1Curs 6

CompuCompui i azotaazotaii

n sngen snge

Compui azotai neproteici

n investigarea funciei renale.

Determinarea ureei, acidului uric, creatinei, creatininei.

2CompuCompui i azotaazotaii

n sngen snge

Neproteici

Uree

(BUN-blood

urea nitrogen)

Acid uric

Creatin, creatinin

Proteici

Albumine

Globuline

Fibrinogen

HemoglobinBilirubinUrobilinogeni

3Compui azotai neproteici (analizai pentru monitorizarea funciei renale)

Compus Concentraia aproximativ n plasm (% din total N neproteic)

Uree 45Aminoacizi 20Acid uric 20Creatinin 5Creatin 1-2Amoniac 0.2

4UreeaUreea

Generare: catabolismul proteinelor i acizilor

nucleici

n ficat

Proteine Aminoacizi Amoniac Uree

Proteoliz enzimatic

Transaminare

i dezaminare

oxidativ

Sintez enzimatic

NH4

NCO NH3

+ HN=C=O (H2

N)2

CO

Whler, 1828, sinteza

in vitro

a ureei

5UreeUree--SemnificaSemnificaie clinicie clinic

Interval de referin:

6-20 mg/dL

(2.1-7.1 mmol/L)

Valorile cresc cu vrsta

Peste 60 ani:8-23 mg/dL

(2.9-8.2 mmol/L)

Valori mai ridicate la brbai

6Uree -

Metode de analiz

Metoda chimic: reacia cu diacetilmonoxim

)(., galbendiazinaureenoximadiacetilmo acidmser +

cccc

7Uree -

Metode de analiz

Metoda enzimatic

Hidroliza ureei:++ + ++ 342 22 HCONHHOHUree Ureaza

Detecie conductometric Conversia ureei neionizate

n NH4+

i HCO3-

; crete conductivitatea

(metod rapid)

Reacia Nessler

Reacia Berthlot

R. enzimatic Tem: reacia oxo glutarat-glutamat

NaIKIOHIHgNHKIHgINH +++++ ++ 442 332224OHindofenolNHOClOHHC 24562 +++ +

8

9AcidulAcidul

uricuric

C5

H4

N4

O32,6,8 Trioxipurina

Proprieti:

cristale

albedensitate

1.87

solubilitate

n ap: slab

10

Acid uricAcid uric

Generare

:

La om i primate superioare: produs final de oxidare n catabolismul purinelor

La multe mamifere, uricaza oxideaz n continuare acidul uric la alantoin

Principalul compus azotat n excrementele psrilor i reptilelor

11

Acid uricAcid uric

--

semnificasemnificaie clinicie clinic

Intervale de referin (metoda enzimatic):Femei: 2.6-6.0 mg/dL

(0.155-0.357 mmol/L)

Brbai: 3.5-7.2 mg/dL

(0.209-0.428 mmol/L)Valorile cresc cu vrsta (10% pe an)

Relativ

insolubil

la pH plasmeiConc. > 6.8 mg/dl plasm

saturat cristale de urat

GutaGuta: depunerea uratului de sodiu (cristale) n urma precipitrii n fluidul suprasaturat.

12

PurinePurinePurina

heterociclu

aromatic care const dintr-un inel

pirimidinic

i unul

imidazolic.

Termenul

general de purine

se refer i la compuii substituii precum

i la formele tautomere.

Purina este

heterociclul

cu azot cel

mai rspndit

din natur.

13

Acid uricAcid uric

Metode de analizaMetode de analiza

R. cu acid fosfowolframic

(H3

PW12

O40

)

Metoda enzimatic (uricaza)

Metode cromatografice HPLC

14

Metoda enzimatic cu uricaza

222uricaza

2 OHCOalantoinaOuricacid ++ +

rosiechinonairinaminoantip4fenolOH POD22 ++

Reactia

cromogena:

Acidul uric absoarbe la

293 nm ,

alantoina nu !Msurare cinetic: rata de descretere a absorbanei este proporional cu conc. Acid uric

15

CreatinCreatin, , creatinincreatininCreatina

Acid metilguanidinoacetic C4

H9

N3

O2-

Compus azotat organic prezent n organismul

vertebratelor; ajuta la alimentarea cu energie a celulelor musculare

-

Identificata n muchii scheletici de ctre Chevreul n 1832 i numit astfel dup grecescul Kreas

(carne)

Creatinin rezult la descompunerea creatinfosfatului n muchi, cu vitez relativ constant, funcie de masa muscular (valori mai mari la brbai dect la femei). -

Cel mai fix constituent azotat al sngelui, puin influenat de alimentaie- Investigat alaturi de BUN (blood urea nitrogen).

16

Michel

Eugne

Chevreul

(1786- 1889)

Chimist francez, cunoscut mai ales pentru studiul acizilor grai i aplicaiilor acestora n art i tiin.

I se atribuie descoperirea acidului margaric

(1813), cu rol important n

obinerea margarinei i crearea primului tip de spun, realizat din grsimi animale.

Chevreul studiaz culorile i formuleaz Legea contrastului culorilor.

17

CreatininaCreatinina--sesemnificamnificaie clinicie clinic

Intervale de referin (metoda Jaffe):

Creatinina

n snge:Femei: 0.6-1.1 mg/dL

(53-97 mmol/L)

Brbai: 0.9-1.3 mg/dL

(80-115 mmol/L)

Excreia de creatinin este mai mare la brbai dect la femei

Excreia de creatinin scade cu vrsta

18

CreatininaCreatinina

1 to 2% din creatina muscular este convertit zilnic n mod spontan n

creatinin i eliberat cu vitez

constant n fluidele biologice

Creatina endogen produs este proporional cu masa muscular producia de creatinin depinde de vrst i sex

Fluctuaiile cauzate de diet determin doar variaii minore ale creatininei ale aceleiai persoane

19

CreatininaCreatinina

--

analizaanaliza

Reacia Jaffee

(considerat m. de referin)

Enzimatic

(tinde s nlocuiasc r. Jaffe)

HPLC (cu faz invers sau cu schimb de cationi)

foarte specific; propus ca metod de referin

rosucomplexpicratcreatinina OH+

creatinaOHcreatinina zacreatinina + 2ureesarcozinaOHcreatina creatinaza + + 2

2222 OHglicinadaformaldehiOHOsarcozina idazasarcozinox ++ ++OHoxidataformaindicatorOHredusaformaindicator peroxidaza 222 2)()( + +

Sarcozina-

acid N-Me aminoacetic; Glicina: acid aminoacetic

20

Care sunt

principalii compui azotai neproteici

din snge determinai pentru investigarea funciei renale?

Artai pe scurt cum este generat ureea n organism.

Prezentai o metod de determinare a ureei din snge.

Prezentai o metod de determinare a acidului uric din snge.

Prezentai metoda Jaffee

pentru determinarea creatininei din snge

Curs 6 Compui azotai n sngeCompui azotai n sngeCompui azotai neproteici (analizai pentru monitorizarea funciei renale)UreeaUree-Semnificaie clinicUree - Metode de analizUree - Metode de analizSlide Number 8Acidul uricAcid uricAcid uric - semnificaie clinicPurineAcid uric Metode de analizaMetoda enzimatic cu uricazaCreatin, creatininSlide Number 16Creatinina-semnificaie clinicCreatininaCreatinina - analizaSlide Number 20