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Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones, Clínica,
Investigación y CáncerT.M. MsSc (c) Juan Luis Castillo N.
Centro de Diagnóstico Onco-inmunológicoLtda.Laboratorio de Citometría de Flujo
Hospital del Trabajador, Concepción, Chile.
Concepción, 16 de Agosto de 2004
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¿Qué es la Citometría de Flujo?
Aplicaciones
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Flow Cytometry Publications/year
YEARS
00
300300
600600
0 13 28 79113
223
480611
811940
2,332
1976 1977 1978 1979 1980 1981 1982 1983 1984 1985 1986 1987 1988 1991 19921989 1990 1993 1994
(*) Data taken from Medline search using the keywords: “flow Cytometry”(Agost 15th: 20:30 hrs)
1995 1996
3,483
3,479
2003: 5.588 2004: 3.205 (*)
1999: 4.2561998: 3.8891997: 3.613
2002: 5.3232001: 5.0252000: 4.771
3345
2899
2,713Papers2,4452700
2400
21002100 1,855
180018001,494
15001500 1,232
1,07812001200
900900
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¿QUE ES LA QUE ES LA CITO / METRIACITO / METRIADE FLUJODE FLUJO??
La Citometría de Flujo es una tecnología que permite la “medición simultánea de
múltiples características físicas y químicas de células en
suspensión”
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¿QUE INFORMACION ENTREGA UN CITOMETRO DE FLUJO SOBRE UNA
CELULA?
1.- Su tamaño.2.- Su granularidad o complejidad
interna.3.- Evaluación de características químicas:
• Fluorocromos
• Anticuerpos conjugados con fluorocromos
FACS: Fluorescence activated cell sorter
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Relative Sizes of Biologicals
AmoebaLymphocyte
S.aureus5-8 µm
1 µm
15-30 µm
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Componentes• Sistema de Fluidos
• Sistema Optico:
• Fuente de luz
• Separación espectral
• Sistema Electrónico:
• Control mecánico, de luz y detectores
• Colección y análisis de pulsos
• Sistema Informático:
• Análisis y presentación de datos
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Flow Cell
Injector Tip
FluorescenceFluorescencesignalssignals
Focused laserFocused laserbeambeam
Sheathfluid
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SISTEMAS DE UN CITOMETRO SISTEMAS DE UN CITOMETRO DE FLUJODE FLUJO
Sistema Optico:•Consta de uno o varios láseres, filtros, lentes y fotomultiplicadores.
•El láser produce una luz monocromática utilizada para la excitación de los fluorocromos.
Laser Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation
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PMT
PMT
PMT
PMT
DichroicFilters
BandpassFilters
Laser
1
2
3
4
Flow Cytometry OpticsFlow Cytometry Optics
Flow cell
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Lasers• Argon laser• He-Ne Laser
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Optical Collection systems
He-Cd Laser Argon Laser He-Ne Laser2nd Argon Laser
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Elite Cytometer with 4 Lasers
Water cooled argon laser
He-Cd laser
Air-cooled argon laser
Santa clause
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ANTICUERPOS MONOCLONALES
• Gran disponibilidad comercial
• Gran variedad de fluorocromos
• Precios accesibles• Pedidos vía Internet• Gran Calidad
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FLUOROCROMOSFLUOROCROMOS
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Fluorescein (FITC)EmissonExcitation
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Wavelength300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Relat
ive In
tens
ity
Protein
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Phycoerytherin (PE)Excitation Emisson
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Protein
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Propidium IodideEmissonExcitation
400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Relat
ive In
tens
ity
DNA
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Allophycocyanin (APC)Protein 632.5 nm (HeNe)
300 nm 400 nm 500 nm 600 nm 700 nm
Excitation Emisson
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![Page 36: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/36.jpg)
CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJO
PREPARACIONDE LA MUESTRA
OBJETIVO: SUSPENSION CELULAR
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CITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJOCITOMETRIA DE FLUJOPREPARACION DE LA MUESTRA
Procedimiento St.:• 100 µL de sangre total • 10 µL del Ac. conjugado • Incubar por 10-15 minutos RT • Añade el lisador • Leer en un citómetro de flujo
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PROCESO DE ANALISIS DE UNA MUESTRA
• CALIBRACION• ADQUISICION• ANALISIS
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FITC Fluorescence
Mo1
CD4 CD8
CD8
CD45
leu11a
CD20 Tube
ID
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FORMA DE PRESENTACION DE DATOS
• Histograma• Gráfico de Puntos (Dot Plot)• Gráfico de Contorno (Countour Plot)• Gráfico Isométrico (3D)• Gráfico de Densidad (Density Plot)
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Citometría de flujo: mediciones
“GATE”
LM
G
SCATTER FLUORESCENCIA IMAGEN
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Density Dot Plot Contour Plot
Color of dots can give indication Identify subpopulationsof frequency of events with proper contour lines
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HISTOGRAMA(Un Parámetro)
coun
ts
Autofluorescenciay/o
control isotipo
M1
0 FL1
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One parameter frequency histogram
# of events forparticular parameter
establish regions and calculate coefficient of variation (cv)cv = stdev/mean of half peak
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ESTADISTICA DE CUADRANTES
(Dos Parámetros)
Autofluorescenciay/o
control isotipo
FL2
0 FL1
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ESTADISTICA DE CUADRANTES
(Dos Parámetros)
+,-
4
+,+
2
-,+
1FL
2
-,-
3
0 FL1
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CITOMETRIA DE FLUJO:APLICACIONES
• Toxicología• Microbiología• Parasitología• Citogenética• Virología• . . . . . . . . .
• Hematología• Inmunología• Patología• Transplantes• Farmacología• Biología
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EVOLUCION DE LA CITOMETRIA DE FLUJO
Inmunología Celular
Aplicaciones enPatología
AnticuerposMonoclonales
Citometría deFlujo
CITOMETRIA CLINICA
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CITOMETRIA DE FLUJO:Aplicaciones Clínicas más Frecuentes
• Determinación de Subpoblaciones Linfocitarias• Inmunofenotipificación de Leucemias y Linfomas• Estudio de Ploidia de ADN y Ciclo Celular• Estudio de macrófagos intestinales (EII). • Estudio de Función Neutrofílica (estallido respiratorio,
fagocitosis, etc.) • Oncogenes (p53, PCNA, Ki67, k-ras, etc.)• Cuantificación de moléculas• Estudio de Células Progenitoras (CD34)• Estudios de Función Plaquetaria• Estudios de Resistencia a Drogas• Estudio de Citokinas Intracelulares
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SUBPOBLACIONES LINFOCITARIAS
• Linfocitos T totales :CD3(+)• Linfocitos T Helper :CD3(+)CD4(+)• Linfocitos T Sup/Citot :CD3(+)CD8(+)• Linfocitos B :CD3(-)CD19(+)• Linfocitos Natural Killer (NK) :CD3(-)CD16(+)CD56(+)
• Relación Linfocitos T CD4/CD8
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Infección VIH-SIDA
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File: 111.003Acquisition Date: 23-Apr-Gate: G6Gated Events: 12430Total Events: 15000
Quad Events % Gated % TotalUL 20 0.16 0.13UR 1496 12.04 9.97LL 2028 16.32 13.52LR 8886 71.49 59.24
RELACION CD4/CD8 = 0.17File: 111.004Acquisition Date: 23-Apr-Gate: G6Gated Events: 12512Total Events: 15000
Quad Events % Gated % TotalUL 600 4.80 4.00UR 8866 70.86 59.11LL 1499 11.98 9.99LR 1547 12.36 10.31
![Page 54: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/54.jpg)
EXAM EN R ESU LTAD O R AN G O R EFER EN CIA
LE U C O C ITO S TO TA LE S 8.500 x m m 3
LIN FO C ITO S A B SO LU TO S 2.295 x m m 3
LIN FO C ITO S T (C D 3) 1.91683.50
x m m 3
% 59.4 - 84.6 %
LIN FO C ITO S B (C D 19) x m m 3
% 6.4 - 22.6 %
LIN FO C ITO S T (C D 4) 12.04276
%x m m 3
28.5 - 60.5 %
LIN FO C ITO S T C IT/SU P (C D 8) 70.861.626
%x m m 3
11.1 - 38.3 %
R E LA C IO N T C D 4 / C D 8 0.17 1.2 - 2.1
C E LU LA S LIN FO ID E S N K(N A TU R A L K ILLE R )
x m m 3
%
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INFECCION VIH SIDA
ACTIVACION DE LINFOCITOS T: CD38
• El aumento en la expresión de moléculas CD38 en LT CD8 es un fuerte indicador pronóstico de progresión hacia SIDA y muerte.
• Superior a:• Rto. LT CD4• Marcadores solubles• Combinación HLA-DR+ CD38+
J. Acquir Immune Defic Syndr Retrovirol 16:83-92, 1997Cytometry 26:1-7, 1996Cytometry 33:115-122, 1998
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INFECCION VIH SIDA
GIORGI et al.
• Carcaterizaron el número de moléculas CD38 en LT CD8:
1.- < 2.470 =======> PROGRESOR LENTO2.- 2.470 - 3.899====> PROGRESOR BAJO3.- 3.900 - 7.250====> PROGRESOR ALTO4.- > 7.250 =======> PROGRESOR RAPIDO
• Basado en la probabilidad de desarrollar SIDA dentro de 3 años
Cytometry 33:123-132, 1998J. Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol 16:83-92, 1997
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Copyright Dennis Kunkel
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Copyright Dennis Kunkel
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CITOMETRIA DE FLUJO:Aplicaciones Clínicas más Frecuentes
• Determinación de Subpoblaciones Linfocitarias• Inmunofenotipificación de Leucemias y Linfomas• Estudio de Ploidia de ADN y Ciclo Celular• Estudio de macrófagos intestinales (EII). • Estudio de Función Neutrofílica (estallido respiratorio,
fagocitosis, etc.) • Oncogenes (p53, PCNA, Ki67, k-ras, etc.)• Cuantificación de moléculas• Estudio de Células Progenitoras (CD34)• Estudios de Función Plaquetaria• Estudios de Resistencia a Drogas• Estudio de Citokinas Intracelulares
![Page 61: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/61.jpg)
INMUNOFENOTIPIFICACION DE LEUCEMIAS
“Los distintos tipos de leucemias son un grupo heterogéneo de patologías resultantes de una proliferación descontrolada de una o más tipos
celulares hematopoyeticos tanto en médula ósea como sangre periférica”
![Page 62: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/62.jpg)
HEMATOPOYESISSTEM CELL
CFU-MLCFU-GEMM
LINFOCITO B LINFOCITO TCFU
ERITROIDEMEGACARIOCITO
CFUBASOFILO
CFUEOSINOFILO
CFU-GM
ERITROCITO BASOFILO EOSINOFILO NEUTROFILO
CFU-L
PLAQUETAS MONOCITO
![Page 63: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/63.jpg)
RETENCION DE ANTIGENOS
• Células malignas frecuentemente conservan antígenos asociados con la célula normal a partir de la cual fueron derivados
CD19 CD19
Transformación
MalignaCELULA
PRE-B NORMALCELULA
LEUCEMICA
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CLASIFICACION INMUNOFENOTIPICA (LA)
•LLA-B :-BI-pro B: CD79a y/o CD22 Y/o CD19.-BII Común : CD10.-BIII Pre B: clg.-BIV Madura : slg
•LLA-T :-TI-proT: CD7-TII-pre T: CD2 y/o CD5 y/o CD8-TIII-Cortical: CD1a-IIV-Madura: CD1a y CD3mb
•LMA : -LMA-M6 : glicoforina A-LMA-M7 : CD61, CD41, CD42b-LMA-M3 : HLA-DR(-)-LMA-M4 : HLA-DR(+)
![Page 65: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/65.jpg)
Características normales
![Page 66: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/66.jpg)
• Paciente sexo masculino• 43 años• Dgto. Leucemia Aguda
![Page 67: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/67.jpg)
![Page 68: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/68.jpg)
Leucemia LinfoblásticaDe Línea B (B-II:Común)
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CITOMETRIA DE FLUJO:Aplicaciones Clínicas más Frecuentes
• Determinación de Subpoblaciones Linfocitarias• Inmunofenotipificación de Leucemias y Linfomas• Estudio de Ploidia de ADN y Ciclo Celular• Estudio de macrófagos intestinales (EII). • Estudio de Función Neutrofílica (estallido respiratorio,
fagocitosis, etc.) • Oncogenes (p53, PCNA, Ki67, k-ras, etc.)• Cuantificación de moléculas• Estudio de Células Progenitoras (CD34)• Estudios de Función Plaquetaria• Estudios de Resistencia a Drogas• Estudio de Citokinas Intracelulares
![Page 70: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/70.jpg)
Cellular Function
• Phagocytosis• Killing index of phagocytes• Intracellular cytokines• Calcium flux• Oxidative burst• Membrane potential
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Phagosome
O2
O2-
H2O2
NADPH + H+
NADP+
HMP
NADPHOxidase
GSSG
GSHGR GP
H2O2SOD
O2-
H+
H2O
Catalase
H2O + O2
PCB
SOD
PCB(Reduced GSH level)
PKC(PMA)
?
?+
O2-
OH.
Lipid Peroxidation
Phospolipase A2 activityLeukotrienes
H2O2
Human Neutrophil
Stimulant
PCB
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DCFH-DA DCFH DCFDCF
COOHH
Cl
O
O-C-CH3
OCH3-C-O
Cl
O
COOHH
Cl
OHHO
Cl
O
COOHH
Cl
OHO
Cl
O
Fluorescent
Hydrolysis
Oxidation
2’,7’-dichlorofluorescin
2’,7’-dichlorofluorescin diacetate
2’,7’-dichlorofluoresceinCellular Esterases
H2O2
DCFH-DA
DCFHDCFH--DADA
DCFHDCFH
DCF
H OH O2 22 2Lymphocytes
Monocytes
Neutrophils
log FITC Fluorescence.1
1000100101
0
20
40
60
coun
ts
PMA-stimulated PMNControl
80
![Page 73: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/73.jpg)
• Adulto normal• No estimulado :• Estimulado con PMA :
25.86 %76.98 %
Estallido respiratorio en Granulocitos
No estimulado
Estimulado
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Estallido respiratorioCaso clínico:
• Paciente de sexo femenino• 8 años• Infecciones dérmicas recurrentes por S.aureus.• Granulomas fríos en cara y piernas• Déficit parcial de IgA.
• Evaluación de estallido respiratorio en granulocitos y monocitos.
• Inicio de terapia antibiótica con claritromicina 250 mg/12 hrs por 30 días.
• Evaluación de estallido respiratorio en granulocitos y monocitos, post terapia.
![Page 75: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/75.jpg)
DCFA DCFADespués de terapia antibiótica
Estallido respiratorio en Granulocitos
No estimulado: 33.35 %
Estimulado: 42.66 %
No estimulado: 68.97 %
Estimulado: 57.48 %
DCFA DCFA
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DCFA DCFA
DCFA
Estallido respiratorio en Monocitos
No estimulado: 25.97 %
Estimulado: 57.06 %
No estimulado: 76.26 %
Estimulado: 76.81 %
Después de terapia antibiótica
DCFA
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CITOMETRIA DE FLUJO:Aplicaciones Clínicas más Frecuentes
• Determinación de Subpoblaciones Linfocitarias• Inmunofenotipificación de Leucemias y Linfomas• Estudio de Ploidía de ADN y Ciclo Celular• Estudio de macrófagos intestinales (EII). • Estudio de Función Neutrofílica (estallido respiratorio,
fagocitosis, etc.) • Oncogenes (p53, PCNA, Ki67, k-ras, etc.)• Cuantificación de moléculas• Estudio de Células Progenitoras (CD34)• Estudios de Función Plaquetaria• Estudios de Resistencia a Drogas• Estudio de Citokinas Intracelulares
![Page 78: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/78.jpg)
Diagnóstico Serológico por Citometría de Flujo.
Bacterias: Uso de Microesferas (beads)
*
*+
Anti Ig humana conjugada
*
Ag
+bead
Suero paciente
Clin. Microbiol. Rev 2000;13:167-195J. Clin. Microbiol.. 1998;36:802-806Cytometry 1994;18:103-108
![Page 79: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/79.jpg)
Aplicaciones en Microbiología
![Page 80: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/80.jpg)
Aplicaciones en Microbiología clínica
Detección directa:
• Bacterias
• Hongos
• Parásitos
• Virus
![Page 81: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/81.jpg)
Light Scatter of Bacterial Spores
B.anthracis
B.subtilis
irradiated B.anthracis
SS
FS
Light scatter signals from a mixture of live B.anthracis spores, live B. subtilis spores and gamma irradiated B. anthracis spores.
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Microbial Identification Using Antibodies
Enumeration & identification of target organisms in mixed populations
Examples include:• Legionella spp. in water cooling towers• Cryptosporidium & Giardia in water reservoirs• Listeria monocytogenes in milk• E.coli O157:H7 in contaminated meat• Bacillus anthracis & Yersinia pestis biowarfare agents
![Page 83: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/83.jpg)
Agentes antibacterianos:• Microbiología tadicional (18-24 horas)• Citometría de flujo (pocas horas)• Evaluación de parámetros metábolicos:
• Potencial de membrana• Tamaño celular• Cantidad de ADN• Pruebas de suceptibilidad:
• Efecto bacteriostático• Efecto bactericida
![Page 84: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/84.jpg)
Susceptibilidad bacteriana: FSC/SSC
![Page 85: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/85.jpg)
Universidad de Concepción, ChileHospital del Trabajador Concepción, Chile
In vitro STUDIES OF pH EFFECT UPON MEMBRANE COMPONENTS, SHAPE AND SIZE OF Helicobacter pylori: EPIFLUORESCENCE AND FLOW CYTOMETRY STUDIES.
pH 3
pH 7
pH 10
pH 3
pH 7
pH 10
Strain ATCC43504 Strain 747LO-Skolen, Helsingør, Denmark, July 4-7, 2002
![Page 86: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/86.jpg)
Susceptibilidad bacteriana
Combinación de:• Tamaño (FSC)• Granularidad (SSC)• Fluorescencia:
• Fluorocromos para ADN y ARN• Fluorocromos para ensayos metabólicos:
• Unión a proteínas• Potencial de membrana
Clin. Microbiol. Rev 2000;13:167-195Cytometry 1997;27:169-178
![Page 87: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/87.jpg)
dep.
pol.
![Page 88: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/88.jpg)
dep.
pol.
![Page 89: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/89.jpg)
pol.
dep.
![Page 90: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/90.jpg)
• S. aureus
• Depolarizaciónen 1 hora.
• Potencial demembranapermanece disminuido.
Antimicrob Agents Chemother 2000:44;827-834
![Page 91: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/91.jpg)
CITOMETRIA DE FLUJO:Gastroenterología y Cáncer
• Inmunología y pólipos de colon.• Enfermedad Inflamatoria Intestinal.• Tumores sólidos:
• Ciclo celular y Ploidía de ADN.• Proteínas del ciclo celular• Oncogenes
• Cáncer de Esófago• Linfoma
![Page 92: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/92.jpg)
![Page 93: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/93.jpg)
ENFERMEDAD INFLAMATORIA INTESTINALEspectro de presentación.
Enfermedad de CrohnColitis ulcerosa
Alteración de la inmunoregulación de mucosa intestinal
Inflamación persistente y/o recurrente
GranulomatosaCongestión ulcerativa
Cáncer
![Page 94: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/94.jpg)
ENFERMEDAD INFLAMATORIA INTESTINAL
Enfermedad de CrohnColitis ulcerosa
Estudios celulares de mucosa intestinal (CF):
• Células epiteliales C.P.A.
• Macrófagos Moduladores
• Linfocitos: TCD4 Perpetuación
Induction and Modulation of Gastrointestinal InflamationFALK Symposium 104, Amsterdam, 1999.
![Page 95: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/95.jpg)
ENFERMEDAD DE CROHN COLITIS ULCEROSA
Proceso inflamatorio difuso continuo, limitado al colon
Afecta a todo el tracto digestivo
Inflamación superficial de la mucosa
Proceso transmural y granulomatoso
Presencia de pseudopólipos
Compromiso de mucosa discontinuo
![Page 96: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/96.jpg)
Colon normal
CrohnCrohn
C.U.
![Page 97: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/97.jpg)
Macrófagos intestinales:
• Están localizados en la región subepitelial de la mucosa.• Constituyen entre 10 a 20% de las células mononucleares
de la lamina propia. • Detección de su fenotipo:
• Inmunohistoquímica• Citometría de Flujo
• Existe diferencia entre las poblaciones de macrófagos encontrados en mucosa de EII y en personas que no la presentan
Fiocchi C. Am J Physiol.1997,273:G769-75 Young HE et al. Dev Dyn.1995;202:137-44
![Page 98: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/98.jpg)
Pacientes:
UNIVERSO (n=70)
SOSPECHA CLINICA (+)ENDOSCOPIA (+) (n = 52) GRUPO
TESTIGO(n = 18)
HISTOLOGIA NO ESPECIFICA
(n = 38)
EII POR BIOPSIA (n = 14)
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Método
Dgto. de EII: Clínico, endoscópico
e histológico Grupo de EII
Controles clínicos regulares Grupo testigo
Criterio de Exclusión
Consentimiento informado
![Page 100: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/100.jpg)
Endoscopía
HLA-DRCD33
CD16CD33
Materiales y Métodos
Biopsia2 x 2 mm Disgregación
mecánica
30` oscuridad
FACSCalibur Software Cell-Questv.3.3
Mínimo de 10000 eventos
![Page 101: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/101.jpg)
Pacientes según fenotipo HLA-DR en MI y diagnóstico de EII
Fenotipo MIEII-CH
100 (14)
0 (0)
100 (14)
p<0.001
Testigo
11.11 (2)
88.89 (16)
100 (18)
Total
65.71 (46)
34.29 (24)
100 (70)
HLA-DR(+)
HLA-DR(-)
Total
Sospecha Clínica
HNC
78.94 (30)
21.06 (8)
100 (38)
p<0.001
Subtotal
84.61 (44)
15.39 (8)
100 (52)
p<0.001
HNC: Histología no concluyenteEII-CH: EII con confirmación Histológica
Chi Cuadrado con corrección de Yates p < 0.001
![Page 102: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/102.jpg)
Fenotipo MIEII-CH
85.71 (12)
14.29 (2)
100 (14)
P>0.05
Testigo
55.55 (10)
44.45 (8)
100 (18)
Total
74.28 (52)
25.72 (18)
100 (70)
CD16 (+)
CD16 (-)
Total
Pacientes según fenotipo CD16 en MI y diagnóstico de EII
HNC
78.94 (30)
21.06 (8)
100 (38)
p<0.05
Subtotal
80.76 (42)
19.24 (10)
100 (52)
p<0.05
Sospecha Clínica
HNC: Histología no concluyenteEII-CH: EII con confirmación Histológica
Chi Cuadrado con corrección de Yates p < 0.05
![Page 103: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/103.jpg)
Especificidad
88.9
88.9
88.9
VPN
66.7
66.6
100
VG
85.7
82.0
93.7
Sospechaclínica
HNC
EII-CH
Indices de validación para HLA-DR en EII
Sensibilidad
84.6
78.9
100
VPP
95.7
93.7
87.5
HNC: Histología no concluyenteEII-CH: EII con confirmación HistológicaVPP: Valor predictivo positivoVPN: Valor predictivo negativoVG: Valor Global
![Page 104: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/104.jpg)
Especificidad
44.4
44.4
44.4
VPN
44.4
50.0
80.0
VG
71.4
67.85
62.5
Sospechaclínica
HNC
EII-CH
Indices de validación para CD16 en EII
Sensibilidad
80.8
78.9
85.7
VPP
80.8
75.0
54.5
HNC: Histología no concluyenteEII-CH: EII con confirmación HistológicaVPP: Valor predictivo positivoVPN: Valor predictivo negativoVG: Valor Global
![Page 105: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/105.jpg)
CITOMETRIA DE FLUJO:Gastroenterología y Cáncer
• Inmunología y pólipos de colon.• Enfermedad Inflamatoria Intestinal.• Tumores sólidos:
• Ciclo celular y Ploidía de ADN.• Proteínas del ciclo celular• Oncogenes
• Cáncer de Esófago• Linfoma
![Page 106: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/106.jpg)
ANALISIS CITOMETRICO DE TUMORES SOLIDOS
•Tejido fresco o congelado.
•Tejido fijado en formalina -desparafinado.
Concordancia : 90 %.
![Page 107: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/107.jpg)
ANALISIS CITOMETRICO DE TUMORES SOLIDOS
TEJIDO FRESCO
Ventajas :
- Células enteras ( ADN, Ags. de membrana y citoplasma ).- Menor debris ( mejor resolución del histograma ).
Desventajas :
- No es posible la localización histológica de áreasde interés.
- Proceso inmediato o congelación.
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 108: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/108.jpg)
ANALISIS CITOMETRICO DE TUMORES SOLIDOS
TEJIDO FIJADO EN FORMALINA Y DESPARAFINADO
Ventajas :
- Selección histológica de áreas de interés.- Permite estudio retrospectivo en individuos de curso clínico conocido.
Desventajas :
- Núcleos “desnudos”.- Fijación en formalina o microondas.- Mayor debris.
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 109: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/109.jpg)
ESTUDIO DE PLOIDIA DE ADN Y CICLO CELULAR
• Se evalúa el contenido relativo de ADN en el núcleo de una célula normal o neoplásica.
• Se obtiene una estimación de las fases delciclo celular.
• Se utilizan sustancias fluorescentes que tiene afinidad con el ADN (PI, DAPI, BrEt).
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999 J.L.C.N.
![Page 110: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/110.jpg)
CICLO CELULARCICLO DE VIDA DE UNA CELULA (24HRS)
MITOSISM
1 hrG2(4n) G0 (2n)
9 hr
4 hrPost Síntesis DNA
10 hrs
Síntesis ADN S G1 (2n) Pre-síntesis ADN
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 111: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/111.jpg)
HISTOGRAMA DE ADN OBSERVADO
4n2n
FASES G0G1
NU
ME
RO
DE
CE
LU
LA
S
FASE S FASES G2+M
CONTENIDO DE ADN
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 112: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/112.jpg)
Histograma Diploide o “Normal”
![Page 113: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/113.jpg)
Histograma Aneuploide
![Page 114: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/114.jpg)
Conferencia de Consensos en Citometría del ADNOctubre de 1992. Cytometry 14:471-7, 1993.
La ploidía del ADN se expresa como Indice de ADN ( IA ):
IA = G0G1 población en estudioG0G1 población de referencia
Población de referencia : tejido normal del cual se origina el tumor en estudio.
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 115: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/115.jpg)
Conferencia de Consensos en Citometría del ADNOctubre de 1992. Cytometry 14:471-7, 1993.
IA = 1 ADN diploide.IA > 1 ADN aneuploide.
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 116: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/116.jpg)
ANALISIS CITOMETRICO DE TUMORES SOLIDOS
ANEUPLOIDIA
•Grado de malignidad
•Pronóstico
Invasión
Metástasis
Evolución natural
Respuesta a tratamiento
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
![Page 117: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/117.jpg)
ANALISIS CITOMETRICO DE TUMORES SOLIDOS
PROLIFERACION CELULAR
•Tiempo libre de enfermedad.
•Sobrevida.
![Page 118: Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones ... · -IIV-Madura: CD1a y CD3mb ... CH3-C-O Cl O COOH H Cl HO OH Cl O COOH H Cl HO O Cl O Fluorescent Hydrolysis Oxidation 2’,7’-dichlorofluorescin](https://reader030.vdocuments.pub/reader030/viewer/2022013110/5ad93cca7f8b9ab8378e65ac/html5/thumbnails/118.jpg)
Conferencia de Consensos en Citometría del ADNOctubre de 1992. Cytometry 14:471-7, 1993.
Proliferación Celular :
Fracción Fase S tiene valor predictivo positivo
S+G2M no debería usarse.
Fracción Fase S específica de células tumoraleses el parámetro citométrico más relevante como
factor pronóstico independiente.
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
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ESTUDIO DE PLOIDIA DE ADN Y CICLO CELULAR
• Estudio del comportamiento biológico de poblaciones celulares dentro de un tumor.
• Determinación de Fracción proliferativa (Fases S + G2M) de una población celular.
• Pronóstico y sobrevida de pacientes afectados de cáncer.
• Estudios de viabilidad.• Apoptosis.
Aplicaciones:
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
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MUESTRAS USADAS PARA ANALISIS DE PLOIDIA DE ADN Y CICLO CELULAR POR
CITOMETRIA DE FLUJO
I Suspensiones Celulares:• Líneas Celulares.• Sangre Periférica• Médula Osea• Fluídos con alta celularidad (Liq. ascítico,
peritoneal, etc.)II Tumores Sólidos:
• Tejido sólido• Aspirado Celular
III Tejidos Embebidos en Parafina
Rev. Méd. Chile vol. 127 n.11 Santiago Nov. 1999
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Resultados en Cáncer Gástrico Avanzado :
PLOIDIA
FASE S
Cuadernos Chilenos de Cirugía N°40, 1996: 166-174
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Fase Ses un factor pronóstico independiente
en Cáncer gástrico Avanzado
Cuadernos Chilenos de Cirugía N°40, 1996: 166-174
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ESOFAGO
• Mucina 1• Ciclo celular• Ploidía de ADN• p53
Carcinoma superficial de
células escamosas
Marcadores pronósticos
• Endoscopy 2001;33(1):1-7• Int J Cancer 1999;84(3):251-7• Cancer 1999:85(11):2322-8
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LINFOMA
• Poblaciones Linfoides T• Poblaciones Linfoides B:
• Expresión de cadenas livianas tipo kappa• Expresión de cadenas livianas tipo lambda
• Ausencia de otros marcadores (CD5, CD10, CD34)
Helicobacter pyloriMALT
• Hematology 2001• BMC Gastroenterology 2 (WWW.biomedcentral.com/1471-230x/2/6)
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¿?
Disponible en:
www.oncoinmun.co.cl
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Citometría de Flujo: Introducción, Aplicaciones, Clínica,
Investigación y CáncerT.M. MsSc (c) Juan Luis Castillo N.
Centro de Diagnóstico Onco-inmunológicoLtda.Laboratorio de Citometría de Flujo
Hospital del Trabajador, Concepción, Chile.
Concepción, 16 de Agosto de 2004