UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

Departamento Académico de Microbiología y Parasitología Básica y Aplicada

MONITOREO AMBIENTAL EN AMBIENTES CONTROLADOS

MG. MIRTHA ROQUE ALCARRAZ

CONTROL MICROBIOLOGICO DE AMBIENTES

Objetivo

Minimizar los riesgos de contaminación por partículas o microorganismos de los ambientes, materia prima, productos y materiales que se están manipulando.

Parámetros de un control ambiental

Clasificación de las áreas de trabajo en base a los límites de recuento de partículas.

Programa de evaluación microbiológica.

Capacitación de personal.

Factores críticos en el diseño y ejecución de un programa de evaluación microbiológica.

Desarrollo de un plan de muestreo.

Establecimiento de niveles de alerta e intervención.

Metodología e instrumentación para cuantificar microorganismos.

Medios y diluyentes empleados

Identificación de microorganismos aislados

Factores a considerar para la clasificación de áreas limpias Grado de pureza del

aire interior Flujo de aire Tamaño de

partículas no viables

GRADO DE PUREZA DEL AIRE

Federal Estándar 209E-USA establece la pureza del aire interior en función del tamaño de partículas inertes suspendidas.

0.5 –5.0um y >5 um

FLUJO DE AIRELas áreas limpias se agrupan

en :Flujo multidireccional Estricta disciplina en

cuanto a la vestimenta Movimiento de los usuarios Limpieza y mentenimiento SE DILUYE LA

CONTAMINACION mediante la aportación de AIRE LIMPIO

Flujo unidireccional El aire es introducido a

una velocidad baja y constante recorriendo uniformemente toda la sala y siendo extraído por el lugar opuesto al ingreso

Se utiliza en salas que requieren muy baja concentración de partículas o bacterias

Características de los ambientes controlados

Paredes lisas Zócalo sanitario Suelos lisos continuos y

sin juntas Pares y piso recubiertos

con pintura epoxica o poliéster.

Techos lisos y continuos

No deben existir ventanas o ser en numero reducido y selladas

Puertas dobles y lisas Iluminación artificial Aire acondicionado Superficies de mesas

poliéster resistente a desinfectantes

Clasificación de áreas

Area clase 100 El número de partículas no debe exceder de 100/pie3 3,530 / m3

Area clase 10 000 El número de partículas no debe exceder de 10 000/pie3

353,000 / m3

Area clase 100 000 El número de partículas no debe exceder de 100 000/pie3

3,530,000 / m3

Federal standard 209 E USA

Federal Estandard 209E

Clase 100 and Clase 1000 (Área critica)

Menos de 0.1 ufc /pie3de aire 3 ufc / m3 de aire Frecuencia: Cada etapa

Área clase 100

LLENADO DE

AMPOLLAS

Área clase10000

Área clase 10 000

Federal Estandard 209E

Clase 10,000 (Áreas menos criticas) Menos de 0.5 ufc / pie3 de aire 20 ufc / m3 de aire Frecuencia: Diaria

Federal Estandard 209E

Clase 100,000 (Áreas no criticas) Menos de < 2.5 ufc / pie3 de aire < 100 ufc / m3 de aire Frecuencia: Diaria

Área clase 100 000

Federal Estandard 209E

Clase 100 and Clase 1000 (Superficies)

3ufc por 2 pulg2 (25 - 30 cm2.) RODAC Placa Frecuencia: Cada etapa

Requerimientos de áreas controladas

Clase Eficienci

Filtro

VelocidaMax aire

Nº Max

Particm3

Nº Max

Ufc / m3

100

Cab.F.L 99.997%

0.3m/s V

0.45m/sH 3500 < 1

100 99.995% 3500 5

10000 99.950% 350000 100

100000 95.000% 3500,000 500

Temperatura 18-24 ºC Humedad Relativa 30-50%

Federal Estandard 209E

Clase 10,000 (Superficies) 5 ufc por 2 pulg2 (25-30 cm2) RODAC Placa 10 ufc por 2 pulg2 (25-30 cm.2) RODAC Placa para el piso Frecuencia: Diaria

Federal Estandard 209E – Monitoreo del Personal

Clase 100 and Clase 1000 3 ufc por guante (25 -30 cm2.) 5 ufc por vestido (25-30 cm2.) Frecuencia: Cada etapa

Federal Estandard 209E – Monitoreo de Personal

Clase 10,000 10 ufc por Guantes (25-30 cm2.) 20 ufc por vestido (25-30 cm2.) Frecuencia: Diaria

Clasificación de áreas de acuerdo a ISO 14644-1

La clasificación de esta norma se basa exclusivamente en la concentración de partículas en suspensión (polvo, residuos metálicos y otros).

Además, las únicas poblaciones de partículas que se tienen en cuenta para la clasificación son las de distribución acumulativa basada en umbrales (límite inferior) de 0,1 µm a 5 µm.

Número de partículas por metro cúbico por tamaño en micrómetros

  0.1 um 0.2 um 0.3 um 0.5 um 1 um 5 um

ISO 1 10 2        

ISO 2 100 24 10 4    

ISO 3 1000 237 102 35 8  

ISO 4 10000 2370 1020 352 83  

ISO 5 100000 23700 10200 3520 832 29

ISO 6 1000000 237000 102000 35200 8320 293

ISO 7       352000 83200 2930

ISO 8       3520000 832000 29300

ISO 9       35200000 8320000 293000

Tabla 1: Clasificación de áreas limpias según ISO 14644-1.

Programa de evaluación microbiológica

Objetivo : Obtener estimaciones representativas de la biocarga del ambiente.

Incluye : Selección del lugar de muestreo Frecuencia de muestreo Acciones correctivas e investigativas Métodos empleados Documentación

Documentación de un Programa de monitoreo ambiental

Fecha y hora de análisis Método de análisis Nivel de actividad en el

lugar de muestreo Equipo de muestreo Área Esquema del área indicando

ubicaciones del lugar de muestreo.

Lugar de muestra Resultados Fecha de lectura de resultados Nombre del Analista

Nivel de alerta y acción Temperatura y tiempo de

incubación Resultados de prueba de control Fechas de certificación,

validación y expira del medio utilizado

Caracterización de los contaminantes

Nombre del analista Reporte de datos Revisión de datos históricos Fecha de calibración de los

instrumentos y metodología

Factores críticos incluidos en el diseño de un programa de control ambiental

Un programa de control ambiental debe ser capaz de detectar a tiempo algún manejo inadecuado en las condiciones microbiológicas de tal manera que permita tomar medidas correctivas efectivas.

Desarrollo de un plan de muestreo

Debe ser documentado y describir los procedimientos y métodos de muestreo de un ambiente controlado. Debe identificar los puntos de muestreo, la frecuencia, el método de análisis y como interpretar los resultados

FECHA : PRODUCTO EN PROCESO / LOTE :AREA CLASE ......................MEDIO DE CULTIVO : TSA NUMERO DE PERSONAS :METODO EMPLEADO : Muestreador de aire Biotest Placas de sedimentación Volumen muestreado : ............................... Tiempo de exposición : ........................

ENVASADO DE LIQUIDOS

Ü ç

CERRADORA

ZIOLI

ETIQUETADORA STRUNCK

BACTERIAS

30 - 35º C

/48 horas

HONGOS Y

LEVADURAS

20 - 25º C

/5 días

BACTERIAS

30 - 35º C/48

horas

HONGOS Y

LEVADURAS

20 - 25º C /5

días

Ü ç Esquina izquierda

Ü è Flujo laminar

Ü é Envasadora

Ü ê Taponadora

Ü ë Revisadora

OBSERVACIONES : ............................................................................................................................................................................................................................................................................................................

RESULTADO : Conforme No conforme

Realizado por : .................... Revisado por : ....................Fecha Fecha

CONTROL AMBIENTAL : AREA DE ENVASADO DE LIQUIDOS

UBICACION DE PLACAS HORA

LIMITES RESULTADOS

BIOTEST

VOLUMEN

(LITROS)

FLUJ O LAMINAR

Ü è

ENVASADOR

A

DAUMAG

Ü éTAPONADORA

Ü ê

REVISADORA

Ü ë

ALIMENTAC

. A

ETIQUETAD

AIRE ACONDICIONADO

Establecimiento de niveles de alerta e intervención

Nivel de alerta :

Es el que muestra una

desviación potencial

de las condiciones

operativas normales

Nivel de acción :

Cuando se exceden los

niveles y es necesario

una acción correctiva.

Metodología e Instrumentación

En la industria farmacéutica, los métodos

mas usados son : De sedimentación De centrifugación (impacto)

La selección del método apropiado es

responsabilidad del usuario.

Método de centrifugación

El equipo empleado es el Biotest,

cuya función es recolectar

cuantitativamente los

microorganismos presentes en el

aire.Trabaja según el principio de

impacto sobre un medio de

cultivo. Se hace uso de láminas

conteniendo Agar TSA y se

muestrea un volumen de aire

determinado.

Método de las Placas de contacto

Se emplean las placas Rodac, diseñadas para el muestreo de superficies lisas.

Método del Hisopado

Método de Hisopado o de las Torundas : se emplea para superficies irregulares.

Medios de cultivo

Medios líquidos Agua peptonada Solución salina Caldo Casoy Solución bufferada

Medios sólidos Agar TSA Agar SDA Agar de Lecitina Agar Nutritivo

Identificación de microorganismos aislados

Es importante identificar los microorganismos aislados para facilitar su monitoreo y evaluar la efectividad de los procesos de sanitización.

Capacitación del personal

Se requiere un programa de capacitación formal del

personal para minimizar el riego de contaminación.

El adiestramiento debe documentarse.

La capacitación debe incluir :

Instrucciones sobre procesamientos asépticos : la relación :

manipuleo - procedimientos de fabricación – contaminación

Instrucciones sobre los principios básicos de microbiología

Desinfección y sanitización