶剂校准和 ILISs 进行评价
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单残留方法
5.6.4. 方法 1.3“Glyphosate & Co. Hypercarb”
表 6：针对乙烯利、HEPA（乙烯利代谢物）、草甘膦、AMPA（草甘膦代谢物）、N-乙酰-AMPA（草甘膦代谢物）、草铵膦、MPPA（草铵膦代谢物）、N-乙酰-草铵膦（草铵膦代谢物）、三乙膦酸铝、膦酸（三乙膦酸代谢物）、马来酰肼、高氯酸、氯酸盐、氰尿酸和双丙氨膦所建议的 LC-MS/MS 条件。
仪器参数 条件
电离模式 ESI 阴
色谱柱/温度 Hypercarb 0 2.1 x 100 mm 5µm（部件号 35005-102130）；40°C 预柱 Hypercarb 保护柱 2.1 x 10 mm 5µm（部件号 35005 102101） 预过滤器 如 Supelco column saver 2.0 µm 过滤器（可选）
淋洗液 A 1% 醋酸水溶液 + 5% 甲醇
淋洗液 B 1% 醋酸甲醇溶液
梯度 %A 流量 [mL/min] 时间[min] 100 0.2 0 70 0.2 10 70 0.4 11 70 0.4 18 10 0.4 19 10 0.4 22 100 0.2 22.1 100 0.2 30
进样体积 5 µL
校准标准品和浓度 如 0.05 或 0.1 µg /IS-部分* + 报告界限的浓度
获得的质量转化（m/z） 化合物 质量转化（m/z） 草甘膦 草甘膦-13C2，15N（ILIS）
168/63, 168/124, 168/150, 168/81 171/63
AMPA** AMPA-13C，15N（ILIS）
110/63, 110/79, 110/81** 112/63
N-乙酰-AMPA 152/63, 152/79, 152/110
乙烯利 乙烯利-D4（ILIS）
143/107, 143/79, 145/107 147/111
HEPA HEPA-D4（ILIS）
125/79, 125/95, 125/63 129/79
草铵膦 草铵膦-D3（ILIS）
180/63, 180/136, 180/85, 180/95 183/63
N-乙酰-草铵膦 N-乙酰-草铵膦-D3（ILIS）
222/63, 222/59, 222/136 225/63
MPPA MPPA-D3（ILIS）
151/63, 151/107, 151/133 154/63
乙磷铝 乙磷铝-D15（ILIS）
109/81, 109/63（检测为乙膦酸） 114/82（检测为乙膦酸- D5）
膦酸***/**** 膦酸-18O3（ILIS）
81/79, 81/63（检测为膦酸酯阴离子） 87/85
马来酰肼 马来酰肼-D2（ILIS）
111/82, 111/42, 111/55, 111/83 113/42
Per 氯酸盐 Per 氯酸盐-18O4（ILIS）
99/83, 101/85 107/89
氯酸盐 氯酸盐-18O3（ILIS）
83/67, 85/69 89/71
三聚氰酸 三聚氰酸-13C3
128/42, 128/85 131/43
双丙氨膦 322/88, 322/94, 322/134
* 一个 IS 部分是所制备的校准标准液中所含的绝对 IS 质量（见表 1）。 ** 参见第 5.6.4.1 节关于乙膦酸对 AMPA 的潜在干扰的注释 1。 *** 参见第 5.6.4.1 节关于膦酸的注释 3
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单残留方法
**** 对于膦酸、高氯酸和氯酸盐，最好采用方法 1.4（5.6.5），因为在采用这些 LC 条件时，这些化合物似乎受到基质的强烈抑制。
图 4：甲醇（含 1% 甲酸）中 0.1 mg/L 乙烯利、HEPA、 草甘膦、 AMPA、草铵膦、MPPA、N-乙酰-AMPA、N-乙酰- 草铵膦、乙磷铝、马来酰肼、膦酸、高氯酸盐、氯酸盐、三聚氰酸和双丙氨膦的色谱图。
强度
强度
强度
强度
强度
强
度
时间（min） 乙膦酸 109/81 T
时间（min） 马来酰肼 111/82 T
时间（min） 乙烯利 143/107 T
时间（min） HEPA 125/79 T
时间（min） 草甘膦 168/63 T
时间（min） 草铵膦 180/63 T
时间（min） AMPA 110/63T
时间（min） MPPA 151/63 T
时间（min） 膦酸 81/79 T
时间（min） 氯酸盐 99/83 T
时间（min） N-乙酰-AMPA 152/63 T
时间（min） N-乙酰-草铵膦 222/63 T
时间（min） 氯酸盐 83/67 T
时间（min） 三聚氰酸 128/42 T
时间（min） 双丙氨膦 322/134
强度
强度
强度
强
度
强度
强度
强度
强度
强度
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5.6.4.1. 方法 1.3 和 1.4 提示
1) AMPA 和乙膦酸的质量转化相同（110/81）。因此需要进行色谱分离（通常如此）。
2) 当在 Hypercarb 色谱柱上分析乙膦酸和膦酸时，我们参考来自 Bayer CropScience 的 D. Rosati 和 C. Venet 的专利（专利号 WO 2006079566 A1）。
3) 对于高氯酸盐、氯酸盐和膦酸的分析，建议将 QuPPe 提取物稀释 5 或 10 倍（同见注解 7）
4) 检查过滤器是否存在高氯酸盐和氯酸盐的交叉污染。参见 2.6 下的注解。纤维素混合酯过滤器适合此应用！
5) 在 LC- MS/MS 中，乙膦酸及其 D5-相似物在溶液中通过源内裂解降解为膦酸。因此，须对乙膦酸和膦酸进行有效的色谱分离（通常如此）。图 5 显示了源内裂解的一个示例。当注入 0.1 µg/mL 乙膦酸后，在乙膦酸的保留时间内，膦酸的质量示踪上显示一个峰。该峰的信号强度对应 0.04 µg/mL 膦酸。在注入 0.1 µg/kg 乙膦酸-D5 时，源内裂解较少（相当于约 0.001 µg/mL 膦酸），但作为杂质的膦酸出现在适当的保留时间，浓度相当于约 0.007 µg/mL。因此，为安全起见，不得将乙膦酸-ILIS 添加到预期用于分析天然膦酸的校准液或样品或样品提取物中。此外，用于膦酸分析的校准液最好不含任何天然乙膦酸（同见注解 6）。
图 5：膦酸、乙膦酸和乙膦酸-D5 的色谱图（各 1.0 µg/mL）。除乙膦酸和乙膦酸-D5 的合适质量示踪外，还显示膦酸的质量示踪，表明乙膦酸和乙膦酸-D5 向膦酸发生源内裂解，以及膦酸作为乙膦酸-D5 标准溶液的杂质而存在。
注入的校准标准品 质量示踪下检测到的信号
膦酸 81/79 乙膦酸 109/81（上）或乙膦酸-D5 114/82（下） 膦酸 0.1 µg/mL
乙膦酸 0.1 µg/mL
乙膦酸-D5 0.1 µg/mL
强度
强度
强度
强度
时间（min）
时间（min） 时间（min）
时间（min）
强度
时间（min）
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6) 还观察到溶液中乙烯利降解为膦酸。图 6 显示当注入 1 µg/ mL 乙烯利标准品时膦酸出现的小峰（相当于 0.002 µg/mL）。这种杂质可忽略不计。不过，图 6 还显示了因发生严重降解而不适于使用的乙烯利-D4 标准品的色谱图，其中仅含约 0.08 µg/mL 乙烯利-D4和约 0.8 µg/mL 膦酸，而非预期的 1 µg/mL 膦酸。使用这种 ILIS 会污染膦酸样品，产生假阳性结果。为安全起见，乙烯利-ILIS 不应被添加到预期用于天然膦酸分析的校准液、样品或样品提取物中。此外，用于分析膦酸的校准液最好不含任何天然乙烯利（同见注解 5）。
图 6：膦酸、乙烯利和不适于使用的乙烯利-D4 标准品的色谱图（各 1.0 µg/mL）。乙烯利标准品中仅含极低浓度的膦酸，当在所购买的标准品中膦酸的含量很高时，乙烯利-D4 标准品中的膦酸含量高得不可接受。
注入的校准标准品 质量示踪下检测到的信号
膦酸 81/79 乙膦酸 109/81（上）或乙膦酸-D5 114/82（下） 膦酸 0.1 µg/mL
乙烯利 1.0 µg/mL
乙烯利-D4 1.0 µg/mL（不合适的商用标准品示例！！）
7) 当注入含高浓度磷酸（许多样品中本身含有高浓度的磷酸）的提取物时，磷酸和膦酸色谱分离会受到影响。这往往会导致膦酸信号抑制，在某些情况下甚至会导致假阴性结果。当磷酸发生少量源内裂解时，也出现膦酸（81/63）最重要的合格质量转化，但后者的浓度通常高于膦酸的浓度，它对质量转化的干扰仍然较为显著，尤其当这两种淋洗液紧挨着时（如图 7a 中蓝莓提取物的色谱图所示）。磷酸和膦酸的色谱分离大大提高了提取物的后续稀释，在高浓度的磷酸之后，通常允许对膦酸进行适当的检测、鉴定和定量。从而有利于注入更小体积的样品提取物（如 1-2 µL）或在进样前将 QuPPe 提取物稀释 5-10 倍。幸运的是，磷酸和膦酸都至少有 1 个合适的质量转化（分别为 97/63 和 81/79，图 7a 中专门加标的蓝莓提取物的示例显示），对于膦酸，该质量转化可用于定量并提高鉴定的确定性。膦酸 ILIS 的洗脱时间和峰形也可用来与磷酸区分，以避免假阳性。利用 81/63 质量示踪上的信号，经过计算，如果这种质量转化被用于定量，则 20 mg/kg 磷酸会模拟 0.1 mg/kg 膦酸。使用微分迁移分离（DMS）技术的实验（见图 8a 和 8b）。
强度
强
度
强度
强
度
时间（min）
时间（min）
时间（min）
时间（min）
强度
时间（min）
设为 100%
设为 100%
当 1µg/mL 乙烯利 D4 完全转化成膦酸时，膦酸水平高于预计
水平 天然标准品中约 8% 的相
应信号
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图 7：磷酸和膦酸的色谱和质谱分离。
注入样品 质量示踪下检测到的信号
81/79 （膦酸“独有”）
81/63 （膦酸和磷酸共有）
97/63 （磷酸“独有”）
膦酸 （2.5 µg/mL）
蓝莓提取物 （含约 20 mg/kg 磷酸）
添加膦酸的蓝莓提取物
（0.05 µg/mL）
添加磷酸的蓝莓提取物（5 µg/mL）
时间（min）
时间（min）
时间（min）
时间（min）
时间（min） 时间（min）
时间（min） 时间（min）
强度
强
度
强度
强
度
强度
强度
强度
强度
强
度
时间（min）
时间（min）
时间（min）
强度
强度
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图 8a：磷酸和膦酸的色谱和质谱以及膦酸不同于磷酸的同重元素（均为 m/z 81）源内裂解的迹象（81/81 和 81/63 比例不同，81/79 转化缺失）
图 8b：膦酸（dihydrophosphonate，m/z=81）与磷酸同重元素源内裂解（均为 m/z 81）之间的 DMI 分离
欧洲参比实验室-SRM
此处未显示“独有”
质量
来自膦酸
来自磷酸
不同比率： 同重元素但不
完全相同
共有的
膦酸
磷酸
磷酸产生的干扰：
磷酸→在作物中以高浓度存在（如 20-200 mg/kg）
在未稀释的样品中，峰值可能重叠……
- 信号抑制→假阳性风险
- 稀释有助于分离峰（f=5-10）
独有的
（主要）
（次要）
使用转化 81/63： 20 ppm 磷酸盐将掺入 0.1 ppm 膦酸盐
欧洲参比实验室-SRM
离子淌度差分质谱技术（DMS），SelexIONTM DMS‐设定值，用于膦酸盐
注入膦酸盐：
注入膦酸盐：
（其浓度有助于提供
良好的 81/63 信号）：
时间（min）
时间（min）
强度
强度
涡轮增压机
/信号源联轴器伸长环
檐板 DMS电池 孔板
-
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8） 氯酸盐可以是高氯酸盐溶液的少量杂质，也可以是高氯酸盐的少量源内裂解。在实验中注入 0.2 µg/mL 高氯酸盐标准品，在氯酸盐的质量示踪上显示两个峰（见图 9）。一个峰来源于作为杂质包含在高氯酸盐溶液中的氯酸盐（约 0.35%），另一个峰来源于高氯酸盐保留时间段的源内裂解，相当于 0.001 µg/mL 氯酸盐量。
图 9：0.2 µg/mL 氯酸盐和高氯酸盐以及氯酸盐-18O3 和高氯酸盐-18O4 混合物（含约 0.2 µg/mL 氯酸盐18O3 和约 0.02 µg/mL 高氯酸盐-18O4）的色谱图。
注入样品 质量示踪下检测到的信号 氯酸盐 0.2 µg/mL 氯酸盐 83/67
高氯酸盐 0.2 µg/mL 氯酸盐 83/67
高氯酸盐 99/83
氯酸盐-18O3（约 0.18 µg/mL + 高氯酸盐-18O4（约 0.02 µg/mL）
氯酸盐-18O3 89/71
高氯酸盐-18O4 107/89
9） 色谱柱预洗和重新调整：在首次使用前，Hypercarb 色谱柱和预柱须彻底清洗，以覆盖表面的特定活性部位。用含平面分子如叶绿素和花青素的溶液预洗可加快预洗过程。推荐以下预洗程序：注入菠菜的 QuPPe 提取物（15-20 倍，如果可能，注入 20 µL），或注入葡萄皮提取物 3溶液，通过将 100 mg 葡萄皮提取物溶解在 20 mL 甲醇 + 1% FA-H2O 1:1 中进行制备。此活性部位的覆盖是暂时的，色谱柱活性随着溶剂或稀释提取物的注入逐渐增加。经过一系列低基质负载或无基质负载注入，通常会提高对利用提取物进行中间调整的需要，以还原色谱柱。图 10、11 和 12 以示例显示了预洗对色谱柱性能的影响。
3 可作膳食补充剂
时间（min）
时间（min）
时间（min）
时间（min）
强度
强
度
强度
强度
时间（min）
强度
与上述进样相比 RT 略有漂移
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图 10：使用新的 Hypercarb 色谱柱得到的色谱图，由于活性部位与分析物具有很强的相互作用，色谱分析效果不佳。当使用新的预柱时，可观察到相同情况。
图 11：注入 10 次（20µL）菠菜 QuPPe 提取物进行预洗后得到的色谱图。
图 12：在正常常规使用过程中，另外注入各种果蔬 QuPPe 提取物的约 100 种提取物后的色谱图。
10） 色谱柱的储存：正常操作后，在任何正常的序列/运行（全梯度）后，色谱柱可直接储存。全梯度运行系统 3-4 次，在序列开始前，重新激活色谱柱（在基质中注入标准品）。如果要储存较长时间（如 > 2 个月），建议按照如上所述重新调整色谱柱。
11） 预过滤器：如果使用预过滤器，一旦背压明显增加，就要进行更换。出于实际原因，为方便起见，建议在进行其他维护作业如重新调整或更换预柱时更换预过滤器。如果预过滤器更换后（见上文），压力未恢复至正常水平，则预柱的玻璃料可能需要更换。
注：观察到草甘膦的损失可能与脏污的预过滤器的相互作用有明显关联。
12） 预柱（保护柱）：一旦发现分离性能（峰形恶化）明显下降，就应立即更换预柱。方法 1.3 的预柱比方法 1.1 和 1.2 的预柱更换频率明显要低。预柱更换后需对其进行预洗。为此，预柱不必附在色谱柱上。还可将数个预柱排成一行，同时预洗。
时间（min） 时间（min） 时间（min） 时间（min）
时间（min） 时间（min） 时间（min）
强度
时间（min） 时间（min）
时间（min） 时间（min）
强度
强
度 强
度
HEPA 125/63 T 乙烯利 143/107 T N-乙酰-AMPA 152/63 T 草甘膦 168/63 T
HEPA 125/63 T
HEPA 125/63 T
乙烯利 143/107 T
乙烯利 143/107 T
N-乙酰-AMPA 152/63 T
N-乙酰-AMPA 152/63 T
草甘膦 168/63 T
草甘膦 168/63 T
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5.6.5. 方法 1.4“PerChloPhos”
表 7：膦酸（乙膦酸代谢产物）、高氯酸盐和氯酸盐的建议 LC-MS/MS 条件。
仪器参数 条件 电离模式 ESI 阴 色谱柱/温度 Hypercarb 2.1 x 100 mm 5 m （部件号 35005-102130）；40°C 预柱 Hypercarb 保护柱 2.1 x 10 mm 5 m （部件号 35005-102101） 预过滤器 如 Supelco column saver 2.0 µm 过滤器（可选） 淋洗液 A 1% 醋酸水溶液+ 5% 甲醇 淋洗液 B 1% 醋酸甲醇溶液 梯度 %A 流量 [mL/min] 时间 [min]
100 0.4 0 70 0.4 10 100 0.4 10.1 100 0.4 15
进样体积 5 µL 校准标准品和浓度 如 0.05 或 0.1 µg/IS 部分* + 报告界限浓度 获得的质量转化 化合物 质量转化 （m/z）
高氯酸盐 高氯酸盐-18O4（ILIS）
99/83，101/85 107/89
氯酸盐 氯酸盐-18O3（ILIS）
83/67，85/69 89/71
膦酸 膦酸 18O3（ILIS）
81/79，81/63 87/85
图 12：甲醇中 0.05 mg/L 膦酸、高氯酸盐和氯酸盐的色谱图。
时间（min） 时间（min） 时间（min）
时间（min） 时间（min） 时间（min）
强度
强度
强度
强度
强度
强度
氯酸盐 83/67 T 磷酸 81/79 T
高氯酸盐-18O3 IS 107/89 氯酸盐 18O3 IS 89/71 磷酸 18O3 IS 87/85
高氯酸盐 98/83 T
-
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5.6.12. 方法 7“Morpholine, Diethanolamine and Triethanolamine”
表 13：吗啉、二乙醇胺和三乙醇胺的建议 LC-MS/MS 条件
仪器参数 条件
电离模式 ESI 阳
色谱柱 Dionex Acclaim Trinity P1 2.1 x 100 mm（3 m）（部件号 071389）；40°C
预过滤器 如 Supelco column saver 2.0 µm 过滤器（可选）
预柱 Dionex Acclaim Trinity P1 2.1 x 10 mm（3 m）（部件号 071391）
淋洗液 A 50 mmol NH4-甲酸盐水溶液（使用甲酸调整到 pH 3）
使用棕色玻璃瓶！
淋洗液 B 乙腈
梯度
%A 流量 [mL/min] 时间 [min] 10 0.4 0
10 0.4 10
进样体积 5 µL
校准标准品和浓度 如 0.05 或 0.1 µg/IS 部分* + 报告界限浓度
获得的质量转化
化合物 质量转化（m/z）
吗啉 吗啉-D8（IS）
88/70，88/45，88/44 96/78
二乙醇胺（DEA） 二乙醇胺-D4（IS）
106/88，106/70，106/45 110/92
三乙醇胺（TEA） 三乙醇胺-D12（IS）
150/132，150/70，150/88 162/144
* 一个 IS 部分是所制备的校准标准液中所含的绝对 IS 质量（见表 1）。 吗啉、DEA 和 TEA 不是农药，而是用来覆盖作物（柑橘、苹果、芒果等）表面的蜡添加剂。为了方便和提高实验效果，将其纳入该方法中。由于这三种化合物可以非常灵敏地进行分析，如有可能，建议在进样前对提取物进行 5-10 倍稀释，特别是当不存在需要使用标准品添加法（5.5.3）的 IS 时。 图 18：苹果提取物中 0.05 mg/kg 吗啉、二乙醇胺和三乙醇胺的典型色谱图（进样前将提取物稀释 10 倍）
吗啉-D8
强度
强
度
强度
强
度
强度
强
度
时间（min） 时间（min） 时间（min）
时间（min） 时间（min） 时间（min） 吗啉-88/70 T 二乙醇胺 106/88 T 三乙醇胺 150/132 T
二乙醇胺-D4 三乙醇胺-D12
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5.6.13. 方法 8“TDMs”
表 13：1,2,4-三唑、三唑丙氨酸、三唑乙酸、三唑乳酸和 1,2,3-三唑的建议 LC-MS / MS 条件
设备参数 条件 电离模式 ESI 阳 色谱柱 Hypercarb 2.1×100 mm 5m（部件号 35005-102130）；40°C 预柱 Hypercarb 保护柱 2.1×10 mm 5 m（部件号 35005-102101） 预过滤器 如 Supelco column saver 2.0 μm 过滤器（可选） 淋洗液 A 1% 醋酸水溶液 + 5% 甲醇 淋洗液 B 1% 醋酸甲醇溶液
梯度
%A 流量 [mL/min] 时间 [min] 100 0.6 0 10 0.6 5 100 0.6 5.1 100 0.6 10
进样体积 2 µL 校准标准品和浓度 如 0.05 或 0.1 µg/IS 部分* + 报告界限浓度
获得的质量转化
化合物 质量转化 （m/z）
DMS-条件** 使用 SelexION Q-Trap® 5500 DMS 温度：高
COV（V） SV（V）
1,2,4-三唑*** 1,2,4-三唑（IS）
70/43 75/46
-13 /-13.5 -5 /-13
3000 /3000 2000 /3000
三唑丙氨酸 三唑丙氨酸-13C2,15N3（IS）
157/70 162/75
2 /0.5 0 /3.0
3500 /3000 2500 /3000
三唑乙酸 三唑乙酸-13C2,15N3（IS）
128/70 133/75
-1.5 /-3.0 -1.5 /-3.0
2000 /3000 2000 /3000
三唑乳酸 三唑乳酸-13C2,15N3（IS）
158/70 163/75
-1 /-0.5 -0.5 /-0.5
2500 /3000 2500 /3000
1,2,3-三唑*** IS 当前不可获得
70/43 -
-12 /-12.5 -
3000 /3000 -
*一个 IS 部分是所制备的校准标准液中所含的绝对 IS 质量（见表 1）。 ** 每台仪器的 DMS 条件有某种程度的不同 *** 1,2,4-三唑和 1,2,3-三唑被用作肥料中的硝化抑制剂 图 18：0.01 mg/kg 加标牛油果提取物的 TDMs 典型色谱图。
1,2,4-三唑 70/43 1,2,4-三唑丙氨酸 128/70 1,2,4-三唑乙酸 157/70 1,2,4-三唑乳酸 158/70
时间（min） 时间（min） 时间（min） 时间（min）
强度
强度
强度
强度
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5.7. 校准和计算
5.7.1. 使用 IS
5.7.1.1. 在等分之前将 IS 添加到样品中：
下列计算方法要求添加到测试部分（5.2.3）和校准标准品（5.5）（mIS样品 / mIS样品）的 IS 质量比已知且恒定。当整个校准浓度的 IS 保持恒定时，各校准浓度的峰值比 PR 校准混合物（A农药校准混合物/ AIS校准混合物）可对照 m农药校准混合物而不是 m农药校准混合物/mIS校准混合物的比率（mIS校准混合物设为 1）来绘图。
校准曲线（分别为各种农药绘制）由下列公式表示：
可利用从样品提取物中得到的农药与内部标准品的相应峰值比（PR 样品 = A 农药校准混合物/ AIS 校准混合物）、校正因子（mIS样品/mIS 校准混合物）以及测试部分重量（ma）对给定样品中给定农药的质量分数（WR）进行如下计算。
原则上（但非必需），所制备的校准标准品应确保其 mIS 样品 / mIS 校准混合物 的比率等于 20（假定的样品提取物体积与校准标准品体积之比）。IS-WS I 和 IS-WS II 的绝对质量不一定已知（同见表 1 的注释）。
5.7.1.2. IS被添加到一等份提取物中
如果将 IS 添加到一等份提取物中（如 1 mL），则掌握样品提取物的实际总体积尤为重要。因此水量调节必不可少，如果如 5.2.2 和表 18 所述进行了水量调整，则可假设总体积恰好为 20 mL。此时，1 mL 样品提取物将对应测试部分（ma）的 1/20。应根据所用的等份体积，使用 IS 质量比（mIS等份 / mIS校准混合物）称量待添加到等份中的 IS 质量（mIS等份），这对计算很重要。原则上（而非必要），应利用公式 mIS等份 = mIS样品 × V等份/20 导出 mIS等份，其中 mIS样品为根据 5.2.2 和表 18待添加到整个样品部分的 IS 质量。
如上所述，可利用从样品提取物得到的农药与内部标准品的各峰值比（PR 样品 = A 农药样品 / A IS 样品）、校正因子
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（mIS 等份 / mIS 校准混合物）和等份中样品当量的重量（m 等份= ma x V 等份/20）对给定样品中给定农药的质量分数（WR）进行如下计算。
所用变量 校准混合物中的农药质量 m 农药校准混合物 µg
最终提取物中的农药质量 m 农药样品 µg
校准混合物中的内部标准品质量 mISTD 校准混合物 µg
添加到测试部分（样品）的内部标准品质量 mISTD 样品 µg
添加到等份样品提取物的内部标准品质量 mISTD 等份 µg
所用样品提取物等份的体积（5.7.1.2 和 5.5.3），用于添加 IS 或标准品添加
V 等份 mL
测试部分的质量 ma g
一等份中测试部分的质量 m 等份 g
样品中农药的质量分数 wR mg/kg
从校准标准品中获得的农药峰面积（混合物） A 农药校准混合物 （计数）
从校准标准品中获得的 IS 峰面积（混合物） AISTD 校准混合物 （计数）
从注入提取物中获得的农药峰面积 A样品农药 （计数）
从注入提取物中获得的 IS 峰面积 A样品 ISDT （计数）
从校准混合物中获得的农药与 IS 峰值比 PR 校准混合物 （无穷小量）
从注入提取物中获得的农药与 IS 峰值比 PR 样品 （无穷小量）
校准曲线斜率 a 校准品 （无穷小量）
校准曲线的偏差（截距） b 校准品 （无穷小量）
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5.7.2. 不使用 IS
如果不使用合适的 IS，则应高度重视妥善补偿基质效应。对于基质效应的补偿，建议采用基质匹配校准（5.5.2）和标准品添加方法（5.5.3）。在这两种情况下，假设样品提取物的总体积恰好为 20 mL。因此，样品中含水量（和提取量）的调整极为重要。
5.7.2.1. 采用无 IS 的基质匹配校准进行计算
校准曲线（分别针对各种农药绘制）由下列公式表示：
可以利用从样品提取物（A样品农药）中得到的农药的各峰面积、校正因子（V）以及测试部分的重量（ma）对给定样品中给定农药的质量分数（WR）进行如下计算。
其中，V最终 为样品提取物总量（20 mL）。
5.7.1.2 列出了所有其他变量。
5.7.2.2. 采用标准品添加方法计算
在没有合适的 IL-IS 可用时，标准品添加方法是首选方法。这种方法通常对基质效应的补偿比基质匹配校准（5.5.2）更好。我们通过采用如图 1 所示的图形演示的线性回归计算样品中农药的质量分数（WR）。校准曲线的 Y 轴截距将指示样品提取物非强化等份中的农药质量。
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图 20：图示使用标准品添加程序的内部校准
图解：
Y 分析物的峰面积
X 所添加的分析物的绝对质量 m 农药校准混合物（μg）
|x| 标准品添加（y=0）前样品提取分析物的绝对量（μg）
其中 x = y 轴截距（b）
（µg） 曲线斜率（a）
使用图中所示的回归图形进行如下计算
式中， b 待测分析物校准曲线 Y 轴截距；
a 待测分析物校准曲线斜率（1/µg）；
V最终 样品提取物体积（mL）（应为 20 mL）
Val 用于标准品添加方法的等份体积（mL）
ma 最初的样品部分重量（g）
分析物信号
（计数）
y 轴截距 曲线斜率
标准品添加前样品提取分析物的绝对量
添加被分析物的绝对质量（μg）
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6. 性能数据
采用基质匹配校准进行的回收实验的典型结果（n=5）（详情请见 www.crl-pesticides-datapool 方法验证数据库）。
表 14：近似定量限（LOQ）概述*
方法 农药
多数果蔬 （以土豆、黄瓜和苹果测
试） [mg/kg]
柑橘属 （以橘子测试）[mg/kg]
谷类 （以大麦测试） [mg/kg]
M1.1/M1.2/M1.3 乙烯利 0.01/0.01/0.01 0.01/0.01/0.01 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 HEPA 0.01/0.01/0.02 0.01/0.01/0.02 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 草甘膦 0.01/0.01/0.02 0.02/0.01/0.02 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 氨甲基膦酸 0.01/0.01/0.02 0.02/0.01/0.02 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 草铵膦 0.01/0.01/0.02 0.02/0.02/0.02 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 MPPA 0.01/0.01/0.01 0.02/0.02/0.01 0.02/0.02/0.02
M1.1/M1.2/M1.3 N-乙酰-草铵膦 0.02/0.02/0.01 0.02/0.02/0.01 0.02/0.02/0.02
M1.2/M1.3 N-乙酰-氨甲基膦酸 0.01/0.01 0.01/0.01 0.02/0.02
M1.3 / M2 高氯酸盐 0.01/0.01 0.01/0.01 0.01/0.01
M1.2 / M1.3 膦酸** 0.1/0.1 0.1/0.1 0.1/0.1
M1.3 氯酸盐** 0.01 n.a. n.a.
M1.1/ M1.3/M2 乙膦酸 0.1 / 0.005/0.005 n.a. / 0.005/0.005 n.a. / 0.005/0.005
M2 / M1.3 马来酰肼 0.01 0.01 0.02
M3 氨基三唑 0.01 0.01 0.02
M3 / M5 ETU 0.01 / 0.01 0.02 / n.a. 0.02 / n.a.
M3 / M5 PTU 0.01 / 0.01 0.02 / n.a. 0.02 / n.a.
M3 / M4 / M5 矮壮素 0.005 / 0.005 0.005 / 0.005 0.01 / 0.01
M3 / M4 / M5 助壮素 0.005 / 0.01 0.005 / 0.01 0.001 / 0.02
M3 / M4 灭蝇胺 0.01 / 0.01 0.01 / 0.01 0.02 / 0.02
M3 / M4 丁酰肼 0.01 / 0.02 0.01 / 0.02 0.02 / 0.04
M3 / M4 三甲基锍-阳离子 0.01 / 0.005 0.01 / 0.005 0.02 / 0.01
M3 / M4 沙蚕毒素 0.01 / 0.01 n.a. / n.a. n.a. / n.a.
M4 N,N-二甲基肼 0.005 0.005 0.01
M4 敌草快 0.005 0.005 0.005
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M4 百草枯 0.005 0.005 0.005
M6 链霉素 0.01 n.a. n.a.
M6 春雷霉素 0.01 n.a. n.a.
M7 吗啉** 0.01** 0.01** n.a.
M7 二乙醇胺** 0.01** 0.01** n.a.
M7 三乙醇胺** 0.01** 0.01** n.a. * 使用 Q-Trap 5500 仪器； ** 由 10 倍稀释提取物导出的数值（0.05 g/mL 样品当量）
7. 参考文献 Anastassiades, M and Mack, D（2008）; New Developments in the Analysis of Pesticides Typically not Cov- ered by Multiresidue Methods; European Pesticide Residue Workshop, EPRW 2008, Berlin, oral presenta- tion O1, Book of Abstracts
Kolberg DI, Mack D, Anastassiades M, Hetmanski MT, Fussell RJ, Meijer T, Mol HG. Anal Bioanal Chem. 404（8）:2465-74（2012）; Development and independent laboratory validation of a simple method for the de- termination of paraquat and diquat in potato, cereals and pulses
Alder L. and Startin J. R.（2005）; Determination of Chlormequat and Mepiquat in Foods by Liquid Chroma- tography/Mass Spectrometry or Liquid Chromatography/Tandem Mass Spectrometry: Interlaboratory Study; Journal of AOAC International Vol. 88, No. 6: 1762-1776
Vahl, M. et al.（1998）; Analysis of Chlormequat residues in grain using liquid chromatography-mass spec- trometry（LC-MS/MS）; Fresenius J Anal Chem 361:817-820
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附录
表 15：典型已购标准品和目标分析物之间的换算系数（3.15）：
化合物 分子量 [g/mol] 售出的化合物 分子量 [g/mol] 换算系数
双丙氨膦 323,3 双丙氨膦钠 345,3 1,07 氯酸盐（阴离子） 83,6 氯酸钠 106,1 1,27 矮壮素（阳离子） 117,6 矮壮素氯化物 158,1 1,34 矮壮素-D4（阳离子） 121,6 矮壮素-D4-氯化物 162,1 1,33 双苯唑快（阳离子） 249,3 双苯唑快-硫酸二甲酯 360,4 1,45 敌草快（双阳离子） 184,2 敌草快二溴单水合物 362,1 1,97 敌草快-D4（双阳离子） 188,2 敌草快-D4-二溴化单水合物 366,1 1,95 乙膦酸 110,0 三乙膦酸铝 118,0 1,07
乙膦酸-D5 115,0 乙膦酸-D5-1/3铝 123,0 1,07 乙膦酸-D5-钠 137,0 1,19
草铵膦 182,2 草铵膦铵 198,2 1,09 草铵膦-D3 185,1 草铵膦-D3-盐酸盐 220,6 1,19 春雷霉素 379,4 春雷霉素盐酸盐一水合物 433,8 1,14 助壮素（阳离子） 114,2 助壮素水剂 149,7 1,31 助壮素-D3（阳离子） 117,2 助壮素-D3-碘化物 244,1 2,08 N, N-二甲肼-D6 66,1 二甲肼-D6-盐酸盐 102,6 1,55 N-乙酰基-草铵膦 223,2 N-乙酰基-草铵膦-二钠盐 267,2 1,20 N-乙酰基-草铵膦-D3 226,2 N-乙酰基-草铵膦-D3-二钠盐 270,2 1,19 沙蚕霉素 149,3 沙蚕霉素-草酸盐 239,3 1,60 沙蚕霉素-D6 155,3 沙蚕霉素-D6-草酸盐 245,3 1,58 百草枯（双阳离子） 186,3 百草枯-二氯化物 257,2 1,38 百草枯-D6（双阳离子） 192,3 百草枯-D6-二碘化物 446,0 2,32 链霉素 581,6 链霉素-倍半硫酸盐 728,7 1,25 三甲基锍 77,2 三甲基锍-碘化物 204,1 2,64 三甲基锍-D9 86,2 三甲基锍-D9-碘化物 213,1 2,47
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表 16：农药储备溶液和工作溶液的典型浓度（3.15 和 3.16），建议溶剂也适用于 ILISs（参见 3.18、3.19 和 3.20）：
化合物 方法 储备溶液（典型） 工作溶液（含混合物）（典型） 制备时所用溶液 [mg/mL] 制备时所用溶液 [μg/mL]
乙烯利 M1.（1.2.3） 甲醇 + 1% 甲酸 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1HEPA M1.（1.2.3） 甲醇 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1草甘膦 M1.（1.2.3） 水/甲醇（3:1） 0.2 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1AMPA* M1.（1.2.3） 水* 0.01 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1草铵膦 M1.（1.2.3） 水/甲醇（2:1） 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1MPPA* M1.（1.2.3） 氰化甲烷* 0.01 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1N-乙酰基-草铵膦 M1.（1.2.3） 甲醇 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1N-乙酰基-AMPA* M1.（2.3） 水* 0.1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1膦酸 M1.（2.3） 水（适用于ILIS的氰化甲烷）1 甲醇+1%甲酸*** 5 / 1 / 0.1乙膦酸 M1.（2.3）/M2 水/甲醇（3:1） 0.1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1马来酰肼 M1.3/M2 甲醇 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1高氯酸盐 M1.3/M2 甲醇 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1氯酸盐 M1.3 甲醇 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1氨基三唑 M3 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1ETU M3 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1PTU M3 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1三甲基锍盐 M3,4 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1环丙氨嗪 M3,4 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1丁酰肼 M3,4 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1矮壮素 M3,4,5 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1助壮素 M3,4,5 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1敌草快** M4 甲醇 + 1% 甲酸 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1百草枯** M4 甲醇 + 1% 甲酸 1 甲醇 + 1% 甲酸 5 / 1 / 0.1沙蚕霉素 M4 甲醇/水（3:1） 1 甲醇 5 / 1 / 0.1双苯唑快 M4 氰化甲烷 1 甲醇 5 / 1 / 0.1N,N-二甲肼 M4 氰化甲烷 1 甲醇 5 / 1 / 0.1链霉素** M6 水/甲醇（1:1） 1 甲醇 5 / 1 / 0.1春雷霉素 M6 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1吗啉 M7 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1二乙醇胺 M7 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1三乙醇胺 M7 甲醇 1 甲醇 5 / 1 / 0.1* 供应商已购溶液
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单残留方法
** 对于可能与玻璃表面发生反应的化合物，请使用塑料容器和塞子 ***甲醇 + 1% 甲酸溶液中的膦酸 ILIS 足够稳定，可保存一个月以上（天然膦酸酯微量成分）。 表 17：同位素标记内部标准品的供应商 3.17（典型） 名称 来源 货号 浓度 [μg/mL] 每单位
的量 价格（欧元-欧分）
1 单位 2 μg* 0.1 μg**
氨基三唑
15N 1 XA10240100ME 100 1.1 mL 165 € 300 c 15 c 15N 13C 1 XA10240110AL 100 1.1 mL 332 € 604 c 30 c 15N2 13C2 7 A633382 10 mg 1496€ 30 c 1,5 c 15N4 / 13C2 8 C4313 10 mg
AMPA
13C2,15N2 1 CIL-CDNLM-6786-1.2 100 1.2 mL 464 € 773 c 39 c 5 CDNLM-6786-1.2 100 1.2 mL 464 € 773 c 39 c
13C,15N 7 A617342 10 mg 1687 € 34 c 1,7 c 1 XA10205100WA 100 1.1 mL 332 € 604 c 30 c
13C,15N,D2 10 CDNLM-6786-1.2 100 1.2 mL 465 € 775 c 39 c 氯酸盐-18O3*** 12 200 5 mL 50 c 50 c 2,5 c
矮壮素水剂 1,1,2,2-D4
1 X 11340100DO 100 10 mL 286 € 57 c 2,9 c 1 XA11340100DO 100 1.1 mL 73 € 133 c 6,6 c 6 D3386 10 mg 756 € 15 c 0,8 c 1 CA11340100 5 mg 389 € 16 c 0,8 c
D9 3 673151 5 mg 310 € 12 c 0.6 c
氰尿酸 13C3 9 32679 10 mg 408 8,2 c 0,4 c 18O3 3 673141 10 mg 299 € 6,0 c 0,3 c
环丙氨嗪-D4 1 XA11920010EA 100 1.1 mL 118 € 215 c 11 c 7 C989302 10 mg 1047 € 21 c 1,1 c
丁酰肼-D6 1 XA11960100AL 100 1.1 mL 87 € 158 c 7,9 c
二乙醇胺 D4 4 D-5307
100 mg 432 € 0.9 c 0.04 c
D8 7 D441902 100 mg 1100 € 2,2 c 0,1 c
双氢链霉素 倍半硫酸盐 -水合物 硫酸盐
1 C 12635300 100 mg 29 € 0,1 c 0,003 c
1 EPD1954000 25 mg 120 € 1,0 c 0.048
敌草快-D4-二溴化物（乙烯-D4）（大部分为一水合物!）
1 XA12960010DO 100 1.1 mL 82 € 149 c 7,5 c 4 D-3932 10 mg 144 € 2,9 c 0,1 c 6 D17071 50 mg 840 € 3,4 c 0,2 c 7 D492902 5 mg 117 € 4,7 c 0,2 c
10 B130022-10 10 mg 1109 € 22 c 1,1 c 11 sc-218246 5 mg 234 € 9,4 c 0,5 c
乙撑硫脲 D4
1 XA13230100AC 100 1.1 mL 127 € 231 c 12 c DRE-C13230100 10 mg 1197 € 24 c 1,2 c
6 D8328 5 mg 1387 € 56 c 2.8 c 7 C366177 10 mg 1122 € 22 c 1,1 c
13C2 7 C366178 2,5 mg 1650 € 132 c 6,6 c
乙撑硫脲-D4-D4（ETU-D4）
1 C 13330100 50 mg 316 € 1.3 c 0.06 c XA13330100AC 100 1.1 mL 127 € 231 c 12 c
6 D1965 100 mg 733 € 1,5 c 0,07 c
7 I367002 10 mg 98 € 2,0 c 0,1 c 乙膦酸 D15（铝） 1 CA13940010 10 mg 380 € 7,6 c 0.4 c
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名称 来源 货号 浓度 [μg/mL] 每单位 的量
价格（欧元-欧分）
1 单位 2 μg* 0.1 μg** D5（钠） 8 C5607 10 mg 825 € 17 c 0,8 c
草铵膦-D3 2 - 友情捐赠 7 G596952 10 mg 1870 € 37 c 1,9 c
草甘膦-1,2-13C2, 15N
1 XA14050100WA 1.1 mL 304 € 553 c 28 c
5 CNLM-4666-1.2 1.2 mL 361 € 602 c 30 c CNLM-4666-10X-1.2 1.2 mL 1173 € 196 c 9,8 c
1 CIL-CNLM-4666-1.2 1.2 mL 344 € 573 c 29 c 6 CN10570 5 mg 1991 € 80 c 4,0 c 7 G765002 10 mg 1048 € 21 c 1,0 c 9 608629-SPEC 10 mg 247 € 4,9 c 0.25 c
11 sc-280758 1 mg 262 € 52 c 2,6 c
HEPA（羟基-乙烯利）-D4 1 CA13230200 10 mg 256 € 5,1 c 0,3 c 7 H939652 25 mg 1125 € 9,0 c 0,5 c 2 - 友情捐赠
马来酰肼-D2（MH-D2） 1 C 14730100 10 mg 235 € 4,7 c 0,2 c
3 673799 10 mg 199 € 20 c (10μg) 1 c (0.5 μg)
三聚氰胺-13C3, 15N3 3 673055 10 mg 289 € 5,8 c 0,3 c 1 CIL-CNLM-8150-10X-1.2 1000 1,2 mL 1145 € 229 c 12 c
助壮素- D16 -氯化物- 6 D14539 50 mg 1350 € 5.4 c 0.3 c
D3（methyl-D3）-碘化物
1 X 14880100DO 100 10 mL 378 € 76 c 3,8 c 1 XA14880100DO 100 1.1 mL 68 € 124 c 6,2 c
吗啉-D8 4 D-1895/0.5 500 mg 468 € 0.94 c (10μg)
0.05 c (0.5μg)
N-乙酰基-草铵膦 D3（甲基-D3） 2 - 友情捐赠
D3（乙酰氨基-D3, -二钠盐) 7 A178237 5 mg 141 € 5,6 c 0,3 c
沙蚕霉素-草酸盐-D6 1 C 15502010 10 mg 245 € 5 c 0.3 c
MPPA-D3 2 - 友情捐赠 7 M326162 10 mg 1825 € 37 c 1.8 c
百草枯- D6-二碘化物 1 C 15870200 50 mg 256 € 1,0 c 0.05 c
D8-二氯化物 7 P191902 25 mg 1125 € 9,0 c 0,5 c
高氯酸盐-18O4 5 OLM-7310-1.2 100 1.2 mL 326 € 272 c 14 c
12*** 40 5 mL 250 € 125 c 6,3 c 膦酸-18O3 12 2000 1 mL 125 6,3 c 0,3 c
霜霉威-D7 4 DER-XA16390100AC 100 1,1 mL 82 € 149 c 7,5 c PTU-D6 = N,N´-（1,2-丙烯）硫脲素-D6； =（4-甲基-2-亚乙基硫脲-D6）
6 D535（无效） 100 mg 756 € 1,5 c 0.1 c
PTU-D6 （1,3-丙烯-d6 硫脲） （无法与目标分析物完全共洗脱）
7 P836802 10 mg 1100 € 22 c 1,1 c
1, 2, 4-苯三唑-13C2,15N3 2 - 友情捐赠
1, 2, 4-苯三唑-乙酸-13C2,15N3 2 - 友情捐赠
1, 2, 4-苯三唑-丙氨酸-13C2,15N3 2 - 友情捐赠
1, 2, 4-苯三唑-乳酸-13C2,15N3 2 - 友情捐赠
三乙醇胺 “D15“（实际上是 D12） 1 CIL-DLM-7663 1mg 153 € 31 c 1,5 c D12 7 T775582 10mg 141 € 2,8 c 0,15 c
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名称 来源 货号 浓度 [μg/mL] 每单位 的量
价格（欧元-欧分）
1 单位 2 μg* 0.1 μg** 三甲基锍-D9-碘化物 6 D2677 100 mg 733 € 0,7 c 0,04 c 化合物供应商
1：LGC Sta dards
2：Bayer Crop Science
3：HPC（高纯化合物）
4：CDN Isotopes（Ehrenstorfer 博士）
5：Cambridge Isotope Lab. Inc.
6：Medical isotopes
7：Toronto Research Chemicals
8：ALSACHIM
9：Sigma-Aldrich
10.：Cerilliant（Sigma Aldrich)
11.：Santa Cruz biotechnology, inc.
12.：EURL-SRM (hosted at CVUA Stuttgart)
（免责声明：商标名的使用是为了方便阅读，仅供参考，并不能构成官方或 EURL 对任何产品的许可。市场价格可能随时变更，且价格不含货运费）：
* 在程序的开始阶段，一般将 2 µg IS 添加进样品（通常为 10g）中 ** 一般将 0.1 µg 加入 1 ml 等份样品提取物（一般对应 0.5 g 样品）中，这样只补偿基质效应 *** 由于制造过程的影响，18O3-氯酸盐储备溶液往往伴随 18O4-高氯酸盐（约 40 µg/mL）。高氯酸盐的灵敏度是氯酸盐的五倍，两者的信号强度在同一范围内。
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表 18：IS 工作溶液的典型浓度（3.19）
方法 IS*
IS –添加至样品（5.2.3） IS - 添加至校准标准品（5.5） 样品提取物（ ~20 mL）和校准标准品（~ 1 mL）中的期望近似 IS 浓度
IS-WS I 的建议浓度（3.19）
加入样品的 IS 绝对质量 （50 µL IS-WS I）(mIS样品)
IS-WS II 的建议浓度（3.20） **
加入校准标准品的 IS绝对质量 （50 µL IS-WS II）s (mIS 样品)
µg/mL µg µg/mL µg µg/mL M1.(1.2.3) 乙烯利-D4 40 2 2 0,1 0,1 M1.(1.2.3) HEPA-D4 40 2 2 0,1 0,1 M1.(1.2.3) 草甘膦-13C2,15N 40 2 2 0,1 0,1
M1.(1.2.3) 氨甲基膦酸-13C,15N 40 2 2 0,1 0,1
M1.(2.3) N-乙酰基-氨甲基膦酸* 40 2 2 0,1 0,1
M1.(1.2.3) 草铵膦-D3 40 2 2 0,1 0,1 M1.(1.2.3) MPPA-D3 40 2 2 0,1 0,1 M1.(1.2.3) N-乙酰基-草铵膦-D3 40 2 2 0,1 0,1
M1.(2.3),2 乙膦酸 -D5(来自乙膦酸 - 铝-D15) 40 2 2 0,1 0,1
M1.3,2 马来酰肼-D2 200 10 10 0,5 0,5
M1.3,2 高氯酸盐-18O4 40 2 2 0,1 0,1
M3 氨基三唑-(15N)/ (15N2,13C2) 40 2 2 0,1 0,1
M3,5 乙撑硫脲-D4 40 2 2 0,1 0,1
M3,5 丙硫氧嘧啶-D6 40 2 2 0,1 0,1
M3,4 环丙氨嗪-D4 40 2 2 0,1 0,1
M3,4 丁酰肼-D6 40 2 2 0,1 0,1
M3,4 沙蚕霉素-D4 40 2 2 0,1 0,1
M3,4,5 矮壮素-D4 40 2 2 0,1 0,1
M3,4,5 助壮素-D3 40 2 2 0,1 0,1
M4 敌草快-D4 40 2 2 0,1 0,1
M4 百草枯-D6 40 2 2 0,1 0,1
M6 二氢睪酮链霉素**** 40 2 2 0,1 0,1
M7 吗啉-D8 40 2 2 0,1 0,1
M7 二乙醇胺-D6 40 2 2 0,1 0,1
M7 三乙醇胺-D12 40 2 2 0,1 0,1
* IS 需要有足够高的浓度以确保检测几乎对信噪比无影响（如 S/N > 20 较好）。请牢记，同位素标记 ISs（IL-ISs）通常含少量非标记类似物。为减少假阳性的风险，加入样品中的 IL-IS 的量应不高于所需量。由于交叉污染一般较少，而且源于 IL-IS 的相似浓度天然农药也出现在校准标准品中，会通过拦截去除，所以源液的定量一般不会受到太大影响。当使用马来酰肼时，如将较高浓度的 IL-IS 加入样品中，则应小心谨慎（同见 5.6.3 下面的注释）。
** 用于步骤 5.2.3 中添加样品的 IS 工作溶液的 20 倍稀释液
*** 虽然二氢睪酮链霉素未被标记同位素，但当 LC 条件通过调整可确保精确的共洗脱，以达到同等基质效应时，它仍适合补偿链霉素上的基质影响。
注：如果某种化合物的检测较少，且 IS 较为昂贵，则建议将 IS 添加至 1 mL 等份并转移至自动进样器样品瓶中（见 5.2.7）。或者，在首次筛选时可完全忽略此步骤，仅当首次检测呈现阳性时才在第二次分析中添加 IS。当化合物的保留时间出现漂移时最好采用第一种方案。通过对比 IS 与疑似峰之间的保留时间和峰形可极大提高鉴定的置信度。
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表 19：所选食物的含水量和提取前待加入试样中的水量（5.2.2）（取决于分析方法）
商品组 商品 典型含水量g/100 g
待加入 10 g 试样中的水量 [g]（加水量参考样品重量，这是特定的）
备注 当使用在程序开始时添加的 IS 进行定量时（5.2.3）
当不使用 IS 或在等分后加入 IS 时（5.7.1.2）
水果 柑橘类水果 橙汁 90 - 1
葡萄汁 90 - 1 柠檬 85 - 1.5 橙子 85 - 1.5 橘子 90 - 1
仁果 苹果 85 - 1.5
苹果干 30 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
苹果酱 80 - 2 苹果汁 90 - 1 梨 85 - 1.5 柑橘 85 - 1.5
核果 杏 85 - 1.5
杏干 30 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
杏核 85 - 1.5 樱桃 85 - 1.5 李子 80 - 2 油桃 85 - 1.5 桃 90 - 1
桃干 20 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
梅子 85 - 1.5
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商品组
商品 典型含水量g /100 g
待加入 10 g 试样中的水量 [g]（加水量参考样品重量，这是特定的）
备注 当使用在程序开始时添加的 IS 进行定量时（5.2.3）
当不使用 IS 或在等分后加入 IS 时（5.7.1.2）
梅干 20 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
无核小水果 黑莓 85 - 1.5 蓝莓 85 - 1.5 红醋栗 85 - 1.5 接骨木梅 80 - 2 醋栗 90 - 1 葡萄 80 - 2 木莓 85 - 1.5
葡萄干 20 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
草莓 90 - 1 菠萝 85 - 1.5
其他水果 香蕉 75 2.5 2.5 无花果 80 - 2
无花果干 20 5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用
源）
5 ～ 8.5 g 样品（见错误！未找到信息引用源）
称取 13.5 g 再水化匀浆
猕猴桃 85 - 1.5 芒果 80 - 2 木瓜 90 - 1
蔬菜 根生块茎蔬菜 甜菜根 90 - 1
胡萝卜 90 - 1 块根芹 90 - 1 山葵 75 2.5 2.5 欧芹根 90 - 1 萝卜 95 - 0.5 雅葱 80 - 2
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商品组 商品 典型含水量g /100 g
待加入 10 g 试样中的水量 [g]（加水量参考样品重量，这是特定的）
备注 当使用在程序开始时添加的 IS 进行定量时（5.2.3）
当不使用 IS 或在等分后加入 IS 时（5.7.1.2）
马铃薯 80 - 2 大蒜 60 5 ～ 7 g 样品 5 ～ 7 g 样品
葱蒜类 洋葱 90 - 1 韭葱 85 - 1.5 葱 80 - 2 细香葱 85 - 1.5
果蔬 茄子 90 - 1 黄瓜 95 - 0.5 香瓜 90 - 1 红椒 90 - 1 南瓜 95 - 0.5 西红柿 95 - 0.5 西葫芦 95 - 0.5 西兰花 90 - 1
卷心菜 甘蓝小包菜 85 - 1.5 菜花 90 - 1 大白菜 95 - 0.5 羽衣甘蓝 90 - 1 甘蓝 90 - 1 红叶卷心菜 90 - 1 皱叶甘蓝 90 - 1 包心菜 90 - 1 生菜 95 - 0.5 莴苣 95 - 0.5
多叶蔬菜和草药 水芹 90 - 1 野苣 85 - 1.5 欧芹 80 - 2 芝麻菜 85 - 1.5
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欧洲委员会 欧盟农药残留参比实验室
单残留方法
商品组 商品 典型含水量g /100 g
待加入 10 g 试样中的水量 [g]（加水量参考样品重量，这是特定的）
备注 当使用在程序开始时添加的 IS 进行定量时（5.2.3）
当不使用 IS 或在等分后加入 IS 时（5.7.1.2）
菠菜 90 - 1 茎菜类 芦笋 95 - 0.5
芹菜 95 - 0.5 韭葱 85 - 1.5 大黄 95 - 0.5 洋蓟 85 - 1.5
豆类 黄豆、豌豆、扁豆干
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单残留方法
表 20：ABI 5500 的典型 LC-MS/MS 参数
方法
1.1 / 1.2 方法 1.3
方法 1.4
方法 2
方法 3 + 4.1 +
5
方法 4.2
方法 6
方法 7
方法 8
离子源 （ESI、电喷雾离子源）模
式
阴性 阴性 阴性 阴性 阳性 阳性 阳性 阳性 阳性（SelexIo™）
气帘气 （氮气）
30 psi (2.07 bar)
40 psi (2.76 bar)
40 psi (2.76 bar)
30 psi(2.07 bar)
30 psi(2.07 bar)
30 psi(2.07 bar)
30 psi (2.07 bar)
40 psi (2.76 bar)
20 psi (1.38 bar)
碰撞气 中性
离子源电压 -4500 -4500 -4500 -4500 1500 5000 5500 1500 5500
气体 1 （零级空气
或氮气）
50 psi (3,45 bar)
60 psi (4,14 bar)
60 psi (4,14 bar)
50 psi(3,45 bar)
50 psi(3,45 bar)
60 psi(4,14 bar)
50 psi (3,45 bar)
60 psi (4,14 bar)
60 psi (4,14 bar)
气体 2 （零级空气
或氮气）
60 psi (4,14 bar)
60 psi (4,14 bar)
70 psi (4,83 bar)
60 psi(4,14 bar)
60 psi(4,14 bar)
50 psi(3,45 bar)
60 psi (4,14 bar)
70 psi (4,83 bar)
70 psi (4,83 bar)
气体 2 温度
600°C 550°C 550°C 500°C 500°C 500°C 550°C 500°C 550°C
MS1 分辨率
单位（约 0.7 amu FWHM*）
MS2 分辨率
单位（约 0.7 amu FWHM*）
停留时间 20 20 20 50 20 10 50 20 20
*FWHM =半峰全宽
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单残留方法
表 21：文件记录
活动 时间？ 版本
采用 CRL-SRM 进行方法发展 在柏林 EPRW 介绍方法（海报和口头介绍）
2006-2008 -
2008 年 6 月
起草第一版 2008 年 11-12 月V1
将第一版上载至 CRL 网址 2009 年 1 月
更新表 1，
在旧版本中，ISs 的期望浓度以错误的稀释系数计算得出。算术错误已纠正。 介绍“Glyphosate & Co.”方法中的 HEPA 测量条件
2009 年 8 月 V2
介绍“Quats & Co.”方法中敌草快和百草枯筛选