8/17/2019 dasgen

http://slidepdf.com/reader/full/dasgen 1/3

Waktu :0-9 detik ( dari video )

Untuk membuat DNA rekombinan dibutuhkan syarat-syarat berikut ;

1. Adanya ektor ( !ambar "i"in biru muda ). # vektornya ada$ahnya

%$asmid dari bakteri yan! di iso$asikan. &an! ber'un!si seba!ai

seba!ai %embaa DNA Asin! yan! beru%a !en dari suatu makh$uk

hidu% dari satu or!anisme untuk di%indahkan ke or!anisme $ainnya.

Ada%un "ontoh$ainya 'a!e tau bakterio'a!e ( virus yn! men!in'eksi

bakteri ). n!!at yan! sudah di restriksi*. Adanya DNA asin! # DNA asin! biasanya beru%a !en dari suatu

makh$uk hidu% bisa manusia+ hean atau tumbuhan, ( !ambar

seten!ah $in!karan di kanan ) arna biru tua. n!at nyan! sudahdirestriksi. /nim restriksi yaitu enim endonuk$ease (%emoton! DNA ). /nim 2i!ase ( %en!!abun! DNA )

Waktu : 1*-19detik

3emudian ter4adi$ah %roses %en!!abun!an 5 %er%indahan antara vektor

den!an DNA asin! yan! membentuk mo$eku$ DNA dan disebut DNA

6ekombinan.

Waktu : *0- detik

Dida$am vektor ( %$asmid ) atau disebut 786AN86 meru%akan

sebuah mo$eku$ ke"i$ yan! terda%at da$am se$ bakteri yan! berbentuk

bu$at dan membaa materi !en "ontohnya <en 2a" = dan kebanyakan

membaa mo$eku$ DNA untaian !anda.

Waktu : >- >? detik

Untuk membentuk DNA 6ekombinan disini ada %eranan /nim restriksi

( restri"tions enhyme ) yan! ber%eran seba!ai %emoton! rantai DNA .

ingat !! setiap Retriksi mempunyai tempat pemotongan yang berbeda

dan spesifk seperti tepatnya di lokasi gen Lac Z. 

in!att /nim yan! di!unakan untuk memoton! %$asmid harus sama

den!an %emoton! DNA asin! sehin!!a nanti keduanya bisa bersatu

misa$ : /"o61

emoton!an enim restriksi yan! da%at men!hasi$kan u4un! yan!

dinamakan #sti"ky, yan! da%at sa$in! menem%e$ antara u4un! DNA satu

den!an u4un! DNA yan! $ain. 3edua DNA den!an u4un! sti"ky 4ika

ditem%atkan %ada kondisi yan! te%at+ maka da%at membentuk mo$eku$

rekombinan den!an menem%e$kan kedua u4un!nya.Waktu : >9- 1 .@detik

8/17/2019 dasgen

http://slidepdf.com/reader/full/dasgen 2/3

3emudian ter4adinya %en!!abun!an den!an DNA asin! yan! kemudian

di!abun!kan o$eh bantuan enim $i!ase. Dan terbentuk $ah DNA

6ekombinan.  Penggabungan dan pemotongan DNA dilakukan secara in

vitro melalui reasi sederhana

Waktu 01. *- * . *1 menit ( men!!unakan bakteri seba!ai %en!"o%y atau"$on DNA 6ekombinan yan! 3om%eten )

ertama : DNA 6ekombinan yan! kom%eten di sisi%kan keda$am tubuh

bakteri biasanya ( /"o$i ) di tarans'ormasi yan! dihara%kan a!ar !en

da%at dieks%resikan dan men!hasi$kan %rotein tertentu.. kemudian DNA

6ekombinan akan me$akukan re%$ikasi

3edua : kemudian tubuh bakteri me$akukan %embe$ahan ( %embe$ahan

biner dari satu men4adi * dari * men4adi dst+ maka terbentuk$ah bakteri

yan! memi$iki DNA 6ekombinan yan! kom%eten+

Waktu : 7akteri tersebut diku$turkan %ada media tertentu. untuk 

mengetahui mana yang kompeten maka dikulturkan pada media

tertentu seperti media agar yang mengandung "gal atau #P$% . contoh

kasusnya & pen'elasan yang di blod (arna biru diba(ah )

 Ada%un e$eksi se$ rekombinan yan! membaa 'ra!men yan! diin!inkan

atau DNA 6ekombinan yan! 3om%eten di$akukan den!an men"ari 'ra!men

tersebut men!!unakan 'ra!men %e$a"ak (%robe)+ yan! %embuatannya

di$akukan se"ara in vitro men!!unakan teknik reaksi %o$imerisasi berantaiatau %o$ymerase "hain rea"tion (6). en4e$asan $ebih rin"i tentan!

teknik 6 da%at di4e$askan o$eh ke$om%ok se$an4utnya .

en!etahuan umum :

-<en $a"= da$am %roses k$onin! DNA ber'un!si seba!ai !en %e$a%or+ yaitu

!en yan! eks%resinya ber!antun! %ada masuk atau tidaknya insert %ada

vektor k$onin! serta men!kode B - !a$aktosedase

uatu tekhnik rekombinan berhasi$ di$ihat dari arna bakteri yan!

diku$turkan a%abi$a arna bakteri yan! memi$iki arna %utih dikatakanter4adi kerusakan %ada !en 2a" = yan! disisi%i dna asin! atau !en $a"=

tersebut tidak da%at yan! membentuk enim B-!a$aktosidase yan!

'un!siona$ dan C-!a$ tidak akan di%e"ah sehin!!a ko$oni yan! dihasi$kan

teta% berarna %utih.+ berarti se$ kom%eten membaa DNA 6ekombinan (

DNA $asmid dan !en 5 DNA Asin! ) yan! mana diku$turkan %ada media

a!ar yan! men!andun! C-!a$ atau < ( "ontoh keberhasi$an eknik DNA

6ekombinan dan %en!!andaan 4um$ahnya )

edan!kan a%abi$a ko$oni bakteri yan! diku$turkan berarna biru maka

dikatakan tidak kom%eten memebentuk DNA 6ekombinan karena $a"=

akan ditranskri%si se"ara norma$ dan da%at membentuk -

8/17/2019 dasgen

http://slidepdf.com/reader/full/dasgen 3/3

"om%$ementaion men4adi B-!a$aktosidase yan! da%at meme"ah C-!a$

men4adi !a$aktosa dan turunan indoksi$urunan tersebut se$an4utnya akan

dioksidasi sehin!!a membentuk turunan dibromo-dik$oro yan!

menyebabkan berubahnya arna ko$oni men4adi biru saat ditumbuhkan

%ada media a!ar yan! men!andun! C-!a$

-/nim endonuk$ease restriksi yan! berbeda+ memi$iki situs %emoton!an

yan! berbeda+ namun ada bebera%a 4enis enim endonuk$ease restriksi

yan! diiso$asi dari sumber yan! berbeda memi$iki situs %emoton!an yan!

sama. /nim-enim endonuk$ease restriksi yan! memi$iki situs

%emoton!an yan! sama disebut iso"hiomer (6ad4i+ *011).