centro nacional de referencia de plaguicidas y ... · las pruebas preliminares se realizan para...
TRANSCRIPT
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 1 de 14
CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA
DE PLAGUICIDAS Y CONTAMINANTES
“GUÍA DE VALIDACIÓN
DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS”
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 2 de 14
DIRECTORIO
MVZ Enrique Sánchez Cruz
Director en Jefe del Servicio Nacional de Sanidad, Inocuidad y Calidad Agroalimentaria
MVZ Hugo Fragoso Sánchez
Director General de Inocuidad Agroalimentaria, Acuícola y Pesquera
QA Mayrén Cristina Zamora Nava
Directora del Centro Nacional de Referencia de Plaguicidas y Contaminantes
MVZ Linda Coatlicue García López
Subdirectora de Monitoreo y Vigilancia de Contaminantes y Residuos Tóxicos.
LAE Daniel González Ávila
Subdirector de Monitoreo y Evaluación de Calidad
QA Víctor Manuel López Herrera
Jefe de Departamento del LDDOP
Biol. Said Efren Nuñez Armenta
Coordinador de Validación de Métodos del LDDOP
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 3 de 14
CONTENIDO
1 PROPÓSITO. .................................................................................................................................................................. 4
2 ALCANCE. ................................................................................................................................................................. 4
3 REFERENCIAS ......................................................................................................................................................... 4
4 DEFINICIONES ......................................................................................................................................................... 4
5 DESARROLLO .......................................................................................................................................................... 5
5.1 Criterios de Validación y Verificación de Métodos ............................................................................................. 5
5.1.1 Evaluación del desempeño de métodos: .............................................................................................. 5
5.2 Consideraciones previas .................................................................................................................................... 8
5.2.1 Selección de la matriz .............................................................................................................................. 8
5.2.2 Pruebas preliminares ............................................................................................................................... 8
5.3 Selección del método ......................................................................................................................................... 8
5.3.1 Método Normalizado ................................................................................................................................ 9
5.3.2 Método No Normalizado .......................................................................................................................... 9
5.4 Establecimiento del Protocolo de Validación ó Verificación de Métodos ........................................................ 10
5.5 Diseño experimental ........................................................................................................................................ 10
5.5.1 Preparación del inoculo ........................................................................................................................ 10
5.5.2 Preparación de la muestra .................................................................................................................... 11
5.5.3 Inoculación de muestras ....................................................................................................................... 12
5.5.4 Tabla de contingencias ......................................................................................................................... 12
5.6 Informe de Validación / Verificación de Métodos ............................................................................................. 12
6 ANEXOS .................................................................................................................................................................. 13
6.1 Categorías de matrices .................................................................................................................................... 13
6.2 Etapas y parámetros de validación .................................................................................................................. 14
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 4 de 14
1 PROPÓSITO.
Establecer los lineamientos y criterios para la evaluación del desempeño de métodos aplicados para el análisis de
microorganismos patógenos, aportando evidencia objetiva que permita establecer la veracidad de los resultados
particulares para su uso.
2 ALCANCE.
El presente documento es aplicable a aquellos laboratorios interesados en coadyuvar con la Dirección General de
Inocuidad Agroalimentaria, Acuícola y Pesquera del SENASICA, mediante la obtención del reconocimiento de
competencia técnica para la detección de organismos patógenos en productos vegetales , superficies de contacto
(vivas e inertes) y agua de uso agrícola.
3 REFERENCIAS
NMX-EC-17025-IMNC-2006 “Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y de
calibración”.
CRITERIOS DE APLICACIÓN DE LA NORMA NMX-EC-17025-IMNC-2006 / ISO/IEC 17025:2005 de la
Entidad Mexicana de Acreditación (ema®)
UNE-EN ISO 16140 Microbiología de los alimentos para consume humano y animal – Protocolo de
Validación de métodos alternativos.(ISO 16140:2016).
4 DEFINICIONES
Analito: Componente medido por el método de análisis. En el caso de métodos microbiológicos esto es el
microorganismo sus componentes o productos asociados (enzimas o toxinas).
Cepas de referencia: Son cultivos conservados y distribuidos por Colecciones de Cultivo, cuyos microorganismos
se encuentran definidos como mínimo a nivel de género y especie. Los laboratorios microbiológicos deben utilizar
estas como el control de sus técnicas.
Matriz.-Es el tipo de muestra (vegetal, agua, esponja, etc.) que puede o no contener al analito de interés.
Método Normalizado.-Aquellos publicados como Normas Oficiales Mexicanas (NOM), Normas Mexicanas (NMX)
ó los emitidos por organizaciones de normalización, extranjeras, regionales e internacionales; todas reconocidas,
tales como FDA (Food And Drug Administration), USDA (United States Department of Agriculture), ISO
(International Organization for Standardization), etc.
Método no Normalizado.- Los métodos, propios o desarrollados por el laboratorio, los métodos obtenidos de
publicaciones científicas, así como los métodos normalizados modificados, ampliados o usados fuera de su alcance
propuesto
Método alternativo.-Método de análisis que determina o estima, para una categoría de productos determinada, el
mismo analito que el método normalilzado correspondiente; el cual ha sido validado por comparación con el método
Normalizado (método confirmatorio).
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 5 de 14
Método confirmatorio.- Método que se emplea para confirmar los resultados positivos de los métodos alternativos,
obteniendo un microorganismo aislado.
Muestra: cantidad representativa de un total que posee todas las características físicas, fisicoquímicas y
microbiológicas del producto que se toma para someterla a estudio, análisis o experimentación.
Organismo Diana (Blanco).-Organismo definido según el alcance del método, que debe ser detectado o
enumerado.
Organismo No Diana (No blanco).-Organismo definido según el alcance del método, que no debe ser detectado
o enumerado.
Validación del método.- Confirmación mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han cumplido los
requisitos para una utilización o aplicación específica prevista para métodos No normalizados.
Verificación del método.- Confirmación mediante la aportación de evidencia objetiva de que se han cumplido los
requisitos especificados para métodos Normalizados.
5 DESARROLLO
5.1 Criterios de Validación y Verificación de Métodos
5.1.1 Evaluación del desempeño de métodos:
Proceso que se realizara en el laboratorio para demostrar que un método produce consistentemente resultados
confiables en las condiciones particulares del laboratorio evaluando los siguientes aspectos divididos en las etapas 1,
2, 3 y 4 (Ver Anexo 6.2).
5.1.1.1 Límite de detección
Demostrar la concentración más baja en la que el método es capaz de recuperar al microorganismo de las muestras
inoculadas con un nivel bajo de inoculo (menor a 5 UFC´s).
LD= VP x 100
Ni
Dónde:
VP= Resultados Positivos de muestras con inoculación baja
Ni = Muestras inoculadas (menos a 5 UFC´s)
Criterio de aceptación: Mayor o igual 80%.
5.1.1.2 Repetibilidad (R)
Grado de concordancia entre resultados sucesivos e independientes obtenidos por el mismo método empleando un
material idéntico bajo las mismas condiciones (aparatos, operadores, laboratorio e intervalos de tiempos cortos, es
decir condiciones de repetibilidad)
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 6 de 14
R= N x 100
VP
Criterio de aceptación: Mayor o igual a 90%.
5.1.1.3 Reproducibilidad
Grado de concordancia entre resultados de análisis individuales en materia de análisis idéntico empleando el mismo
método y obtenido por operadores en diferentes laboratorios empleando equipos diferentes (es decir unas
condiciones de reproducibilidad)
El análisis es realizado por al menos dos personas y se evalúan los criterios de Eficacia Relativa, Especificidad
Relativa y Sensibilidad Relativa de forma independiente.
Criterio de aceptación: Mayor o igual al 95% de eficacia relativa por cada analista
5.1.1.4 Eficacia Relativa (ER)
Grado de correspondencia entre la respuesta obtenida por el método con las muestras inoculadas y las que no
están inoculadas
ER= VP+VN x 100
N
Criterio de aceptación: Mayor igual a 95%
5.1.1.5 Especificidad Relativa (ES) (Exclusividad)
Capacidad del método para distinguir al microorganismo diana, de otros organismos similares, pero
genéticamente distintos o no diana,
ES = VN x 100
Ns
Criterio de aceptación: Mayor igual al 95%
5.1.1.6 Sensibilidad Relativa (SR) (Inclusividad)
Capacidad del método para detectar el microorganismo diana cuando se encuentra presente, en una amplia gama
de microorganismos no diana. Por ejemplo: clasificación taxonómica, composición inmunológica, genética, etc.
SR = VP x100
Ni
Criterio de aceptación: Mayor igual al 95%
5.1.1.7 Robustez
La robustez es una medida de la capacidad de un procedimiento analítico de no ser afectado por variaciones
deliberadas de los parámetros del método; proporciona una indicación de la fiabilidad del procedimiento en un uso
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 7 de 14
normal. En este sentido el objetivo de la prueba de robustez es optimizar el método analítico desarrollado o
implementado por el laboratorio, y describir bajo qué condiciones analíticas (incluidas sus tolerancias), se pueden
obtener resultados confiables.
Un método de ensayo es más robusto entre menos se vean afectados sus resultados frente a una modificación de
las condiciones analíticas.
Entre las condiciones analíticas que podrían afectar a un método se encuentran:
· Analistas
· Equipos
· Reactivos
· pH
· Temperatura
· Tiempo de reacción
· Matriz
· Entre otros; dependiendo las variaciones que considere pertinentes el laboratorio.
Para realizar en análisis de robustez se aplica el test de Youden y Steiner aplicado de la siguiente forma:
Prueba de Robustez de Younden y Steiner
Letra Descripción Valor
Nominal
Valor Alto Valor
Bajo
A/a Condición 1 X A a
B/b Condición 2 Y B b
… … … … …
Se deben establecer las comparaciones posibles, es decir las diferencias entre la variable de alto valor contra la de
valor bajo; esta prueba nos permite evaluar de 4 a 7 condiciones:
(A – a), (B – b), (C – c), (D – d), (E – e), (F – f) y (G – g)
Condición 1 2 3 4 5 6 7 8
A/a A A A A a a a a
B/b B B B b B b b b
C/c C c C c C c C c
D/d D D d d d d D D
E/e E e E e e E e E
F/f F f f F F f f F
G/g G g g G g G G g
Resultado*
Resultado*
Resultado*
* Estos resultados son por las cada una de las tres replicas
Donde los resultados obtenidos se reportan como presencia (1) o ausencia (0)
Criterio de aceptación:
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 8 de 14
Para las variables (A y a), (B y b)…. :
Donde el promedio de A se calcula: (A+A+A+A) = X;
4
Donde se espera un resultado igual a X=1,
cuando el método es lo suficientemente robusto
para no ser afectado por condiciones evaluadas.
Donde el promedio de A se calcula: (a+a+a+a) = X;
4
Donde se espera un resultado igual a X=1,
cuando el método es lo suficientemente robusto
para no ser afectado por condiciones evaluadas.
5.2 Consideraciones previas
5.2.1 Selección de la matriz
Los criterios para la selección de matriz para la evaluación del desempeño del método, se basan en la Categoría
de matrices (Anexo 6.1) y en el siguiente orden de importancia:
Matrices de la región con mayor probabilidad de analizar
Registro histórico de muestras analizadas
Categorías de matrices (Ver Anexo 6.1 Categorías de matrices)
Alertas / Notificaciones sanitarias
Vinculación epidemiológica entre la matriz y el organismo diana
Programas de Monitoreo y Vigilancia establecidos por el SENASICA
Petición explicita del cliente
5.2.2 Pruebas preliminares
Es recomendable realizar pruebas preliminares para asegurar (o en su caso controlar) que no existe algún factor
que no permita la detección del organismo de interés por el método empleado.
Las pruebas preliminares se realizan para determinar:
El efecto o interferencia de la matriz sobre el método
Evaluar reactivos que van a ser utilizados
La preparación de las muestras, etc.
Es necesario documentar todas las actividades realizadas junto con los resultados obtenidos.
5.3 Selección del método
Para verificar o validar un método, en necesario definir el tipo de Método (Normalizado o No Normalizado) con la
finalidad de establecer los parámetros de validación o verificación correspondientes.
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 9 de 14
Diagrama1. Selección del método
5.3.1 Método Normalizado
Para métodos o procedimientos normalizados el laboratorio debe realizar y presentar evidencia objetiva de la
verificación del método para demostrar que cumple las especificaciones del mismo y cuenta con la competencia
técnica para realizarlo adecuadamente, tomando en consideración sus propias instalaciones, equipo y personal.
La verificación del método debe considerar los siguientes criterios:
Eficacia Relativa.
Especificidad Relativa
Sensibilidad Relativa
5.3.2 Método No Normalizado
Para métodos o procedimientos no normalizados, el laboratorio debe realizar y presentar evidencia objetiva de la
validación del método para demostrar que el método es capaz de detectar el microorganismo de interés.
La validación de estos métodos debe considerar los siguientes criterios:
Límite de Detección.
Repetibilidad.
Reproducibilidad.
Método
Normalizado (NOM, ISO, FDA, etc.)
No Normalizado (normalizado
con modificación)
Certificado (AOAC, AFNOR,
etc.)
Protocolo de validación
Protocolo de verificación
Informe de validación o verificación
Registros Validación
Verificación
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 10 de 14
Eficacia Relativa.
Especificidad Relativa
Sensibilidad Relativa
Robustez
Los métodos no normalizados se consideran como análisis “Tamiz”, por lo que cada resultado positivo, deberá ser
confirmado por el método Normalizado o Confirmatorio (aislamiento de microorganismo; tanto en la validación del
método como en el método de rutina), para poder emitir resultados confiables y demostrar que el método es
equivalente al método Normalizado.
5.4 Establecimiento del Protocolo de Validación ó Verificación de Métodos
Antes de iniciar con la validación o verificación de un método, se debe contar con el “Protocolo de Validación” o
con el “Protocolo de Verificación” (Según la selección del método) con la finalidad de planificar y organizar las
actividades correspondientes.
Para ello, se deberán definir:
Objetivo
Alcance
Personal que participara en las actividades
Metodología
Diseño experimental
Listado de equipos, instrumentos, materiales, medios de cultivo, reactivos y cepas de referencia
Parámetros y criterios de aceptación del método
Método estadístico
Formatos y Registros asociados
5.5 Diseño experimental
5.5.1 Preparación del inoculo
La validación y verificación de métodos debe de contemplar el uso de materiales de referencia adecuados al
alcance de la metodología para dar confiabilidad a los resultados obtenidos en el laboratorio. Por lo tanto, el uso de
materiales de referencia es un requisito necesario en los métodos realizados en los laboratorios.
Para realizar las diluciones de los microorganismos diana y no diana que se van a emplear en la validación o
verificación, se siguen las indicaciones de trabajo para diluciones bacterianas establecidas en el laboratorio, las
cuales deberán tomar en cuenta la verificación de los microorganismos empleando el método normalizado. La
verificación de microorganismos no diana, se realizará siempre y cuando se cuente con un método de identificación.
Es importante señalar que para los parámetros de especificidad y sensibilidad relativa en las etapas 3 y 4, es
necesario considerar las muestras estimadas para cada una de ellas con las inoculaciones del microorganismo
diana y no diana.
Las concentraciones de los microorganismos no diana deberán ser 10 veces mayor a la concertación del
microorganismo diana y este a su vez debe ser 10 veces mayor al límite de detección del método.
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 11 de 14
Ejemplo:
Se contemplan 20 muestras para especificidad y sensibilidad relativas para cada etapa (3 y 4) de las cuales, las 10
primeras se deben inocular con 4 microorganismos no diana (verdaderos negativos) y las 10 restantes se deberán
inocular con el microorganismo diana (verdaderos positivos) con los 4 microorganismos no diana (Ver Tabla 1).
Microorganismo diana. La concentración de inoculo debe ser de 10 a 100 veces mayor que el límite de detección
del método a validar.
Microorganismo no diana. La concentración de inoculo de cepas debe ser mayor al nivel del microorganismo diana
(10 veces más), y emplear como mínimo 4 microorganismos no diana por ensayo.
Tabla 1. Inoculación de muestras.
Nivel de inoculación de los Microorganismos
Muestras Diana
No diana
1
No diana
2
No diana
3
No diana
4
Eficacia
Rela
tiva
Especific
idad r
ela
tiva (
verd
adero
s
nega
tivos)
1 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
2 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
3 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
4 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
5 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
6 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
7 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
8 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
9 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
10 N/A 1X101 1X101 1X101 1X101
Sensib
ilidad
rela
tiva (
verd
adero
s
positiv
os)
11 1X101 1X102 1X102 1X102 1X102
12 1X101 1X102 1X102 1X102 1X102
13 1X101 1X102 1X102 1X102 1X102
14 1X101 1X102 1X102 1X102 1X102
15 1X101 1X102 1X102 1X102 1X102
16 1X102 1X103 1X103 1X103 1X103
17 1X102 1X103 1X103 1X103 1X103
18 1X102 1X103 1X103 1X103 1X103
19 1X102 1X103 1X103 1X103 1X103
20 1X102 1X103 1X103 1X103 1X103
5.5.2 Preparación de la muestra
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 12 de 14
La preparación de la muestra debe mantener la microflora natural presente en la matriz y adicionar las cepas diana
y no diana según el parámetro a evaluar.
Los registros de inoculación de muestras, deben contener la siguiente información
Identificación de la muestra
Cantidad de la muestra
Concentración de Inoculo de organismo diana
Concentración de Inoculo de organismos no diana
5.5.3 Inoculación de muestras
Las muestras debe considerar la microflora natural presente y considerando que los microorganismos, no presentan
una distribución uniforme de contaminación, se puede presentar una inhibición propia de la matriz, un estrés
microbiano, o una lesión de los microorganismos, por lo que es necesario realizar una contaminación artificial con
el organismo diana, y en su caso la inclusión de organismos no diana según el parámetro a evaluar.
La inoculación de las muestras se realiza en condiciones asépticas, preferentemente dentro de una cabina de
seguridad biológica.
La inoculación artificial debe asegurar la uniformidad de la contaminación en la matriz, que permita la recuperación
del microorganismo en la porción de la matriz utilizada, considerando la cantidad establecida en la metodología.
Durante la ejecución del protocolo de validación se deberán documentar todas las actividades realizadas junto con
los resultados obtenidos.
5.5.4 Tabla de contingencias
Al tratarse de pruebas cualitativas los resultados se dan en dos categorías, Presencia (Positivo) / Ausencia
(Negativo) y se establece una tabla de comparación respecto con el valor esperado y el valor obtenido por lo de
esta forma se pueden ingresan los datos en una tabla de resultados de validación, donde se realice la captura y
análisis de resultados.
Tabla de contingencias
Respuesta Muestra inoculada Muestra no inoculada
Resultado Positivo Verdadero positivo (VP) Falso Positivo (FP)
Resultado
Negativo
Falso negativo (FN) Verdadero Negativo (VN)
5.6 Informe de Validación / Verificación de Métodos
El informe debe reflejar, además de lo especificado en el numeral 5.4:
Resultados obtenidos
Conclusiones y declaración de conformidad sobre la aptitud del método, fundamentada en la evaluación de los
parámetros de desempeño respecto a los criterios establecidos.
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 13 de 14
Criterios de revalidación: justificar y fundamentar apropiadamente si se considera al método adecuado, aún
cuando se hayan producido desviaciones del protocolo o, cuando uno de los puntos del informe no concuerde
con el requisito establecido previamente, por ejemplo los criterios de aceptación.
Se deben adjuntar al informe los registros originales o hacer referencia de su ubicación y/o resguardo.
El método estadístico utilizado para la evaluación del método debe incluir la eliminación de resultados aberrantes,
tales como:
Controles negativos (sin inocular) que arrojen un resultado positivo, son indicadores de un error del
laboratorio/operador.
Evidencia de no homogeneidad o uniformidad del material inoculado.
Valores atípicos
6 ANEXOS
6.1 Categorías de matrices
FRUTAS FRUTILLAS
• Frutas de hueso (Ej. durazno) • Bayas y otras frutas pequeñas
(Ej. fresas, zarzamora, uva)
• Frutas pomáceas (Ej. manzana)
• Frutas tropicales y subtropicales variadas
• (de piel comestible) (Ej. higo)
• Frutas tropicales y subtropicales variadas
(de piel no comestible) (Ej. papaya)
Frutos cítricos (Ej. naranja)
HORTALIZAS HIERBAS AROMATICASY ESPECIAS
Brasicáceas (Ej. brócoli) • Especias (Ej. Tomillo)
• De Bulbo (Ej. cebollín) • Hierbas aromáticas (Ej. Epazote)
• Cucurbitáceas (Ej. calabaza)
De fruto (Ej. tomate, chile) OTROS
De hojas verdes (Ej. espinaca, lechuga) Setas
• De tallo (Ej. apio) Brotes de semilla (Ej. Germen de alfalfa)
• Brasicáceas (Ej. brócoli)
Leguminosas (Ej. ejote)
SUPERFICIES DE CONTACTO
(Vivas e inertes)
AGUA
• Hisopo • Agua de Riego en producción primaria
• Esponja • Agua potable proceso de empaque
GUÍA DE VALIDACIÓN DE MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS
SMEC-PR-GVM CENTRO NACIONAL DE REFERENCIA DE PLAGUICIDAS Y
CONTAMINANTES 2018.07 Ver. 00
Página 14 de 14
6.2 Etapas y parámetros de validación y/o verificación
ETAPAS DE
VALIDACIÓN Y/O
VERIFICACIÓN
PARÁMETROS
DE VALIDACIÓN
Y/O
VERIFICACIÓN
MUESTRAS REPETICONES
(REPETIBILIDAD)
TOTAL DE
MUESTRAS
TOTAL DE
ANÁLISIS CÁLCULO
CRITERIO DE
ACEPTACIÓN
Etapa 1 Límite de
Detección 10** N/A 10 10 LD=VP/Ni X 100
Mayor o igual 80%.
Etapa 2 Robustez 24* N/A 24 24 --- ---
Etapa 3.
Reproducibilidad
Especificidad
Relativa 10** X 3 10 30
SR=VP/Ni x100 Mayor igual a 95%
Sensibilidad
Relativa 10** X 3 10 30
ES=VN/Ns X100 Mayor igual a 95%
Eficacia relativa*** --- --- --- --- ER=
(VP+VN)/NX100 Mayor igual a 95%
Etapa 4.
Reproducibilidad (una
semana después
como mínimo)
Especificidad
Relativa 10** X 3 10 30
SR=VP/Ni x100 Mayor igual a 95%
Sensibilidad
Relativa 10** X 3 10 30
ES=VN/Ns X100 Mayor igual a 95%
Eficacia relativa*** --- --- --- --- ER=
(VP+VN)/NX100 Mayor igual a 95%
74 154 --- ---
* Son 8 muestras, haciendo tres replicas en las mismas condiciones (24 muestras)
** Este es el número mínimo, en medida de lo posible realizar un mayor número de muestras.
***Eficacia relativa: Esta se calcula usando los resultados de Especificidad Relativa y Sensibilidad Relativa, empleando la tabla de contingencias.
Considerar los controles positivos y negativos para cada etapa de validación.
Para el desarrollo de Validaciones de métodos, es necesario considerar para las Etapas 3 y 4 un mínimo de 10 muestras con el microrganismo diana
Sensibilidad relativa y 10 sin el microorganismo diana Especificidad relativa (por etapa) y