columnas acquity uplc & nuevos rellenos lc€¦ · amplia y creciente selección de rellenos de...

©2010 Waters Corporation

Columnas Acquity UPLC & Nuevos Rellenos LC

Bàrbara Bagó

Facultad Química - Universidad de Sevilla

3 de Noviembre 2011

©2011 Waters Corporation 2

Agenda

Columnas Acquity UPLC

HILIC

Nuevos Rellenos en Fase Reversa — HSS CN

— HSS PFP

Nuevas columnas 2.5 um eXtended Performance [XP]

http://www.waters.com/waters/nav.htm?locale=es_ES&cid=134618172�




Columnas Waters

Styragel®

µBondapak™

DeltaPak®

1964 1979 1973

1992

Symmetry®

Spherisorb®

Atlantis ®

Symmetry® 300

XTerra®

XTerraPrep®

1998

Nova-Pak®

ProteinPakTM

Pico-TagTM

SymmetryShield®

1984

1986

2002

1999 1994 2003

Atlantis ® HILIC Silica Prep OBD™

Intelligent SpeedTM

BioSuite™ NanoEase™

2004

ACQUITY UPLC® BEH SunFire™ Columns

PrepPak®

1976

1958

Atlantis® T3

ACQUITY UPLC® HSS T3 AccQTagTM Ultra

2006

2005

XBridge™

2007

ACQUITY UPLC ® HSS C18 and HSS C18 SB

2008

XBridge™ HILIC

2009

ACQUITY UPLC® BEH Amide ACQUITY UPLC® BEH Glycan ACQUITY HSS HPLC Columns

2010

ACQUITY UPLC® BEH200 SEC XSelect CSH HPLC columns

ACQUITY CSH Columns Viridis SFC Columns

ProteinPak High Rs IEX

AccQTagTM


La oferta más amplia en Columnas UPLC – Hasta los 15 – 18 K PSI

BEH C18

BEH C8

BEH Fenilo

BEH Shield RP18

BEH HILIC

BEH Amida

CSH C18

CSH Fluoro-Fenilo

HSS T3

HSS C18

HSS C18 SB

5 partículas base • 130Å, 200Å and 300Å BEH [Ethylene Bridged Hybrid], HSS [High

Strength Silica] and CSH [Charged Surface Hybrid]

• Todos disponibles en tamaños de partícula HPLC y UPLC

Amplia y creciente selección de rellenos de columna • 15 fases estacionarias

• BEH 130Å C18, C8, Shield RP18, Fenil, HILIC y Amida

• BEH 300Å C18 y C4

• BEH 200Å SEC

• HSS C18, T3, C18 SB, HSS CN & HSS PFP

• CSH C18, Fluoro-Fenilo y Fenilo-Hexilo

Contrastadas soluciones para aplicaciones específicas • AAA, OST, PST, PrST y Glicanos

Escalabilidad entre HPLC y UPLC Columnas XBridge HPLC y ACQUITY UPLC BEH

Columnas HSS HPLC y ACQUITY UPLC HSS

Columnas XSelect HPLC y ACQUITY CSH

Precolumnas VanGuard

Tecnología eCord

CSH Fenilo-Hexilo

Si

O

O

O

Si

F

F

F

F

F

O

O

O

Si

O

O

O


Precolumnas VanGuard™ Diseñadas para aplicaciones UPLC®

Las primeras y únicas precolumnas desarrolladas para trabajar en rutina a presiones de hasta 15.000 – 18.000 psi (1.000 – 1.200 bar)

Diseño de muy baja dispersión

Protección de la columna de UPLC®, manteniendo su eficacia


Dimensiones Columnas ACQUITY UPLC™

Diámetro interno (1.0 mm, 2.1 mm y 3.0 mm)

— Como recomendación genérica usar 2.1 mm

— Usar sólo 1 mm en situaciones específicas

o Volumen de muestra muy pequeño

— Nuevas columnas de 3.0 mm id

o Recomendadas en separaciones isocráticas

o Superior capacidad de carga

Longitud (30 mm, 75 mm, 50 mm, 100 mm y 150 mm)

— Si el objetivo prioritario es RAPIDEZ

o Empezar con 50 mm de longitud

— Si el objetivo prioritario es RESOLUCION

o Empezar con 100 mm de longitud


Columnas UPLC - Nuevas dimensiones: 75 mm longitud


Columnas Acquity CSH [Charged Surface Hybrid]: Tecnología CSH

Amplio rango de selectividades con un

elevado nivel de reproducibilidad

Superior forma de pico/capacidad de carga para compuestos básicos

Idealmente adecuadas para fases móviles con

baja fuerza iónica, sin tamponar o bien tamponadas

Rápido equilibrado de columna al cambiar entre diferentes pH’s

Excepcional reproducibilidad lote - a - lote

Escalabilidad entre plataformas tecnológicas HPLC y UPLC


Columnas Acquity CSH [Charged Surface Hybrid]:

CSH C18

— Mid/high coverage trifunctional C18

— Particle size: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 and 5 µm [XSelect HPLC Columns]

— pH range: 1 – 11; Temp. limit: 80°C

— Superior peak shape for bases in buffered and low ionic strength mobile phases

— Lower retentivity for bases (vs. BEH C18)

CSH Fluoro-Phenyl — Non end-capped trifunctional pentafluorophenyl (PFP)



— Exceptional peak shape and lower retentivity for bases with exceptional selectivity differences

— Market-leading reproducibility

CSH Phenyl-Hexyl — Trifunctional phenyl-hexyl



— Exceptional peak shape for bases

— Complementary selectivity for aromatic species

1.7 µm

UPLC

HPLC

3.5, 5 µm


Tecnología CSH: Controlled Surface Charge Yields High Performance

Column: 2.1 x 50 mm MP A: water

MP B: acetonitrile MP C: 2% formic acid

Gradient: 25-35%B in 2 min, 35 – 95%B from 2 -

3 min; [2.5% C held constant]

Inj. Vol.: 5 µL Sample Conc.: 10

µg/mL Detection UV @ 254 nm Sampling rate: 20 Hz

Filter: 0.1 sec System: ACQUITY UPLC H-Class with ACQUITY UPLC PDA and SQD

Tricyclic

antidepressants: 1. Doxepin

2. Desipramine 3. Imipramine 4. Nortriptyline 5. Amitriptyline 6. Trimipramine

1

AU

0.00

0.05

0.10

ACQUITY CSH C18 1.7 µm 0.05 % formic acid

Peak capacity =71

2 3 4

5 6

Minutes

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00

0.00

Minutes

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00

AU

0.05

0.10

Fused Core C18 1.7 µm 0.05 % formic acid

Peak capacity = 26

1 2 3 4 5 6

Comparative separations may not be representative of all applications


Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Tecnología BEH

Columnas de aplicación general

— Amplio rango de compuestos

— Fases móviles tamponadas

— Estabilidad a pH elevado es lo más importante

Excepcional comportamiento cromatográfico en cualquier plataforma tecnológica

Elevada eficiencia, forma de pico y estabilidad

Combinación exclusiva de rango de pH, límite de temperatura y presión

Escalabilidad entre plataformas tecnológicas HPLC y UPLC®

Amplio rango de fases estacionarias

Tecnología de partícula híbrida adecuada para el desarrollo de métodos


Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Químicas Fase Reversa

BEH C18 — Enlace trifucnional - ligando C18

— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 , 5 y 10 µm [Columnas HPLC XBridge]

— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 80°C — Excepcional eficacia y forma de pico

BEH C8 — Enlace trifuncional- ligando C8


— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 60°C — Menor hidrofobicidad que C18

BEH Shield RP18 — Enlace monofuncional, grupo carbamato embebido [pH 2 – 11]


— Rango pH: 2 – 11; Límite temp.: 50°C — Selectividad alternativa

BEH Fenilo — Enlace trifuncional – ligando C6-Fenilo

— Tamaño partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC XBridge]

— Rango pH: 1 – 12; Límite temp.: 80°C — Selectividad complementaria para compuestos aromáticos

1.7 µm

UPLC

HPLC

2.5, 3.5, 5 & 10 µm


Columnas Acquity HSS [High Strength Silica]

HSS T3 — Baja densidad de ligando, enlace trifucnional - ligando C18 [pH 2 – 8]

— Tamaño de partñicula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS]

— Rango pH: 2 – 8; Límite temp.: 45°C

— C18 compatible con fases móviles acuosas con elevada vida de columna

— Recomendada para máxima retención de compuestos polares en fase reversa

HSS C18 — Elevada cobertura, enlace trifuncional – ligando C18 [pH 1 – 8]

— Tamaño de partícula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS ]


— Universal, elevado comportamiento C18

— Proprietary endcapping technique for superior peak shape and lifetime

HSS C18 SB [Selectivity para Bases] — Baja densidad de ligando, enlace trifuncional - ligando C18 [pH 2 – 8]

— Tamaño de partícula: 1.8 µm [UPLC]; 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC HSS]


— C18 sin endcapping diseñada para in teracción silanólica y selectividad alternativa

1.8 µm

UPLC

HPLC

3.5 and 5 µm


¿Qué opciones existen para mejorar la retención de compuestos polares?

Probar HILIC

Analitos Polares – Límitaciones en la Aproximación por Fase Reversa

Inferior sensibilidad en la detección por MS — Los analitos se retienen en un elevado contenido acuoso en la fase

móvil

— Más difícil desolvatar fases móviles acuosas en MS

Retención inadecuada si el analito está cargado — Los analitos con elevado pKa se retendrán menos en las fases

móviles habituales a pH ácido


¿Qué es HILIC?

HILIC - Hydrophilic Interaction Chromatography

Retención de compuestos altamente polares no retenidos por fase reversa

— Menor interferencia de componentes de la matriz

Selectividad complementaria a la fase reversa — Los pesticidas polares se retienen más que las interferencias

Hidrofóbicas Sensibilidad superior en MS

— Fases móviles con elevado contenido orgánico (> 80% ACN) favorece la respuesta ESI-MS

— Inyección directa de extractosaltamente orgánicos sin dilución — Facilita el uso de pequeños volúmenes de muestra

Elevado procesamiento de muestras

— Inyección directa de extractos de elevado contenido orgáncio que provienen de PPT, LLE o SPE sin necesidad de diluir o bien

evaporar y reconstituir


Columnas Acquity BEH [Ethylene Bridged Hybrid]: Químicas HILIC

1.7 µm

UPLC

HPLC

2.5, 3.5, 5 & 10 µm

BEH HILIC — Partícula híbrida puente etileno sin funcionalizar

— Tamaño de partícula: 1.7 µm [UPLC]; 2.5, 3.5 y 5 µm [Columnas HPLC

XBridge]


— Excepcional forma de pico y retención para analitos básicos polares

BEH Amida — Selectividad alternativa para separaciones HILIC

— Tamaño de partícula: 1.7 µm [UPLC]; 3.5 µm [Columnas HPLCXBridge]


— Diseñada para la retención de analitos polares ácidos, neutros y básicos

— Columna ideal para carbohidratos/azúcares y glicanos


Comparación Selectividad BEH Amida vs. BEH HILIC

Compounds 1. Methacrylic Acid

2. Cytosine 3. Nortriptyline 4. Nicotinic Acid

AU

0.00

0.20

0.40

0.60

3

1 2

4

Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00

AU

0.00

0.20

0.40

0.60 1

2

3

4

ACQUITY UPLC BEH HILIC 2.1 x 100 mm, 1.7 µm

Isocratic mobile phase of 90/5/5 ACN/EtOH/10 mM CH3COONH4 in H2O with 0.02% CH3COOH, flow rate 0.5 mL/min, column temp. 25 °C, 1.5 µL injection, 60 µg/mL each compound, sample diluent 75/25 ACN/MeOH, UV 210 nm

ACQUITY UPLC BEH Amide 2.1 x 100 mm, 1.7 µm


Análisis azúcares en Columna 1.7µm BEH Amida

1) Fructose, 2) Glucose, 3) Sucrose, 4) Maltose, 5) Lactose

ACQUITY ELSD using 0.29mL/min at 35°C, Isocratic with 0.2%TEA in 75% ACN

Minutes 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 5.5 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0

Food Sugars (1mg/mL)

1

Blueberry Jam Extract

(5mg/mL)

2

3

4

5

1

2

4

P-T

olu

am

ide


Agenda


HILIC


— HSS PFP






2 Plataformas en Columnas LC completamente escalables

Familia diseñada y optimizada para

Estabilidad pH

Columnas LC más compatibles con detección MS en el mercado

Familia diseñada y optimizada para Selectividad

Múltiples sustratos de partícula

para resolver múltiples problemas cromatográficos

1.7 [UPLC], 2.5, 3.5, 5 y 10 µm 1.8 [UPLC], 2.5, 3.5 y 5 µm HSS

1.7 [UPLC], 2.5, 3.5 y 5 µm CSH


Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH: 2005

ACQUITY BEH Phenyl XBridge Phenyl

ACQUITY BEH C18 XBridge C18

ACQUITY BEH Shield RP18 XBridge Shield RP18



Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, HSS: 2008





ACQUITY HSS C18 SB XSelect HSS C18 SB

ACQUITY HSS C18 XSelect HSS C18

ACQUITY HSS T3 XSelect HSS T3


Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, XSelect CSH & HSS: 2010








ACQUITY CSH C18 XSelect CSH C18

ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl XSelect CSH Phenyl-Hexyl

ACQUITY CSH Fluoro-Phenyl XSelect CSH Fluoro-Phenyl


Ever-Growing Selectivity Range XBridge/BEH, XSelect CSH & HSS: 2011








ACQUITY CSH C18 XSelect CSH C18

ACQUITY CSH Phenyl-Hexyl XSelect CSH Phenyl-Hexyl

ACQUITY CSH Fluoro-Phenyl Xselect CSH Fluoro-Phenyl

ACQUITY HSS CN XSelect HSS CN

ACQUITY HSS PFP XSelect HSS PFP


Nuevos Rellenos XSelect/ACQUITY UPLC

HSS PFP —Selectividad excepcional para

isómeros posicionales, compuestos halogenados y compuestos polares

HSS Ciano —Estable, compatible con RP & NP,

química CN reproducible

—Baja hidrofobicidad y selectividad única comparada con ligando C18


Descripción Producto XSelect HSS/ACQUITY UPLC HSS CN

Ofrece al cromatografista una fase para: — Baja hiydrofobicidad para una rápida elución de los analitos

hidrofóbicos

— Selectividad única

— Compatible con Fase Normal

Beneficios Diferenciales: — Significativa menor retención que C18 (típicamente requiere

menor % orgánico en fase móvil)

— Compatible con fases móviles altamente acuosas

— Estable, bajo sangrado en separaciones LC-MS


Mezcla Compuestos Básicos en columna CN

ACQUITY UPLC HSS CN

0.000

0.010

0.020

0.030

0.000

0.010

0.020

0.030

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50

1

2

3 4

5

6

7

Zorbax SB-CN 1

2

3 4

5

6

7

Compuestos: 1. Aminopyrazine

2. Pindolol 3. Quinine

4. Labetalol 5. Verapamil 6. Diltiazem

7. Amitriptyline

Gradiente: 30% al 60% MeOH con Formiato Amónico 10 mM

Ambas Columnas: 2.1 x 50 mm, 1.7 μm ó 1.8 μm


Descripción Producto: XSelect HSS/ACQUITY UPLC HSS PFP

Ofrece al cromatografista mecanismos de selectividad múltiples que incluyen: — puentes de hidrógeno — dipolo-dipolo — aromáticos (pi-pi) — hidrofóbico (fase reversa)

Análisis:

Isómeros posicionales, compuestos halogenados y compuestos polares

Simple positioning vs. CSH Fluoro-Phenyl

— HSS PFP: SUPERIOR retención de compuestos básicos — CSH Fluoro-Fenil: MENOR retención de compuestos básicos

©2011 Waters Corporation 29 Minutes 0.0 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00

Condiciones : Columns: 2.1 x 50 mm Mobile Phase A: 0.1% CF3COOH in H2O Mobile Phase B: 0.08% CF3COOH in ACN Flow Rate: 0.5 mL/min Gradient: Time Profile Curve (min) %A %B 0.0 92 8 6 0.1 92 8 6 4.45 50 50 7 4.86 10 90 6 5.0 92 8 6 6.0 92 8 6 Injection Volume: 1.0 µL Sample Diluent: 50:50 H2O: MeOH with 0.05% CF3COOH Sample Conc.: 100 µg/mL Temperature: 40 oC Detection: UV @ 330 nm Sampling rate: 40 pts/sec Time Constant: 0.1 Instrument: Waters ACQUITY UPLC®, with ACQUITY UPLC® TUV

Compuestos Ácidos 1. Caftaric acid 2. Chlorogenic acid 3. Cynarin 4. Echinacoside 5. Cichoric acid

UPLC® Gama Selectividad Derivados Ácido Caféico

HSS PFP

1

2

3

4

5

4

1

2

3

CSH Fluoro-Fenil 5


Comaparación: Antidepresivos Tricíclicos

Compounds 1. Trimethoprim 2. Nordoxepin 3. Doxepin 4. Nortriptyline 5. Imipramine 6. Amitriptyline 7. Trimipramine

ACQUITY UPLC HSS PFP, 1.8 µm, 2.1 X 50mm

Kinetex PFP, 1.7 µm, 2.1X50 mm

0.000

0.002

0.004

0.006

0.008

0.010

0.012

0.014

0.016

0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00

1

2

3 4 5 6 7

1

2 3

4 6 7

0.000

0.005

0.010

0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00

5

RPHAve = 3.04

RPHAve = 17.77

System: ACQUITY UPLC® H-Class with ACQUITY UPLC ® PDA Detector

Mobile Phase A: 10mM NH4COOH, pH3.0

Mobile Phase B: ACN

Isocratic Mobile Phase: 60:40; A:B

Flow Rate: 0.5 mL/min

Injection Volume: 1 µL

Column Temperature: 30 °C

UV Detection: 254 nm


Agenda


HILIC


— HSS PFP






Nuevas Columnas 2.5 um XP eXtended Performance [XP]

Empaquetadas en hardware de baja dispersión – hardware UPLC

Diseñadas para trabajar hasta presiones de 18000psi

Compatibles con tecnología HPLC, UHPLC & UPLC

Configuraciones disponibles:

— Diámetros: 2.1 mm / 3.0 mm (4.6 mm Enero 2012)

— Longitudes: 30 mm / 50 mm / 75 mm / 100 mm

— 14 Fases Estacionarias

Empaquetadas con partículas XBridge [BEH], XSelect [CSH&HSS] de 2.5 um con los siguientes ligandos: — BEH C18, Shield RP18, C8, HILIC & Amide

— CSH C18, CSH Fenil-Hexil, CSH Fluoro-Fenil

— HSS C18, T3, C18 SB, Ciano & PFP


Columnas 2.5 µm eXtended Performance [XP]

Rápida Optimización de Métodos guiados por Farmacopea (USP, EP)

• Las columnas 2.5 µm XP ofrecen la flexibilidad para transferir métodos HOY (de acuerdo con las guías de reducción del 50% del tamaño de partícula; 5 µm-a-2.5 µm)

Baja Contrapresión, Elevado Throughput, Incremento de la Productividad

• 40% menor contrapresión que las columnas de UPLC < 2 µm

• Aumento del caudal para aumentar throughput en cromatografía HPLC - NOTA: La sensibilidad y la resolución se reducirán

• Presión equivalente y comportamiento superior a las columnas core-shell • Aumento de la productividad HPLC en 2-4X comparado con columnas HPLC 3.5 – 5 µm

Inigualable Disponibilidad de Selectividad

• 14 químicas que incluyen C18, Fenil-Hexil, C8, Grupo Polar Embebido, HILIC, Amide así como las nuevas columnas Ciano & PFP

• 3 partículas diferentes que incluyen sílice, híbrida y híbrida con carga en la superficie • Directamente escalable a columnas UPLC 1.7/1.8 µm y columnas HPLC como 3.5/5 µm

• +160 configuraciones resultan en 380 referencias


AU

0.00

0.10

0.20

0.30

Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00

XSelect CSH C18 XP 4.6 x 75 mm, 2.5 µm

HPLC System

2X más rápido que 3.5 µm HPLC

2.5 µm XP

Aumento de la Productividad

ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 µm

UPLC System


AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.00 0.50 1.00 1.50 2.50 3.00 3.50 Minutes 2.10

1.7 µm

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

Minutes 0.00 4.00 8.00 12.00 16.00 20.00 24.00 28.00

XSelect CSH C18 4.6 x 100 mm, 3.5 µm

Sistema HPLC 3.5 µm


Tolm

etin

Nap

roxe

n

Feno

prof

en

Indo

met

haci

n

Dic

lofe

nac


Curvas van Deemter

0

5

10

15

20

25

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0

1 . 7 µm ACQUITY UPLC® BEH C18

2 . 5 µm XBridge™ BEH C18 XP

2 . 6 µm Core-Shell C18

Linear Velocity, u (cm/sec)

Plat

e H

eigh

t (H

, 4 s

igm

a)

Acenaphthene, 2.1 x 50 mm columns

70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm

Observaciones: Comportamiento similar de partículas core-shell 2.6 µm y partículas completamente porrosas 2.5 µm 1.7 µm ofrece una eficacia superior comparado con tamaños de partícula mayores

pdHETPh =

m

p

Ddu

v×

=


Eficacia vs. Caudal

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

14000

16000

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

Flow Rate (mL/min)

Plat

e Co

unt (

4 si

gma)

1.7 µm ACQUITY UPLC® BEH C18

2.5 µm XBridge™ BEH C18 XP

2.6 µm Core-Shell C18

Acenaphthene, 2.1 x 50 mm columns

70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm

Observaciones: Cuando se realiza un gráfico eficacia vs. caudal, se observa que un tamaño de partícula menor siempre ofrecerá mejor eficacia que uno superior Partículas completamente porosas 2.5 µm y partículas 2.6 µm core-shell ofrecen la misma eficacia

¿Qué sucede con la presión?


Comparación Contrapresión: Completamente Porosa vs. Core-Shell

0

1000

2000

3000

4000

5000

6000

7000

8000

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

Flow Rate (mL/min)

Pres

sure

(psi

)

2 . 5 µm XBridge™ BEH C18 XP

2 . 6 µm Core-Shell C18

2.1 x 50 mm columns

70/30 MeCN/H2O, 30 °C, 254 nm

Observaciones: Partículas completamente porosas 2.5 µm y partículas 2.6 µm porosas en la superficie produce n la misma contrapresión


Impacto de la Dispersión del Instrumento en el Rendimiento de la Columna

Instrumento UPLC de Ultra-baja dispersión

mejora el rendimiento de la columna, incluso con diámetros de 4.6 mm

A: agua con 0.1% ácido fórmico B: acetonitrilo con 0.1% ácido

fórmico Caudal: 1.4 mL/min

Mezcla NSAID (50-100 ug/mL) Detección UV a 270 nm

Gradiente (2.5µm): 35%B mantenido durante 2.37 min, rampa al 65%B en 9.05 min, mantenido durante 0.41

min, re-acondicionamiento al 35%B.

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00

Alliance 2695 HPLC XSelect CSH C18 XP

4.6 x 75 mm, 2.5 µm

AU

0.00

0.10

0.20

0.30

0.40

0.50

Minutes 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00

ACQUITY UPLC H-Class XSelect CSH C18 XP

4.6 x 75 mm, 2.5 µm

Tolm

etin

Nap

roxe

n

Feno

prof

en

Indo

met

haci

n

Dic

lofe

nac

15% disminución anchura pico

30% aumento altura pico


Resolución, Throughput y Sensibilidad: Comparación entre Columnas 2.5 µm XP y 1.7 µm UPLC

Columna 1.7 µm ACQUITY UPLC ofrece

2X mayor velocidad y 20% mayor sensibilidad

comparado con columnas 2.5 µm XP mientras se

mantiene la selectividad

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Minutes 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00

XSelect CSH C18 XP 2.1 x 75 mm, 2.5 µm

Caudal: 0.54 mL/min

A: agua con 0.1% ácido fórmico B: acetonitrilo con 0.1% ácido

fórmico Mezcla NSAID (50-100 ug/mL)

Detección UV a 270 nm

Gradient e(2.5µm): 35%B al 65%B en 4.85 min, mantenido durante 0.66


Gradiente (1.7µm): 35%B al 65%B en 2.20 min, mantenido durante 0.3


Las 2 columnas se usaron en un sistema ACQUITY UPLC H-Class

ACQUITY UPLC CSH C18 2.1 x 50 mm, 1.7 µm

Caudal: 0.8 mL/min

AU

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Minutes 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50

AU

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Minutes 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00

Tolm

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Nap

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Feno

prof

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Indo

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haci

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lofe

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Transferencia a UPLC

columnas acquity uplc & nuevos rellenos lc€¦ · amplia y creciente selección de rellenos de...

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