células de mamíferos
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Células de Mamíferos( CHO, BHK, COS)
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Aplicaciones
Ensayos funcionales in vivo
Interaccion entre proteinas
Generacion de anticuerpos
Líneas celulares
CHO ( ovario de hamster chino)COS (BHK ( riñón de hamster bebe)
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• En domesticación desarrollaron enfermedades degenerativas, debido a su estrecho parentesco entre si.
• Bajo número de cromosomas (2n=22)
• Dr. Theodore T. Puck ( aisló ovario y estableció una nueva línea celular)
CHO ( chinese hamster ovary)
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Vectores utilizados
• Vectores de DNA viral.
• Plásmidos con secuencias de DNA viral.
Entre los DNA virales escogidos:SV40
, adenovirus, papilomavirus.
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VECTOR VIRAL
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Estrategia para el desarrollo línea de células CHO
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Estrategia para el desarrollo línea de células CHO
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COS ( green monkey kidney)
• Las células COS son células de simio derivada de la línea celular CV-1 de la que manifiesta en cultivo permanentemente, transformadas en proteínas SV40 defectivo en el origen de replicación.
• Estas proteínas de SV40 promueve la replicación reiterada del vector.
• Las células COS transfectada mueren al cabo de 3-4 días posiblemente por una sobrecarga de DNA vector epidemico que resulta toxico.
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• Son monocapas de fibroblastos de riñón de hámster .
• La línea original se derivó de los riñones de cinco hámster de sexo no determinado, en 1961.
• Características beneficiosas: rápido crecimiento, pases limitados y alta eficiencia.
• Es susceptibles a los virus de la rabia, herpes simple, rubeola, estomatitis vesicular, fiebre aftosa.
BHK ( baby hamster kidney)
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Ventajas
• Generar proteínas con un plegado correcto y con modificaciones post traduccionales (MPT) idénticas a las proteínas endógenas.
• Este sistema es también perfectamente adecuado para la producción de anticuerpos, proteínas para su uso como estándar en el ELISA o la espectrometría de masas.
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Desventajas
• Rendimiento de producción más bajo que otros sistemaseucariotas, una tasa de crecimiento lento y un coste másalto, debido a la necesidad de medios de cultivo complejos.
• Aun cuando la capacidad de la células CHO para expresarglicoproteínas es alta, estas células carecen de enzimas quepermiten la glicosilación terminal de proteínas humanas.
• Esta líneas celulares ( tumorales ) pueden contenerretrovirus.
• Son vulnerables a la contaminación viral, proveniente delmedio suero fetal bovino. Actualmente algunos nocontienen el suero fetal.
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Gracias